Tutaj opisujemy prostą i powtarzalną metodę, która może wywołać zawał mięśnia sercowego lub uszkodzenie niedokrwienno-reperfuzyjne mięśnia sercowego u myszy poprzez precyzyjne podwiązanie lewej przedniej zstępującej tętnicy wieńcowej za pomocą mikromanipulacji.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Indukcja zawału mięśnia sercowego i uszkodzenia niedokrwienno-reperfuzyjnego mięśnia sercowego u myszy
* These authors contributed equally
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Ostra choroba mięśnia sercowego jest powszechną chorobą sercowo-naczyniową o wysokiej śmiertelności. Uszkodzenie reperfuzyjne mięśnia sercowego może przeciwdziałać korzystnym skutkom rozpływu serca i wywołać wtórne uszkodzenie mięśnia sercowego. Prosty i powtarzalny model zawału mięśnia sercowego i uszkodzenia niedokrwienno-reperfuzyjnego mięśnia sercowego jest dobrym narzędziem dla badaczy. W tym miejscu opisano konfigurowalną metodę tworzenia modelu zawału mięśnia sercowego (MI) i MIRI poprzez precyzyjne podwiązanie lewej przedniej zstępującej tętnicy wieńcowej (LAD) za pomocą mikromanipulacji. Dokładne i powtarzalne pozycjonowanie ligatury LAD pomaga uzyskać spójne wyniki w przypadku uszkodzenia serca. Zmiany w segmencie ST mogą pomóc w określeniu dokładności modelu. Poziom troponiny sercowej T w surowicy (cTnT) służy do oceny uszkodzenia mięśnia sercowego, ultrasonografia serca jest wykorzystywana do oceny skurczowej funkcji mięśnia sercowego, a barwienie chlorkiem Evansa-Niebieskiego / trifenylotetrazolu służy do pomiaru wielkości zawału. Ogólnie rzecz biorąc, protokół ten skraca czas trwania zabiegu, zapewnia kontrolowany rozmiar zawału i poprawia przeżywalność myszy.
Wprowadzenie
Ostry zawał mięśnia sercowego (AMI) jest powszechną chorobą sercowo-naczyniową na całym świecie i niesie ze sobą wysoką śmiertelność1. Postęp technologiczny sprawia, że wczesna i skuteczna rewaskularyzacja jest dostępna dla pacjentów z zawałem serca. Po tych zabiegach u niektórych pacjentów może wystąpić uszkodzenie niedokrwienno-reperfuzyjne mięśnia sercowego (MIRI)2. Dlatego bardzo ważne jest zrozumienie mechanizmów działania i sposobów łagodzenia MI/MIRI. Myszy są szeroko stosowane jako modele ze względu na ich niski koszt, szybki czas rozmnażania i łatwość dokonywania zmian genetycznych3. Ucze....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
Badania na zwierzętach zostały zatwierdzone przez Komitet ds. Opieki i Wykorzystania Zwierząt Uniwersytetu Nauki i Technologii Huazhong (Wuhan, Chiny).
UWAGA: Jako modele wykorzystano samce myszy C57BL/6J (8-10 tygodni). Myszy mają swobodny dostęp do pożywienia i wody oraz są hodowane w warunkach wolnych od określonych patogenów. W pomieszczeniu utrzymywana jest kontrolowana temperatura (22 °C ± 2 °C) i wilgotność (45%-65%). Myszy są poddawane 12-godzinnemu cyklowi światła/ciemności w Zakładzie Opieki nad Zwierzętami w Tongji Medical School (Wuhan, Chiny) zgodnie z wytycznymi ustanowionymi przez tę instytucję. Należy używać sterylnych narzę....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
Schemat eksperymentalny przedstawiono na Rysunku 1A. Badacz może zaplanować punkty czasowe zgodnie z projektem eksperymentalnym po rozpoczęciu badania. Czas trwania ligacji LAD zależy od celu badania. W przypadku MI można pominąć etap reperfuzji. Echo serca może być wykonywane na różnych etapach badania, ponieważ jest to metoda nieinwazyjna, natomiast barwienie Evans-Blue/TTC może być przeprowadzone wyłącznie po uśmierceniu myszy. W badaniach koncentrujących się na włóknieniu i przebudowie k.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
W ostatnich latach tworzenie modeli MI i MIRI w badaniach klinicznych i naukowych szybko się rozwinęło20,21. Jednak nadal istnieją pewne pytania, takie jak mechanizmy działania i sposoby łagodzenia MI/MIRI, które muszą zostać rozwiązane. W tym miejscu opisano zmodyfikowany protokół ustanawiania mysiego modelu MI i MIRI. Należy dokładnie rozważyć kilka kluczowych punktów.
Pierwszym kluczowym punktem jest intubacja dotchawicza. Niektóre .......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Autorzy deklarują brak konfliktu interesów.
Podziękowania
Ta praca była wspierana przez Narodową Fundację Nauk Przyrodniczych Chin (82070317, 81700390 do Jibin Lin, 8210021880 do Bingjie Lv i 82000428 do Boyuan Wang) oraz National Key R&D Program of China (2017YFA0208000 do Shaolin He).
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| 0,9% roztwór chlorku sodu | Kelun Industry Group, Chiny-4 | ||
| % roztwór utrwalający paraformaldehyd | Servicebio, Chiny | G1101-4-0 | |
| jedwabny szew | Produkty medyczne Shanghai Pudong Jinhuan, Chiny | C412-8-0 | |
| szew | Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products, Chiny | H801-Buprenorfina | |
| IsoReag, Chiny | IR-11190-Aparat | ||
| Canon, Japonia | EOS 80D-Krem | ||
| do depilacji | Veet, | ||
| Troponin T hs STAT | Roche, Niemcy-Elektrochemiczny | ||
| immunoanalizator luminescencji | Roche, Niemcy | Elecsys 2010-Evans | |
| niebieski | Sigma, Ameryka | E2129 | - |
| Nożyczki do oczu | Shanghai Medical Instruments, Chiny | JC2303-Kleszcze | |
| hemostatyczne | Shanghai Medical Instruments, Chiny | J31020-Systemy | |
| obrazowania in vivo o wysokiej częstotliwości | Visualsonics, Kanada | Vevo2100-Ibuprofen | |
| PerFeMiKer, Chiny | CLS-12921-Cewnik | ||
| dożylny | Introcan, Niemcy | 4254090B-Ketamina | |
| Sigma-Aldrich, Ameryka | K2753-Alkohol | ||
| medyczny | Huichang, Chiny-Uchwyty | ||
| mikroigłowe | Shanghai Medical Instruments, Chiny | WA2040-Nożyce | |
| mikroskopowe | Shanghai Medical Instruments, Chiny | WA1040-Kleszcze | |
| mikrochirurgiczne | Shanghai Medical Instruments, Chiny | WA3020-Elektrokardiograf | |
| myszyTechman, Chiny | BL-420F-Uchwyty | ||
| igieł | Shanghai Medical Instruments, Chiny | JC3202-sala | |
| operacyjna | Chico, Chiny | Rurka ZK-HJPT-PE-10 | |
| Huamei, Chiny-Pentobarbital | |||
| Merck, Ameryka | |||
| 1030001-Respirator dla gryzoni | Shanghai Alcott Biotech, Chiny | ALC-V8S-P | - |
| Mikroskop stereoskopowy | Aomei Industry, Chiny | SZM0745-STL3-T3-Chirurgiczna | |
| termostatyczna poduszka grzewcza | Globalebio, Chiny | GE0-20W-Chlorek | |
| trifenylotetrazolu | Servicebio, Chiny | G1017-Xylazine | |
| Huamaike Biochemicals and Life Science Research Prouducts, Chiny | 323004 | - |
Bibliografia
- Reed, G. W., Rossi, J. E., Cannon, C. P. Acute myocardial infarction. Lancet. 389 (10065), 197-210 (2017).
- Ibanez, B., Heusch, G., Ovize, M., Van de Werf, F. Evolving therapies for myocardial ischemia/reperfusion injury. Journal of the American College of Cardiology. 65....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
