Artykuł metodologiczny

HPLC w połączeniu z chemicznym odciskiem palca do rozpoznawania wielu wzorców w celu identyfikacji autentyczności Clematidis armandii caulis

DOI:

10.3791/64690

⸱

11 listopada 2022

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1School of Pharmacy, The Second Class Laboratory of Traditional Chinese Medicine Pharmaceutics, National Administration of Traditional Chinese Medicine, Chengdu Medical College, 2Pengzhou Second People's Hospital

* These authors contributed equally

W tym artykule

Podsumowanie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Tutaj prezentujemy protokół do ustanowienia wysokosprawnej chromatografii cieczowej (HPLC), połączonej z chemicznym rozpoznawaniem wielu wzorów odcisków palców, który zapewnia nową strategię skutecznej identyfikacji prawdziwych odmian Clematidis Armandii Caulis i jego domieszek.

Streszczenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Metoda identyfikacji chińskich materiałów leczniczych i związanych z nimi domieszek została skonstruowana na przykładzie Clematidis Armandii Caulis (Chuanmutong, powszechnie stosowana tradycyjna medycyna chińska). Dziesięć partii oryginalnych odmian Chuanmutong i pięć partii pokrewnych domieszek przeanalizowano i porównano w oparciu o odciski palców z wysokosprawnej chromatografii cieczowej (HPLC) w połączeniu z chemometrią, w tym analizą skupień (CA), analizą głównych składowych (PCA) i ortogonalną częściową analizą dyskryminacji metodą najmniejszych kwadratów (OPLS-DA). Ponadto oznaczono zawartość β-sitosterolu. Ustalono kontrolny chemiczny odcisk palca Chuanmutong i zidentyfikowano 12 wspólnych pików. Podobieństwo między odciskiem palca 10 partii oryginalnych odmian Chuanmutong a kontrolnym odciskiem palca wynosiło 0,910-0,989, podczas gdy podobieństwo pięciu partii domieszek wynosiło tylko 0,133-0,720. Opierając się na wspólnych pikach na chromatogramie, 15 partii próbek sklasyfikowano na trzech poziomach zawartości przez PCA i zagregowano w cztery kategorie według CA, uzyskując wyraźne rozróżnienie między autentycznym Chuanmutong a domieszkami Chuanmutong. Ponadto w ramach projektu OPLS-DA znaleziono siedem zróżnicowanych składników, które mogą skutecznie zidentyfikować autentyczny Chuanmutong i domieszki Chuanmutong. Zawartość β-sitosterolu w 10 partiach oryginalnych odmian Chuanmutong wynosiła 97,53-161,56 μg/g, podczas gdy zawartość β-sitosterolu w pięciu partiach domieszek była bardzo zróżnicowana, wśród których zawartość β-sitosterolu w Clematis peterae Hand.-Mazz. i Clematis gouriana Roxb. Var. finetii Rehd. et Wils. była znacznie niższa niż w przypadku autentycznych odmian Chuanmutong. Zawartość składników indeksu HPLC i metoda rozpoznawania wielu wzorców chemicznych odcisków palców opracowana w tym badaniu zapewniają nową strategię skutecznej identyfikacji autentycznych chińskich materiałów leczniczych i powiązanych domieszek.

Wprowadzenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Chuanmutong, suchy Caulis of Clematis armandii Franch. lub Clematis montana.-Ham., to tradycyjna medycyna chińska powszechnie stosowana w klinikach1,2,3. Stosuje się go w leczeniu problemów z oddawaniem moczu, obrzęków, owrzodzeń na języku i ustach, zmniejszonego wydzielania mleka, sztywności stawów i bólu mięśni spowodowanego wilgotnym ciepłem4. Chuanmutong zawsze był pozyskiwany z dzikich odmian, dystrybuowanych głównie w południowo-zachodnich Chinach, zwłaszcza w Syczuanie, gdzie można znaleźć najlepszą jakość5,6. Trudno jest odróżnić autentyczne odmiany od ich blisko spokrewnionych domieszek ze względu na ich podobne cechy7,8,9,10. Standard jakości Chuanmutong w wydaniu Farmakopei Chińskiej z 2020 r. określa jedynie właściwości, identyfikację mikroskopową i identyfikację cienkowarstwową bez określenia zawartości, co nie może skutecznie zidentyfikować domieszek, a zatem wiąże się z potencjalnym ryzykiem. Co więcej, istnieje niewiele doniesień porównujących i identyfikujących Chuanmutong i pokrewne rośliny. W związku z tym metoda kontroli jakości w celu zapewnienia autentyczności Chuanmutong jest warta dalszych badań.

Składniki chemiczne Chuanmutong składają się głównie z pentacyklicznych triterpenoidów typu oleanan i ich glikozydów, flawonoidów i kwasów organicznych11,12,13,14. Wśród nich kwas oleanolowy, β-sitosterol, stigmasterol i ergosterol mają działanie moczopędne o różnym natężeniu, które mogą być potencjalnymi substancjami farmakodynamicznymi promującymi diurezę i łagodzącymi strangurię15,16. Chemiczne odciski palców uzyskuje się poprzez oddzielenie i wykrycie wielu składników chemicznych zawartych w próbkach za pomocą wysokosprawnej chromatografii cieczowej (HPLC), chromatografii gazowej (GC) itp. Przyjęcie odpowiednich metod analizy statystycznej w celu analizy cech Chuanmutong może określić ogólną kontrolę jakości i naukową identyfikację tradycyjnej medycyny chińskiej17,18,19.

W tym badaniu zebrano 10 partii autentycznych odmian Chuanmutong i pięć partii domieszek. Ich jakość porównano i przeanalizowano metodą odcisków palców HPLC połączoną z rozpoznawaniem wielu wzorców, w tym analizą skupień (CA), analizą głównych składowych (PCA), ortogonalną analizą częściowej dyskryminacji metodą najmniejszych kwadratów (OPLS-CA) oraz oznaczaniem zawartości składnika farmakodynamicznego. Protokół ten ustanawia metodę identyfikacji autentycznych odmian o wysokiej specyficzności, nową strategię naukowej identyfikacji autentycznych odmian i domieszek w chińskich materiałach leczniczych.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Metody chemicznego wykrywania odcisków palców

  1. Warunki chromatograficzne
    1. Przygotować fazę ruchomą acetonitrylu (A)/wody (B). Ustaw program gradientu w następujący sposób w oprogramowaniu HPLC: 0-20 min, 3%A-10%A; 20-25 min, 10%A-13%A; 25-65 min, 13%A-25%A; 65-75 min, 25%A-40%A; 75-76 min, 40%A-3%A; 76-85 min, 3%A-3%A.
    2. Utrzymuj natężenie przepływu fazy ruchomej na poziomie 1,0 ml/min.
    3. Rozdzielanie chromatograficzne przeprowadzić na kolumnie C18 (250 mm x 4,6 mm, 5 μm) utrzymywanej w temperaturze 30 °C.
    4. Ustawić objętość wstrzykniętego wstrzykiwacza na 10 μl.
    5. Wykrywanie próbek na długości fali 205 nm.
      UWAGA: Aby zapoznać się z konkretnymi ustawieniami warunków chromatograficznych, należy zapoznać się z procedurami operacyjnymi oprogramowania roboczego wysokosprawnej chromatografii cieczowej (tabela materiałów).
  2. Przygotowanie roztworu próbki
    1. Zmielić surowce do jednolitej wielkości cząstek, przepuszczając je przez nylonową siatkę o średnicy wewnętrznej 850 μm ± 29 μm.
    2. Umieścić 2 g zmielonego surowca (dokładnie zważonego) w kolbie stożkowej o pojemności 50 ml z korkiem i dodać 50 ml metanolu. Umieścić korek na kolbie i stosować ultradźwięki (600 W, 40 kHz) przez 30 minut.
    3. Następnie schłodzić kolbę do temperatury pokojowej (RT). Ponownie zważyć próbki i uzupełnić początkową masę, zastępując utracony ekstraktant.
    4. Wlać 4 ml roztworu metanolu zawierającego ekstrakty lecznicze do kolby miarowej o pojemności 10 ml. Dodaj 6 mlH2O, wymieszaj i pozostaw na 10 minut.
    5. Na koniec przefiltruj supernatant przez membranę filtracyjną 0,45 μm i przełącz go w stan czuwania.
  3. Walidacja metod wykrywania odcisków palców
    1. Przygotować próbkę w sposób opisany powyżej (etap 1.2) i poddać ją analizie HPLC (etap 1.1) sześć razy dziennie. Aby ocenić precyzję, należy obliczyć względne odchylenie standardowe (RSD) względnego czasu retencji i względnych powierzchni pików, jak opisano w kroku 1.3.5.
    2. Ocenić stabilność roztworu próbki, analizując ten sam roztwór próbki przechowywany w temperaturze pokojowej przez 0, 2, 4, 6, 8, 12 i 24 godziny, a następnie obliczyć RSD względnego czasu retencji i względnych powierzchni pików, jak opisano w kroku 1.3.5.
    3. Pobrać sześć powtórzeń tej samej próbki (CMT-4), przygotować roztwór próbki zgodnie z powyższą procedurą (etap 1.2) i wykryć jego odcisk palca w HPLC zgodnie z krokiem 1.1. Obliczyć RSD względnego czasu retencji i względnych powierzchni pików, a następnie ocenić jego powtarzalność zgodnie z opisem w kroku 1.3.5.
    4. Następnie użyj piku o numerze 10 w Rysunek 1B jako pik odniesienia i oblicz RSD względnego czasu retencji i względnej powierzchni piku każdego wspólnego piku, jak opisano w kroku 1.3.5.
    5. Użyj wzorów wymienionych poniżej, aby obliczyć względny czas retencji i względną powierzchnię piku każdego wspólnego piku:
      Tre = charakterystyka T/odniesienie T
      Are = Cecha charakterystyczna/Odniesienie A
      Gdzie Tre = względny czas retencji, Charakterystyka T= charakterystyczny czas utrzymywania szczytu, Todniesienie = referencyjny czas utrzymania szczytu, Are = względna powierzchnia piku, charakterystyka A= charakterystyczna powierzchnia piku, a Aodniesienie = referencyjna powierzchnia piku.
      UWAGA: Ustalenie odcisków palców tradycyjnej medycyny chińskiej zazwyczaj wymaga wybrania piku chromatograficznego, który jest łatwy do uzyskania i ma wysoką rozdzielczość. Jest on używany jako pik referencyjny do identyfikacji odcisków palców oraz badania ich stabilności i odtwarzalności.

2. Ustanowienie odcisku palca Chuanmutong i analiza podobieństwa

  1. Należy użyć 10 partii autentycznych próbek i pięciu partii domieszek, takich jak Clematis argentilucida (Levl. et Vant.) W. T. Wang (CC), Clematis apiifolia var. obtusidentata Rehd. et Wils. (DC), Clematis peterae Hand.-Mazz. (DE), Clematis gouriana Roxb. Var. finetii Rehd. et Wils (XS) i Clematis finetiana Levl. et Vaniot. (SMT) jako próbki do analizy odcisków palców.
  2. Przygotować roztwory próbek zgodnie z opisem w kroku 1.2. Przeprowadzić analizę odcisków palców wszystkich roztworów próbek za pomocą HPLC zgodnie z warunkami opisanymi w kroku 1.1.
  3. Zaimportuj odpowiednie dane do systemu oceny podobieństwa chromatograficznych odcisków palców tradycyjnej medycyny chińskiej (SESCF-TCM, wersja 2012). System oznaczy piki o rozsądnej wysokości i dobrej rozdzielczości na chromatogramach wszystkich próbek jako wspólne piki.
    UWAGA: Oprogramowanie SESCF-TCM można pobrać po rejestracji na stronie internetowej Komisji Farmakopei Chińskiej (http://114.247.108.158:8888/login).
    1. W oprogramowaniu kliknij przycisk Ustaw widmo referencyjne w menu.
    2. Następnie w oknie Ustawienia parametrów ustaw Szerokość okna czasowego na 0.5 i wybierz Metodę generowania widma kontrolnego jako Metodę mediany.
    3. Kliknij opcję Multi-point Calibration (Kalibracja wielopunktowa) w menu głównym, a następnie wybierz opcję Peak Matching (Dopasowanie wartości szczytowych) jako Full Spectrum Peak Matching (Dopasowanie wartości szczytowych).
    4. Na koniec kliknij Generuj kontrolę, aby wygenerować referencyjny chromatograficzny odcisk palca autentycznego gatunku Chuanmutong.
  4. Zaimportuj czas retencji i obszar piku 10 partii autentycznych próbek Chuanmutong i pięciu partii domieszek do SESCF-TCM w celu analizy. Konkretne operacje są następujące:
    1. W oprogramowaniu kliknij przycisk Ustaw widmo referencyjne w menu głównym.
    2. W oknie Ustawienia parametrów ustaw referencyjny chromatograficzny odcisk palca autentycznego gatunku Chuanmutong jako odniesienie, wybierz metodę generowania widma kontrolnego jako metodę mediany i ustaw szerokość okna czasowego na 0,5.
    3. Kliknij opcję Multi-point Calibration (Kalibracja wielopunktowa) w menu głównym, a następnie wybierz opcję Peak Matching (Dopasowanie wartości szczytowych) jako Full Spectrum Peak Matching (Dopasowanie wartości szczytowych).
    4. Na koniec kliknij Oblicz podobieństwo, aby obliczyć podobieństwo na podstawie referencyjnych odcisków palców chromatogramu Chuanmutong. Na koniec oblicz podobieństwo odcisków palców za pomocą Systemu Chromatograficznej Oceny Odcisków Palców Medycyny Chińskiej (wersja 2012).
      UWAGA: Aby zapoznać się z konkretnymi operacjami, zapoznaj się ze specyfikacją operacyjną systemu chromatograficznej oceny odcisków palców medycyny chińskiej (wersja 2012).

3. Analiza rozpoznawania wielu wzorców odcisku palca Chuanmutong

  1. Analiza skupień (CA)
    1. Użyj obszarów pików 12 wspólnych pików w odciskach palców 10 partii autentycznych próbek Chuanmutong i ich pięciu partii domieszek jako zmiennych i wprowadź je do oprogramowania do analizy statystycznej w celu systematycznej analizy skupień (CA).
    2. Wybierz metodę międzygrupową i użyj współczynnika korelacji Pearsona jako podstawy klasyfikacji do narysowania diagramu analizy skupień Chuanmutong i jego domieszek. Konkretne operacje są następujące:
      1. W oprogramowaniu do analizy statystycznej kliknij Plik, aby zaimportować dane.
      2. Kliknij Analiza w menu, a następnie kliknij Grupowanie systemów w Klasyfikacji.
      3. Wybierz wspólny obszar piku jako zmienną i ustaw liczbę klastrów na cztery.
      4. Kliknij Metoda, wybierz metodę grupowania jako Połączenie międzygrupowe, wybierz interwał pomiaru jako Korelacja Pearsona, a następnie kliknij OK, aby narysować mapę CA.
  2. Analiza głównych składowych (PCA)
    1. Zaimportuj względną wspólną powierzchnię pików autentycznych odmian i ich domieszek do oprogramowania analitycznego w celu analizy PCA i użyj mapy wyników PCA do oceny mapy macierzy wyników różnic w próbie. Konkretne operacje są następujące:
      1. Otwórz oprogramowanie do analizy danych, kliknij Plik w menu i utwórz nowy zwykły projekt. Zaimportuj obszar pików 12 typowych pików w arkuszu kalkulacyjnym (np. w formacie Excel) z systemu HPLC. Następnie kliknij Zakończ, aby zakończyć import danych.
      2. Kliknij Nowy, aby utworzyć nowy model, aby ustawić typ modelu za pomocą PCA. Kliknij Autodopasowanie i Dodaj, aby dopasować dane, a następnie kliknij Wyniki, aby uzyskać mapę wyników PCA.
  3. Ortogonalna analiza częściowej dyskryminacji metodą najmniejszych kwadratów (OPLS-DA)
    1. Użyj metody ortogonalnej częściowej analizy najmniejszych kwadratów z trybem nadzoru, aby dokładniej przeanalizować względne wspólne piki powierzchni pików autentycznych odmian Chuanmutong i domieszek oraz narysuj mapę wyników klasyfikacji OPLS-DA dla wszystkich próbek. Konkretne operacje są następujące:
      1. W oprogramowaniu do analizy danych kliknij Plik w menu, aby zaimportować plik i utworzyć nowy zwykły projekt. Zaimportuj obszar pików 12 typowych pików w arkuszu kalkulacyjnym z systemu HPLC, a następnie kliknij Zakończ, aby zakończyć import danych.
      2. Kliknij Nowy, aby utworzyć nowy model, aby ustawić typ modelu za pomocą PCA. Kliknij Autodopasowanie i Dodaj, aby dopasować dane. Następnie kliknij na Wyniki, aby uzyskać mapę wyników PCA.
      3. Kliknij Nowy i wybierz Nowy jako Model One, aby ustawić typ modelu za pomocą OPLS-DA.
      4. Kliknij Skala i ustaw typ za pomocą Par dla wszystkich. Najpierw kliknij Autodopasowanie, a następnie kliknij Wyniki, aby uzyskać mapę wyników OPLS-DA.
    2. W celu określenia wpływu każdego wspólnego piku w Chuanmutong na jego wyniki klasyfikacji oraz różnicę między autentycznymi materiałami Chuanmutong a powiązanymi domieszkami, należy użyć zmiennej ważność w projekcji (VIP) do analizy.
    3. Narysuj mapę VIP różnych składników Chuanmutong. Wynikowa mapa adresów VIP służy do oceny wpływu każdej zmiennej na klasyfikację i do odsiewania składników, które w znaczący sposób przyczyniają się do różnic między grupami. Konkretne operacje są następujące:
      1. W oprogramowaniu do analizy danych kliknij Analizuj w menu i kliknij Permutacje, ustaw liczbę permutacji na 200 i uzyskaj R2 i Q2 mapy wyników OPLS-DA.
      2. Kliknij VIP i wybierz VIP Predictive, aby uzyskać mapę VIP.

4. Oznaczanie β-sitosterolu w Chuanmutong metodą HPLC

  1. Warunki chromatograficzne (patrz krok 1.1)
    1. Przygotuj fazę ruchomą: metanol-woda (97:3).
    2. Ustawić natężenie przepływu fazy ruchomej na 1,0 ml/min.
    3. Rozdzielanie chromatograficzne przeprowadzić na kolumnie C18 (250 mm x 4,6 mm, 5 μm) utrzymywanej w temperaturze 30 °C.
    4. Ustawić objętość wstrzykniętego wstrzykiwacza na 10 μl.
    5. Wykryj składnik na długości fali 204 nm.
  2. Przygotowanie roztworu próbki
    1. Przygotować podstawowy roztwór wzorcowy β-sitosterolu (0,1 mg/ml), rozpuszczając w metanolu dokładnie odważoną ilość odpowiedniego wzorca odniesienia.
    2. Zmielić próbkę analityczną surowca do uzyskania jednolitej wielkości cząstek, przepuszczając próbkę przez siatkę nylonową o średnicy wewnętrznej 180 μm ± 7,6 μm.
    3. Umieścić 2 g zmielonego surowca (dokładnie zważonego) w kolbie okrągłodennej i dodać do niej 50 ml chloroformu.
    4. Podłączyć kolbę do chłodnicy zwrotnej i podgrzewać ją we wrzącej łaźni wodnej (umiarkowane wrzenie) przez 60 minut. Przefiltrować roztwór ekstrakcyjny za pomocą bibuły filtracyjnej o grubości 15-20 μm.
    5. Odparować filtrat do stanu bliskiego suchości we wrzącej łaźni wodnej (umiarkowane wrzenie) przez około 10 minut.
    6. Rozpuścić pozostałość i uzupełnić objętość do 5 ml przy użyciu metanolu. Na koniec przepuść supernatant przez membranę filtracyjną 0,45 μm i przełącz go w stan czuwania.
  3. Walidacja metody
    1. Pobrać roztwór podstawowy β-sitosterolu przygotowany w podkroku 4.2.1, rozcieńczyć go 100% metanolem i przygotować roztwory o stężeniach 100 μg/ml, 80 μg/ml, 60 μg/ml, 50 μg/ml, 40 μg/mL, 30 μg/ml i 20 μg/ml.
    2. Wstrzyknąć próbki w warunkach chromatograficznych opisanych w kroku 4.1 w celu wyznaczenia powierzchni piku, przeprowadzić analizę regresji od powierzchni piku do objętości iniekcji i uzyskać równanie regresji oraz współczynnik korelacji w celu oceny jego liniowości.
    3. Przygotować próbki w sposób opisany powyżej (etap 4.2) i poddać je analizie HPLC (etap 4.1) sześć razy tego samego dnia. Następnie oblicz RSD powierzchni pików, aby ocenić precyzję.
    4. Oceń stabilność roztworu próbki, analizując te same roztwory próbek przechowywane w RT przez 0, 2, 4, 6, 8, 12 i 24 godziny, jak opisano w kroku 4.1. Następnie oblicz RSD powierzchni pików zgodnie z opisem w kroku 1.3.5.
    5. Zbadać powtarzalność, rozpuszczając tę samą próbkę (CMT-4) w sekstuplikacie, przygotowanym zgodnie z opisem w kroku 4.2, i poddając ją analizie HPLC, jak opisano w kroku 4.1. Następnie oblicz RSD zawartości β-sitosterolu w sześciu próbkach.
    6. Oceń dokładność metody, stosując metodę dodawania wzorca. W tym celu dodać roztwory referencyjne β-sitosterolu do próbek o stężeniach 80%, 100% i 120% zawartości β-sitosterolu i powtórzyć każdy warunek trzy razy, jak opisano w kroku 4.1. Oceń dokładność metody, obliczając średni odzysk i RSD.
      UWAGA: Wzór obliczeniowy wskaźnika odzysku (RR) jest następujący:
      RR % = [(Mt - M0) / Ms] × 100
      Gdzie Mt = jakość β-sitosterolu po dodaniu wzorca, M0 = jakość roztworu próbki, a Ms = jakość dodanego β-sitosterolu.
  4. Oznaczanie zawartości β-sitosterolu w próbkach
    1. Weź 10 partii autentycznych chińskich materiałów leczniczych i pięć partii powiązanych domieszek, aby przygotować roztwory próbek zgodnie z krokiem 4.2.
    2. Następnie wstrzyknąć każdy roztwór próbki i roztwór wzorcowy β-sitosterolu w celu określenia powierzchni piku w warunkach opisanych w kroku 4.1 i obliczyć zawartość β-sitosterolu w każdej próbce, stosując metodę jednopunktową wzorca zewnętrznego.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Chromatograficzny odcisk palca Chuanmutong i analiza podobieństwa (SA)
Wartości RSD względnego czasu zachowania precyzji, powtarzalności i stabilności wynosiły odpowiednio poniżej 0,46%, 1,65% i 0,53%; wartości RSD względnej powierzchni piku wynosiły odpowiednio poniżej 4,23%, 3,56% i 3,96%. Jak pokazano w Rysunki 1A,B, w 10 autentycznych próbkach Chuanmutong było 12 odrębnych wspólnych pików (od piku 1 do piku 12) w odciskach palców HPLC. Ponieważ obsza...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Pobieranie próbek do badań jest pierwszym kluczowym krokiem na drodze do skonstruowania rozpoznawania wielu wzorców w celu identyfikacji autentyczności chińskich materiałów leczniczych. Dzięki badaniom rynku odkryliśmy, że Sichuan Ya'an, Liangshan i Leshan są głównymi obszarami produkcji dzikich zasobów Chuanmutong. Pokrewne odmiany tego samego rodzaju mają również ten sam rozkład geograficzny 6,20; CC, DC, DE, XS i SMT są często nadużywane jako Chuangmutong

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Podziękowania

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ta praca była wspierana przez Projekt Administracji Tradycyjnej Medycyny Chińskiej w Syczuanie (nr 2020JC0088, nr 2021MS203).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Kwas octowyZhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, Chiny2017381038
AcetonitrylSigma-Aldrich  Trading Co., Ltd., Szanghaj, ChinyWXBD5243V
β-SitosterolMeisai Biological Technology Co., Ltd., Chongqing, Chiny20210201
  Kolumna C18Yuexu Material Technology Co., Ltd., Szanghaj, ChinyWelch Ultimate LP
ChuanmutongGuoqiang Chinese Herbal Pieces Co., Ltd., Syczuan, Chiny 19020103CMT-1
ChuanmutongHongya Wawushan Pharmaceutical Co., Ltd., Syczuan, Chiny 200701CMT-2
ChuanmutongHongpu Pharmaceutical Co., Ltd., Syczuan, Chiny 200701CMT-3
ChuanmutongHongpu Pharmaceutical Co., Ltd., Syczuan, Chiny 200901CMT-4
ChuanmutongXinrentai Pharmaceutical Co., Ltd., Syczuan, Chiny 210701CMT-5
ChuanmutongHaobo Pharmaceutical Co., Ltd., Syczuan, Chiny 210401CMT-6
ChuanmutongXinrentai Pharmaceutical Co., Ltd., Syczuan, Chiny 200901CMT-7
ChuanmutongWusheng Pharmaceutical Group Co., Ltd., Syczuan, Chiny 201201CMT-8
ChuanmutongLimin Chinese Herbal Pieces Co., Ltd., Syczuan, Chiny 201001CMT-9
ChuanmutongYuhetang Pharmaceutical Co., Ltd., Syczuan, Chiny210501CMT-10
Clematis argentilucida (Levl. et Vant.) W. T. WangMadzi Bridge, Sanlang Township, Tianquan County, Sichuan, Chiny -CC
Clematis apiifolia var. obtusidentata Rehd. et Wils.Wioska Heilin, gmina Qiliping, powiat Hongya, Syczuan, Chiny -DC
Clematis peterae Ręka.-Mazz.Wioska Huangmu, gmina Huangmu, powiat Hanyuan, Syczuan, Chiny -DE
Clematis gouriana Roxb. Var. finetii Rehd. et WilsMixedang Mountain, Huangwan Township, Emei County, Sichuan, Chiny -XS
Clematis finetiana Levl. et Vaniot.Wioska Wannian, gmina Huangwan, powiat Emei, Syczuan, Chiny -SMT
Waga elektronicznaHaozhuang Hengping Scientific Instrument Co., Ltd., Szanghaj,  Chiny FA1204
ErgosterolMeisai Biological Technology Co., Ltd, Chongqing, Chiny20210201
EtanolKelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, Chiny2021112602
Octan etyluZhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, Chiny2017042043
Kwas mrówkowyKelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, Chiny2016062901
Wysokosprawna chromatografia cieczowaAgilent, USA.1260
IBM SPSS Statistics wersja 26.0International Business Machines Corporation, USA-Metanol
Sigma-Aldrich  Trading Co., Ltd., Szanghaj, ChinyWXBD6409V
MetanolKelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, Chiny202010302
alkohol n-butylowyZhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, Chiny2020071047
Eter naftowyZhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, Chiny2020090125
Kwas fosforowyComeo Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, Chiny20200110
SESCF-TCM wersja 2012Komisja Farmakopei Narodowej, Chiny-http://114.247.108.158:8888/login
StigmasterolMeisai Biological Technology Co., Ltd., Chongqing, Chiny20210201
TrichlorometanSinopharm Group Chemical Reagent Co., Ltd., Szanghaj, Chiny20200214
Umetrics Wersja SIMCA 14.1.0.2047Umetrics, Szwecja-https://www.sartorius.com/en/products/process-analytical-technology/data-analytics-software/mvda-software/simca/simca-free-trial-download
Maszyna do wody ultraczystejYoupu Ultrapure Technology Co., Ltd., Syczuan, ChinyUPH-II-10T
Myjka ultradźwiękowaKunshan Hechuang Ultrasound Instrument Co., Ltd., Jiangsu, ChinyKH3200E

Bibliografia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Chen, C. R. Chinese Medicine Specimen Picture Book. , Shanghai World Book Company. Shanghai. 116(1935).
  2. Xiong, J., et al. Lignans from the stems of Clematis armandii ("Chuan-Mu-Tong") and their anti-neuroinflammatory activities. Journal of Ethnopharmacology. 153 (3), 737-743 (2014).
  3. Pan, L. L., et al. a lignan from the Chinese medicinal plant Clematis armandii, inhibits A431 cell growth via blocking p70S6/S6 kinase pathway. Integrative Cancer Therapies. 16 (3), 351-359 (2017).
  4. Chinese Pharmacopoeia Commission. Pharmacopoeia of The People's Republic of China: (Edition 2020). , The Medicine Science and Technology Press of China. China., Beijing. 38(2020).
  5. Wang, D. G., Guo, J. L. Textual research on the materia medica and authenticity of Clematidis armandii. Lishizhen Medicine and Materia Medicine Research. 18 (11), 2696(2007).
  6. Fang, Q. M., Zhang, M., Zhong, Y. Y. The natural resources and exploitation of Caulis Clematidis Armandii in Sichuan. West China Journal of Pharmaceutical Sciences. 20 (5), 404-406 (2005).
  7. Bai, M. N., Dai, Y. X., Wang, Y., Ren, Y. Y., Tan, R. Study on the identification of Caulis Clematidis Armandii. Research and Practice on Chinese Medicines. 31 (3), 13-16 (2017).
  8. Zhou, P. J., Li, X. F., Fu, D. H., Pu, X. Y., Zhu, G. Q. Pharmacognosy identification of Ethnomedicine Clematis ranunculoides Franchet. Journal of Guangzhou University of Traditional Chinese Medicine. 34 (3), 432-436 (2017).
  9. Guo, J. L., Tang, Y., Pei, J., Wang, D. G. Study on random amplified polymorphic DNA and sequence characterized amplified regions of Caulis Clematidis Armandii. Journal of Chengdu Medical College. 6 (4), 283-286 (2011).
  10. Liu, M. Z., Li, M. N., Yao, H., Liu, P. Molecular identification of Clematidis Armandii Caulis and its adulterants and closely related species by ITS2 sequence. Global Traditional Chinese Medicine. 4 (6), 446-450 (2011).
  11. Liu, J. J., Chen, X., Wei, Z. Q., Li, B. Chemical constituents and identification of the caules of Clematis armandii Franch.and Clematis montana Buch.-Ham. Natural Product Research and Development. 22 (6), 998-1000 (2010).
  12. Yang, T. R., Xu, Z., Shi, Y. N. Studies on four compounds from Clematis Montana. Journal of Liaoning University of Traditional Chinese Medicine. 10 (4), 142-143 (2008).
  13. Yan, L. H., Xu, L. Z., Zhou, Z. M., Yang, S. L. Chemical constituents from stems of Clematis armandii(I). Chinese Traditional and Herbal Drugs. 38 (3), 340-342 (2007).
  14. Li, X., et al. Traditional uses, phytochemistry, pharmacology, and toxicology of Akebiae Caulis and its synonyms: A review. Journal of Ethnopharmacology. 277, 114245(2021).
  15. Ye, X., et al. Diuretic effect and material basis of Clematidis Armandii Caulis in rats. China Journal of Chinese Materia Medica. 44 (9), 1889-1894 (2019).
  16. Kuang, Y., et al. Consistency study of Caulis Clematidis Armandii and its traditionally used products and counterfeit species based on efficacy and pharmacognosy. Pharmacology and Clinics of Chinese Materia Medica. 36 (3), 115-121 (2020).
  17. Li, Y., et al. Quality assessment of Asarum heterotropoides var. mandshuricum based on HPLC multi-component determination and multiple pattern recognition method of fingerprint. Chinese Traditional and Herbal Drugs. 53 (1), 238-243 (2022).
  18. Li, Y., et al. Determination of multi-components of Paeoniae Alba Radix based on fingerprints and chemical pattern recognition. Chinese Traditional and Herbal Drugs. 53 (1), 231-237 (2022).
  19. Li, H. H., et al. Comparative investigation for raw and processed products of Euodiae Fructus based on high-performance liquid chromatography fingerprints and chemical pattern recognition. Chemistry & Biodiversity. 18 (8), 2100281(2021).
  20. Dong, L. J., et al. Study on suitable distribution areas of Kawa Kimichi produced in Sichuan province-based on remote sensing and GIS-A case study of Clematis Armandii. Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica-World Science and Technology. 17 (11), 2398-2404 (2015).
  21. Tang, S. W., Pei, J., Li, F. Y. Morphological and histological identification of Chuanmutong. West China Journal of Pharmaceutical Sciences. 15 (1), 19-21 (2000).
  22. Li, B., Chen, X., Fang, Q. M., Zhang, B. J., Wei, Z. Q. Quality Research of Chuanmutong. Journal of Sichuan of Traditional Chinese Medicine. 27 (6), 58-60 (2009).
  23. Wu, W. J., Wan, M. M., Cao, Y. H., Tan, R., Song, L. K. Research on the Quality Standard of Chuanmutong. Chinese Archives of Traditional Chinese Medicine. 33 (2), 313-315 (2015).
  24. Wei, Z. Q., Chen, X., Li, B., Dong, X. P. Determination of stigmasterol in Clematis armandii Franch and Clematis montana Buch-Ham. by HPLC. Lishizhen Medicine and Materia Medica Research. 20 (3), 574-575 (2009).
  25. Qing, L. S., et al. Determination of oleanolic acid in Caulis clematidis armandii by HPLC. West China Journal of Pharmaceutical Sciences. 21 (3), 273-274 (2006).
  26. Yang, S. D., Wang, R., Fu, D. Y., Guo, J. J., Tan, W. Y. Determination on oleanolic acid in caulis clematidis armandii by microwave assisted extraction-HPLC/MS. Anhui Academy of Agricultural Sciences. 38 (13), 6929-6931 (2010).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

Profilowanie HPLCuwierzytelnianie Chuanmutonganaliza skupieanaliza g wnych sk adowychOPLS DAzawarto beta sitosteroluchi skie materia y medyczne

Powiązane artykuły