Tutaj danio pręgowany (Danio rerio) jest używany jako model do badania reakcji alergicznych i odpowiedzi immunologicznych związanych z zespołem alfa-Gal (AGS) poprzez ocenę reakcji alergicznych na ślinę kleszczy i spożycie mięsa ssaków.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Model zwierzęcy danio pręgowanego do badania reakcji alergicznych w odpowiedzi na biomolekuły śliny kleszczy
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Kleszcze to wektory stawonogów, które wywołują chorobę poprzez przenoszenie patogenów i których ukąszenia mogą być związane z reakcjami alergicznymi wpływającymi na zdrowie ludzi na całym świecie. U niektórych osób wysoki poziom przeciwciał immunoglobuliny E przeciwko glikanowi Galα1-3Galβ1-(3)4GlcNAc-R (α-Gal) został wywołany przez ukąszenia kleszczy. Reakcje anafilaktyczne, w których pośredniczą glikoproteiny i glikolipidy zawierające glikan α-Gal, obecny w ślinie kleszczy, są związane z zespołem alfa-Gal (AGS) lub alergią na mięso ssaków. Danio pręgowany (Danio rerio) stał się szeroko stosowanym modelem kręgowców do badania różnych patologii. W tym badaniu danio pręgowany został wykorzystany jako model do badania reakcji alergicznych w odpowiedzi na spożycie α-Gal i mięsa ssaków, ponieważ, podobnie jak ludzie, nie syntetyzują one tego glikanu. W tym celu oceniono wzorce zachowań i krwotoczne reakcje alergiczne typu anafilaktycznego w odpowiedzi na ślinę kleszcza Ixodes ricinus i spożycie mięsa ssaków. To eksperymentalne podejście pozwala na uzyskanie ważnych danych, które wspierają model zwierzęcy danio pręgowanego do badania alergii przenoszonych przez kleszcze, w tym AGS.
Wprowadzenie
Kleszcze są wektorami patogenów, które wywołują choroby, a także są przyczyną reakcji alergicznych, wpływając na zdrowie ludzi i zwierząt na całym świecie1,2. Podczas żerowania kleszczy biomolekuły w ślinie kleszczy, zwłaszcza białka i lipidy, ułatwiają odżywianie się tych ektopasożytów, unikając obrony żywiciela3. Niektóre biomolekuły śliny z modyfikacjami glikanu Galα1-3Galβ1-(3)4GlcNAc-R (α-Gal) prowadzą do wytwarzania wysokiego poziomu przeciwciał anty-α-Gal IgE po ukąszeniu kleszcza, tylko u niektórych osób, co jest znane jako zespół α-Gal (AGS)4. Jest to ch....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
Wszystkie opisane tutaj metody zostały zatwierdzone przez Komitet Etyki ds. Eksperymentów na Zwierzętach Uniwersytetu Kastylii-La Manchy w ramach badania "Ocena odpowiedzi immunologicznej na inaktywowaną szczepionkę M. bovis i prowokację M. marinum w modelu danio pręgowanego numer PR-2017-05-12."
Kleszcze zostały uzyskane z kolonii laboratoryjnej, gdzie reprezentatywne próbki kleszczy w kolonii zostały przetestowane metodą PCR na obecność typowych patogenów kleszczy w celu potwierdzenia braku patogenów, i przechowywane w Instytucie Parazytologii, Centrum Biologii Czeskiej Akademii Nauk (IP BC CAS), Republika Czeska.Wszystk....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
Protokół przedstawiony w niniejszej pracy opiera się na kilku aspektach wcześniej opublikowanych eksperymentów27,30 oraz wynikach uzyskanych w naszym laboratorium, gdzie model danio pręgowanego został ustanowiony i zwalidowany do badania AGS oraz odpowiedzi immunologicznej na α-Gal, ponieważ ani ludzie, ani danio pręgowane nie syntetyzują tej cząsteczki13. Model ten umożliwia charakteryzację i ocenę różnych reakcji alergicznych będących wy.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Danio pręgowany to ekonomiczny i łatwy w obsłudze model, który jest również bardzo użytecznym narzędziem do badania molekularnych mechanizmów odpowiedzi immunologicznej, chorób chorobotwórczych, testowania nowych leków oraz szczepień i ochrony przed infekcjami 33,34,35. Badanie zachowania danio pręgowanego jest przydatne, ponieważ poprzednie badania wykazały, że niektóre gatunki ryb pozostają nieruchome na dnie zbiornika, gdy są.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Autorzy nie mają nic do ujawnienia.
Podziękowania
Chcielibyśmy podziękować członkom grupy SaBio za współpracę w projektowaniu eksperymentu i pomoc techniczną z obiektem doświadczalnym ryb oraz Juanowi Galceránowi Sáezowi (IN-CSIC-UMH, Hiszpania) za dostarczenie danio pręgowanego. Prace te były wspierane przez Ministerio de Ciencia e Innovación/Agencia Estatal de Investigación MCIN/AEI/10.13039/501100011033, Hiszpanię i EU-FEDER (grant BIOGAL PID2020-116761GB-I00). Marinela Contreras jest finansowana przez Ministerio de Ciencia, Innovación y Universidades, Hiszpania, grant IJC2020-042710-I.
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Probówka 1,5 ml | VWR | 525-0990 | |
| All Prep DNA/RNA | Qiagen | 80284 | |
| do nauki w akwarystyce | |||
| Zestaw do oznaczania białek BCA | Thermo Fisher Scientific | 23225 | |
| Zestaw rozsekcyjny | VWR | 631-1279 | |
| Karma dla psa - czerwona Klasyczna | Acana | ||
| ELISA płytki-96 | dołków Thermo Fisher Scientific | 10547781 | |
| Gala1-3Gal-BSA 3 (α-Gal) | Dextra | NGP0203 | |
| iScript Odwrotna transkrypcja Supermix | 1708840 | ||
| Strzykawki mikrolitrowe | Hamilton | 7638-01 | |
| Czytnik płytek | dowolny | ||
| Sól fizjologiczna buforowana fosforanami | Sigma | P4417-50TAB | |
| chlorowodorek pilokarpiny | Sigma | P6503 | |
| Końcówka do pipet P10 | VWR | 613-0364 | |
| Końcówka do pipet P1000 | VWR | 613-0359 | |
| Wysokiej jakości pokarm dla ryb tropikalnych | DAPC | ||
| Gąbka Uchwyt dla zwierząt | Wykonane z pianki złomowej | ||
| Mikroskop stereoskopowy | dowolny | ||
| termocykler Real-Time PCR | dowolny | ||
| metanosulfonian trikainy (MS-222) | Sigma | E10521 |
Bibliografia
- de la Fuente, J., Estrada-Pena, A., Venzal, J. M., Kocan, K. M., Sonenshine, D. E. Overview: Ticks as vectors of pathogens that cause disease in humans and animals. Frontiers in Bioscience: A Journal and Virtual Library. 13 (18), 6938-6946 (2008).
- de la Fuente, J., et al.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
