Artykuł metodologiczny

Ocena wrażliwości mechanicznej pleców u szczura do mechanistycznego badania przewlekłego bólu pleców

DOI:

10.3791/63667

⸱

30 sierpnia 2022

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Anatomy, Université du Québec à Trois-Rivières, 2CogNAC Research Group, Université du Québec à Trois-Rivières, 3Division of Physiology, Department of Basic Sciences, Faculty of Veterinary Medicine, University of Tabriz

W tym artykule

Podsumowanie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Aby opracować nowatorskie interwencje terapeutyczne w celu zapobiegania i leczenia bólu pleców, potrzebne są modele zwierzęce, które zbadają mechanizmy i skuteczność tych terapii z perspektywy translacyjnej. Niniejszy protokół opisuje test BMS, znormalizowaną metodę oceny wrażliwości mechanicznej pleców u szczura.

Streszczenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ból krzyża jest główną przyczyną niepełnosprawności na całym świecie, z dramatycznymi konsekwencjami osobistymi, ekonomicznymi i społecznymi. Aby opracować nowatorskie metody terapeutyczne, potrzebne są modele zwierzęce, które pozwolą zbadać mechanizmy i skuteczność nowych terapii z perspektywy translacyjnej. W obecnych badaniach wykorzystuje się kilka modeli bólu pleców u gryzoni. Co zaskakujące, nie zwalidowano żadnego standaryzowanego testu behawioralnego do oceny wrażliwości mechanicznej w modelach bólu pleców. Ma to kluczowe znaczenie dla potwierdzenia, że zwierzęta z przypuszczalnym bólem pleców wykazują miejscową nadwrażliwość na bodźce nocyceptywne oraz dla monitorowania wrażliwości podczas interwencji mających na celu złagodzenie bólu pleców. Celem tego badania jest opracowanie prostego i przystępnego testu do oceny wrażliwości mechanicznej grzbietu szczurów. Klatka testowa została wyprodukowana specjalnie dla tej metody; Długość x szerokość x wysokość: 50 x 20 x 7 cm, z siatką ze stali nierdzewnej na górze. Ta klatka testowa umożliwia zastosowanie bodźców mechanicznych do pleców. Aby wykonać test, grzbiet zwierzęcia jest golony w obszarze zainteresowania, a obszar testowy jest oznaczany w celu powtórzenia testu w różnych dniach, w zależności od potrzeb. Próg mechaniczny wyznacza się za pomocą włókien von Freya nałożonych na mięśnie przykręgosłupowe, wykorzystując opisaną wcześniej metodę góra-dół. Pozytywne reakcje obejmują (1) drganie mięśni, (2) wyginanie się w łuk (wyprost pleców), (3) rotację szyi, (4) drapanie lub lizanie pleców oraz (5) ucieczkę. Ten test behawioralny (test wrażliwości mechanicznej pleców (BMS)) jest przydatny do badań mechanistycznych z modelami bólu pleców u gryzoni w celu opracowania interwencji terapeutycznych w celu zapobiegania i leczenia bólu pleców.

Wprowadzenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ból krzyża (LBP) jest główną przyczyną niepełnosprawności na całym świecie, która ma dramatyczne konsekwencje osobiste, ekonomiczne i społeczne1,2,3,4. Każdego roku około 37% populacji jest dotkniętych LBP5. LBP zwykle ustępuje w ciągu kilku tygodni, ale nawraca u 24%-33% osób, przechodząc w przewlekłość w 5%-10% przypadków2. Aby zrozumieć mechanizmy i wpływ LBP, a także efekty różnych interwencji terapeutycznych, wykorzystano kilka zwierzęcych modeli LBP, naśladujących stany kliniczne lub niektóre składniki LBP6. Te modele myszy i szczurów można sklasyfikować do jednej lub więcej z następujących kategorii: (1) dyskogenne LBP7,8,, (2) korzeniowy LBP8,9,10,11, (3) choroba zwyrodnieniowa stawów międzywyrostkowych12, oraz (4) LBP13,14. Ponieważ ból nie może być mierzony bezpośrednio u gatunków innych niż ludzie, opracowano liczne testy do ilościowego określenia zachowań podobnych do bólu w tych modelach8. Testy te oceniają zachowania wywołane przez szkodliwy bodziec (siłę mechaniczną15,16,17, stymulacja termiczna18,19,20,21,22,23,24, 25) lub wyprodukowane spontanicznie26,27,28,29.

Metody wykorzystujące bodźce mechaniczne obejmują test von Freya15,16 oraz Randall-Selitto Test17. Metody wykorzystujące bodźce cieplne obejmują test ruchu ogona18, test gorącej płyty19, test Hargreavesa20 oraz test sondy termicznej21. Metody wykorzystujące zimne bodźce obejmują test zimnej płyty22, test parowania acetonu23 oraz test zimnej podeszwy24. Metody dla spontanicznych zachowań obejmują skale grymasu26, burrowing27, analizę obciążenia i chodu28, a także zautomatyzowaną analizę behawioralną29. Pomimo tych licznych dostępnych testów, żaden z nich nie jest zaprojektowany specjalnie dla modeli bólu pleców.

Celem tego badania jest stworzenie prostego i przystępnego testu do oceny wrażliwości mechanicznej grzbietu szczurów. Technika ta jest w dużej mierze oparta na teście von Freya zastosowanym do podeszwowej powierzchni tylnej łapy15,16. Podstawową zasadą testu von Freya jest użycie serii monofili do obszaru zainteresowania, dostarczając stałe, z góry określone siły. Odpowiedź jest uważana za pozytywną, jeśli szczur wykazuje zachowanie nocyfensywne. Próg mechaniczny można następnie obliczyć na podstawie włókien, które wywołały reakcje. W niniejszym badaniu przedstawiono prostą i dostępną metodę zaadaptowaną z testu Von Freya w celu określenia wrażliwości mechanicznej grzbietu szczurów.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Protokół eksperymentalny został zatwierdzony przez komitet ds. opieki nad zwierzętami Université du Québec à Trois-Rivières i był zgodny z wytycznymi Kanadyjskiej Rady ds. Opieki nad Zwierzętami oraz wytycznymi Komitetu ds. Badań i Zagadnień Etycznych Międzynarodowego Stowarzyszenia Badań nad Bólem (IASP). W niniejszym badaniu wykorzystano sześć samców szczurów rasy Wistar (masa ciała: 320-450 g; wiek: 18-22 tygodnie). Zwierzęta zostały pozyskane ze źródła komercyjnego (patrz tabela materiałów). Dane od tych szczurów pochodzą z większej próby z poprzedniego badania30.

1. Przygotowanie eksperymentalne

  1. Zwierzęta należy trzymać w pomieszczeniu o kontrolowanej temperaturze, w standardowych pomieszczeniach dla zwierząt, z dostępem do pożywienia i wody ad libitum oraz cyklem światło-ciemność trwającym 14 godzin – 10 godzin. Należy upewnić się, że wszystkie zwierzęta są w dobrym zdrowiu w dniu eksperymentów.
  2. Wygeneruj model zwierzęcy przewlekłego bólu pleców, wykonując poniższe czynności.
    1. Aby wywołać przewlekły ból pleców, wykonaj domięśniowe wstrzyknięcie Complete Freund Adjuvant (CFA) do mięśni pleców zgodnie z poprzednimi raportami14,30,31.
    2. Znieczulić zwierzę za pomocą izofluranu (4% do indukcji i 2%-2,5% do utrzymania).
    3. Za pomocą igły 27 G wstrzyknąć 150 μl gotowej do użycia emulsji typu woda w oleju CFA (patrz tabela materiałów) do mięśni przykręgosłupowych jednostronnie lub obustronnie, w zależności od potrzeb protokołu.
    4. Trzymać igłę do wstrzykiwań na miejscu przez co najmniej 3 minuty po zakończeniu wstrzyknięcia. W przypadku zwierząt z grupy kontrolnej należy zastosować te same procedury30, ale wstrzyknąć roztwór sterylnego roztworu soli fizjologicznej (150 μL, 0,9%) zamiast CFA.
  3. Wykonaj klatkę testową.
    1. Wykonaj klatkę testową dla dwóch zwierząt, która składa się z jednej komory dla każdego zwierzęcia.
      UWAGA: Na potrzeby niniejszego badania każda komora ma następujące wymiary: długość x szerokość x wysokość: 50 x 20 x 7 cm (patrz Tabela Materiałów).
    2. Zamontuj dwie sąsiadujące ze sobą komory na czterech nogach z pleksi o długości 33 cm. Użyj przezroczystej pleksi do ścian komór, ale użyj czarnej pleksi do oddzielenia komór, aby zwierzęta nie widziały się nawzajem.
    3. Użyj siatki ze stali nierdzewnej wykonanej z drutu 1 mm z odstępem między drutami 8 mm, aby wykonać podłogę i sufit klatki testowej (Rysunek 1).

2. Test wytrzymałości mechanicznej pleców (BMS)

  1. Zapoznaj zwierzę z klatką testową 30 minut/dzień przez 5-7 kolejnych dni przed pierwszym badaniem. W razie potrzeby powtórz test.
  2. Znieczulić zwierzęta za pomocą 2% izofluranu31 (patrz Tabela Materiałów).
  3. W pozycji leżącej w znieczuleniu izofluranem należy ogolić włosy na grzbiecie obszaru zainteresowania (od poziomu kręgów T6 do L6) za pomocą trymera do włosów zwierzęcych (patrz Tabela materiałów). W przypadku powtarzających się pomiarów, gol włosy z tyłu co 3 dni dziennie bez oceny behawioralnej, aby upewnić się, że bodźce są zawsze stosowane bezpośrednio na skórę. Narysuj znak na skórze za pomocą markera permanentnego, aby upewnić się, że włókna są zawsze nakładane na ten sam obszar podczas powtarzania testu w różnych dniach.
  4. W dniu badania umieść zwierzęta w klatce testowej na 15-30 minut przed badaniem, aż zwierzę się uspokoi.
  5. Podczas testu należy nakładać filamenty von Freya (0,07, 0,16, 0,4, 0,6, 1, 2, 4, 6, 10, 15 i 26 g) prostopadle do tyłu, zawsze zaczynając od filamentu 2 g i stosując metodę góra-dół15 (patrz Tabela Materiałów). Powoli podejdź do grzbietu zwierzęcia z włóknem od tyłu zwierzęcia.
    1. Filament należy nakładać tylko wtedy, gdy zwierzę nie śpi, stoi na czterech łapach i nie porusza się. Nakładaj filament na 2 s obustronnie do obszaru zainteresowania, 10 mm od wyrostka kolczystego (Rysunek 2), co 15-30 s.
      UWAGA: Odpowiedź uważa się za pozytywną, jeśli zwierzę wykazuje jedno lub więcej z następujących zachowań podczas lub bezpośrednio po zastosowaniu filamentu: (1) drganie mięśni, (2) wygięcie w łuk (wyprost pleców), (3) obracanie szyi w celu spojrzenia na plecy, (4) drapanie lub lizanie pleców oraz (5) ucieczka.
  6. Jak opisano wcześniej15, jeśli nie zaobserwuje się żadnej odpowiedzi po zastosowaniu filamentu, zastosuj następny filament z większą siłą w serii. Jeśli zaobserwuje się reakcję, użyj następnego żarnika o mniejszej sile w serii. Kontynuuj tę procedurę, aż zostaną uzyskane cztery odczyty po pierwszej zmianie zachowania (odpowiedź po serii "brak odpowiedzi" lub brak odpowiedzi po serii "odpowiedzi").
  7. Po zakończeniu zbierania danych oblicz wartość reprezentującą 50% progu mechanicznego, zgodnie z opisem Chaplan et al.15, używając następującego wzoru:
    Próg 50% (g) = 10(Xf+kδ)/10 000
    UWAGA: W tej formule "Xf" jest znakiem uchwytu ostatniego użytego filamentu von Freya. "k" to wartość tabelaryczna oparta na wzorcu odpowiedzi zwierzęcia15, a "δ" to średnia przyrostów Handle Marka między włóknami Von Freya. W zależności od planu doświadczenia i potrzeb doświadczalnych, tylko jedna strona kręgosłupa może być oceniana w celu zgłoszenia jednego progu lub dwie strony mogą być oceniane, a progi są podawane oddzielnie lub jako średnia. Zapoznaj się z tabelą uzupełniającą 1, aby zapoznać się z szablonem obliczeń32.

3. Odzyskiwanie zwierząt

  1. Po zakończeniu wstrzyknięcia domięśniowego należy przerwać znieczulenie i umieścić zwierzę samo w standardowej klatce w celu rekonwalescencji.
  2. W okresie rekonwalescencji należy zbadać zachowanie zwierzęcia i nie pozostawiać go bez opieki.
  3. Upewnij się, że zwierzę dochodzi do siebie po znieczuleniu i porusza się normalnie w ciągu 5 minut. Następnie umieść zwierzę z powrotem w jego zwykłej klatce razem z innymi zwierzętami.
    UWAGA: Pod koniec eksperymentu zwierzę jest przetaczane przez serce 10% roztworem formaliny, w głębokim znieczuleniu izofluranem (5%). Mięśnie pleców w obszarze wstrzyknięcia są następnie ekstrahowane w celu badania histologicznego i potwierdzenia zmian zapalnych.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Metoda została użyta w poprzednim badaniu, w którym przedstawiono pełne dane i statystyki w celu porównania wstecznej czułości mechanicznej między CFA a szczurami kontrolnymi30. Reprezentatywne dane indywidualne (średnia z lewego i prawego progu) od sześciu szczurów uwzględnionych w poprzednim badaniu przedstawiono w Rysunek 3 i Tabela 1. Na początku badania czułość mechaniczna była podobna w obu grupach. Domięśniowe wstrzyknięcie CFA w mięśnie lędźwiowe spowod...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Kroki krytyczne
Test BMS jest prostą metodą oceny wrażliwości mechanicznej grzbietu szczurów, zarówno w jednym punkcie czasowym, jak i wielokrotnie w ciągu dni lub tygodni, kiedy spodziewane są zmiany (modele bólu) lub po interwencji farmakologicznej lub niefarmakologicznej. Krytycznymi kwestiami metody jest klatka testowa, której wymiary muszą zapewniać, że szczur czuje się komfortowo, ale nie porusza się zbytnio. Grzbiet zwierzęcia musi być dostępny przez sufit z siatki, aby zapewnić powtarzalną s...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Autorzy deklarują brak sprzecznych interesów lub relacji, które mogą prowadzić do konfliktu interesów.

Podziękowania

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ta praca została wsparta grantem z Fondation Chiropratique du Québec oraz Kanadyjskiej Rady Badań nad Naukami Przyrodniczymi i Inżynierią (MP: grant #06659). Wkład Hongkongu był wspierany przez Université du Québec à Trois-Rivières (program PAIR). Wkład BP był wspierany przez Fonds de recherche du Québec en Santé (FRQS) i Fondation Chiropratique du Québec. Wkład TP był wspierany przez Kanadyjską Radę ds. Badań Przyrodniczych i Inżynieryjnych. Wkład NE i EK został wsparty przez Fondation Chiropratique du Québec. Wkład MP został wsparty przez FRQS.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Aerrane (izofluran, USP) - tylko do użytku weterynaryjnegoBaxterNDC 10019-773-60Znieczulenie wziewne; DIN 02225875, do indukcji znieczulenia
Complete Freund Adjuvant (CFA)Fisher Scientific#77140Emulsja typu woda w oleju Complete Freund Adjuwantt (CFA) z zabitymi komórkami Mycobacterium butyricum.
Samce szczurów WistarCharles River Laboratoriesmasa ciała: 320– 450 g; Wiek: 18-22 tygodnie.
Penlon Sigma Delta VaporizerPenlon990-VI5K-SVEEKPenlon Sigma Delta Waporyzator używany do znieczulenia
Sharpie Permanent MarkerSharpieBC23636Marker permanentny, Fine Point, Black
Klatka testowaNaSzerokość: 20 cm;  Długość: 50 cm; Wysokość od dołu do góry: 40 cm; Wysokość od dolnego oczka do górnej części klatki: 7 cm; Grubość ścianki: 5 mm; Siatka: drut 1 mm z odstępem między drutami 8 mm     
Von Frey FilamentsAesthesio, Precyzyjny dotykowy ewaluator sensoryczny514000-20CFilamenty od 0,07 g do 26 g
Wahl Professional Animal, ARCO Akumulatorowa maszynka do strzyżenia zwierząt, trymer Grooming Wahl Kit #8786-1201Trymer do włosów zwierzęcych, do golenia, zero ostrzy 
zamówienie

Bibliografia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Hartvigsen, J., et al. What low back pain is and why we need to pay attention. Lancet. 391 (10137), 2356-2367 (2018).
  2. Manchikanti, L., Singh, V., Falco, F. J., Benyamin, R. M., Hirsch, J. A. Epidemiology of low back pain in adults. Neuromodulation. 17, Suppl 2 3-10 (2014).
  3. Urits, I., et al. Low back pain, a comprehensive review: Pathophysiology, diagnosis, and treatment. Current Pain and Headache Reports. 23 (3), 23(2019).
  4. James, S. L., et al. Global, regional, and national incidence, prevalence, and years lived with disability for 354 diseases and injuries for 195 countries and territories, 1990-2017: a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2017. Lancet. 392 (10159), 1789-1858 (2018).
  5. Hoy, D., et al. A systematic review of the global prevalence of low back pain. Arthritis & Rheumatology. 64 (6), 2028-2037 (2012).
  6. Shi, C., et al. Animal models for studying the etiology and treatment of low back pain. Journal of Orthopaedic Research. 36 (5), 1305-1312 (2018).
  7. Olmarker, K. Puncture of a lumbar intervertebral disc induces changes in spontaneous pain behavior: An experimental study in rats. Spine. 33 (8), 850-855 (2008).
  8. Deuis, J. R., Dvorakova, L. S., Vetter, I. Methods used to evaluate pain behaviors in rodents. Frontiers in Molecular Neuroscience. 10, 284(2017).
  9. Kawakami, M., et al. Pathomechanism of pain-related behavior produced by allografts of intervertebral disc in the rat. Spine. 21 (18), 2101-2107 (1996).
  10. Hu, S. -J., Xing, J. -L. An experimental model for chronic compression of dorsal root ganglion produced by intervertebral foramen stenosis in the rat. Pain. 77 (1), 15-23 (1998).
  11. Xie, W. R., et al. Robust increase of cutaneous sensitivity, cytokine production and sympathetic sprouting in rats with localized inflammatory irritation of the spinal ganglia. Neuroscience. 142 (3), 809-822 (2006).
  12. Arthritis and Rheumatism. Characterization of a new animal model for evaluation and treatment of back pain due to lumbar facet joint osteoarthritis. Arthritis and Rheumatism. 63 (10), 2966-2973 (2011).
  13. Kobayashi, Y., Sekiguchi, M., Konno, S. -I., Kikuchi, S. -I. Increased intramuscular pressure in lumbar paraspinal muscles and low back pain: Model development and expression of substance P in the dorsal root ganglion. Spine. 35 (15), 1423-1428 (2010).
  14. Touj, S., et al. Sympathetic regulation and anterior cingulate cortex volume are altered in a rat model of chronic back pain. Neuroscience. 352, 9-18 (2017).
  15. Chaplan, S. R., Bach, F. W., Pogrel, J. W., Chung, J. M., Yaksh, T. L. Quantitative assessment of tactile allodynia in the rat paw. Journal of Neuroscience Methods. 53 (1), 55-63 (1994).
  16. Deuis, J. R., et al. Analgesic effects of clinically used compounds in novel mouse models of polyneuropathy induced by oxaliplatin and cisplatin. Neuro-Oncology. 16 (10), 1324-1332 (2014).
  17. Randall, L. O., Selitto, J. J. A method for measurement of analgesic activity on inflamed tissue. Archives Internationales de Pharmacodynamie et de Therapie. 111 (4), 409-419 (1957).
  18. D'Amour, F. E., Smith, D. L. A method for determining loss of pain sensation. Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 72 (1), 74-79 (1941).
  19. Woolfe, G. The evaluation of the analgesic actions of pethidine hydrochlodide (Demerol). Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 80 (3), 300-307 (1944).
  20. Hargreaves, K., Dubner, R., Brown, F., Flores, C., Joris, J. A new and sensitive method for measuring thermal nociception in cutaneous hyperalgesia. Pain. 32 (1), 77-88 (1988).
  21. Deuis, J. R., Vetter, I. The thermal probe test: A novel behavioral assay to quantify thermal paw withdrawal thresholds in mice. Temperature. 3 (2), 199-207 (2016).
  22. Allchorne, A. J., Broom, D. C., Woolf, C. J. Detection of cold pain, cold allodynia and cold hyperalgesia in freely behaving rats. Molecular Pain. 1, 36(2005).
  23. Carlton, S. M., Lekan, H. A., Kim, S. H., Chung, J. M. Behavioral manifestations of an experimental model for peripheral neuropathy produced by spinal nerve ligation in the primate. Pain. 56 (2), 155-166 (1994).
  24. Brenner, D. S., Golden, J. P., Gereau, R. W. I. V. A novel behavioral assay for measuring cold sensation in mice. PLoS One. 7 (6), 39765(2012).
  25. Moqrich, A., et al. Impaired thermosensation in mice lacking TRPV3, a heat and camphor sensor in the skin. Science. 307 (5714), 1468-1472 (2005).
  26. Langford, D. J., et al. Coding of facial expressions of pain in the laboratory mouse. Nature Methods. 7 (6), 447-449 (2010).
  27. Deacon, R. M. J. Burrowing in rodents: a sensitive method for detecting behavioral dysfunction. Nature Protocols. 1 (1), 118-121 (2006).
  28. Griffioen, M. A., et al. Evaluation of dynamic weight bearing for measuring nonevoked inflammatory hyperalgesia in mice. Nursing Research. 64 (2), 81-87 (2015).
  29. Brodkin, J., et al. Validation and implementation of a novel high-throughput behavioral phenotyping instrument for mice. Journal of Neuroscience Methods. 224, 48-57 (2014).
  30. Paquette, T., Eskandari, N., Leblond, H., Piché, M. Spinal neurovascular coupling is preserved despite time dependent alterations of spinal cord blood flow responses in a rat model of chronic back pain: implications for functional spinal cord imaging. Pain. , (2022).
  31. Tokunaga, R., et al. Attenuation of widespread hypersensitivity to noxious mechanical stimuli by inhibition of GABAergic neurons of the right amygdala in a rat model of chronic back pain. European Journal of Pain. 26 (4), 911-928 (2022).
  32. Dixon, W. J. Efficient analysis of experimental observations. Annual Review of Pharmacology and Toxicology. 20, 441-462 (1980).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

Model b lu u szczur wtest Von Freymi nie przykr gos upowetesty behawioralnepe ny adjuwant Freundanadwra liwo mechanicznazwierz ce modele b lu

Powiązane artykuły