Pacjenci z ciężkim zwłóknieniem otrzewnej mają wysoką zachorowalność i śmiertelność. Mechanizm zwłóknienia otrzewnej jest niejasny. W tym badaniu opisano prosty eksperymentalny mysi model zwłóknienia otrzewnej wywołanego wstrzyknięciem płynu do dializy otrzewnowej.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Klinicznie istotny mysi model zwłóknienia otrzewnej za pomocą dializatu i cewników
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Zwłóknienie otrzewnej może wystąpić u pacjentów poddawanych dializie otrzewnowej (PD), a pacjenci z ciężkim zwłóknieniem otrzewnej mają wysoką zachorowalność i śmiertelność. Zapalenie otrzewnej, płyn dializacyjny o wysokiej zawartości glukozy w otrzewnie i długi okres PD przyspieszają wystąpienie zwłóknienia otrzewnej. Badanie na zwierzętach zwłóknienia otrzewnej jest potrzebne ze względu na ograniczenia badań na ludziach i in vitro. Jednak większość modeli zwierzęcych nie naśladuje stanów klinicznych. Aby zbadać zwłóknienie otrzewnej, opracowaliśmy klinicznie istotny model mysi poprzez wszczepienie cewnika otrzewnowego i wstrzyknięcie 2,5% płynu PD o wysokiej zawartości glukozy oraz 20 mM metyloglioksalu (MGO) do jamy otrzewnej codziennie przez 21 dni. Implantacja cewnika otrzewnowego pozwala uniknąć uszkodzenia otrzewnej przez igły i naśladuje klinicznych pacjentów z chorobą Parkinsona. Barwienie immunofluorescencyjne wykazało, że miofibroblasty gromadziły się w zwłókniejącej otrzewnej. W grupie eksperymentalnej stwierdzono mniejszą objętość ultrafiltracji i funkcję transportu błony otrzewnowej (test równowagi otrzewnowej). W tym artykule przedstawiamy szczegółowy protokół modelu.
Wprowadzenie
Dializa otrzewnowa (PD) jest jednym z rodzajów terapii nerkozastępczej, którą otrzymuje około 11% pacjentów ze schyłkową niewydolnością nerek (ESRD)1. Badania wykazały, że zwłóknienie otrzewnej rozwija się u pacjentów otrzymujących PD2. Stwardnienie otrzewnowe (EPS), ciężka postać zwłóknienia otrzewnej, powoduje wysoką zachorowalność i śmiertelność3. Do czynników ryzyka zwłóknienia otrzewnej należą: zapalenie otrzewnej, płyn dializacyjny o wysokim stężeniu glukozy, długi okres choroby Parkinsona oraz czynniki genetyczne4. Mechanizm zwłóknienia otrzewne....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
Eksperymenty zostały zatwierdzone i przeprowadzone zgodnie z National Taiwan University College of Medicine oraz College of Public Health Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC). Wszystkie myszy były trzymane pod standardową opieką.
1. Eksperyment na zwierzętach
- Używaj samców i samic myszy C57BL/6 typu dzikiego (WT) w wieku powyżej 11 tygodni .
- Przygotuj materiały chirurgiczne, w tym mysz 4-francuski port silikonowy, rękawiczki, serwety, cewniki, szwy i igły.
- Wszczep port myszy w następujący sposób:
- Znieczulić myszy ketaminą/ksylazyną (100/10 mg/kg masy ciała) poprzez w....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
Przeprowadzono badanie histologiczne tkanki otrzewnej, które wykazało, że w grupie otrzymującej płyn do dializy otrzewnowej z dodatkiem MGO (PDF) skutecznie wywołano włóknienie otrzewnej. Barwienie immunofluorescencyjne otrzewnej trzewnej powierzchni wątroby wykazało większą akumulację miofibroblastów w uszkodzonej otrzewnej grupy PDF niż w grupie kontrolnej (Rysunek 1). Jak pokazano na Rysunku 2A, w grupie PDF odnotowano niższą objętość ultrafiltracji niż w gru.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Otrzewna ma otrzewną trzewną i ciemieniową, pokrywającą narządy jamy brzusznej i ściany brzucha. Składa się z monowarstwy komórek międzybłonka, warstwy podmiędzybłonka, błony surowiczej, fibroblastów, limfocytów i wydzielanych białek14. Zwłóknienie otrzewnej to utrata i denudacja komórek międzybłonka, pogrubienie podmiędzybłonka i nagromadzenie wielu komórek zapalnych, takich jak miofibroblasty i makrofagi 4,14.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Autorzy nie mają nic do ujawnienia.
Podziękowania
Ta praca była wspierana przez Narodowy Tajwański Szpital Uniwersytecki (NTUH) 111-UN0026.
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| przeciwciało anty-cytokeratynowe o szerokim spektrum | abcam | ab9377 | |
| Beckman Coulter | Beckman Coulter | AU5800 | Analizator biochemiczny |
| DAPI, przeciwciało 4′,6-diamidino-2-fenyloindolowe | Sigma-Aldrich | 98718-90-3 | |
| Zasłony | dowolne | ||
| kozy FITC anty-królik | Jackson ImmunoResearch Secondary Przeciwciało | 111-095-144 | |
| Rękawice | dowolne | ||
| GraphPad | Prizm Oprogramowanie GraphPad | Oprogramowanie GraphPad 9.0 | |
| Kellys | any | ||
| Methylglyoxal (MGO) | Sigma-Aldrich | ||
| Mini-UTE Mouse Port | Access Technologies | MMP-4S 061108B | Mysz 4-francuski port |
| silikonowyMonoklonalna antyaktyna, przeciwciało alfa--mięśni gładkich Cy3 | Sigma-Aldrich | C6198 | |
| Igły | dowolne | ||
| Klipsy refleksyjne 7 mm | dowolne | ||
| Szew 4-0 Nylon | dowolny |
Bibliografia
- Jain, A. K., Blake, P., Cordy, P., Garg, A. X. Global trends in rates of peritoneal dialysis. Journal of the American Society of Nephrology. 23 (3), 533-544 (2012).
- Zhou, Q., Bajo, M. A., Del Peso, G., Yu, X., Selgas, R. Preventing peritoneal membrane fibrosis....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
