Tutaj opisujemy metodę generowania sztucznego modelu decydualizacji za pomocą myszy z owariektomią, klasyczny eksperyment decydualizacji endometrium w dziedzinie badań nad decydualizacją endometrium.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Generowanie mysiego modelu sztucznego decydualizacji z owariektomią do badań nad decydualizacją endometrium
* These authors contributed equally
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Dziesiątkowanie endometrium to unikalny proces różnicowania endometrium, ściśle związany z miesiączką i ciążą. Upośledzenie decydualizacji prowadzi do różnych zaburzeń endometrium, takich jak niepłodność, nawracające poronienia i przedwczesny poród. Opracowanie i wykorzystanie modelu decydualizacji endometrium w badaniach reprodukcyjnych od dawna stanowi ważne dla badaczy zajmujących się reprodukcją. Mysz była szeroko stosowana w badaniu reprodukcji i decydualizacji. Istnieją trzy dobrze ugruntowane modele mysie dotyczące decydualizacji, a mianowicie naturalna decydualizacja ciąży (NPD), sztuczna decydualizacja (AD) i decydualizacja in vitro (IVD). Wśród nich AD jest uważany za wiarygodny model decydualizacji myszy, który jest łatwy do wdrożenia i bliski NPD. Niniejsza praca koncentruje się na zmodyfikowanej metodzie generowania i stosowania mysiego modelu sztucznego decydualizacji z owariektomią w celu uniknięcia wpływu na jajniki, co pozwala uzyskać wysoce powtarzalne wyniki przy małych wariancjach w obrębie grupy. Metoda ta zapewnia dobry i wiarygodny model zwierzęcy do badania decydualizacji endometrium.
Wprowadzenie
Wraz z rozwojem technologii wspomaganego rozrodu, obecny wskaźnik ciąż klinicznych z transferem zarodków in vitro (IVF-ET) osiągnął lub nawet przewyższył ten z naturalnej ciąży. Mimo to wiele pacjentek w praktyce klinicznej wspomaganego rozrodu nadal poddaje się wielokrotnym transferom zarodków, ale nie udaje im się zajść w ciążę zgodnie z oczekiwaniami. Jednak jego specyficzny mechanizm molekularny jest nadal niejasny, więc interwencja kliniczna jest nieskuteczna, co jest jednym z istotnych wyzwań stojących przed medycyną reprodukcyjną1,2.
Czynniki endometrium odpowiadają ....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
Wszystkie opisane eksperymenty na zwierzętach zostały zatwierdzone przez Komitet ds. Użytkowania i Opieki nad Zwierzętami (nr 20171202) Szpitala Drum Tower Hospital of Nanjing University Medical School. Wszystkie operacje są prowadzone zgodnie z odpowiednimi wytycznymi agencji ds. opieki nad zwierzętami i ich wykorzystania.
UWAGA: Myszy były hodowane w specyficznym środowisku wolnym od patogenów (SPF), o temperaturze 22 °C ± 1 °C, wilgotności względnej 50% ± 1%, cyklu światło/ciemność 12 godzin/12 godzin oraz swobodnym dostępie do jedzenia i wody.
1. Owariektomia myszy
- Narzędzia chiru....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
Wskaźniki modelu decydualizacji u myszy obejmują ogólną morfologię macicy, stosunek masy macicy zdecydualizowanej do niezdecydualizowanej, morfologię histologiczną błony śluzowej macicy oraz poziom ekspresji cząsteczek markerowych decydualizacji. Ogólna morfologia sztucznie zdecydualizowanej macicy myszy indukowanej olejem jest bardziej zbliżona do morfologii macicy w ciąży. Trzon macicy ulega pogrubieniu, a światło macicy staje się mniejsze niż po stronie nieindukowanej. Objętość i masa indukowanego rogu macicy są znacz.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Decydualizacja u myszy jest procesem spontanicznym zależnym od obecności zarodków, który różni się od ludzi. Stwierdzono jednak, że sztuczna stymulacja, taka jak wstrzyknięcie do macicy szklanych kulek i uszkodzenie macicy, może wywołać decydualizację endometrium zamiast zarodków. Ponadto naukowcy odkryli, że wiele czynników może indukować decydualizację lub uczestniczyć w decydualizacji, takich jak wstrzykiwanie hormonów steroidowych, prostaglandyn i czynników hamujących wzrost do jamy macicy21. .......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Autorzy nie mają nic do ujawnienia.
Podziękowania
Autorzy pragną podziękować za wsparcie ze strony Narodowej Fundacji Nauk o Przyrodzie Chin (82001629, XQS), Młodzieżowego Programu Fundacji Nauk Przyrodniczych Prowincji Jiangsu (BK20200116, XQS) oraz Funduszy na Studia Podoktoranckie w Prowincji Jiangsu (2021K277B, XQS).
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Estrogen | Sigma | E2758 | Suplement hormonalny |
| Progesteron | Sigma | P0130 | Suplement hormonalny |
| Olej sezamowy | Sigma | S3547 | Suplement hormonalny |
| Pentobarbital sodu | Dainippon Sumitomo Pharma Co., Ltd. | Znieczulenie | |
| Meloksykam do wstrzykiwań | Qilu Animal Health Products Co., Ltd | Analgezja | |
| Alkaliczny zestaw barwników fosfatazowych (metoda łączenia Kaplowa / Azo) | Solarbio | G1480 | Alkaliczna plama fosfatazowa |
| Eosin | Servicebio | G1005-2 | HE Barwnik |
| Hematoksylina | Servicebio | G1005-1 | Barwnik HE |
| ChamQ Uniwersalny SYBR qPCR Master Mix | Vazyme | Q711-02 | qPCR |
| 70% etanol | Lircon | ZH1120090 | Dezynfekcja |
| Jodoforu | Runzekang | RZK-DF | Dezynfekcja |
| Erytromycyna Maść do oczu | Guangzhou Baiyunshan | Myszy Eyeball protect | |
| 4-0 szew | Ethicon | W329 | Szew do nacięcia |
| 10% formaliny | Yulu | L25010118 | Tissue fix |
| Optymalna temperatura cięcia związek | Sakura | 4583 | Odczynnik Ssection |
| Trizol | Ambion | 15596018 | qPCR |
Bibliografia
- Carson, S. A., Kallen, A. N. Diagnosis and management of infertility: A review. JAMA. 326 (1), 65-76 (2021).
- Yatsenko, S. A., Rajkovic, A. Genetics of human female infertility dagger. Biology of Reproduction. 101 (3), 549-566 (2019).
- Sang, Y., Li, Y., Xu, L., Li, D., Du, M.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
