Ustalono kilka typów zwierzęcych modeli zapalenia tarczycy Hashimoto, podobnie jak spontaniczne autoimmunologiczne zapalenie tarczycy u myszy NOD. Myszy H-2h4 to prosty i niezawodny model do indukcji HT. W tym artykule opisano to podejście i oceniono proces patologiczny w celu lepszego zrozumienia mysiego modelu SAT.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Generacja modelu spontanicznego autoimmunologicznego zapalenia tarczycy u myszy
W tym artykule
Informacja o sprostowaniu
Important: There has been an erratum issued for this article. View Erratum Notice
Podsumowanie
Streszczenie
W ostatnich latach zapalenie tarczycy typu Hashimoto (HT) stało się najczęstszą autoimmunologiczną chorobą tarczycy. Charakteryzuje się naciekaniem limfocytów i wykrywaniem swoistych autoprzeciwciał w surowicy. Chociaż potencjalny mechanizm wciąż nie jest jasny, ryzyko zapalenia tarczycy typu Hashimoto jest związane z czynnikami genetycznymi i środowiskowymi. Obecnie istnieje kilka rodzajów modeli autoimmunologicznego zapalenia tarczycy, w tym eksperymentalne autoimmunologiczne zapalenie tarczycy (EAT) i spontaniczne autoimmunologiczne zapalenie tarczycy (SAT).
EAT u myszy jest powszechnym modelem HT, który jest immunizowany lipopolisacharydem (LPS) w połączeniu z tyreoglobuliną (Tg) lub uzupełniany kompletnym adiuwantem Freunda (CFA). Model myszy EAT jest szeroko stosowany u wielu typów myszy. Jednak postęp choroby jest bardziej prawdopodobny związany z odpowiedzią przeciwciał Tg, która może się różnić w różnych eksperymentach.
SAT jest również szeroko stosowany w badaniu RR w NOD. Mysz H-2h4. Skinienie głową. Mysz H2h4 to nowy szczep uzyskany ze skrzyżowania myszy z nieotyłym cukrzycą (NOD) z witaminą B10. A(4R), który jest znacząco indukowany dla HT z jodem podawanym lub bez niego. Podczas indukcji NOD. Mysz H-2h4 ma wysoki poziom TgAb, któremu towarzyszy naciek limfocytów w tkance pęcherzykowej tarczycy. Jednak w przypadku tego typu modelu mysiego istnieje niewiele badań, które kompleksowo oceniają proces patologiczny podczas indukcji jodu.
W tym badaniu ustalono mysi model SAT do badań nad HT, a proces zmiany patologicznej jest oceniany po długim okresie indukcji jodu. Dzięki temu modelowi naukowcy mogą lepiej zrozumieć patologiczny rozwój HT i badać nowe metody leczenia HT.
Wprowadzenie
Zapalenie tarczycy (HT) Hashimoto, znane również jako przewlekłe limfocytarne zapalenie tarczycy lub autoimmunologiczne zapalenie tarczycy, zostało po raz pierwszy opisane w 1912 roku1. HT charakteryzuje się naciekaniem limfocytów i uszkodzeniem tkanki pęcherzykowej tarczycy. Badania laboratoryjne objawiają się głównie zwiększeniem stężenia przeciwciał specyficznych dla tarczycy, w tym przeciwciała przeciwko tyreoglobulinie (TgAb) i przeciwciała przeciwko peroksydazie tarczycowej (TPOAb)2. Częstość występowania HT mieści się w przedziale 0,4%-1,5%, co stanowi 20%-25% wszystkich chorób tarczycy, a wartość ta wzrosła w ost....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
Protokół opisany poniżej został zatwierdzony przez wytyczne dotyczące pielęgnacji i użytkowania ustanowione przez Instytucjonalny Komitet ds. Opieki i Użytkowania Zwierząt Uniwersytetu Syczuańskiego.
1. Przygotowanie
- Umieść wszystkie myszy w określonych warunkach wolnych od patogenów w 12-godzinnych cyklach światła i ciemności (rozpoczynających się odpowiednio o 07:00 i 19:00). Utrzymuj temperaturę w pomieszczeniu na poziomie 22 °C. Zmieniaj materiały pościelowe co tydzień. Zapewnij odpowiednią ilość standardowej karmy dla gryzoni i wody.
- Przygotowując roztwór podstawowy NaI w wodzie, odważyć 2,5 g zwi....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
Zmiany histologiczne różniły się znacząco w zależności od płci zwierząt, czasu trwania podaży jodu oraz stężenia roztworu NaI. Jak pokazano na Rysunku 1, około 10% myszy NOD.H-2h4 rozwinęło SAT nawet bez indukcji jodem w wieku 24 tygodni, a u wszystkich myszy ostatecznie rozwinęło się zapalenie tarczycy. W przypadku podawania zwykłej wody nie stwierdzono istotnych różnic w zmianach histologicznych między samcami a samicami. Dodanie NaI do wody pitnej przyspieszyło rozwój zapalenia tarczycy. .......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
HT występuje z powodu zaburzenia układu autoimmunologicznego spowodowanego przez limfocyty naciekające tarczycę, co dodatkowo upośledza funkcję tarczycy, jednocześnie wytwarzając przeciwciała specyficzne dla tarczycy. Poziomy TSH, TgAb i TPOAb w surowicy u pacjentów z HT są znacznie podwyższone27. Obecnie dwa główne rodzaje modeli mysich są szeroko stosowane do badania etiologii autoimmunologicznego zapalenia tarczycy: EAT i SAT29. Myszy EAT są w większości immunizowane prz.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Wszyscy autorzy deklarują, że nie mają sprzecznych interesów.
Podziękowania
Mysie przeciwciała monoklonalne przeciwko ludzkiemu TPO (używane jako kontrola pozytywna) zostały dostarczone przez Dr. P. Caryona i Dr. J. Rufa (Marsylia, Francja). Autorzy dziękują wszystkim uczestnikom tego badania oraz członkom naszego zespołu badawczego. Prace te były częściowo wspierane przez granty z Funduszu Wsparcia Podoktorskiego Szpitala Zachodniochińskiego, Uniwersytet Sichuan, Chiny (2020HXBH057) oraz Programu Wsparcia Nauki i Technologii Prowincji Syczuan (projekt nr 2021YFS0166)
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Winian butorfanolu | Supelco | L-044 | |
| Chlorowodorek deksmedetomidyny | Sigma-Aldrich | 145108-58-3 | |
| Test immunoenzymatyczny (ELISA) dobrze | Sigma-Aldrich | M9410-1CS | |
| Etanol | macklin | 64-17-5 | |
| Freund' s Adiuwant, Kompletny | Sigma-Aldrich | F5881 | |
| Freund' s Adiuwant, niekompletny | Sigma-Aldrich | F5506 | |
| Koza anty-mysia IgG | invitrogen | SA5-10275 | |
| Roztwór midazolamu | Supelco | M-908 | |
| Mysz/szczur tyroksyna (T4) ELISA | Calbiotech | DKO045 | |
| Paraformaldehyd | macklin | 30525-89-4 | |
| Jodek propidyny | Sigma-Aldrich | P4864 | |
| Jodek sodu | Sigma-Aldrich | 7681-82-5 | |
| Tyreoglobulina | Sigma-Aldrich | T1126 | |
| Tyreoglobulina Zestaw ELISA | Thermo Scientific | EHTGX5 | |
| TSH ELISA | Calbiotech | DKO200 | |
| Ksylen | macklin | 1330-20-7 |
Bibliografia
- Ralli, M., et al. Hashimoto's thyroiditis: An update on pathogenic mechanisms, diagnostic protocols, therapeutic strategies, and potential malignant transformation. Autoimmunity Reviews. 19 (10), 102649(2020).
- Zhang, Q. Y., et al.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
Sprostowanie
Formal Correction: Erratum: Generation of a Mouse Spontaneous Autoimmune Thyroiditis Model
Posted by JoVE Editors on 6/05/2023. Citeable Link.
An erratum was issued for: Generation of a Mouse Spontaneous Autoimmune Thyroiditis Model. The Protocol section was updated.
Step 3.1.1 of the Protocol was updated from:
After the induction, anesthetize the mice with a volume of 0.01 mL/g anesthetic by intraperitoneal injection. Prepare the anesthetic by mixing midazolam (40 µg/100 µL for sedation), medetomidine (7.5 µg/100 µL for sedation), and butorphanol tartrate (50 µg/100 µL for analgesia) in phosphate-buffered saline (PBS).
to
After the induction, anesthetize the mice with a volume of 0.01 mL/g anesthetic by intraperitoneal injection. Prepare the anesthetic by mixing midazolam (40 µg/100 µL for sedation), medetomidine (7.5 µg/100 µL for sedation), and butorphanol tartrate (50 µg/100 µL for analgesia) in phosphate-buffered saline (PBS).
NOTE: The specific concentrations of each component in the anesthesia mixture are: midazolam 13.33µg/100µL, medetomidine 2.5µg/100µL, and butorphanol 16.7µg/100µL. For specific dosages used in mice, the doses are: midazolam 4µg/g, medetomidine 0.75µg/g, and butorphanol 1.67µg/g. Anesthesia depth was confirmed when the mouse's limb muscles relaxed, the whiskers had no touch response, and there was loss of pedal reflex.
Step 3.1.2 of the Protocol was updated from:
After the mice are anesthetized, cut off their whiskers with ophthalmic scissors to prevent blood from flowing down the whiskers and causing hemolysis. Fix the mouse with one hand and press the skin of the eye to make the eyeball protrude. Quickly remove the eyeball and draw 1 mL of blood into the microcentrifuge tube via a capillary tube.
to
After the mice are anesthetized, prepare the peripheral blood samples, by fixing the mouse with one hand and pressing the eye skin to protrude the eyeball. Then, insert the capillary tube into the inner corner of the eye and penetrate at a 30-45 degree angle to the plane of the nostril. Apply pressure while gently rotating the capillary tube. Blood will flow into the tube via capillary action.
Step 3.2.1 of the Protocol was updated from:
Dissect the chest wall to expose the heart, cut open the right atrium, and infuse saline into the left ventricle by an intravenous infusion needle attached to a 20 mL syringe until the tissue turns white.
to
Humanely euthanize the animal according to the institutional policies. Then, dissect the chest wall to expose the heart, cut open the right atrium, and infuse saline into the left ventricle by an intravenous infusion needle attached to a 20 mL syringe until the tissue turns white.
