Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Izolacja wrodzonych komórek limfoidalnych grupy 2 z błony śluzowej nosa myszy w celu wykrycia ekspresji CD226

2.5K wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/63525

⸱

10 maja 2022

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Otolaryngological Department of Tangdu Hospital, Fourth Military Medical University, 2Institute of Medical Research, Northwestern Polytechnical University, 3Orthopedic Department of Tangdu Hospital, Fourth Military Medical University, 4Department of Immunology, Fourth Military Medical University

* These authors contributed equally

W tym artykule

Podsumowanie

Wrodzone komórki limfoidalne grupy 2 (ILC2), zaangażowane w zapalenie typu 2, głównie uczestniczą w odpowiedzi na infekcję robakami pasożytniczymi, choroby alergiczne, homeostazę metaboliczną i naprawę tkanek. W tym badaniu przedstawiono procedurę izolacji ILC2 z mysiej błony śluzowej nosa i wykrywania ekspresji CD226.

Streszczenie

Dzięki licznym badaniom na temat wrodzonych komórek limfoidalnych grupy 2 (ILC2) opublikowanym na przestrzeni lat, ILC2 są powszechnie znane z udziału w regulacji różnych procesów patologicznych, w tym odporności przeciw robakom, naprawie tkanek, termogenezie i chorobom autoimmunologicznym, takim jak astma i alergiczny nieżyt nosa (AR). ILC2 na stałe znajdują się w tkankach obwodowych, takich jak skóra, jelita, płuca i jama nosowa; Istnieją jednak ograniczone informacje na temat ich dokładnych funkcji w odporności błony śluzowej nosa. CD226 jest aktywującą cząsteczką kostymulacyjną, ulegającą głównie ekspresji na komórkach NK (natural killer), limfocytach T i monocytach zapalnych. Nie wiadomo jednak, czy ILC2 wyrażają CD226 lub odgrywają rolę w patogenezie chorób związanych z ILC2s. Tutaj opracowaliśmy metodę izolowania i identyfikowania ILC2 z błony śluzowej nosa i wykryliśmy ekspresję CD226 na ILC2 uzyskanych od zdrowych myszy i myszy AR. W niniejszym artykule opisujemy ten protokół izolacji i identyfikacji ILC2 z mysiej błony śluzowej nosa, który pomoże zbadać wewnętrzny patologiczny mechanizm zaburzeń immunologicznych w chorobach błony śluzowej nosa.

Wprowadzenie

Wrodzone komórki limfoidalne grupy 2 (ILC2s) zostały po raz pierwszy odkryte w tkankach jamy otrzewnej myszy, a następnie wykazano, że są obecne we krwi i innych tkankach obwodowych, takich jak płuca, skóra i jama nosowa1,2,3. Jako komórki rezydujące w tkankach, ILC2 są głównie utrzymywane i namnażane lokalnie i działają jako pierwsi strażnicy reagujący na egzogenne szkodliwe bodźce poprzez wytwarzanie licznych cytokin typu 2 i indukowanie odporności typu 24,5,6. ILC2 mogą również wywierać swoje działanie poprzez transport w kierunku zainfekowanych tkanek7,8.

Podobnie jak w przypadku komórek T-helper 2 (Th2), skomplikowane sieci regulacyjne ILC2 zapewniają ich znaczący udział w postępie różnych chorób zapalnych typu 2, w tym chorób alergicznych dróg oddechowych8,9. W astmie alarminy pochodzące z komórek nabłonkowych mogą aktywować ILC2, które dodatkowo sprzyjają zapaleniu płuc poprzez wydzielanie interleukiny (IL)-4, IL-5 i IL-1310. Badania kliniczne wykazały również, że poziomy ILC2 były znacznie podwyższone w plwocinie i krwi pacjentów z ciężką astmą, co sugeruje związek ILC2 z ciężkością astmy i ich funkcją jako predyktora progresji astmy11.

Alergiczny nieżyt nosa (AR) jest powszechną przewlekłą chorobą zapalną, która dotyka miliony ludzi rocznie, a skuteczne metody leczenia tej choroby są ograniczone12,13. ILC2 odgrywają kluczową rolę w patofizjologii AR, zarówno w fazie uczuleni, jak i w fazie generowania objawów i stanu zapalnego14. U pacjentów z AR zgłaszano, że poziomy ILC2 we krwi obwodowej są podwyższone zarówno miejscowo, jak i ogólnoustrojowo15. Jednak pewne efekty i mechanizmy leżące u podstaw ILC2 na patofizjologię i progresję AR nadal wymagają dalszych badań.

CD226 - transbłonowa glikoproteina, która służy jako cząsteczka kostymulacyjna - ulega ekspresji głównie na komórkach NK (natural killer), limfocytach T i innych monocytach zapalnych16,17. Interakcja CD226 i jego ligandów (CD155 i/lub CD112) lub konkurenta (TIGIT) pozwala mu uczestniczyć w biologicznych funkcjach różnych komórek odpornościowych18. Wiązanie ligandów na komórkach prezentujących antygen z CD226 na limfocytach cytotoksycznych (CTL) sprzyja aktywacji obu komórek jednocześnie, podczas gdy aktywacja CTL może być dodatkowo tłumiona przez TIGIT (immunoreceptor limfocytów T z domenami Ig i ITIM), konkurenta CD22619,20. Badanie ex vivo na ludziach wykazało, że CD226 i CD155 na limfocytach T regulują równowagę między Th1 / Th17 i Th2 poprzez różnicową modulację podzbiorów Th21. CD226 może również pośredniczyć w adhezji płytek krwi i zabijaniu guza NK22,23. Tymczasem CD226 jest dobrze przebadany pod kątem patogenezy różnych chorób zakaźnych, chorób autoimmunologicznych i nowotworów18,24,25. Obecnie CD226 stał się nowym jasnym punktem w immunoterapii. Badania wykazały, że pęcherzyki zewnątrzkomórkowe mogą odwrócić ekspresję CD226 na komórkach NK, aby przywrócić ich aktywność cytotoksyczną i interweniować w postęp raka płuc26. Niedawne badanie ujawniło podklaster płodowych ILC grupy 3 w jelitach płodowych charakteryzujących się wysoką ekspresją CD226 przez sekwencjonowanie RNA pojedynczej komórki27, co wskazuje, że CD226 może odgrywać role we wrodzonej odporności za pośrednictwem komórek limfoidalnych.

Nasza wiedza na temat ILC2 w zapaleniu dróg oddechowych opiera się głównie na badaniach nad astmą; jednak niewiele wiadomo o ich funkcjach w odporności błony śluzowej nosa. W związku z tym ustanowiono protokół izolacji i identyfikacji ILC2 z błony śluzowej nosa. Badanie koncentruje się na ekspresji CD226 na ILC2 w tkankach nosa i jego zmienności między myszami zdrowymi i AR. Może to dostarczyć nowych informacji na temat mechanizmów leżących u podstaw regulacji lokalnej odporności za pośrednictwem ILC2 i posłużyć jako podstawa do opracowania nowych podejść do leczenia AR.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

Wszystkie eksperymenty zostały przeprowadzone zgodnie z Wytycznymi dotyczącymi opieki i użytkowania zwierząt laboratoryjnych. Wszystkie procedury i protokoły zostały zatwierdzone przez Komisję Etyki Badań Naukowych IV Wojskowego Uniwersytetu Medycznego (nr 20211008).

1. Ustanowienie mysiego modelu AR

  1. Trzymanie samców i samic myszy typu dzikiego (WT) C57BL/6 w wieku 8-12 tygodni w określonych warunkach wolnych od patogenów i zapewnienie standardowej karmy laboratoryjnej i wody.
  2. Zemulguj 50 μg albuminy jaja kurzego (OVA) w 0,2 ml sterylnego PBS zawierającego 2 mg wodorotlenku glinu na czystej ławce, aby zachować sterylność. W dniach 0, 7 i 14 należy wstrzyknąć dootrzewnowo samicom lub samcom myszy po 50 μg zemulgowanego OVA.
  3. W dniach 21, 22, 23, 24 i 25 wkraplać donosowo myszom 50 μg OVA rozpuszczonych w 30 μl sterylnego PBS (15 μl na nozdrze) w znieczuleniu wziewnym (2-3% izofluranu o szybkości przepływu tlenu lub 0,5 l / min).
  4. Poddaj myszy eutanazji 24 godziny po ostatnim wyzwaniu (dzień 26).

2. Izolacja komórek jednojądrzastych (MNC) z błony śluzowej nosa

  1. Poddaj myszy eutanazji przez zwichnięcie szyjki macicy w głębokim znieczuleniu. Namocz myszy głową do góry w 75% etanolu przez 5 minut i unikaj przedostania się etanolu do zewnętrznego nozdrza. Połóż brzuch w dół na stole operacyjnym
    2. .
  2. Odetnij przednie zęby. W linii środkowej głowy wykonaj nacięcie i rozetnij skórę nożyczkami.
  3. Zdejmij dolną szczękę, odetnij cały nos wzdłuż końca podniebienia i umieść tkankę na 60-milimetrowej szalce Petriego zawierającej 5 ml lodowatego PBS. Za pomocą nożyczek i kleszczy usuń mięso i mięśnie przylegające do kości.
  4. Przenieś nos myszy na nową szalkę Petriego o średnicy 60 mm zawierającą 5 ml lodowatego PBS. Umyj kości dwukrotnie 5 ml lodowatego PBS.
  5. Przenieś nos do probówki mikrowirówkowej o pojemności 1,5 ml.
  6. Wystarczająco rozbić i przenieść nos do probówki o pojemności 15 ml zawierającej 2 ml wstępnie podgrzanego buforu do trawienia (pożywka RPMI 1640 uzupełniona 1 mg/ml kolagenazy IV i 10 U/ml DNazy I).
  7. Zamocuj pokrywę i umieść rurkę pionowo w wytrząsarce orbitalnej w temperaturze 37 °C, z ciągłym mieszaniem przy 120-150 obr./min przez 40 min.
    UWAGA: Podgrzej bufor trawienny do 37 °C, aby osiągnąć najwyższą aktywność enzymu.
  8. Dodaj 5 ml lodowatej pożywki RPMI 1640 zawierającej 10% płodowej surowicy bydlęcej (FBS), aby zatrzymać proces trawienia.
  9. Przefiltruj przez sitko o średnicy 70 μm, aby usunąć fragmenty stałe.
  10. Wirować przy 500 x g przez 5 minut, a następnie delikatnie wyrzucić supernatant.
  11. Zawiesić osad w lodowato zimnym podłożu RPMI 1640 i wirować przy 500 x g przez 5 minut. Delikatnie wyrzucić supernatant.
  12. Ponownie zawiesić osad komórkowy w 4 ml pożywki o gradiencie gęstości 40% (160 μl 10x PBS + 1,44 ml roztworu podstawowego pożywki gradientowej gęstości + 2,4 ml pożywki RPMI 1640).
  13. Delikatnie włóż pipetę Pasteura do dna probówki i powoli dodaj 2,5 ml pożywki o gradiencie gęstości 80% (200 μl 10x PBS + 1,8 ml roztworu podstawowego pożywki o gradientzie gęstości + 0,5 ml pożywki RPMI 1640).
  14. Ustawić przyspieszenie i opóźnienie wirówki na niższym poziomie niż trzeci bieg i wirować przy 400 x g przez 15 minut w temperaturze pokojowej (RT).
  15. Usuń górną warstwę zanieczyszczeń przed opróżnieniem komórek na granicy faz, aby uniknąć potencjalnego zanieczyszczenia. Ostrożnie opróżnij warstwę komórek jednojądrzastych (MNC) na granicy faz pożywki o gradiencie gęstości 40%/80% do probówki o pojemności 15 ml zawierającej 2 ml lodowatego PBS za pomocą pipety. Dwukrotnie umyj komórki lodowatym PBS.

3. Barwienie powierzchni do analizy FCM

  1. Zebrać komórki i odwirować przy 500 x g przez 5 minut w temperaturze 4 °C. Zawiesić osad komórkowy w buforze do barwienia (PBS uzupełniony 2% FBS i 0,1% NaN3) i wirować przy 500 x g przez 5 minut w temperaturze 4 °C. Odrzucić supernatant.
    UWAGA: Zachowaj ostrożność podczas przygotowywania buforu do barwienia. NaN3 jest bardzo toksyczny i może powodować uszkodzenie narządów w przypadku połknięcia, wdychania lub kontaktu ze skórą. Unikaj również uwolnienia do środowiska.
  2. Zawiesić komórki w 80 μl roztworu blokującego (przeciwciało anty-CD16/32 (1:100) rozcieńczone w buforze barwiącym) na probówkę. Inkubować przez 30 minut w ciemności w temperaturze 4 °C.
  3. Nie przemywając, dodać 20 μl odpowiedniego rozcieńczenia koktajlu przeciwciał barwiących powierzchnię (tabela 1).
  4. Dodać 1 μl (na test) barwnika 520 (FVD) do utrwalania żywotności tuż przed dodaniem koktajlu przeciwciał do próbek. Inkubować w ciemności w temperaturze 4 °C przez 30 min. Ustaw pasujące przeciwciała izotypowe i fluorescencję minus jeden (FMO) jako kontrole ujemne.
  5. Przemyć komórki w 500 μl buforu barwiącego, odwirowując przy 500 x g przez 5 minut w temperaturze 4 °C.
  6. Zawiesić osad komórkowy w 200 μl buforu barwiącego. Dodać 50 μl wirowych bezwzględnych kulek do liczenia do wybarwionych komórek i zamieszać. Poddaj je analizie cytometrii przepływowej (FCM).
    UWAGA: Dane FCM uzyskano za pomocą analizatora komórek spektralnych i przeanalizowano za pomocą oprogramowania do analizy cytometrii przepływowej (FCM).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

W celu zbadania roli komórek ILC2 w AR opracowano mysi model indukowany OVA. Konstrukcja mysiego modelu AR opierała się na wcześniejszych badaniach z niewielkimi modyfikacjami28,29,30,31. Nagrano 10-minutowy film, aby zmierzyć częstotliwość kichania i drapania nosa po ostatniej stymulacji donosowej. Objawy alergiczne myszy z indukowanym OVA AR przedstawiono na Rysunku 1

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

ILC2 są ściśle związane ze stanem zapalnym typu 2 i zaburzeniami zapalnymi, jak wykazano w coraz większej liczbie badań. Zarówno modele mysie, jak i obserwacja człowieka przyczyniają się do lepszego zrozumienia jego funkcji w górnych drogach oddechowych. W patofizjologii astmy ILC2 są aktywowane przez limfopoetynę zrębu grasicy, IL-25 i IL-33, które są głównie wytwarzane przez komórki nabłonkowe. Następnie, odzwierciedlając komórki Th2, ILC2 wytwarzają IL-4, IL-5 i IL-13 w celu zaostrzenia stanu zapalnego typu 2

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Podziękowania

R.Z. był wspierany przez Narodową Fundację Nauk Przyrodniczych Chin (nr 81871258) oraz fundusze dostarczone przez Czwarty Wojskowy Uniwersytet Medyczny (No.2020rcfczr). Y.Z. był wspierany przez Program Badań Podstawowych Nauk Przyrodniczych Shaanxi (nr 2021JM-081).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Wodorotlenek glinuMeilun technologia biologiczna21645-51-2
CD11beBioscience11-0112-82Stosowany w przeciwciałie
koktajl CD11cBioLegend117306Stosowany w przeciwciałie
CD16/32BioLegend101302Klon: 93; Rozcieńczenie 1:100
CD226BioLegend128812Stosowany w koktajlu przeciwciała
CD3eBioLegend100306Stosowany w koktajlu przeciwciała
CD45BioLegend103128Stosowany w przeciwciałie
CD45ReBioscience11-0452-82Stosowany w przeciwciałie Coctail
CD90.2BD Pharmingen553014Stosowany w przeciwciałach koktajl
Collagenase IVDIYIBio DY40128
CountBright absolutne koraliki do liczeniaInvitrogenC36950absolutne koraliki do liczenia
Dnase figure-materials-1BeyotimeD7076
Płodowa surowica bydlęcagibco10270-106
Utrwalany barwnik żywotności eFluor 520 (FITC)eBioscience65-0867-14FVD
HBSS, wapń, magnezServicebioG4204-500
KLRG1eBioscience17-5893-81Stosowany w koktajlu przeciwciała
NaN3SIGMAS2002
NovoExpressanalizy cytometrii przepływowej (FCM)AgilentTechnologieswersja 1.5.0
OVASIGMA9006-59-1
PBS, 1xServicebioG4202-500
PBS, 10xServicebioG4207-500
PercollYeasen40501ES60gęstość pożywka gradientowa
Pożywka hodowlana RPMI 1640Corning10-040-CVRV
Analizator komórek spektralnychSONYSA3800
Oprogramowanie do

Bibliografia

  1. Huang, Y., et al. S1P-dependent interorgan trafficking of group 2 innate lymphoid cells supports host defense. Science. 359 (6371), 114-119 (2018).
  2. Price, A. E., et al. Systemically dispersed innate IL-13-expressing cells in type 2 immunity. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 107 (25), 11489-11494 (2010).
  3. Ebihara, T., et al. Trained innate lymphoid cells in allergic diseases. Allergology International. 70 (2), 174-180 (2021).
  4. Gasteiger, G., Fan, X., Dikiy, S., Lee, S. Y., Rudensky, A. Y. Tissue residency of innate lymphoid cells in lymphoid and nonlymphoid organs. Science. 350 (6263), 981-985 (2015).
  5. Moro, K., et al. Interferon and IL-27 antagonize the function of group 2 innate lymphoid cells and type 2 innate immune responses. Nature Immunology. 17 (1), 76-86 (2016).
  6. Helou, D. G., et al. LAIR-1 acts as an immune checkpoint on activated ILC2s and regulates the induction of airway hyperreactivity. The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 149 (1), 223-236 (2022).
  7. Karta, M. R., et al. beta2 integrins rather than beta1 integrins mediate Alternaria-induced group 2 innate lymphoid cell trafficking to the lung. The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 141 (1), 329-338 (2018).
  8. Helou, D. G., et al. PD-1 pathway regulates ILC2 metabolism and PD-1 agonist treatment ameliorates airway hyperreactivity. Nature Communications. 11 (1), 3998(2020).
  9. Kabata, H., Moro, K., Koyasu, S. The group 2 innate lymphoid cell (ILC2) regulatory network and its underlying mechanisms. Immunological Reviews. 286 (1), 37-52 (2018).
  10. Zheng, H., et al. The role of Type 2 innate lymphoid cells in allergic diseases. Frontiers in Immunology. 12, 586078(2021).
  11. Maggi, L., et al. The dual function of ILC2: From host protection to pathogenic players in type 2 asthma. Molecular Aspects of Medicine. 80, 100981(2021).
  12. Meltzer, E. O., et al. Burden of allergic rhinitis: results from the Pediatric Allergies in America survey. The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 124, 3 Suppl 43-70 (2009).
  13. Wheatley, L. M., Togias, A. Clinical practice. Allergic rhinitis. The New England Journal of Medicine. 372 (5), 456-463 (2015).
  14. Bousquet, J., et al. Allergic rhinitis. Nature Reviews. Disease Primers. 6 (1), 95(2020).
  15. Kato, A. Group 2 innate lymphoid cells in airway diseases. Chest. 156 (1), 141-149 (2019).
  16. Nakamura-Shinya, Y., et al. DNAM-1 promotes inflammation-driven tumor development via enhancing IFN-gamma production. International Immunology. 34 (3), 149-157 (2022).
  17. Braun, M., et al. CD155 on Tumor cells drives resistance to immunotherapy by inducing the degradation of the activating receptor CD226 in CD8(+) T cells. Immunity. 53 (4), 805-823 (2020).
  18. Huang, Z., Qi, G., Miller, J. S., Zheng, S. G. CD226: An emerging role in immunologic diseases. Frontiers in Cell and Developmental Biology. 8, 564(2020).
  19. Gilfillan, S., et al. DNAM-1 promotes activation of cytotoxic lymphocytes by nonprofessional antigen-presenting cells and tumors. Journal of Experimental Medicine. 205 (13), 2965-2973 (2008).
  20. Zhang, D., et al. TIGIT-Fc alleviates acute graft-versus-host disease by suppressing CTL activation via promoting the generation of immunoregulatory dendritic cells. Biochimica et Biophysica Acta: Molecular Basis of Disease. 1864, 3085-3098 (2018).
  21. Lozano, E., Joller, N., Cao, Y., Kuchroo, V. K., Hafler, D. A. The CD226/CD155 interaction regulates the proinflammatory (Th1/Th17)/anti-inflammatory (Th2) balance in humans. Journal of Immunology. 191 (7), 3673-3680 (2013).
  22. Kojima, H., et al. CD226 mediates platelet and megakaryocytic cell adhesion to vascular endothelial cells. Journal of Biological Chemistry. 278 (38), 36748-36753 (2003).
  23. Martinet, L., Smyth, M. J. Balancing natural killer cell activation through paired receptors. Nature Reviews. Immunology. 15 (4), 243-254 (2015).
  24. Yeo, J., Ko, M., Lee, D. H., Park, Y., Jin, H. S. TIGIT/CD226 axis regulates anti-tumor immunity. Pharmaceuticals. 14 (3), Basel, Switzerland. 200(2021).
  25. Nakano, M., et al. Association of elevated serum soluble CD226 levels with the disease activity and flares of systemic lupus erythematosus. Scientific Reports. 11 (1), 16162(2021).
  26. Chang, W. A., et al. miR-150-5p-containing extracellular vesicles are a new immunoregulator that favor the progression of lung cancer in hypoxic microenvironments by altering the phenotype of NK cells. Cancers. 13 (24), 6552(2021).
  27. Stehle, C., et al. T-bet and RORalpha control lymph node formation by regulating embryonic innate lymphoid cell differentiation. Nature Immunology. 22 (10), 1231-1244 (2021).
  28. Piao, C. H., Fan, Y. J., Nguyen, T. V., Song, C. H., Chai, O. H. Mangiferin alleviates ovalbumin-induced allergic rhinitis via Nrf2/HO-1/NF-kappaB signaling pathways. International Journal of Molecular Sciences. 21 (10), 3415(2020).
  29. Zhao, Y., Tao, Q., Wu, J., Liu, H. DMBT1 has a protective effect on allergic rhinitis. Biomedicine and Pharmacotherapy. 121, 109675(2020).
  30. Piao, C. H., et al. Ethanol extract of Dryopteris crassirhizoma alleviates allergic inflammation via inhibition of Th2 response and mast cell activation in a murine model of allergic rhinitis. Journal of Ethnopharmacology. 232, 21-29 (2019).
  31. Liang, M. J., et al. Immune responses to different patterns of exposure to ovalbumin in a mouse model of allergic rhinitis. European Archives of Oto-Rhino-Laryngology. 273 (11), 3783-3788 (2016).
  32. Ebbo, M., Crinier, A., Vely, F., Vivier, E. Innate lymphoid cells: major players in inflammatory diseases. Nature Reviews. Immunology. 17 (11), 665-678 (2017).
  33. Seehus, C. R., et al. Alternative activation generates IL-10 producing type 2 innate lymphoid cells. Nature Communications. 8 (1), 1900(2017).
  34. Cai, T., et al. IL-17-producing ST2(+) group 2 innate lymphoid cells play a pathogenic role in lung inflammation. The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 143 (1), 229-244 (2019).
  35. Golebski, K., et al. IL-1beta, IL-23, and TGF-beta drive plasticity of human ILC2s towards IL-17-producing ILCs in nasal inflammation. Nature Communications. 10 (1), 2162(2019).
  36. Lei, A., Zhou, J. Cell-surface molecule-mediated cell-cell interactions in the regulation of ILC2-driven allergic inflammation. Cellular and Molecular Life Sciences. 76 (22), 4503-4510 (2019).
  37. Maazi, H., et al. ICOS:ICOS-ligand interaction is required for type 2 innate lymphoid cell function, homeostasis, and induction of airway hyperreactivity. Immunity. 42 (3), 538-551 (2015).
  38. Lei, A. H., et al. ICAM-1 controls development and function of ILC2. The Journal of Experimental Medicine. 215 (8), 2157-2174 (2018).
  39. Drake, L. Y., Iijima, K., Kita, H. Group 2 innate lymphoid cells and CD4+ T cells cooperate to mediate type 2 immune response in mice. Allergy. 69 (10), 1300-1307 (2014).
  40. Wang, Y., et al. The comparation of intraperitoneal injection and nasal-only delivery allergic rhinitis model challenged with different allergen concentration. American Journal of Rhinology & Allergy. 33 (2), 145-152 (2019).
  41. Niu, Y., et al. HIF1alpha deficiency in dendritic cells attenuates symptoms and inflammatory indicators of allergic rhinitis in a SIRT1-dependent manner. International Archives of Allergy and Immunology. 181 (8), 585-593 (2020).
  42. Van Nguyen, T., et al. Anti-allergic rhinitis activity of alpha-lipoic acid via balancing Th17/Treg expression and enhancing Nrf2/HO-1 pathway signaling. Scientific Reports. 10 (1), 12528(2020).
  43. Pyun, B. J., et al. Gardenia jasminoides attenuates allergic rhinitis-induced inflammation by inhibiting periostin production. Pharmaceuticals (Basel). 14 (10), 986(2021).
  44. Liu, Z., et al. Analysis of expression of ILC2 cells in nasal mucosa based on animal model of allergic bacterial infection rhinitis. Journal of Infection and Public Health. 14 (1), 77-83 (2021).
  45. Hu, B., Wang, Y., Zheng, G., Zhang, H., Ni, L. Effect of parasympathetic inhibition on expression of ILC2 cells in a mouse model of allergic rhinitis. The World Allergy Organization journal. 14 (9), 100582(2021).
  46. Autengruber, A., Gereke, M., Hansen, G., Hennig, C., Bruder, D. Impact of enzymatic tissue disintegration on the level of surface molecule expression and immune cell function. European Journal of Microbiology & Immunology. 2 (2), 112-120 (2012).
  47. Krisna, S. S., et al. Optimized protocol for immunophenotyping of melanoma and tumor-bearing skin from mouse. STAR Protocols. 2 (3), 100627(2021).
  48. Hoyler, T., et al. The transcription factor GATA-3 controls cell fate and maintenance of type 2 innate lymphoid cells. Immunity. 37 (4), 634-648 (2012).
  49. Huang, Y., et al. IL-25-responsive, lineage-negative KLRG1(hi) cells are multipotential 'inflammatory' type 2 innate lymphoid cells. Nature Immunology. 16 (2), 161-169 (2015).
  50. Loering, S., et al. Differences in pulmonary group 2 innate lymphoid cells are dependent on mouse age, sex and strain. Immunology and Cell Biology. 99 (5), 542-551 (2021).
  51. Lin, L., et al. Allergic inflammation is exacerbated by allergen-induced type 2 innate lymphoid cells in a murine model of allergic rhinitis. Rhinology Journal. 55 (4), 339-347 (2017).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Tagi

Ekspresja CD226katar siennycytometria przepływowaizolacja komórekgradient gęstościbarwienie antygenów powierzchniowychkomórki mononuklearnemodel mysi
Izolacja wrodzonych komórek limfoidalnych grupy 2 z błony śluzowej nosa myszy w celu wykrycia ekspresji CD226
Skontaktuj się z nami
Poleć bibliotece

Prywatność

Warunki korzystania z usługi

Zasady

Prawa autorskie © 2026 MyJoVE Corporation. Wszelkie prawa zastrzeżone.