To badanie opisuje metodę konstruowania agregatów na podstawie samoorganizacji ludzkich mezenchymalnych komórek macierzystych i identyfikuje cechy morfologiczne i histologiczne dla regeneracyjnego leczenia ubytków kości czaszki.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
To badanie opisuje metodę konstruowania agregatów na podstawie samoorganizacji ludzkich mezenchymalnych komórek macierzystych i identyfikuje cechy morfologiczne i histologiczne dla regeneracyjnego leczenia ubytków kości czaszki.
Mezenchymalne komórki macierzyste (MSC), charakteryzujące się zdolnością do samoodnawiania się i potencjałem różnicowania wieloliniowego, mogą pochodzić z różnych źródeł i stają się obiecującymi kandydatami do medycyny regeneracyjnej, zwłaszcza do regeneracji zębów, kości, chrząstek i skóry. Samoorganizujące się podejście do agregacji MSC, które w szczególności konstruuje klastry komórek naśladujące rozwijającą się kondensację mezenchymalną, umożliwia dostarczanie komórek macierzystych o dużej gęstości wraz z zachowanymi interakcjami komórka-komórka i macierzą zewnątrzkomórkową (ECM) jako niszą mikrośrodowiska. Wykazano, że metoda ta umożliwia skuteczne wszczepianie komórek i przeżycie, promując w ten sposób zoptymalizowane zastosowanie egzogennych MSCs w inżynierii tkankowej i zapewniając kliniczną regenerację narządów. W artykule przedstawiono szczegółowy protokół budowy i charakterystyki samoorganizujących się agregatów opartych na mezenchymalnych komórkach macierzystych z pępowiny (UCMSC), a także przykład zastosowania regeneracyjnego kości czaszki. Wdrożenie tej procedury pomoże w ustaleniu skutecznej strategii przeszczepów MSC dla inżynierii tkankowej i medycyny regeneracyjnej.
Kondensacja mezenchymalnych komórek macierzystych (MSC) jest niezbędnym etapem do zapewnienia prawidłowego wzrostu i rozwoju organizmu we wczesnej organogenezie1,2, szczególnie w tworzeniu kości, chrząstek, zębów i skóry1,3,4. W ciągu ostatnich kilku dekad terapie inżynierii tkankowej wykorzystujące hodowlane postnatalne MSCs w połączeniu z biodegradowalnymi rusztowaniami poczyniły ważne postępy w osteogennym5 i regeneracji chrzęstnej6. Jednak stosowanie rusztowań może m....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
UWAGA: Wszystkie procedury dla zwierząt zostały zatwierdzone przez Komitet ds. Opieki nad Zwierzętami i Użytkowania Czwartego Wojskowego Uniwersytetu Medycznego i przeprowadzone zgodnie z Przewodnikiem National Institutes of Health dotyczącym opieki i użytkowania zwierząt laboratoryjnych. W niniejszym badaniu wykorzystano kriokonserwowane ludzkie UCMSC, które uzyskano ze źródła komercyjnego (patrz tabela materiałów). Wykorzystanie komórek ludzkich zostało zatwierdzone przez Komisję Etyczną IV Wojskowego Uniwersytetu Medycznego. W celu opisania procedury jako przykład podano UCMSC. Ubytek czaszki został przyjęty jako przykład w celu ukazania potrzeby n....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Agregaty można z sukcesem stworzyć z UCMSC zgodnie z przebiegiem eksperymentalnym (Rycina 1). Jakość kruszywa musi zostać oceniona przed jego użyciem, poprzez obserwacja morfologiczna i analiza histologiczna. Powstała struktura lamelarna powinna być kompletna i gęsta, a komórki w obserwacji mikroskopowej powinny być przeplecione, tworząc wzór tkany (Rycina 2A). Podwijanie się krawędzi można zaobserwować podczas agregacji; nadmierne podwinięcie krawędzi .......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dzięki postępom w biotechnologii inżynierii tkankowej, wielu naukowców skupiło się na strategiach konstruowania wszczepialnej struktury o wysokiej plastyczności i zawierającej długotrwałe komórki, które mogą osiągnąć optymalną regenerację. Obecnie istnieje wiele metod implantacji MSC, takich jak metody oparte wyłącznie na komórkach, rusztowania uzupełnione cytokinami 6,24 lub połączenie komórek macierzystych i rusztowań5. W artykule przeds.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Autorzy nie mają do ujawnienia żadnych konfliktów interesów.
Ta praca była wspierana przez granty z Narodowej Fundacji Nauk Przyrodniczych Chin (81930025, 82100969 i 82071075) oraz Narodowego Kluczowego Programu Badań i Rozwoju Chin (2022YFA1104400 i 2021YFA1100600). Jesteśmy wdzięczni za pomoc ze strony Narodowego Centrum Demonstracyjnego Nauczania Eksperymentalnego dla Medycyny Podstawowej (AMFU).
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| 0,25% Trypsyna-EDTA (1x) | Sigma | T4049 | Pasaż komórkowy |
| Automatyczna maszyna do odwadniania | LEICA | ASP200s | Odwadnianie agregatu |
| Eppendorf | 5418R | Wirówka | |
| Thermo Nunc | 339650 | Naczynie do kultur wirowania | |
| Thermo | 150466 | Kultura UCMSC | |
| Etanol | SCR | 10009218 | Agregat odwadniający |
| Śmiertelna surowica bydlęca | Sijiqing | 11011-8611 | Kultura UCMSC |
| Kleszcz | JZ | JD1080 | Agregat żniwny |
| Aldehyd glutarowy | Proandy | 10217-1 | Utrwalanie agregatu |
| Zestaw do barwienia hematoksyliny i eozyny | beyotime | C0105S | Barwienie HE |
| Heksametyldisilazan | SCR | 80068416 | Sucha powierzchnia kruszywa |
| Hoechst33342 | Sigma | 14533 | Barwienie jąder komórkowych |
| L-glutamina | Sigma | G5792 | Hodowla UCMSC |
| Żywa/martwa Żywotność/Cytotoksyczność Zestaw | Invitrogen | L3224 | Barwienie żywych/martwych komórek |
| Zestaw do barwienia Massona | ZHC | CD069 | Barwienie |
| Masson Minimum Essential Medium Alpha basic (1x) | Gibco | C12571500BT | Kultura UCMSC |
| Parafina | Leica | 39601006 | Osadzanie tkanek |
| Paraformaldehyd | Saint-Bio | D16013 | Utrwalanie kruszywa |
| PBS (1x) | Meilunbio | MA0015 | Ponowne zawieszenie i oczyszczanie UCMSC |
| Penicylina/Streptomycyna | Procell Nauki przyrodnicze | PB180120 | Kultura UCMSC |
| Pentobarbital sodu | Sigma | P3761 | Znieczulenie zwierząt |
| Polysporin | Pfizer | Zapobiegaj wysuszeniu oczu | |
| Skaningowy mikroskop elektronowy | Hitachi | s-4800 | Obserwacja SEM |
| Nożyczki | JZ | Y00030 | Nacięcie chirurgiczne dla zwierząt |
| Płytka sześciodołkowa | Thermo | 140675 | Kultura UCMSC |
| Ścieg | Jinhuan | F603 | Zamknij rany |
| Szew | Xy | 4-0 | Zamknij rany |
| Sprzęt termostatyczny | Grant | v-0001-0005 | Kąpiel wodna |
| UCMSC | Bai'ao& nbsp; | UKK220201 | Komercyjnie UCMSC |
| Witamina C | Diyibio | DY40138-25g | Agregat indukujący |
| ksylen | SCR | 10023418 | Kruszywo odwadniające |
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Ten artykuł został opublikowany
Film wkrótce dostępny