Tutaj prezentujemy protokół do ustanowienia wysokosprawnej chromatografii cieczowej (HPLC), połączonej z chemicznym rozpoznawaniem wielu wzorów odcisków palców, który zapewnia nową strategię skutecznej identyfikacji prawdziwych odmian Clematidis Armandii Caulis i jego domieszek.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
HPLC w połączeniu z chemicznym odciskiem palca do rozpoznawania wielu wzorców w celu identyfikacji autentyczności Clematidis armandii caulis
* These authors contributed equally
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Metoda identyfikacji chińskich materiałów leczniczych i związanych z nimi domieszek została skonstruowana na przykładzie Clematidis Armandii Caulis (Chuanmutong, powszechnie stosowana tradycyjna medycyna chińska). Dziesięć partii oryginalnych odmian Chuanmutong i pięć partii pokrewnych domieszek przeanalizowano i porównano w oparciu o odciski palców z wysokosprawnej chromatografii cieczowej (HPLC) w połączeniu z chemometrią, w tym analizą skupień (CA), analizą głównych składowych (PCA) i ortogonalną częściową analizą dyskryminacji metodą najmniejszych kwadratów (OPLS-DA). Ponadto oznaczono zawartość β-sitosterolu. Ustalono kontrolny chemiczny odcisk palca Chuanmutong i zidentyfikowano 12 wspólnych pików. Podobieństwo między odciskiem palca 10 partii oryginalnych odmian Chuanmutong a kontrolnym odciskiem palca wynosiło 0,910-0,989, podczas gdy podobieństwo pięciu partii domieszek wynosiło tylko 0,133-0,720. Opierając się na wspólnych pikach na chromatogramie, 15 partii próbek sklasyfikowano na trzech poziomach zawartości przez PCA i zagregowano w cztery kategorie według CA, uzyskując wyraźne rozróżnienie między autentycznym Chuanmutong a domieszkami Chuanmutong. Ponadto w ramach projektu OPLS-DA znaleziono siedem zróżnicowanych składników, które mogą skutecznie zidentyfikować autentyczny Chuanmutong i domieszki Chuanmutong. Zawartość β-sitosterolu w 10 partiach oryginalnych odmian Chuanmutong wynosiła 97,53-161,56 μg/g, podczas gdy zawartość β-sitosterolu w pięciu partiach domieszek była bardzo zróżnicowana, wśród których zawartość β-sitosterolu w Clematis peterae Hand.-Mazz. i Clematis gouriana Roxb. Var. finetii Rehd. et Wils. była znacznie niższa niż w przypadku autentycznych odmian Chuanmutong. Zawartość składników indeksu HPLC i metoda rozpoznawania wielu wzorców chemicznych odcisków palców opracowana w tym badaniu zapewniają nową strategię skutecznej identyfikacji autentycznych chińskich materiałów leczniczych i powiązanych domieszek.
Wprowadzenie
Chuanmutong, suchy Caulis of Clematis armandii Franch. lub Clematis montana.-Ham., to tradycyjna medycyna chińska powszechnie stosowana w klinikach1,2,3. Stosuje się go w leczeniu problemów z oddawaniem moczu, obrzęków, owrzodzeń na języku i ustach, zmniejszonego wydzielania mleka, sztywności stawów i bólu mięśni spowodowanego wilgotnym ciepłem4. Chuanmutong zawsze był pozyskiwany z dzikich odmian, dystrybuowanych głównie w południowo-zachodnich Chinach, zwłaszcza w Syczuanie, gdzie można znaleźć najlepszą jakość5
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
1. Metody chemicznego wykrywania odcisków palców
- Warunki chromatograficzne
- Przygotować fazę ruchomą acetonitrylu (A)/wody (B). Ustaw program gradientu w następujący sposób w oprogramowaniu HPLC: 0-20 min, 3%A-10%A; 20-25 min, 10%A-13%A; 25-65 min, 13%A-25%A; 65-75 min, 25%A-40%A; 75-76 min, 40%A-3%A; 76-85 min, 3%A-3%A.
- Utrzymuj natężenie przepływu fazy ruchomej na poziomie 1,0 ml/min.
- Rozdzielanie chromatograficzne przeprowadzić na kolumnie C18 (250 mm x 4,6 mm, 5 μm) utrzymywanej w temperaturze 30 °C.
- Ustawić objętość wstrzykniętego wstrzykiwacza na 10 μl.
- Wykrywanie próbek na długo....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
Odcisk chromatograficzny Chuanmutong i analiza podobieństwa (SA)
Wartości RSD dla względnego czasu retencji w badaniach precyzji, powtarzalności i stabilności wyniosły odpowiednio poniżej 0,46%, 1,65% i 0,53%; wartości RSD dla względnego pola powierzchni piku wyniosły odpowiednio poniżej 4,23%, 3,56% i 3,96%. Jak pokazano na Rysunkach 1A,B, w odciskach HPLC 10 autentycznych próbek Chuanmutong zidentyfikowano 12 wyraźnych wspólnych pików (od piku 1 do pik.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Pobieranie próbek do badań jest pierwszym kluczowym krokiem na drodze do skonstruowania rozpoznawania wielu wzorców w celu identyfikacji autentyczności chińskich materiałów leczniczych. Dzięki badaniom rynku odkryliśmy, że Sichuan Ya'an, Liangshan i Leshan są głównymi obszarami produkcji dzikich zasobów Chuanmutong. Pokrewne odmiany tego samego rodzaju mają również ten sam rozkład geograficzny 6,20; CC, DC, DE, XS i SMT są często nadużywane jako Chuangmutong
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Autorzy nie mają nic do ujawnienia.
Podziękowania
Ta praca była wspierana przez Projekt Administracji Tradycyjnej Medycyny Chińskiej w Syczuanie (nr 2020JC0088, nr 2021MS203).
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Kwas octowy | Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, Chiny | 2017381038 | |
| Acetonitryl | Sigma-Aldrich Trading Co., Ltd., Szanghaj, Chiny | WXBD5243V | |
| β-Sitosterol | Meisai Biological Technology Co., Ltd., Chongqing, Chiny | 20210201 | |
| Kolumna C18 | Yuexu Material Technology Co., Ltd., Szanghaj, Chiny | Welch Ultimate LP | |
| Chuanmutong | Guoqiang Chinese Herbal Pieces Co., Ltd., Syczuan, Chiny | 19020103 | CMT-1 |
| Chuanmutong | Hongya Wawushan Pharmaceutical Co., Ltd., Syczuan, Chiny | 200701 | CMT-2 |
| Chuanmutong | Hongpu Pharmaceutical Co., Ltd., Syczuan, Chiny | 200701 | CMT-3 |
| Chuanmutong | Hongpu Pharmaceutical Co., Ltd., Syczuan, Chiny | 200901 | CMT-4 |
| Chuanmutong | Xinrentai Pharmaceutical Co., Ltd., Syczuan, Chiny | 210701 | CMT-5 |
| Chuanmutong | Haobo Pharmaceutical Co., Ltd., Syczuan, Chiny | 210401 | CMT-6 |
| Chuanmutong | Xinrentai Pharmaceutical Co., Ltd., Syczuan, Chiny | 200901 | CMT-7 |
| Chuanmutong | Wusheng Pharmaceutical Group Co., Ltd., Syczuan, Chiny | 201201 | CMT-8 |
| Chuanmutong | Limin Chinese Herbal Pieces Co., Ltd., Syczuan, Chiny | 201001 | CMT-9 |
| Chuanmutong | Yuhetang Pharmaceutical Co., Ltd., Syczuan, Chiny | 210501 | CMT-10 |
| Clematis argentilucida (Levl. et Vant.) W. T. Wang | Madzi Bridge, Sanlang Township, Tianquan County, Sichuan, Chiny | - | CC |
| Clematis apiifolia var. obtusidentata Rehd. et Wils. | Wioska Heilin, gmina Qiliping, powiat Hongya, Syczuan, Chiny | - | DC |
| Clematis peterae Ręka.-Mazz. | Wioska Huangmu, gmina Huangmu, powiat Hanyuan, Syczuan, Chiny | - | DE |
| Clematis gouriana Roxb. Var. finetii Rehd. et Wils | Mixedang Mountain, Huangwan Township, Emei County, Sichuan, Chiny | - | XS |
| Clematis finetiana Levl. et Vaniot. | Wioska Wannian, gmina Huangwan, powiat Emei, Syczuan, Chiny | - | SMT |
| Waga elektroniczna | Haozhuang Hengping Scientific Instrument Co., Ltd., Szanghaj, Chiny | FA1204 | |
| Ergosterol | Meisai Biological Technology Co., Ltd, Chongqing, Chiny | 20210201 | |
| Etanol | Kelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, Chiny | 2021112602 | |
| Octan etylu | Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, Chiny | 2017042043 | |
| Kwas mrówkowy | Kelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, Chiny | 2016062901 | |
| Wysokosprawna chromatografia cieczowa | Agilent, USA. | 1260 | |
| IBM SPSS Statistics wersja 26.0 | International Business Machines Corporation, USA-Metanol | ||
| Sigma-Aldrich Trading Co., Ltd., Szanghaj, Chiny | WXBD6409V | ||
| Metanol | Kelon Chemical Co., Ltd., Chengdu, Chiny | 202010302 | |
| alkohol n-butylowy | Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, Chiny | 2020071047 | |
| Eter naftowy | Zhiyuan Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, Chiny | 2020090125 | |
| Kwas fosforowy | Comeo Chemical Reagent Co., Ltd., Tianjin, Chiny | 20200110 | |
| SESCF-TCM wersja 2012 | Komisja Farmakopei Narodowej, Chiny-http://114.247.108.158:8888/login | ||
| Stigmasterol | Meisai Biological Technology Co., Ltd., Chongqing, Chiny | 20210201 | |
| Trichlorometan | Sinopharm Group Chemical Reagent Co., Ltd., Szanghaj, Chiny | 20200214 | |
| Umetrics Wersja SIMCA 14.1.0.2047 | Umetrics, Szwecja-https://www.sartorius.com/en/products/process-analytical-technology/data-analytics-software/mvda-software/simca/simca-free-trial-download | ||
| Maszyna do wody ultraczystej | Youpu Ultrapure Technology Co., Ltd., Syczuan, Chiny | UPH-II-10T | |
| Myjka ultradźwiękowa | Kunshan Hechuang Ultrasound Instrument Co., Ltd., Jiangsu, Chiny | KH3200E |
Bibliografia
- Chen, C. R. Chinese Medicine Specimen Picture Book. , Shanghai World Book Company. Shanghai. 116(1935).
- Xiong, J., et al. Lignans from the stems of Clematis armandii ("Chuan-Mu-Tong") and their anti-neuroinflammatory activities. Journal of ....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
