$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Pandemia wirusowa wywołana przez nowego koronawirusa beta1 (tj. 2019-nCoV), która później została nazwana koronawirusem zespołu ciężkiej ostrej niewydolności oddechowej 2 (SARS-CoV-2)2 (dalej głównie nazywany wirusem), obejmujący klaster płucny i ciężką ostrą niewydolność oddechową, pojawiła się w mieście Wuhan w Chinach pod koniec 2019 roku3. Ze względu na szybką transmisję wirusa z człowieka na człowieka na całym świecie, wysoki wskaźnik infekcji, wysoką śmiertelność i poważne zagrażające życiu skutki uboczne4, podczas pandemii badania wirusologiczne5 szybko ewoluowały, aby zidentyfikować organizację i strukturę genomu wirusa5,6. Objawy COVID-197,8 obejmują wysoką gorączkę, suchy kaszel i uogólniony ból9. Co ważne, różne serotypy wirusa prowadzą do różnego nasilenia choroby10. Co więcej, bezobjawowi nosiciele mogą potencjalnie rozprzestrzeniać wirusa. Zwykle pod mikroskopem cząsteczki wirusa COVID-19 wykazują maczugopodobne wypustki utworzone przez białka kolca11. Dlatego, aby kontrolować rozprzestrzenianie się tego nowego patogenu, wykrywanie przypadków musi być szybkie i skuteczne. W związku z tym niezwykle czułe, szybkie i selektywne wykrywanie wirusa we wczesnych stadiach infekcji wirusowej stało się kluczowe2,11. Dystans społeczny/fizyczny jest konieczny, aby uniknąć transmisji wirusa12. Agencje zdrowia kładą nacisk na rozwój inteligentnych narzędzi diagnostycznych i nanosystemów13. Rzeczywiście, zgodnie z sugestiami agencji zdrowia, ukierunkowane i masowe testy14,15 są wymagane i nadal są poszukiwane.
Zasadniczo, metody diagnozy biologicznej, takie jak reakcja łańcuchowa polimerazy z odwrotną transkrypcją (RT-PCR), są najlepszym sposobem na masową identyfikację SARS-CoV-2, podobnie jak w przypadku koronawirusa związanego z bliskowschodnim zespołem oddechowym (MERS-CoV)16 i SARS-CoV-117. W tym kontekście obecna standardowa identyfikacja zakażenia SARS-CoV-2 zależy od poprawy cech specyficznych dla infekcji18,19. Dodatkowo należy wziąć pod uwagę zróżnicowanie zakażeń SARS-CoV-2 w zależności od obszaru, wieku, rasy i płci. Mając na uwadze ostateczny cel, jakim jest ratowanie życia, kluczowe znaczenie ma stworzenie narzędzi do szybkiej diagnostyki do użytku w miejscu opieki nad pacjentem (POC)20,21.
W tym kontekście, regularne strategie, takie jak fluorescencyjna hybrydyzacja in situ (FISH), badanie immunosorbentu białek (ELISA), metody oparte na mikrosferach, testy elektrochemiczne oraz MRI, PET i NIRFOI22 mają niską wrażliwość na niskie poziomy wirusa, niską selektywność i niską zdolność do ponownego wykorzystania; dodatkowo, takie procedury mają wady, w tym kosztowne systemy diagnostyczne wykorzystujące bioczujniki, odczynniki jednorazowego użytku i wymóg wysoko wykwalifikowana siła robocza23. Dlatego te wnikliwe techniki nie mogą być postrzegane jako szybkie, rozsądne, wyjątkowo specyficzne lub czułe metody weryfikacji koncepcji24,25. Warto zauważyć, że istnieją różne rodzaje bioczujników opartych na DNA i odporności, które wykorzystują techniki złożone, pojemnościowe i elektryczne18,26,27,28. Na przykład elektryczne biosensory DNA, które mają wysoką czułość, można w prosty sposób zmniejszyć i można je przestrajać29,30, zostały stworzone do wykrywania Ebola31, Zika, MERS-CoV i SARS-CoV32,33,34. Podobnie, skutecznie stworzono bioczujnik półprzewodnikowy (FET) do wykrywania białka kolca wirusa wykorzystujący pewne przeciwciała (monoklonalne) unieruchomione na urządzeniach pokrytych szkliwem grafenowym35,36. Niemniej jednak ta nowa strategia jest mniej czuła niż RT-PCR. Co więcej, niedawno opracowano aerozolowy model wykrywania wirusa oparty na terminalach 3D oparty na nanocząstkach aerozolu i zmniejszonym tlenku grafenu (GrO), który ma dolną granicę identyfikacji (2,8 × 10−15 M); W każdym razie proponowana złożona struktura biosensora35 została przetestowana pod kątem stosowania POC i porównana z innymi istniejącymi strategiami biosensorów, które są wykorzystywane do wykrywania wirusa35,37,38.
W tym badaniu zaprojektowaliśmy i wykonaliśmy pomniejszony i wielokrotnego użytku biosensor DIDC oparty na GrO do identyfikacji białka kolca wirusa bez ograniczeń przedstawionych powyżej dla innych biosensorów. Ten bioczujnik umożliwia detekcję na poziomie femtogramu (fg) w ciągu 3 s18,27 czasu odpowiedzi. Aby przeprowadzić te badania, wybrano nanopłatki GrO pod kątem lepszej responsywności i selektywności, co oznacza, że można wykryć niskie stężenia białka antygenu wirusa z wymazów z jamy ustnej i gardła lub nosogardzieli. GrO jest odpowiednim, syntetycznie niezawodnym, spójnym i przewodzącym materiałem, który może być z korzyścią wykorzystany do zastosowań biosensorycznych2,39,40,41. Ponadto zastosowano metodę hybrydyzacji bez znakowania przeciwciał monoklonalnych IgG, koncentrując się na białku S1 kolca wirusa. Wyprodukowany biosensor SARS-CoV-2-GrO-DIDC jest wielokrotnego użytku po zaawansowanym leczeniu i oczyszczeniu roztworem piranii. Ten ultraszybki, czuły, selektywny, bezetykietowy i wielokrotnego użytku biosensor może być wykorzystywany do biosensoryzacji próbek klinicznych i spersonalizowanych zastosowań w opiece zdrowotnej26,42,43,44.