Wszystkie procedury eksperymentalne zostały przeanalizowane i zatwierdzone przez Instytucjonalną Radę Recenzyjną (Institutional Review Board) Szpitala Bundang Uniwersytetu Narodowego w Seulu. Do eksperymentów w niniejszym badaniu zakwalifikowano 34 uczestników po udarze mózgu. Od wszystkich uczestników uzyskano pisemną zgodę na udział w badaniu. W przypadku, gdy uczestnik spełniał kryteria, ale nie mógł podpisać formularza zgody z powodu niepełnosprawności, pisemna zgoda została uzyskana od przedstawiciela ustawowego.
1. Układ eksperymentalny
- Rekrutacja pacjentów
- Przeprowadzić proces przesiewowy zgodnie z następującymi kryteriami włączenia:
Wiek od 18 do 85 lat z obecnością zaburzeń funkcji kończyn górnych;
Pierwszy w życiu udar niedokrwienny lub krwotoczny potwierdzony w tomografii komputerowej mózgu lub rezonansie magnetycznym;
Zdolność uczestnika do postępowania zgodnie z instrukcjami dotyczącymi oceny klinicznej oraz badania EEG;
Brak historii innych chorób psychiatrycznych lub neurologicznych poza udarem.
- Wykluczyć pacjentów na podstawie następujących kryteriów:
Wcześniejsze schorzenia obejmujące ośrodkowy układ nerwowy (np. urazowe uszkodzenie mózgu, guz mózgu, choroba Parkinsona);
Brak możliwości noszenia czepka EEG; oraz
Brak zdolności do postępowania zgodnie z instrukcjami dotyczącymi oceny klinicznej oraz badania EEG.
UWAGA: Kryteria włączenia i wyłączenia zostały dobrane w celu wyboru uczestników zdolnych do udziału w eksperymencie oraz uregulowania czynników demograficznych, które mogłyby wpłynąć na wyniki.
- Przekazać wszystkim zrekrutowanym uczestnikom szczegółowe informacje na temat procedury eksperymentalnej.
- System eksperymentalny: EEG
- Użyć systemu EEG składającego się z 32 elektrod skalpowych Ag/AgCl, tekstylnego czepka EEG oraz oprogramowania do zapisu EEG w celu rejestracji danych.
- Użyć komputera osobistego (PC) z zainstalowanym oprogramowaniem do zapisu EEG i połączyć PC z urządzeniem EEG za pomocą Bluetooth.
- Użyć drugiego komputera PC z aplikacją oprogramowania do programowania i analizy numerycznej dla inżynierii (patrz Tabela materiałów).
- Do prezentacji bodźców połączyć PC z dedykowanym modułem triggerów (Rysunek 1).
UWAGA: Szczegółowe specyfikacje obu komputerów PC znajdują się w Tabeli materiałów.
- Paradygmat eksperymentalny oparty na oprogramowaniu programistycznym
UWAGA: Uczestnicy wykonywali zadanie prostowania ręki przy użyciu kończyny objętej dysfunkcją oraz kończyny zdrowej, podczas którego mierzono dane EEG. Rysunek 2 przedstawia paradygmat eksperymentalny niniejszego badania.
- Zaprezentować dwa bodźce wizualne, CLOSE (zamknij) i OPEN (otwórz), przez 30 s każdy, na środku monitora w celu pomiaru bazowych danych EEG w stanie spoczynku, podczas których uczestnik zamyka i otwiera oczy.
UWAGA: Ponieważ dane EEG w stanie spoczynku są w stosunkowo mniejszym stopniu zanieczyszczone niepożądanymi artefaktami fizjologicznymi, są one przydatne do weryfikacji jakości danych EEG oraz identyfikacji indywidualnych charakterystyk EEG w odniesieniu do stanu spoczynku.
- Zaprezentować obraz ruchu ręki przez 3 s, aby polecić uczestnikowi wykonanie ruchu prostowania ręki, a następnie znak fiksacyjny przez 5 s w celu odpoczynku.
UWAGA: Procedura ta była traktowana jako jedna próba i była powtarzana 10 razy w jednej sesji. Każdy uczestnik przeszedł 4 sesje dla każdej ręki. Uczestnik mógł zrobić przerwę w dowolnym momencie po wykonaniu każdej sesji, aby zapobiec nadmiernemu zmęczeniu.

Rysunek 1: Schemat konfiguracji sprzętu. Komputer (PC1) służący do prezentacji bodźców eksperymentalnych był połączony z modułem wyzwalającym (trigger box), a drugi komputer (PC2) był połączony ze wzmacniaczem EEG. Zdarzenia stymulacyjne generowane w PC1 były przesyłane do wzmacniacza EEG za pośrednictwem modułu wyzwalającego podłączonego do PC1. Prosimy kliknąć tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.

Rycina 2: Paradygmat eksperymentalny zastosowany w niniejszym badaniu. Pojedyncza próba składała się z ruchu wyprostu dłoni trwającego 3 s, po którym następowała relaksacja trwająca 5 s. Wzór ten był powtarzany 10 razy w ciągu jednej sesji. Wykonano łącznie osiem sesji; cztery sesje obejmowały ruchy dłoni niedominującej (dotkniętej), a pozostałe cztery ruchy dłoni dominującej (zdrowej). Rycina została zaadaptowana z pracy Shim i wsp.17 za zgodą Mary Ann Liebert, Inc. Proszę kliknąć tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.
2. Rejestracja danych EEG związanych z ruchem
- Konfiguracja EEG
- Osadź uczestnika w wygodnym fotelu przed monitorem.
UWAGA: Odległość między uczestnikiem a monitorem powinna wynosić co najmniej 60 cm, aby zapobiec zmęczeniu wzroku. Należy jednak unikać nadmiernej odległości (np. >150 cm), ponieważ mogłoby to rozproszyć koncentrację uczestnika.
- Aby prawidłowo założyć czepek do pomiaru EEG, wyznacz lokalizację Cz na podstawie międzynarodowego systemu 10-20, wykorzystując przecięcie linii podłużnej łączącej nasion z inion oraz linii poprzecznej łączącej górne części obu małżowin usznych.
UWAGA: Czepek EEG może nie być wymagany w zależności od sprzętu do pomiaru EEG. W takim przypadku elektrody EEG są mocowane bezpośrednio do skóry głowy zgodnie z międzynarodowym systemem 10-2015.
- W celu dokładnego pomiaru EEG użyj czepka EEG o odpowiednim rozmiarze, dopasowanego do obwodu głowy uczestnika, i załóż go tak, aby pozycja elektrody Cz pokrywała się z indywidualną lokalizacją Cz.
- Zaciśnij pasek podbródkowy z odpowiednią siłą; zapobiegnie to dyskomfortowi uczestnika podczas połykania i mrugania w trakcie eksperymentu. Następnie potwierdź, że pozycje elektrod T9 i T10 czepka EEG znajdują się w obszarze skroniowym nad obiema małżowinami usznymi, a pozycja elektrody Fpz czepka EEG znajduje się na środku czoła.
UWAGA: Jeśli elektrody te znajdują się poza wyznaczonymi miejscami, rozważ zmianę czepka. W naszym badaniu użyto trzech rozmiarów czepków EEG (54 cm: mały, 56 cm: średni, 58 cm: duży).
- Po prawidłowym założeniu czepka EEG przymocuj 32 elektrody skalpowe Ag/AgCl do skóry głowy zgodnie z rozszerzonym międzynarodowym systemem 10-10, z elektrodą uziemiającą w Fpz i referencyjną w FCz16.
UWAGA: Lokalizacja elektrody referencyjnej (FCz) jest w stosunkowo mniejszym stopniu podatna na wpływ różnych artefaktów fizjologicznych, takich jak te z elektrookulografii, elektromiografii i elektrokardiografii, ponieważ znajduje się wokół centralnego obszaru (Cz) skóry głowy.
- Dostosuj poziom impedancji między elektrodami EEG a skórą głowy za pomocą żelu przewodzącego i utrwal włosy żelem, aby zapobiec wszelkim przeszkodom między elektrodami EEG a skórą głowy.
UWAGA: Ważne jest sprawdzenie, czy w wyniku wycieku żelu nie powstał mostek między sąsiednimi elektrodami EEG.
- Użyj oprogramowania do rejestracji EEG.
- Włącz system EEG i wykonaj Configuration > Select Amplifier. Wybierz Liveamp > > amplifier > connect. Wyszukaj funkcję Liveamp dla połączenia bezprzewodowego (Rysunek 3).
- Uruchom funkcję Impedance check, aby monitorować poziom impedancji dla każdej elektrody.
UWAGA: Zaleca się przeprowadzanie eksperymentu przy poziomie impedancji <20 KΩ (Rysunek 4).
- Uruchom funkcję monitoring , aby potwierdzić, czy sygnały EEG wszystkich elektrod mają podobne poziomy amplitudy poprzez monitorowanie sygnału EEG w czasie rzeczywistym (Rysunek 5).
UWAGA: Amplituda sygnału EEG zazwyczaj mieści się w zakresie od 10 µV do 100 µV, a moc fal alfa (8-12 Hz) wzrasta w obszarze potylicznym przy zamkniętych oczach. Zatem jakość danych EEG można potwierdzić jakościowo, monitorując poziom amplitudy i oscylacje alfa na kanałach w okolicy potylicznej przy zamkniętych oczach.
- Konfiguracja paradygmatu
- Dla stabilnego pozyskiwania danych EEG użyj dwóch oddzielnych komputerów PC: jednego do prezentacji bodźców zewnętrznych, a drugiego do rejestracji danych EEG (patrz. Rysunek 1).
- Aby zaprezentować bodźce eksperymentalne uczestnikom, stwórz program stymulacji w oparciu o paradygmat eksperymentalny, korzystając z oprogramowania programistycznego (wprowadzonego w kroku 1.3).
UWAGA: W niniejszym badaniu stworzono program stymulacji oparty na oprogramowaniu, ale można użyć innych programów, zależnie od ich kompatybilności ze sprzętem EEG używanym w eksperymencie oraz wygody użytkownika. Skrypt bodźców oparty na oprogramowaniu programistycznym znajduje się w Pliku Uzupełniającym 1 (Experimental_stimulus.m). Informacje o zdarzeniach, wskazujące punkt rozpoczęcia bodźców, są generowane przez wewnętrzne oprogramowanie programistyczne, przesyłane do wzmacniacza EEG poprzez skrzynkę triggerową, a ostatecznie do oprogramowania do rejestracji EEG (Rysunek 1).
- Uruchom program prezentujący bodźce eksperymentalne w trybie monitorowania (patrz. podpunkt 2.1.10). Następnie potwierdź, czy informacje o zdarzeniach są prawidłowo i terminowo zaznaczane na dole oprogramowania do rejestracji EEG przy każdej prezentacji bodźca, jak pokazano na Rysunku 6.
UWAGA: Informacje o punkcie czasowym są zapisywane przy każdej prezentacji nowego bodźca i są następnie wykorzystywane do segmentacji danych. Dlatego ważne jest uzyskanie jak najdokładniejszych punktów czasowych zdarzeń eksperymentalnych, aby zapobiec niedokładnej segmentacji danych, co prowadziłoby do niewiarygodnych wyników w analizie.
- Uruchom oprogramowanie do rejestracji EEG, a następnie niezależnie uruchom program prezentacji bodźców opracowany na podstawie paradygmatu eksperymentalnego, aby zapobiec pominięciu danych.
UWAGA: Dla wygody analizy danych zaleca się tworzenie nazw plików według spójnej zasady przechowywania danych (np. Sub1_Session1).
- Rejestracja EEG
- Zmierz EEG z częstotliwością próbkowania 1 000 Hz zgodnie z paradygmatem eksperymentalnym przedstawionym w kroku 1.3.
UWAGA: Częstotliwość próbkowania może być zmieniona w zależności od zakresu częstotliwości EEG, które badacz chce zbadać. Zgodnie z twierdzeniem Nyquista zazwyczaj zaleca się stosowanie częstotliwości próbkowania >200 Hz, gdzie informacje EEG mogą być badane przy ≤100 Hz. Wynika to z faktu, że większość informacji EEG znajduje się poniżej 100 Hz.
- Utrzymuj w możliwie największym stopniu takie same warunki eksperymentalne (np. miejsce eksperymentu, sprzęt, temperatura w pomieszczeniu itp.) dla wszystkich uczestników i poinstruuj ich, aby minimalizowali niepotrzebne ruchy podczas pomiaru EEG.

Rysunek 3: Procedura połączenia bezprzewodowego między wzmacniaczem EEG a komputerem z oprogramowaniem do rejestracji EEG. Należy wykonać poniższe kroki w podanej kolejności: (A) wybór wzmacniacza, (B) połączenie wzmacniacza, (C) wyszukiwanie podłączonego wzmacniacza w celu nawiązania połączenia bezprzewodowego, (D) połączenie zakończone. Kliknij tutaj, aby wyświetlić większą wersję tego rysunku.

Rysunek 4: Procedura kontroli impedancji dla każdego kanału. Wszystkie kanały powinny zostać dostrojone do koloru zielonego, aby zapewnić stabilny pomiar EEG. Zaleca się przeprowadzanie eksperymentu przy impedancji poniżej 20 KΩ. Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.

Rycina 5: Procedura monitorowania danych w czasie rzeczywistym dla każdego kanału. Sygnały ze wszystkich mierzonych kanałów mogą być monitorowane w czasie rzeczywistym, a ich skala może być zmieniana (powiększanie/pomniejszanie) za pomocą opcji (czerwona ramka) na górnym pasku. Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.

Rycina 6Zrzut ekranu służący do monitorowania informacji o zdarzeniu. Czerwone słupki wskazują znaczniki zdarzeń, które pojawiają się za każdym razem, gdy PC1 podaje bodziec. Krok tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.
3. Analiza danych EEG
UWAGA: Niniejsze opracowanie dostarcza precyzyjnych wytycznych w celu powtórzenia koncepcji badawczej. W związku z tym przedstawia ono zwięzły opis procesu analizy oraz reprezentatywne wyniki. Szczegółowe procedury i powiązane z nimi wyniki można znaleźć w poprzednim badaniu17. Stanowi to potwierdzenie, że Mary Ann Liebert, Inc. udzieliło zgody na wykorzystanie materiałów chronionych prawem autorskim.
- Przetwarzanie wstępne
- Usuń artefakty związane z ruchem gałek ocznych z surowych danych EEG, stosując procedury matematyczne oparte na analizie głównych komponentów zaimplementowane w oprogramowaniu do przetwarzania wstępnego danych EEG18,19 (patrz: Tabela materiałów).
UWAGA: Jeśli jakakolwiek epoka wykazywała wyraźne artefakty (± 100 µV) w dowolnej z elektrod, nawet po przetwarzaniu wstępnym, została ona wykluczona z dalszej analizy. Średnia liczba odrzuconych epok, wraz z odchyleniem standardowym, wynosiła 3,69 ± 7,15 dla zadania ruchu ręki objętej dysfunkcją oraz 1,62 ± 3,95 dla zadania ruchu ręki zdrowej.
- Zastosuj filtr pasmowo-przepustowy w zakresie od 0,1 Hz do 55 Hz. Segmentuj przetworzone wstępnie dane EEG od -1 s do 3,5 s dla każdej próby, bazując na początku zadania, aby objąć okres bazowy wykorzystywany do analizy perturbacji spektralnych powiązanych z danym zdarzeniem (ERSP) oraz analiz sieci funkcjonalnych.
- Analiza ERSP
UWAGA: Pomiarowe dane EEG zostały zwalidowane za pomocą analizy ERSP dla pasma częstotliwości niskiego beta (12-20 Hz) powiązanego z ruchami dowolnymi.
- Przeprowadź krótkoczasową transformatę Fouriera dla każdej próby w celu obliczenia mocy spektralnej EEG, do czego wykorzystano funkcję newtimef z zestawu narzędzi EEGLAB w oprogramowaniu programistycznym20 (niezachodzące na siebie okno Hanninga o rozmiarze 250 ms).
- Znormalizuj widmo mocy każdej próby poprzez odjęcie średniej mocy z okresu bazowego (-1 do 0 s), aby zbadać zmiany mocy spektralnej pomiędzy zadaniem ruchu ręki a okresem bazowym.
- Oszacuj znormalizowane względem bazy mapy ERSP dla każdego pacjenta, uśredniając znormalizowane widma mocy dla wszystkich prób.
- Analiza sieci funkcjonalnych
UWAGA: Przeprowadzono analizę sieci funkcjonalnych, aby zbadać zmiany w EEG z perspektywy sieci mózgowej. Aby obliczyć ważone wskaźniki sieci całego mózgu w oparciu o teorię grafów, najpierw obliczono łączność mózgową między różnymi obszarami, wykorzystując wartość blokowania fazy (PLV). Następnie, na podstawie wyników analizy łączności opartej na PLV, stworzono macierz łączności funkcjonalnej, która posłużyła do obliczenia wskaźników sieci całego mózgu17. Wszystkie analizy sieci funkcjonalnych wykonano przy użyciu oprogramowania programistycznego.
- Oblicz wartość blokowania fazy (PLV) opartą na transformacie Hilberta dla pasma częstotliwości niskiego beta (12-20 Hz), korzystając z funkcji wewnętrznej21,22. Funkcja wewnętrzna do obliczania PLV opartego na transformacie Hilberta znajduje się w Pliku uzupełniającym 2 (myPLV.m).
- Oceń PLV pomiędzy wszystkimi możliwymi parami 32 elektrod EEG w każdym punkcie czasowym podczas okresów wykonywania zadania (0-3,5 s) i stwórz symetryczną macierz sąsiedztwa (32 x 32, liczba elektrod = 32), uśredniając wartości PLV w okresie trwania zadania. Wykorzystaj macierz PLV jako dane wejściowe do analizy sieci17,23.
- Oceń cztery ważone wskaźniki sieci na poziomie globalnym w oparciu o teorię grafów, korzystając z Brain Connectivity Toolbox (https://sites.google.com/site/bctnet): (1) siła (strength), (2) współczynnik grupowania (clustering coefficient), (3) długość ścieżki (path length) oraz (4) cecha małego świata (small-worldness)17,24,25.