Artykuł metodologiczny

Model gryzoni indukowany przez TNBS do badania patogennej roli stresu mechanicznego w chorobie Leśniowskiego-Crohna

DOI:

10.3791/63499

⸱

1 marca 2022

 ,  ,  ,  , 
1Department of Internal Medicine, the University of Texas Medical Branch, 2Department of Pathology, the University of Texas Medical Branch

* These authors contributed equally

W tym artykule

Informacja o sprostowaniu

Important: There has been an erratum issued for this article. View Erratum Notice

Podsumowanie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Obecny protokół opisuje rozwój podobnego do choroby Leśniowskiego-Crohna modelu zapalenia jelita grubego u gryzoni. Zapalenie przezścienne prowadzi do zwężenia w miejscu wkroplenia TNBS, a powiększenie mechaniczne obserwuje się w segmencie bliższym zwężeniu. Zmiany te pozwalają na badanie naprężeń mechanicznych w zapaleniu jelita grubego.

Streszczenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Choroby zapalne jelit (IBD), takie jak choroba Leśniowskiego-Crohna (CD), są przewlekłymi chorobami zapalnymi przewodu pokarmowego, dotykającymi około 20 na 1 000 000 w Europie i USA. CD charakteryzuje się przezściennym zapaleniem, zwłóknieniem jelit i zwężeniem światła. Chociaż terapie przeciwzapalne mogą pomóc w kontrolowaniu stanu zapalnego, nie są skuteczne w przypadku zwłóknienia i zwężenia w CD. Patogeneza CD nie jest dobrze poznana. Obecne badania koncentrują się głównie na określeniu rozregulowanych mechanizmów odpowiedzi immunologicznej jelit. Podczas gdy zapalenie przezścienne związane z CD, zwłóknienie jelit i zwężenie światła reprezentują mechaniczne naprężenie ściany jelita, rola stresu mechanicznego w CD nie jest dobrze zdefiniowana. Aby ustalić, czy stres mechaniczny odgrywa niezależną rolę patogenną w chorobie Alzheimera, opracowano protokół indukowanego przez TNBS modelu zapalenia jelita grubego podobnego do CD u gryzoni. Ten model przezściennego zapalenia i zwłóknienia wywołany TNBS przypomina patologiczne cechy charakterystyczne CD w okrężnicy. Jest indukowany przez wkroplenie TNBS do dystalnej części jelita grubego dorosłych szczurów Sprague-Dawley. W tym modelu zapalenie przezścienne prowadzi do zwężenia w miejscu wkroplenia TNBS (miejsce I). Rozdęcie mechaniczne obserwuje się w części bliższej miejsca wkroplenia (miejsce P), co stanowi naprężenie mechaniczne, ale nie jest widocznym stanem zapalnym. Część okrężnicy dystalna do stanu zapalnego (miejsce D) nie przedstawia stanu zapalnego ani obciążenia mechanicznego. Zaobserwowano charakterystyczne zmiany w ekspresji genów, odpowiedzi immunologicznej, zwłóknieniu i wzroście mięśni gładkich w różnych miejscach (P, I i D), co podkreśla głęboki wpływ naprężeń mechanicznych. Dlatego ten model zapalenia jelita grubego podobnego do CD pomoże nam lepiej zrozumieć mechanizmy patogenne CD, w szczególności rolę stresu mechanicznego i ekspresji genów wywołanej stresem mechanicznym w dysregulacji immunologicznej, zwłóknieniu jelit i przebudowie tkanek w CD.

Wprowadzenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Nieswoiste zapalenie jelit (IBD), w tym wrzodziejące zapalenie jelita grubego (UC) i choroba Leśniowskiego-Crohna (CD), charakteryzuje się przewlekłym stanem zapalnym w przewodzie pokarmowym (GI). Dotyka ~1-2 miliony Amerykanów1. Szacowane roczne koszty opieki nad pacjentami z IBD w USA wynoszą 11,8 miliarda dolarów. W przeciwieństwie do UC, CD charakteryzuje się przezściennym zapaleniem i tworzeniem się zwężeń2,3. Powstawanie zwężeń (zwężenie) występuje nawet u 70% pacjentów z CD3 i może być spowodowane przezściennym zapaleniem (zwężenie zapalne) lub zwłóknieniem jelit (zwężenie zwłóknieniowe)4,5. Zwłóknienie jelit charakteryzuje się nadmiernym odkładaniem się kolagenu i innych macierzy zewnątrzkomórkowych (ECM) z komórkami mięśni gładkich (SMC) jako jednym z głównych typów komórek mezenchymalnych zaangażowanych w ten proces3,4. Przerost mięśni gładkich związany z hipertrofią to kolejna istotna zmiana histologiczna w zwężeniu zwłóknienia w CD6. Chociaż powstawanie zwężeń w CD wiąże się z przewlekłym stanem zapalnym, żadne leczenie przeciwzapalne nie jest skuteczne, z wyjątkiem leczenia chirurgicznego2,6. Jednak nawroty pooperacyjne są prawie w 100%, jeśli ma się wystarczająco dużo czasu2,7. Jako reakcja zapalna, zwłóknienie i przerost SMC mogą również rozwinąć się w stanach niezapalnych (tj. niedrożność jelit) w jelitach8,9; Uważa się, że w powstawaniu zwężeń biorą udział zarówno mechanizmy zależne, jak i niezależne3,4. Biorąc pod uwagę, że szeroko zakrojone badania nad mechanizmami zależnymi od stanu zapalnego nie przełożyły się na żadną skuteczną terapię powstawania zwężeń, potrzebne są badania nad możliwą rolą mechanizmów niezależnych od stanu zapalnego w zwłóknieniu jelit.

Jako czynnik niezapalny, stres mechaniczny (MS) związany z obrzękiem, infiltracją komórek zapalnych, deformacją tkanek, zwłóknieniem i zwężeniem10,11,12,13 jest powszechnie spotykany w IBD, zwłaszcza CD, który charakteryzuje się przezściennym zapaleniem. Naprężenie mechaniczne jest najbardziej widoczne w zwężeniu CD, gdzie zwężenie (zapalne lub zwłóknieniowe) w miejscu zapalenia powoduje naprężenie mechaniczne w tkance lokalnej i prowadzi do rozdęcia światła w segmencie bliższym miejscu niedrożności10,14. Wcześniejsze badania in vitro wykazały, że stres mechaniczny zmienia ekspresję genów specyficznych mediatorów stanu zapalnego (tj. COX-2, IL-6)8,14,15 i czynniki wzrostu (tj. TGF-β) w tkankach przewodu pokarmowego, zwłaszcza komórkach mięśni gładkich jelit (SMC)16. Ostatnie badania wykazały również, że ekspresja specyficznych mediatorów profibrotycznych, takich jak czynnik wzrostu tkanki łącznej (CTGF), jest bardzo wrażliwa na obciążenia mechaniczne17,18. Postawiono hipotezę, że stres mechaniczny może odgrywać niezależną rolę patogenną w zapaleniu, zwłóknieniu i przebudowie tkanek związanym z chorobą Alzheimera. Jednak patogenne znaczenie stresu mechanicznego w zapaleniu jelit, zwłóknieniu i przeroscie mięśni gładkich w CD pozostaje w dużej mierze niezbadane. Może to częściowo wynikać z faktu, że stan zapalny jest bardziej widocznym i lepiej zbadanym procesem niż stres mechaniczny. Co ważniejsze, nie ma dobrze zdefiniowanego modelu zwierzęcego IBD, który pozwoliłby odróżnić wpływ stresu mechanicznego od stanu zapalnego.

Obecna praca opisuje gryzoniowy model zapalenia jelita grubego podobnego do choroby Leśniowskiego-Crohna, wywołany przez wstrzyknięcie do okrężnicy odczynnika haptenowego kwasu 2,4,6-trinitrobenzenosulfonowego (TNBS)19,20, który może służyć do badania roli naprężeń mechanicznych w CD. Stwierdzono, że wkroplenie TNBS wywołało miejscowe (~2 cm długości) przezścienne zapalenie ze zwężeniem światła (zwężeniem) w dalszej części okrężnicy. Zwężenie prowadzi do wyraźnego rozdęcia jelit (stresu mechanicznego)14,15, ale niewidoczny stan zapalny w odcinku okrężnicy proksymalnie do miejsca wkroplenia. Wręcz przeciwnie, odcinek okrężnicy dystalny do miejsca zwężenia nie przedstawia stanu zapalnego ani obciążenia mechanicznego. W trzech różnych miejscach zaobserwowano znaczące zmiany w ekspresji genów, zapaleniu, zwłóknieniu i przeroscie SMC. Wyniki sugerują, że stres mechaniczny, a w szczególności ekspresja genów wywołana stresem mechanicznym, może odgrywać kluczową rolę w rozwoju zwłóknienia i hiperplazji w zapaleniu jelita grubego Leśniowskiego-Crohna.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Wszystkie eksperymenty na zwierzętach zostały przeprowadzone zgodnie z instytucjonalnym komitetem ds. opieki nad zwierzętami i ich użytkowania przy University of Texas Medical Branch (#0907051C). Do badania wykorzystano samce lub samice szczurów Sprague-Dawley w wieku ~8-9 tygodni.

1. Przygotowanie zwierząt

  1. Pościć szczury przez 24 godziny i leczyć je środkiem przeczyszczającym (środek do czyszczenia jelit, patrz tabela materiałów) przez noc.
  2. Następnego dnia znieczulij szczury za pomocą systemu anestezjologicznego (patrz tabela materiałów), wystawiając je na działanie 2% izofluranu wraz z 1 l/min tlenu podczas podawania TNBS. Sprawdź, czy nie ma odruchów lub szczypanie u nóg, aby potwierdzić znieczulenie.
  3. Przygotuj świeży roztwór TNBS w zależności od masy ciała.
    UWAGA: Zastosowano TNBS - 65 mg/kg masy ciała w 250 μL 40% etanolu/soli fizjologicznej.
  4. Ułóż szczury w pozycji leżącej na stole anestezjologicznym. Aby wywołać zapalenie jelita grubego, wprowadź przez odbyt otwarty cewnik poliuretanowy klasy medycznej na ~7-8 cm od krawędzi odbytu i delikatnie wkraplaj TNBS (przygotowany w kroku 1.3) do okrężnicy19. Szczurom kontrolnym pozorowanym podawać tylko 250 μl soli fizjologicznej.
  5. Po zakropleniu TNBS lub soli fizjologicznej trzymaj szczury w pozycji leżącej i lekko głową w dół (~30°), z zamkniętym odbytem przez 2 minuty, aby wspomóc dystrybucję TNBS i uniknąć rozlania.
  6. Dostarczaj szczurom jedzenie i wodę ad libitum przez 7 dni i obserwuj szczury codziennie pod kątem masy ciała, spożycia pokarmu, kału i ogólnego stanu zdrowia.

2. Preparaty tkankowe

  1. W dniu eutanazji należy poddać szczury eutanazji za pomocą inhalacji CO2 i potwierdzić eutanazję ze zwichnięciem szyjki macicy.
  2. Otwórz brzuch szczura za pomocą chirurgicznych nożyczek i kleszczy.
  3. Ostrożnie usuń całą okrężnicę (nad kanałem odbytu) i natychmiast przenieś okrężnicę do lodowatego buforu 1x HBSS.
  4. Wyprostuj dwukropek w buforze i zmierz długość dwukropka za pomocą linijki. Weź nylonową nić i zaokrąglij wokół okrężnicy, aby zmierzyć zewnętrzny obwód segmentów okrężnicy u szczurów kontrolnych i leczonych TNBS. Weź tkanki o pełnej grubości do histologii.
  5. Rozetnij okrężnicę wzdłuż deski krezkowej i dobrze oczyść okrężnicę buforem HBSS. Oceń okrężnicę pod kątem makroskopowego wyniku zapalenia na podstawie kryteriów opisanych wcześniej19 z minimalnymi modyfikacjami.
    UWAGA: 0 = normalna błona śluzowa; 1 = miejscowe przekrwienie, ale bez nadżerek i owrzodzeń; 2 = wrzód i zwężenie (dotknięty obszar < 5 mm); 3 = ciężkie owrzodzenie, blizna i zwężenie (dotknięty obszar > 5 mm).
  6. Pobrać próbki tkanki okrężnicy z miejsca P (porcja 2-3 cm przed ustnym brzegiem miejsca zapalenia), miejsca I (miejsce zapalenia, zwykle 4-6 cm od końca okrężnicy, do którego wkrapla się TNBS) i miejsca D (część 1-2 cm dystalnie do brzusznego brzegu miejsca zapalenia), odpowiednio od szczurów leczonych TNBS.
    UWAGA: Z każdego segmentu pobrano tkankę jelita grubego o długości ~1-2 cm. Ponadto, tkanki jelita grubego o długości 2 cm (~ 4-6 cm od końca okrężnicy) szczurów leczonych solą fizjologiczną zostały pobrane jako pozorowana kontrola (S) (Ryc. 1).
  7. Pobrać próbki tkanek z każdego miejsca w celu przygotowania pełnej grubości, a w razie potrzeby odpowiednio warstwy błony śluzowej/podśluzówkowej i mięśni zewnętrznych21,22.
  8. Próbki tkanek należy najpierw zamrozić w ciekłym azocie przed przechowywaniem ich w temperaturze -80 °C w celu przechowywania przez okres do jednego roku i do celów przyszłych (tj. preparatów RNA).

3. Histopatologiczna ocena zapalenia i zwłóknienia jelit

  1. Utrwal tkanki okrężnicy na całej grubości w 10% formalinie przez 48 godzin, a następnie przenieś do 70% etanolu na 24-48 godzin.
  2. Użyj mikrotomu, aby wyciąć skrawki parafiny o grubości 5 μm dla barwienia Hematoksyliną i eozyną (H&E) oraz Trichromem Massona6,19,23 (patrz Tabela materiałów).
  3. Rejestruj i przeglądaj obrazy za pomocą mikroskopu pionowego wyposażonego w kamerę o wysokiej rozdzielczości z kompatybilnym oprogramowaniem (patrz Spis materiałów).
  4. Wskaźniki stopnia stanu zapalnego i zwłóknienia przez dwóch niezależnych badaczy, w tym patologa chirurgicznego przewodu pokarmowego, zgodnie z kryteriami opisanymi wcześniej6,23 z modyfikacjami. Zobacz Plik Uzupełniający 1, aby zapoznać się z wynikami.
  5. Zmierzyć grubość i liczbę komórek okrągłych i podłużnych warstw mięśni na przekrój poprzeczny w czterech widokach każdej próbki barwionej H&E i przyjąć średnią z czterech pomiarów dla każdej próbki.

4. Ekstrakcja RNA i ilościowy RT-PCR

  1. Homogenizować wycięte tkanki okrężnicy uzyskane z kontroli pozorowanej i trzech miejsc (P, I, D) szczurów z zapaleniem jelita grubego TNBS w odczynniku ekstrakcyjnym zestawu do ekstrakcji RNA (patrz tabela materiałów).
  2. Wyizoluj RNA z każdej próbki za pomocą zestawu. Eluować osad RNA w 30 μl wody wolnej od RNaz.
  3. Określić ilościowo stężenie RNA i sprawdzić czystość za pomocą mikroobjętościowego spektrofotometru UV-Vis (patrz tabela materiałów).
  4. Użyj 1 μg całkowitego RNA do syntezy cDNA21,22 przy użyciu zestawu do syntezy RNA (patrz Tabela materiałów).
  5. Analizuj i określaj ilościowo poziomy ekspresji genów, wykonując PCR w czasie rzeczywistym z 50 ng cDNA jako matrycą, sondami IL-6 i CTGF przy użyciu komercyjnego zestawu PCR do systemu PCR w czasie rzeczywistym (patrz tabela materiałów).
  6. Użyj genu kontrolnego 18S rRNA, aby znormalizować próbki i określić ilościowo względną ekspresję genów przy użyciu uzyskanych wartości Cq.

5. Analiza statystyczna

  1. Wykorzystaj oprogramowanie do analizy statystycznej (patrz tabela materiałów), aby porównać szczury z pozorowaną kontrolą i zapaleniem jelita grubego TNBS.
  2. Uznajmy, że wartość p < 0,05 jest statystycznie istotna15,19.
  3. Aby przetestować różnice między dwiema grupami, użyj analizy testu t Studenta i wykonaj test ANOVA, jeśli porównania obejmują więcej niż dwie grupy15,19.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Makroskopowy widok podobnego do choroby Leśniowskiego-Crohna zapalenia jelita grubego wywołanego przez wewnątrzokrężnicowe wkroplenie TNBS
Jak pokazano w Rysunek 1, wewnątrzjelitowe wkroplenie TNBS u szczurów wywołało miejscowe zapalenie przezścienne (~2 cm długości) z pogrubioną ścianą jelita i zwężonym światłem (zwężeniem) w miejscu wkroplenia w dystalnej części jelita grubego (Rysunek 1A). Miejsce wkroplenia TNBS jest określane jako miejsce I. W wyniku przez...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Zapalenie jelita grubego wywołane TNBS zostało wprowadzone w 1989 roku i od tego czasu jest używane jako eksperymentalny model choroby Leśniowskiego-Crohna 19,20,23. Do istotnych cech tego modelu u gryzoni należy rozwój przezściennego stanu zapalnego, który bardzo przypomina zmiany histopatologiczne rozwijające się w ludzkiej chorobie Leśniowskiego-Crohna 19,20. Dotychcz...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Autorzy nie zgłaszają konfliktu interesów i nie mają nic do ujawnienia.

Podziękowania

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ta praca jest częściowo wspierana przez granty od NIH (R01 DK124611 do XZS) i Departamentu Obrony USA (W81XWH-20-1-0681 do XZS). Prace histologiczne wykonano przy pomocy Pracowni Patologii Chirurgicznej UTMB.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Oprogramowanie sterujące ACT-1 Ver2.63NikonDXM1200F
C1000 z 96-dołkowym modułem szybkiej reakcjiBIO-RAD1851196
CFX96 do systemów PCR w czasie rzeczywistymBIO-RAD1845097
Barwnik specjalny Dako Agilent Artisan Link ProDakoAR310
Dako-Agilent Masson's Zestaw trichromowy ref# AR173DakoAR173
DXM1200 Cyfrowa kolorowa kamera HRNikonDXM1200
Eukarionyczna 18S rRNA Kontrola endogennaThermoFisher Scientific4352930E
E-Z AnestezjaE-Z Systems Inc.EZ-155
GraphPad Prism 9GraphPad9.0.2 (161)
96-dołkowe płytki PCR z twardą skorupą, niskoprofilowe, cienkościenne, w listwach przypodłogowych, białe/przezroczysteBIO-RADHSP9601
HBSS (Corning Hank's Balanced Salt Solution, 1x bez wapnia i magnezu)CORNING21-021-CV
HM 325 MicrotomeThermo Scientific23-900-667
IsofluranePiramalNDC 66794-017-10
LI-COR Odyssey Cyfrowy system obrazowaniaLI-COR9120
Mastercycler epGradient Thermal Cycler z panelem sterowania Termocykler 5340Eppendorf5341
Cewnik poliuretanowy klasy medycznej klasy otwartejCovidien8890703013
Spektrofotometry NanoDrop 2000/2000cThermo Fisher ScientificND2000CLAPTOP
Mikroskop pionowy Nikon Eclipse E800NikonE800
Kanapki z nitrocelulozą/bibułą filtracyjną Opakowanie 50, 0,45 i mu; m, 7 x 8,5 cmBIO-RAD1620215
Glikol polietylenowy 3350, osmotyczny środek przeczyszczającyMiralaxC8175Dawka: 17g w 226 ml wody
RNeasy Mini Kit (250)
250 RNeasy Mini wirujące kolumny, probówki zbiorcze (1,5 ml i 2 mL), odczynniki i wolne od RNaz		QIAGEN74106
SuperScript III System syntezy pierwszej niciThermoFisher Scientific18080051
Testy ekspresji genów TaqMan Rn00573960_g1 sonda CTGFThermoFisher Scientific4331182
Testy ekspresji genów TaqMan Rn99999011_m1 Sonda IL6ThermoFisher Scientific4331182
TaqMan Fast Advanced Master MixThermoFisher Scientific4444557
Tissue-Tek Prisma H& E Zestaw do barwienia #1Sakura6190
Tissue-Tek Prisma Plus Automatyczny barwnik do szkiełekSakura6171
TNBS (roztwór kwasu pikrylosulfonowego)SIGMA-ALDRICH92822
Termocykler dotykowy Moduł reakcji optycznej

Bibliografia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Kappelman, M. D., et al. The prevalence and geographic distribution of Crohn's disease and ulcerative colitis in the United States. Clinical Gastroenterology and Hepatology. 5 (12), 1424-1429 (2007).
  2. Hwang, J. M., Varma, M. G. Surgery for inflammatory bowel disease. World Journal of Gastroenterology. 14 (17), 2678-2690 (2008).
  3. Latella, G., Rieder, F. Intestinal fibrosis: Ready to be reversed. Current Opinion in Gastroenterology. 33 (4), 239-245 (2017).
  4. Rieder, F., Fiocchi, C., Rogler, G. Mechanisms, management, and treatment of fibrosis in patients with inflammatory bowel diseases. Gastroenterology. 152 (2), 340-350 (2017).
  5. Bettenworth, D., et al. Assessment of Crohn's disease-associated small bowel strictures and fibrosis on cross-sectional imaging: A systematic review. Gut. 68 (6), 1115-1126 (2019).
  6. Chen, W., Lu, C., Hirota, C., Iacucci, M., Ghosh, S., Gui, X. Smooth muscle hyperplasia/hypertrophy is the most prominent histological change in Crohn's fibrostenosing bowel strictures: A semiquantitative analysis by using a novel histological grading scheme. Journal of Crohn's and Colitis. 11 (1), 92-104 (2017).
  7. Olaison, G., Smedh, K., Sjödahl, R. Natural course of Crohn's disease after ileocolic resection: Endoscopically visualised ileal ulcers preceding symptoms. Gut. 33 (3), 331-335 (1992).
  8. Lin, Y. M., Li, F., Shi, X. Z. Mechanical stress is a pro-inflammatory stimulus in the gut: In vitro, in vivo and ex vivo evidence. PLoS One. 9, 106242(2014).
  9. Gabella, G., Yamey, A. Synthesis of collagen by smooth muscle in the hyertrophic intestine. Experimental Physiology. 62 (3), 257-264 (1977).
  10. Katsanos, K. H., Tsianos, V. E., Maliouki, M., Adamidi, M., Vagias, I., Tsianos, E. V. Obstruction and pseudo-obstruction in inflammatory bowel disease. Annals of Gastroenterology. 23 (4), 243-256 (2010).
  11. Johnson, L. A., et al. Matrix stiffness corresponding to strictured bowel induces a fibrogenic response in human colonic fibroblasts. Inflammatory Bowel Disease. 19 (5), 891-903 (2013).
  12. Gayer, C. P., Basson, M. D. The effects of mechanical forces on intestinal physiology and pathology. Cell Signalling. 21 (8), 1237-1244 (2009).
  13. Cox, C. S., et al. Hypertonic saline modulation of intestinal tissue stress and fluid balance. Shock. 29 (5), 598-602 (2008).
  14. Shi, X. Z. Mechanical regulation of gene expression in gut smooth muscle cells. Frontiers in Physiology. 8, 1000(2017).
  15. Shi, X. Z., Lin, Y. M., Powell, D. W., Sarna, S. K. Pathophysiology of motility dysfunction in bowel obstruction: Role of stretch-induced COX-2. American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver. 300 (1), 99-108 (2011).
  16. Gutierrez, J. A., Perr, H. A. Mechanical stretch modulates TGF-beta1 and alpha1(I) collagen expression in fetal human intestinal smooth muscle cells. American Journal of Physiology. 277 (5), 1074-1080 (1999).
  17. Lipson, K. E., Wong, C., Teng, Y., Spong, S. CTGF is a central mediator of tissue remodeling and fibrosis and its inhibition can reverse the process of fibrosis. Fibrogenesis Tissue Repair. 5, Supp 1 24(2012).
  18. Chaqour, B., Goppelt-Struebe, M. Mechanical regulation of the Cyr61/CCN1 and CTGF/CCN2 proteins. The FEBS Journal. 273 (16), 3639-3649 (2006).
  19. Shi, X. Z., Winston, J. H., Sarna, S. K. Differential immune and genetic responses in rat models of Crohn's colitis and ulcerative colitis. American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver. 300 (1), 41-51 (2011).
  20. Antoniou, E., et al. The TNBS-induced colitis animal model: An overview. Annals of Medicine and Surgery (London). 11, 9-15 (2016).
  21. Shi, X. Z., Sarna, S. K. Gene therapy of Cav1.2 channel with VIP and VIP receptor agonists and antagonists: A novel approach to designing promotility and antimotility agents. American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver. 295 (1), 187-196 (2008).
  22. Lin, Y. M., Sarna, S. K., Shi, X. Z. Prophylactic and therapeutic benefits of COX-2 inhibitor on motility dysfunction in bowel obstruction: Roles of PGE2 and EP receptors. American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver. 302 (2), 267-275 (2012).
  23. Morris, G. P., Beck, P. L., Herridge, M. S., Depew, W. T., Szewczuk, M. R., Wallace, J. L. Hapten-induced model of chronic inflammation and ulceration in the rat colon. Gastroenterology. 96 (3), 795-803 (1989).
  24. Mudter, J., Neurath, M. F. Il-6 signaling in inflammatory bowel disease: Pathophysiological role and clinical relevance. Inflammatory Bowel Disease. 13 (8), 1016-1023 (2007).
  25. Geesala, R., Lin, Y. M., Zhang, K., Shi, X. Z. Targeting mechano-transcription process as therapeutic intervention in gastrointestinal disorders. Frontiers in Pharmacology. 12, 809350(2021).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Sprostowanie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Formal Correction: Erratum: A TNBS-Induced Rodent Model to Study the Pathogenic Role of Mechanical Stress in Crohn's Disease
Posted by JoVE Editors on 5/20/2022. Citeable Link.

An erratum was issued for: A TNBS-Induced Rodent Model to Study the Pathogenic Role of Mechanical Stress in Crohn's Disease. The Introduction and Protocol were updated.

The first sentence of the Introduction was updated from:

Inflammatory bowel diseases (IBD) such as Crohn's disease (CD) are chronic inflammatory disorders of the gastrointestinal tract affecting approximately 20 per 1,00,000 in Europe and USA. CD is characterized by transmural inflammation, intestinal fibrosis, and luminal stenosis.

to:

Inflammatory bowel diseases (IBD) such as Crohn's disease (CD) are chronic inflammatory disorders of the gastrointestinal tract affecting approximately 20 per 1,000,000 in Europe and USA. CD is characterized by transmural inflammation, intestinal fibrosis, and luminal stenosis.

Step 1.3 in the Protocol was updated from:

Prepare fresh TNBS solution according to body weights.
NOTE: TNBS - 65 mg/kg of body weight in 250 µL of 40% ethanol was used.

to:

Prepare fresh TNBS solution according to body weights.
NOTE: TNBS - 65 mg/kg of body weight in 250 µL of 40% ethanol/saline was used.

Tagi

Model zapalenia jelita grubego indukowanego TNBSzapalenie transmuralnew knienie jelitzw enie wiat a jelitarozszerzenie jelita grubegoprzebudowa tkankiekspresja gen w

Powiązane artykuły