Martwicze zapalenie jelit (NEC) jest najcięższą chorobą przewodu pokarmowego (GI), która często występuje u wcześniaków, szczególnie u niemowląt o bardzo niskiej masie urodzeniowej, z wysoką śmiertelnością i niejasną patogenezą. Przyczyna NEC może być związana z nieprawidłowościami w zakresie regulacji immunologicznej. Model zwierzęcy NEC jest niezbędnym narzędziem do badań immunologicznych nad chorobą NEC. Modele zwierzęce NEC zwykle wykorzystują nowonarodzone myszy C57BL/6J; Myszy nowonarodzone BALB/c są rzadko stosowane. Powiązane badania wykazały, że gdy myszy są zakażone, różnicowanie komórek Th2 dominuje u myszy BALB/c w porównaniu z myszami C57BL/6J. Badania sugerują, że występowanie i rozwój NEC są związane ze wzrostem liczby komórek T pomocniczych typu 2 (Th2) i na ogół towarzyszy im zakażenie. Dlatego w badaniu tym wykorzystano nowonarodzone myszy BALB/c do wywołania modelu NEC o podobnych cechach klinicznych i zmianach patologicznych jelitowych, jak te obserwowane u dzieci z NEC. Dalsze badania są uzasadnione w celu ustalenia, czy ten model zwierzęcy może być wykorzystany do badania odpowiedzi komórek Th2 w NEC.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Mysi model martwiczego zapalenia jelit u noworodków BALB/c
* These authors contributed equally
W tym artykule
Informacja o sprostowaniu
Podsumowanie
Streszczenie
Martwicze zapalenie jelit (NEC) jest najcięższą chorobą przewodu pokarmowego (GI), która często występuje u wcześniaków, szczególnie u niemowląt o bardzo niskiej masie urodzeniowej, z wysoką śmiertelnością i niejasną patogenezą. Przyczyna NEC może być związana z nieprawidłowościami w zakresie regulacji immunologicznej. Model zwierzęcy NEC jest niezbędnym narzędziem do badań immunologicznych nad chorobą NEC. Modele zwierzęce NEC zwykle wykorzystują nowonarodzone myszy C57BL/6J; Myszy nowonarodzone BALB/c są rzadko stosowane. Powiązane badania wykazały, że gdy myszy są zakażone, różnicowanie komórek Th2 dominuje u myszy BALB/c w porównaniu z myszami C57BL/6J. Badania sugerują, że występowanie i rozwój NEC są związane ze wzrostem liczby komórek T pomocniczych typu 2 (Th2) i na ogół towarzyszy im zakażenie. Dlatego w badaniu tym wykorzystano nowonarodzone myszy BALB/c do wywołania modelu NEC o podobnych cechach klinicznych i zmianach patologicznych jelitowych, jak te obserwowane u dzieci z NEC. Dalsze badania są uzasadnione w celu ustalenia, czy ten model zwierzęcy może być wykorzystany do badania odpowiedzi komórek Th2 w NEC.
Wprowadzenie
Martwicze zapalenie jelit (NEC), najcięższa choroba przewodu pokarmowego (GI), występuje u większości wcześniaków (>90%), szczególnie tych z bardzo niską masą urodzeniową (VLBW)1. U niemowląt z VLBW częstość występowania choroby waha się od 10% do 12%, a śmiertelność dzieci, u których zdiagnozowano NEC, wynosi od 20% do 30%2,3. Przyczyna NEC może być związana z urazami błony śluzowej, inwazją bakterii chorobotwórczych i karmieniem jelit, co może prowadzić do reakcji zapalnych i indukcji urazów jelit u podatnych gospodarzy3. Patogeneza NEC jest niejasna. Odpowiedn....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
To badanie zostało zatwierdzone przez Komisję Etyki Medycznej Centrum Medycznego dla Kobiet i Dzieci w Kantonie (nr 174A01) oraz Komisję ds. Etyki Zwierząt w Guangzhou Forevergen Biosciences Laboratory Animal Center (IACUC-G160100). Wszystkie zwierzęta zostały wyhodowane w tym samym pomieszczeniu w specyficznym środowisku wolnym od patogenów (SPF), a eksperymenty przeprowadzono w środowisku konwencjonalnym. Myszy użyte do hodowli miały 7-8 tygodni; myszy w celu wywołania NEC (n = 72) oddzielono od matki w dniu 4, a matki (n = 14) trzymano w oryginalnej klatce i karmiono myszami z grupy kontrolnej (n = 24).
1. Przygotowanie odczynników....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
Model NEC u myszy BALB/c został wywołany poprzez żywienie preparatem, podawanie LPS, hipoksję oraz stymulację zimnem. W okresie indukcji obserwowano u myszy patologię jelit, charakter stolca, zmiany masy ciała oraz codzienną przeżywalność. Reprezentatywne obrazy jelita cienkiego podczas indukcji NEC; liczby na zdjęciach reprezentują ocenę patologii jelit od 0 (nabłonek prawidłowy) do 4 (najcięższa patologia) (Rycina 3A). Ocena patologii jelit była znacznie wyższa w grupie NEC niż w grupie Co.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
NEC jest najczęstszym nagłym przypadkiem ze strony układu pokarmowego u noworodków, charakteryzującym się wysoką częstością występowania i śmiertelnością, zwłaszcza u wcześniaków 1,2,3. Jednak jego patogeneza jest nadal niejasna. Obecnie uważa się, że uszkodzenie błony śluzowej, inwazja patogenów i żywienie dojelitowe są czynnikami wysokiego ryzyka NEC3. Do tej pory zwierzęta wykorzystywane w modelu NEC t.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Autorzy nie mają do ujawnienia żadnych konfliktów interesów.
Podziękowania
Autorzy dziękują Bankowi Klinicznych Zasobów Biologicznych Centrum Medycznego dla Kobiet i Dzieci w Kantonie za dostarczenie próbki klinicznej oraz Guangzhou Forevergen Biosciences Laboratory Animal Center za dostarczenie myszy. Badania te były wspierane przez Narodową Fundację Nauk Przyrodniczych Chin w ramach grantu 81770510 (R.Z.).
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Absolutny etanol | Sinopharm Chemical Reagent Co., LTD. | ||
| Mleko kozie w proszku | Petag | ||
| Roztwór barwnika HE | Sinopharm Chemical Reagent Co., LTD. | G1003 | |
| Izofluran | RWD, Shenzhen Reward Life Technology Co., LTD. | Czynnik chłodniczy R510 | |
| LPS | Sigma-Adrich | L2880 | |
| Tlen medyczny | różne | różne | |
| mikroskopy | System obrazowania NIKON NIKON (DS-Ri2) | ||
| Neutralna żywica | Sinopharm Chemical Reagent Co., LTD. | ||
| Parafina | różne | różne Mleko | |
| dla wcześniaków w proszku | Abbott | 57430 | |
| Xylene | Sinopharm Chemical Reagent Co., LTD. | ||
| 1% Kwas solny | różne | różne | |
| 10% formalina | LEAGENE | DF0110 |
Bibliografia
- Horbar, J. D., et al. Mortality and neonatal morbidity among infants 501 to 1500 grams from 2000 to 2009. Pediatrics. 129 (6), 1019-1026 (2012).
- Stoll, B. J., et al. Neonatal outcomes of extremely preterm infants from the NICHD Neonat....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
Sprostowanie
Formal Correction: Erratum: A Neonatal BALB/c Mouse Model of Necrotizing Enterocolitis
Posted by JoVE Editors on 3/07/2022. Citeable Link.
An erratum was issued for: A Neonatal BALB/c Mouse Model of Necrotizing Enterocolitis. The Representative Results section was updated.
Figure 1 was updated from:
Figure 1: Induction of the BALB/c NEC model process. (A) The mice in the NEC group were separated from the dam at birth until they were 4 days old (on Day 4) and fasted that night. The NEC model was induced from Day 5 onwards after birth and lasted for 5 days. Intestinal tissue specimens were collected on Day 10 or earlier. The mice in the Cont. group were housed with and nursed by the dam. (B) The sequence of operations for each day after inducing the NEC model. Abbreviations: Cont. = control; NEC = necrotizing enterocolitis; LPS = lipopolysaccharide. Please click here to view a larger version of this figure.
to:
Figure 1: Induction of the BALB/c NEC model process. (A) The mice in the NEC group were separated from the dam at birth until they were 4 days old (on Day 4) and fasted that night. The NEC model was induced from Day 5 onwards after birth and lasted for 5 days. Intestinal tissue specimens were collected on Day 10 or earlier. The mice in the Cont. group were housed with and nursed by the dam. (B) The sequence of operations for each day after inducing the NEC model. Abbreviations: Cont. = control; NEC = necrotizing enterocolitis; LPS = lipopolysaccharide. Please click here to view a larger version of this figure.
