Obecny protokół opisuje prostą procedurę pozyskiwania i analizowania topografii epicranialnych potencjałów wywołanych wzrokowo za pomocą 32-wielokanałowych elektrod cienkowarstwowych u myszy.
Method Article
Obecny protokół opisuje prostą procedurę pozyskiwania i analizowania topografii epicranialnych potencjałów wywołanych wzrokowo za pomocą 32-wielokanałowych elektrod cienkowarstwowych u myszy.
Wizualne potencjały wywołane (VEP) pozwalają na charakterystykę funkcji wzrokowych w przedklinicznych modelach mysich. Istnieją różne metody pomiaru VEP u myszy, od nieinwazyjnego EEG, podskórnych pojedynczych elektrod i ECoG po w pełni inwazyjne wewnątrzkorowe wielokanałowe zapisy kory wzrokowej. Może to być przydatne do uzyskania globalnej, topograficznej charakterystyki reakcji wzrokowych na poziomie EEG przed lokalnymi pomiarami mikroelektrod wewnątrzkorowych w ostrych warunkach eksperymentalnych. Na przykład jednym z przypadków użycia jest ocena globalnych, międzymodalnych zmian w topografii VEP w modelach głuchoty przed zbadaniem ich wpływu na lokalnym poziomie wewnątrzkorowym. Wielokanałowe epicko-czaszkowe EEG jest solidną metodą uzyskiwania takiej całościowej miary aktywności wzrokowej kory mózgowej. Wielokanałowe EEG naczaszkowe zapewnia porównywalne wyniki dzięki ustandaryzowanemu, spójnemu podejściu, na przykład do identyfikacji międzymodalnych, patologicznych lub związanych z wiekiem zmian w funkcji wzrokowej kory mózgowej. W niniejszym badaniu przedstawiono metodę uzyskania topografii rozkładu VEP wywołanych błyskiem za pomocą 32-kanałowego układu cienkowarstwowych elektrod EEG u znieczulonych myszy. W połączeniu z analizą w dziedzinie czasu i częstotliwości, podejście to pozwala na szybką charakterystykę i badania przesiewowe topografii i podstawowych właściwości wizualnych funkcji korowych myszy w korze myszy, które można łączyć z różnymi ostrymi ustawieniami eksperymentalnymi.
Myszy są przedklinicznym modelem procesów zwyrodnieniowych wzroku i chorób okulistycznych1,2,3,4. Wzrokowe potencjały wywołane (VEP) są powszechnie używane do pomiaru funkcji wzrokowych kory mózgowej i, na przykład, do oceny zwyrodnienia wzrokowego w modelach patologicznych5,6. Opóźnienie VEP, czas przewodzenia, amplituda, charakterystyka wieloogniskowa lub ostrość przestrzenna korowych potencjałów wywołanych wzrokowych dostarczają informacji diagnostycznych na temat integralności funkcjonalnej układu wzrokowego7,8,9.
U myszy, potencjały wywołane wzrokowe kory mózgowej mogą być mierzone w różnych skalach przestrzennych za pomocą metod o różnym stopniu złożoności, od nieinwazyjnego EEG, podskórnych elektrod igłowych i z wszczepioną czaszką, przez w pełni inwazyjne podejścia wewnątrzczaszkowe z epicortical ECoG, do wewnątrzkorowych zapisów elektrod10,11,12,13,14,15,16,17. Metody te mają różne mocne i słabe strony. Na przykład niewielka liczba elektrod dostarcza tylko ograniczonych informacji na temat rozkładu VEP w korze mózgowej, podczas gdy podskórne elektrody igłowe często nie zapewniają spójnych miejsc zapisu. Co więcej, wszczepione lub metody w pełni inwazyjne wymagają uszkodzenia, penetracji lub usunięcia czaszki i często dostarczają jedynie informacji miejscowych.
W ostrych eksperymentach często pożądane jest pierwsze globalne spojrzenie na funkcje wzrokowe kory mózgowej, po którym ostatecznie następują dalsze kroki eksperymentalne i porównuje się z lokalnymi zapisami wewnątrzkorowymi. Na przykład, jeden potencjalny przypadek użycia jest najpierw wykorzystywany do zbadania wpływu wizualnej intermodalnej reorganizacji głuchoty lub słuchu na poziomie EEG na topografię VEP i aktywność wzrokową kory mózgowej18, 19 przed zbadaniem wpływu na lokalny poziom wewnątrzkorowy.
Wielokanałowe zapisy EEG z cienkowarstwowymi matrycami wieloelektrodowymi mogą dostarczyć usystematyzowaną topografię VEP z czaszki myszy20,21,22,23,24. Takie nagrania czaszkowe mogą mieć przewagę nad zapisami ECoG, pozostawiając nienaruszoną integralność czaszki i unikając bezpośredniej manipulacji powierzchni kory mózgowej. Ponadto, cienkowarstwowe wieloelektrody zapewniają ustandaryzowaną konfigurację elektrod, co pozwala na porównanie wizualnej czasoprzestrzennej aktywności mózgu między eksperymentami podobnymi do standaryzowanego systemu EEG u ludzi25. Ustandaryzowana struktura ułatwia również korzystanie z popularnych zestawów narzędzi do analizy EEG (np. Fieldtrip, Chronux, EEGLAB i ERPLAB) do analizy EEG myszy w dziedzinie czasu i częstotliwości lub pod względem łączności26,27,28,29,30,31.
Obecny protokół opisuje procedurę topograficznych zapisów VEP u myszy przy użyciu 32-kanałowej elektrody cienkowarstwowej. Można to wykorzystać jako część ostrych eksperymentów, po których następują dodatkowe etapy eksperymentalne, takie jak wewnątrzkorowe zapisy mikroelektrod z określonych obszarów mózgu. Pokazano tutaj, jak niezawodnie rejestrować epicranial flash wywołane VEP za pomocą 32-kanałowych elektrod cienkowarstwowych z myszy. Ponadto przedstawiono przykładową analizę topograficzną zapisów VEP w dziedzinie czasu i częstotliwości.
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Wszystkie zwierzęta były traktowane i trzymane zgodnie z niemieckimi (TierSchG, BGBl. I S. 1206, 1313) i europejskimi (ETS 123; Dyrektywa 2010/63/UE) dotyczące badań na zwierzętach. Doświadczenia na zwierzętach zostały zatwierdzone przez niemieckie władze państwowe (Krajowy Urząd Ochrony Konsumentów i Bezpieczeństwa Żywności Dolnej Saksonii, LAVES) i były monitorowane przez uniwersyteckiego inspektora ds. dobrostanu zwierząt. Do niniejszego badania wykorzystano 3-miesięcznego samca myszy C57BL/6J.
1. Szczegóły dotyczące zwierząt
2. Indukcja znieczulenia ogólnego
3. Fizjologiczne monitorowanie i utrzymanie znieczulenia ogólnego
4. Umiejscowienie elektrod i ustawienie nagrywania
5. Zapis EEG i pomiar VEP
6. Zakończenie eksperymentu, usunięcie elektrod i ich czyszczenie
7. Podstawowe przetwarzanie sygnału VEP: Dziedzina czasu i częstotliwości
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Rejestrowanie wizualnych potencjałów wywołanych za pomocą wielokanałowego EEG pozwala na ocenę topografii amplitud, opóźnień lub składowych częstotliwości VEP u myszy. Rysunek 2A pokazuje przykład topografii VEP wywołanej błyskiem zarejestrowanej za pomocą 32-kanałowego EEG z 3-miesięcznego samca myszy C57BL/6J. Najsilniejsza aktywność wywołana wzrokowa występuje w okolicy potylicznej powyżej kory wzrokowej.
Rysunek 2B pokazuje rozkład ...
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
W artykule opisano metodę rejestrowania wielokanałowego EEG epiczaszkowego za pomocą elektrod cienkowarstwowych oraz sposób uzyskania spójnej reprezentacji topograficznej wizualnych potencjałów wywołanych u myszy. Tutaj przykładowo pokazaliśmy dwuoczną stymulację błyskiem, ale takie podejście można zastosować również do innych rodzajów bodźców wzrokowych (tj. monokularów, siatek przestrzennych, ogniskowego pola widzenia) z wykorzystaniem np. większego wyświetlacza.
Krytycznym krokiem w protoko...
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Autorzy deklarują brak sprzecznych interesów finansowych lub innych konfliktów interesów.
Ta praca była wspierana przez Niemiecką Fundację Badawczą (Deutsche Forschungsgemeinschaft, Klaster Doskonałości 2177 "Hearing4all", numer projektu 390895286).
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
|---|---|---|---|
| Bepanthen 5% Dexpantheol | Bayer | Żel oftamiczny | |
| Oprogramowanie Gepard 5.11 | Neuralnyx | Wersja 5.11 | Oprogramowanie do nagrywania sygnałów neurofizjologicznych |
| Digital Lynx SX | Neuralynx | Digital Lynx 16SX | System nagrywania |
| EKG wzmacniacz różnicowy | Otoconsult | WDA2 V1.0 | |
| Golarka elektryczna | Aesculap | GT420 | |
| Uchwyt elektrody TSE | Systems | 430005-HE | |
| Lampa badawcza | Heine | HL 5000 | Lampa źródła zimnego światła |
| Poduszka grzewcza + System kontroli temperatury | CWE | TC-1000 Mysz | |
| Histoacryl 0,5 ml | B.Braun | Klej tkankowy | |
| Lampa grzewcza na podczerwień | Sanitas | SIL 06 | |
| Ketamina 10% | Stroboskop LED WDT | Ketaminhydrochlorek | |
| Monarch | Nova Strobe PBL | Stymulacja wizualna | |
| Matlab 2021a | The Mathworks | 2021a | Kontrola i analiza bodźców |
| Zacisk naczynia Moria | Narzędzia do nauki pięknej | 18320-11 | |
| Elektroda EEG dla myszy | NeuroNexus | H32 (siatkowa) | 32-kanałowa elektroda EEG. Grubość: 20 μ m; długość: 8,6 mm; szerokość 6,8 mm. Miejsca platynowe: 500 μ |
| Rama myszy o średnicy m | Wykonane | Informacje dostępne na żądanie | |
| Wielofunkcyjne urządzenie I/O | National Instruments | PCIe-6353 z BNC 2090A | Analogowe generowanie, wyprowadzanie i wyzwalanie bodźców |
| NaCl 0,9% | B.Braun | Isotonic, sterylne, niepirogenne | |
| Neuralynx HS36 | Neuralynx | HS-36 | Headstage |
| Neuronexus złącze sondy | Neuralynx | ADPT-HS36-N2T-32A Złącze | elektrody |
| Oscyloskop | Tektronix | TDS 2014B | |
| Progent Intensive Cleaner | Menicon | Roztwór do usuwania i dezynfekcji białek do sztywnych soczewek przepuszczalnych dla gazów | |
| Nagrywanie PC | Komputer nagrywający HP | HP Z800 | |
| Rimadyl (Carprofen) | Zoetis | Carprofen | |
| Silicon Oil M 1000 | Carl Roth | 4045.1 | |
| Srebrny drut | Science Products | AG-8W | Średnica 203 i mikro; m; EKG i elektroda referencyjna |
| Komora dźwiękoszczelna | Akustyka | ||
| Mikromanipulator stereotaktyczny | Systemy TSE | 430005-M/P | Do umieszczania elektrod EEG |
| Komputer do stymulacji | Dell | Dell Precision T5810 | Komputer do stymulacji |
| Mikroskop chirurgiczny | Zeiss | Op-Mi Focus | |
| Taśma chirurgiczna | 3M | 1527-0 | 1,25 cm x 9,1 m |
| Thilo-Tears 3 mg/g | Alcon Pharma GmbH | Żel oftamiczny | |
| Vaselin Lichtenstein | Winthrop | Biała maść vaselin | |
| Xylazin 2% | Bernburg | Ksylazynochlorowodorek | |
| Xylocaine w sprayu (10 mg/puff) | Osika | Lidokaina |
Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.
Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article
Request Permission