$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Zakażenie wirusem Zika (ZIKV) jest nową chorobą wirusową przenoszoną przez komary. Pierwsza izolacja ZIKV miała miejsce w Ugandzie w 1947 roku1,2; Od 1947 do 2007 r. pozostawała zaniedbana, ponieważ objawy kliniczne są najczęściej bezobjawowe i charakteryzują się samoograniczającą się chorobą gorączkową. W 2007 roku epidemia wirusa Zika rozpoczęła się na wyspach Yap3,4, po czym nastąpiły większe epidemie w regionach Pacyfiku (Polinezja Francuska, Wyspa Wielkanocna, Wyspy Cooka i Nowa Kaledonia) od 2013 do 2014 roku5,6,7,8, gdzie po raz pierwszy u dorosłych zgłoszono ciężkie powikłanie neurologiczne zespół Guillaina-Barrégo (GBS)9. W latach 2015 i 2016 pierwsza szeroko zakrojona epidemia ZIKV przetoczyła się przez obie Ameryki po pojawieniu się azjatyckiego genotypu ZIKV w Brazylii już w 2013 roku10. Podczas tej epidemii zgłoszono od 440 000 do 1,3 miliona przypadków małogłowia i innych zaburzeń neurologicznych u noworodków11. Obecnie nie ma specyficznego lekarstwa ani leczenia zakażenia ZIKV; W związku z tym istnieje pilna potrzeba medyczna szczepionek przeciwko ZIKV, które mogą zapobiegać zakażeniom, szczególnie w czasie ciąży.
Kwantyfikacja wirusów to proces mający na celu określenie liczby wirusów obecnych w próbce. Odgrywa ważną rolę w badaniach, a laboratoria akademickie obejmują wiele dziedzin, takich jak medycyna i nauki przyrodnicze. Proces ten jest również ważny w sektorach komercyjnych, takich jak produkcja szczepionek wirusowych, białek rekombinowanych, antygenów wirusowych lub środków przeciwwirusowych. Do ilościowego oznaczania wirusa można użyć wielu metod lub testów12. Wybór metod lub testów zwykle zależy od charakterystyki wirusa, pożądanego poziomu dokładności oraz charakteru eksperymentu lub badania. Ogólnie rzecz biorąc, metody ilościowego oznaczania wirusów można podzielić na dwie kategorie: testy molekularne, które wykrywają obecność wirusowego kwasu nukleinowego (DNA lub RNA) oraz testy, które mierzą zakaźność wirusa in vitro12. Ilościowa reakcja łańcuchowa polimerazy (qPCR, dla DNA) lub ilościowa reakcja łańcuchowa polimerazy z odwrotną transkrypcją (qRT-PCR, dla RNA)13 i cyfrowa kropelka PCR14 to przykłady typowych technik molekularnych stosowanych do ilościowego oznaczania wirusowego kwasu nukleinowego w danej próbce15. Jednak te bardzo czułe techniki molekularne nie są w stanie odróżnić wirusów żywotnych od nieżywotnych15. W związku z tym badania, które wymagają informacji na temat cech biologicznych, takich jak zakaźność wirusa na komórkach, nie mogą być przeprowadzone przy użyciu wyżej wymienionych technik molekularnych; Potrzebne są testy, które mogą zmierzyć i określić obecność żywych wirusów. Testy, które mierzą zakaźność wirusa, obejmują test tworzenia płytki nazębnej (PFA), 50% dawkę zakaźną kultury tkankowej (TCID50), test ogniskowania fluorescencyjnego i transmisyjną mikroskopię elektronową (TEM)12.
PFA, opracowany przez Renato Dulbecco w 1952 roku, jest jedną z najczęściej używanych metod miareczkowania wirusów, w tym dla klasy ZIKV16. Służy do bezpośredniego oznaczania stężeń wirusów dla zakaźnych wirionów litycznych. Metoda opiera się na zdolności wirusa litycznego do wywoływania efektów cytopatycznych (CPE; strefy śmierci komórki lub blaszki miażdżycowe, obszar infekcji otoczony niezakażonymi komórkami) w zaszczepionej monowarstwie komórek po zakażeniu wirusowym. Istnieje jednak kilka wad testu, które wpływają na jego użyteczność. Test jest czasochłonny (trwa około 7-10 dni, w zależności od wirusów), zależny od CPE i podatny na błędy. W niniejszym badaniu przedstawiono technikę immunokolorymetryczną, test formowania ostrości (FFA), do wykrywania i ilościowego oznaczania ZIKV w formatach płytek 24-dołkowych i 96-dołkowych.