Mikrodysekcja oka gryzonia

K. Varsha Mohan; Prakriti Sinha; Bharati Swami; Abaranjitha Muniyasamy; Perumal Nagarajan; Pramod Upadhyay

doi:10.3791/64414

Artykuł metodologiczny

Mikrodysekcja oka gryzonia

7.4K wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/64414

⸱

21 kwietnia 2023

K. Varsha Mohan¹ , Prakriti Sinha¹ , Bharati Swami¹ , Abaranjitha Muniyasamy¹ , Perumal Nagarajan¹ , Pramod Upadhyay¹

¹National Institute of Immunology

W tym artykule

Podsumowanie

Ten artykuł przedstawia protokół mikropreparacji oka u gryzoni. Proces ten polega na wyłuszczeniu gałki ocznej wraz z błoną naszywkową (tj. Trzecią powieką). Następnie następuje oddzielenie tylnej i przedniej części gałki ocznej.

Streszczenie

Mikro-rozwarstwienie oka gryzonia polega na segmentacji wyłuszczonej gałki ocznej z dołączoną błoną oczną, czyli trzecią powieką, w celu uzyskania przedniej i tylnej gałki ocznej. Dzięki tej technice można uzyskać podczęści oka, w tym tkankę rogówki, tkankę nerwową, tkankę nabłonka barwnikowego siatkówki (RPE) i soczewkę, do całościowego montażu, kriosekcji i/lub zawiesin jednokomórkowych określonej tkanki oka. Obecność trzeciej powieki ma wyjątkowe i znaczące zalety, ponieważ korzystnie wpływa na utrzymanie orientacji oka, co jest ważne dla zrozumienia fizjologii oka po każdej zlokalizowanej interwencji lub w badaniach obejmujących analizę oku odnoszącą się do topografii przestrzennej oka.

W tej metodzie, wyłuszczyliśmy gałkę oczną w oczodole wraz z trzecią powieką, ostrożnie i powoli przecinając mięśnie zewnątrzgałkowe i przecinając nerw wzrokowy. Gałka oczna została przebita przez rąbek rogówki za pomocą mikroostrza. Jako punkt wejścia wykorzystano nacięcie, pozwalające na przecięcie wzdłuż połączenia rogówkowo-twardówkowego poprzez wprowadzenie przez miejsce nacięcia mikronożyczek. Wykonywano małe i ciągłe nacięcia na obwodzie, aż do rozdzielenia miseczek. Można je dalej preparować, delikatnie złuszczając półprzezroczystą warstwę siatkówki nerwowej za pomocą kleszczy do szycia Colibri w celu uzyskania warstw siatkówki nerwowej i RPE. Ponadto wykonano trzy/cztery równoodległe cięcia od obwodu prostopadle do środka nerwu wzrokowego, aż do dotarcia do nerwu wzrokowego. To otworzyło półkuliste miseczki w kształt różyczki, dzięki czemu opadały płasko i można je było łatwo zamontować. Technika ta została zastosowana w naszym laboratorium do całych zrostów rogówki i odcinków siatkówki. Obecność trzeciej powieki wyznacza orientację nosowo-skroniową, co pozwala na badanie różnych interwencji terapii komórkowej po przeszczepie, a tym samym na ukierunkowaną walidację fizjologiczną niezbędną do wizualizacji i dokładnej reprezentacji w takich badaniach.

Wprowadzenie

Dyssekcja oka jest ważną techniką w badaniach okulistycznych i umożliwiła badaczom dostęp do segmentów oka w celu przeprowadzenia badań celowanych. Wcześniej badacze okulistów opierali się w swoich badaniach na tkance oka od osób chorych. Jednak stopniowo rosnąca liczba szczepów okulistycznych modeli gryzoni¹ na przestrzeni lat zmniejszyła zapotrzebowanie na ludzką tkankę oka. Te szczepy myszy pozwoliły na głębsze zrozumienie chorób oczu i interwencji. Stworzyły one jednak również zapotrzebowanie na innowacyjne techniki mikropreparacji oka. Niewielkie rozmiary i ograniczony obszar działania poważnie ograniczają skuteczny dostęp do części nośnyc....