Stabilnie ugruntowane dwupunktowe wstrzyknięcie modelu ogniskowej demielinizacji wywołanej lizofosfatydylocholiną u myszy

Xiao-Wei Pang; Man Chen; Yun-Hui Chu; Yue Tang; Chuan Qin; Dai-Shi Tian

doi:10.3791/64059

Artykuł metodologiczny

Stabilnie ugruntowane dwupunktowe wstrzyknięcie modelu ogniskowej demielinizacji wywołanej lizofosfatydylocholiną u myszy

DOI:

10.3791/64059

⸱

11 maja 2022

Xiao-Wei Pang¹ , Man Chen¹ , Yun-Hui Chu¹ , Yue Tang¹ , Chuan Qin¹ , Dai-Shi Tian¹

¹Department of Neurology, Tongji Hospital, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology

W tym artykule

Podsumowanie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Obecny protokół opisuje dwupunktowe wstrzykiwanie lizofosfatydylocholiny przez ramkę stereotaktyczną w celu wygenerowania stabilnego i powtarzalnego modelu demielinizacji u myszy.

Streszczenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Sygnalizacja lizofosfolipidowa za pośrednictwem receptorów przyczynia się do patofizjologii różnych chorób neurologicznych, zwłaszcza stwardnienia rozsianego (SM). Lizofosfatydylocholina (LPC) jest endogennym lizofosfolipidem związanym ze stanem zapalnym i może wywoływać szybkie uszkodzenia z toksycznością lipidów mielinowych, prowadząc do ogniskowej demielinizacji. W tym miejscu przedstawiono szczegółowy protokół stereotaktycznego dwupunktowego wstrzyknięcia LPC, który może bezpośrednio spowodować ciężką demielinizację i szybko i stabilnie odtworzyć eksperymentalne uszkodzenie demielinizacyjne u myszy za pomocą zabiegu chirurgicznego. W związku z tym model ten ma duże znaczenie dla chorób demielinizacyjnych, zwłaszcza stwardnienia rozsianego, i może przyczynić się do związanych z tym postępów w badaniach klinicznych. Zastosowano również metody immunofluorescencji i szybkiego barwienia na niebiesko Luxol, aby zobrazować przebieg czasowy demielinizacji ciała modzelowatego u myszy, którym wstrzyknięto LPC. Ponadto metodę behawioralną wykorzystano do oceny funkcji poznawczych myszy po modelowaniu. Ogólnie rzecz biorąc, dwupunktowe wstrzyknięcie lizofosfatydylocholiny przez ramkę stereotaktyczną jest stabilną i powtarzalną metodą generowania modelu demielinizacji u myszy do dalszych badań.

Wprowadzenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Sygnalizacja lizofosfolipidowa za pośrednictwem receptorów obejmuje różnorodne procesy fizjologiczne prawie wszystkich układów narządowych¹. W ośrodkowym układzie nerwowym (OUN) sygnalizacja ta odgrywa kluczową rolę w patogenezie autoimmunologicznych chorób neurologicznych, takich jak stwardnienie rozsiane (SM). Stwardnienie rozsiane jest przewlekłym zaburzeniem o podłożu immunologicznym, charakteryzującym się patologiczną demielinizacją i reakcją zapalną, powodującą dysfunkcję neurologiczną i upośledzenie funkcji poznawczych²^,³. Po ciągłym nawrocie i remisji we wczesnej fazie choroby, ....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Wszystkie procedury na zwierzętach zostały zatwierdzone przez Komitet Instytutu Opieki nad Zwierzętami Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Chiny. Do niniejszego badania wykorzystano dorosłe samce i samice myszy C57BL/6 (typ dziki, WT; 20-25 g; 8-10 tygodni). Myszy pozyskano ze źródeł komercyjnych (patrz tabela materiałów). Myszy trzymano w specyficznym pomieszczeniu dla zwierząt wolnym od patogenów (SPF), z wodą i pokarmem dostarczanym ad libitum. Trzymano je w naprzemiennym 12-godzinnym cyklu światła i ciemności w standardowych warunkach temperatury 22 °C i wilgotności względnej 55%-60%.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Dwupunktowe wstrzyknięcie LPC spowodowało trwalszą demielininę
LPC prowadzi głównie do szybkich uszkodzeń z toksycznością mieliny i rozszczepieniem integralności aksonu¹⁵. Dzień wstrzyknięcia uznano za dzień 0. Myszy trzymano przez okres 10-28 dni (10 dpi i 28 dpi). Barwienie Luxol fast blue (LFB) classing<="xref">10 użyto do oceny obszaru demielinizacji u myszy w tych punktach czasowych. W modelu iniekcji dwupunktowej wystąpiła znaczna demielinizacja na 10 dpi w porówna.......

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Stwardnienie rozsiane, przewlekła choroba demielinizacyjna OUN, jest jedną z najczęstszych przyczyn dysfunkcji neurologicznych u młodych dorosłych²⁰. Klinicznie około 60%-80% pacjentów ze stwardnieniem rozsianym doświadcza cyklu nawrotów i remisji przed rozwinięciem się wtórnie postępującego stwardnienia rozsianego^21,22, co ostatecznie prowadzi do skumulowanych zaburzeń ruchowych i deficytów poznawczych w czasie²³. .......

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Podziękowania

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ta praca była wspierana przez Narodową Fundację Nauk Przyrodniczych Chin (Granty: 82071380, 81873743).

....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
Nazwa	Firma	Numer katalogowy
L-&alfa;-Lizofosfatydylocholina z żółtka jaja	Sigma-Aldrich	L4129-25MG
32 gauge Igła	HAMILTON	7762-05
10 μ l strzykawka	HAMILTON	80014
szybkobieżna wiertarka czaszki	mocna, korea	strong204
wiertarka	Hager & Meisinger, Niemcy	REF 500 104 001 001 005
Respirator Matrx Animal Aneathesia	MIDMARK	VMR
Przenośny instrument stereotaktyczny dla myszy	Nagroda	68507
Mikrostrzykawka	Nagroda	KDS LEGATO 130
Isoflurane	VETEASY
Paraformaldehyd	Servicebio	G1101
Bufor fosforanowy	BOSTER	PYG0021
LuxoL fast bLue	Servicebio	G1030-100ML
Szew	FUSUNPHARMA	20152021225
Pleśń mózgowa	Nagroda	68707
Utrwalacz	mikroskopu elektronowegoServicebio	G1102-100ML
Neutralny czerwony (CI 50040), do mikroskopii Certistain	Sigma-Aldrich	1.01376
Przeciwciało przeciwko mielinie	Millipore	#AB5864
anty-GST-P MBL		#311
Ki-67 (SolA15)	Thermo Fisher Scientific	14-5698-95
Przeciwciało monoklonalne beta aktyny	Proteintech	66009-1-IG
Mielina Podstawowe białko Przeciwciało poliklonalne	Proteintech	10458-1-AP
OLIG2 Przeciwciało poliklonalne	Proteintech	13999-1-AP
Alexa Fluor 488 AffiniPure Anty-Królik Osła IgG (H+L)	YEASEN	34206ES60
Alexa Fluor 594 AffiniPure Donkey Anti-Rat IgG (H+L)	YEASEN	34412ES60
Alexa Fluor 594 AffiniPure Donkey Anti-Rabbit IgG (H+L)	YEASEN	34212ES60
HRP Koza Anty-Królicza IgG (H+L)	abklonalna	AS014
HRP Koza Anty-Mysia IgG (H+L)	abclonal	AS003
Dorosły C57BL/6 samce i samice myszy	Hunan SJA Laboratory Animal Co., Ltd

Przeciwciało monoklonalne

Bibliografia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Gaire, B. P., Choi, J. W. Critical roles of lysophospholipid receptors in activation of neuroglia and their neuroinflammatory responses. International Journal of Molecular Sciences. 22 (15), 7864(2021).
Compston, A., Coles, A. Multiple sclerosis. Lancet

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

Wtryskiwanie lyzofosfatydylocholiny model stwardnienia rozsianego chirurgia stereotaktyczna cia om d owate barwienie Luxol Fast Blue barwienie immunofluorescencyjne kom rki progenitorowe oligodendrocyt w Western blot mikroskopia elektronowa

Stabilnie ugruntowane dwupunktowe wstrzyknięcie modelu ogniskowej demielinizacji wywołanej lizofosfatydylocholiną u myszy

W tym artykule

Podsumowanie

Streszczenie

Wprowadzenie

Protokół

Wyniki

Dyskusja

Oświadczenia

Podziękowania

Materiały

Bibliografia

Przedruki i uprawnienia

Tagi

Powiązane artykuły