Artykuł metodologiczny

Mysi model krzemicy utworzony przez wielokrotne wdychanie krystalicznego pyłu krzemionkowego

3K wyświetleń

DOI:

10.3791/64862

6 stycznia 2023

* These authors contributed equally

W tym artykule

Podsumowanie

Ten protokół opisuje metodę tworzenia mysiego modelu krzemicy poprzez wielokrotne wystawienie na działanie zawiesin krzemionki za pomocą kroplówki z nosa. Model ten może wydajnie, wygodnie i elastycznie naśladować patologiczny proces krzemicy u ludzi z wysoką powtarzalnością i oszczędnością.

Streszczenie

Krzemica może być spowodowana przez narażenie na pył krzemionki krystalicznej (CSD) w środowisku przemysłowym. Patofizjologia, badania przesiewowe i leczenie krzemicy u ludzi były szeroko badane przy użyciu mysiego modelu krzemicy. Poprzez wielokrotne zmuszanie myszy do wdychania CSD do płuc, myszy mogą naśladować kliniczne objawy ludzkiej krzemicy. Metodologia ta jest praktyczna i efektywna pod względem czasu i wydajności oraz nie powoduje mechanicznych urazów górnych dróg oddechowych w wyniku operacji. Co więcej, model ten może z powodzeniem naśladować ostry/przewlekły proces transformacji krzemicy. Główne procedury były następujące. Wysterylizowany proszek CSD o wielkości 1-5 μm został całkowicie zmielony, zawieszony w soli fizjologicznej i zdyspergowany w ultradźwiękowej łaźni wodnej przez 30 minut. Myszy w znieczuleniu indukowanym izofluranem przełączały się z płytkiego, szybkiego oddychania na głębokie, powolne aspiracje na około 2 sekundy. Mysz umieszczono w dłoni, a czubek kciuka delikatnie dotknął krawędzi wargi szczęki myszy, aby wyprostować drogi oddechowe. Po każdym wydechu myszy wdychały zawiesinę krzemionki kropla po kropli przez jedno nozdrze, kończąc proces w ciągu 4-8 sekund. Po ustabilizowaniu się oddechu myszy, ich klatka piersiowa była głaskana i pieszczona, aby zapobiec odkrztuszaniu wdychanego CSD. Myszy zostały następnie zwrócone do klatki. Podsumowując, model ten może określić ilościowo CSD wzdłuż typowego fizjologicznego przejścia drobnych cząstek do płuc, od górnych dróg oddechowych do końcowych oskrzelików i pęcherzyków płucnych. Może również odtworzyć powtarzające się narażenie pracowników w związku z pracą. Model może być wykonany przez jedną osobę i nie wymaga drogiego sprzętu. Wygodnie i skutecznie symuluje cechy chorobowe ludzkiej krzemicy z wysoką powtarzalnością.

Wprowadzenie

Pracownicy są nieuchronnie narażeni na nieregularny pył krzemionki krystalicznej (CSD), który może być wdychany i jest bardziej toksyczny w wielu kontekstach zawodowych, w tym w górnictwie, garncarstwie, szkle, przetwórstwie kwarcu i1,2. Przewlekły stan wdychania pyłu, znany jako krzemica, powoduje postępujące zwłóknienie płuc3. Według danych epidemiologicznych częstość występowania krzemicy spada na całym świecie w ciągu ostatnich kilku dekad, ale w ostatnich latach wzrasta i dotyka młodych ludzi4,5,

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

Wszystkie procedury były zgodne z wytycznymi National Institutes of Health's Guide for the Care and Use of Laboratory Animals (publikacja NIH nr 8023, poprawiona w 1978 roku) i zostały zatwierdzone przez Institutional Animal Care and Use Committee w Szkole Medycznej Uniwersytetu Nauki i Technologii Anhui.

1. Zarządzanie i karmienie myszy

  1. Przypisz 20 zdrowych samców myszy C57BL/6 do grup eksperymentalnych lub nośników w stosunku 1:1. Zaaklimatyzuj myszy do nowego środowiska przez 1 tydzień.
  2. Zapewnij stały czas świecenia przez 12 godzin dziennie. Użyj przełącznika sterowania czasowego, aby uzyskać precyz....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Potencjalna patogeneza krzemicy u myszy została zbadana przy użyciu proponowanej metody. Stwierdziliśmy, że masa ciała myszy w grupie eksperymentalnej znacznie się zmniejszyła w porównaniu z grupą kontrolną i że masa ciała powoli wracała do normy po zaprzestaniu ekspozycji. Ze względu na zastosowaną tutaj zoptymalizowaną dawkę, w tym eksperymencie nie zaobserwowano śmiertelności u myszy narażonych na działanie krzemionki. Techniczna mapa drogowa powtarzającego się podawania kroplówki z nosa do CSD jest pokazana na (

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

Mysie modele krzemicy mają kluczowe znaczenie dla badania patogenezy i leczenia krzemicy. Protokół ten opisuje metodę przygotowania modelu krzemicy u myszy poprzez wielokrotną ekspozycję przez nos. Metoda ta pozwala na badanie patologicznych cech krzemicy wywołanej różnymi czasami ekspozycji. Myszy znieczulono pod respiratorem, a ich częstość oddechów monitorowano. Początkowa krótka, szybka częstość oddechów stopniowo zwalniała i pogłębiała się z czasem. Znieczulenie spowodowało rozluźnienie mięśni myszy, co doprowadziło.......

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Autorzy deklarują brak konfliktu interesów.

Podziękowania

To badanie było wspierane przez University Synergy Innovation Program of Anhui Province (GXXT-2021-077) oraz Anhui University of Science and Technology Graduate Innovation Fund (2021CX2120).

....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Probówka 0,5 mlBiosharpBS-05-M
10% neutralny formalina utrwalaczNanchang Yulu Experimental Equipment Co.Ameryka
Północna Adobe IllustratorAdobe NA
Alkoholowy środek dezynfekującyXintai Kanyuan Produkty do dezynfekcji Co.NA
CD68Abcamab125212
Roztwór do odzyskiwania antygenu cytrynianowegobiosharp life scienceBL619A
DABNJJCBioW026-1-1
DimetylobenzenTechnologia chemiczna Azji Zachodniej (Shandong) CoNA
Ulepszony zestaw do oznaczania białek BCABeyotime BiotechnologyP0009
Hematoksylina i eozyna (H& E)Beyotime BiotechnologyC0105S
Substrat HRPMillipore CorporationP90720
Affinipure Coligürgen Affinipure Anti-Rabbit IgG (H + L)ProteintechSa00001-2
Kwas lodowyAzja Zachodnia Technologia chemiczna (Shandong) CoNA
ImageJNIHNA
IsofluraneRWD Life ScienceR510-22
Zestaw bejc Trichrome MassonaSolarbioG1340
MetanolMacklinNA
MikrorurkiMiliporeAXYMCT150CS
NF-κ B p65Technologia sygnalizacji komórkowej8242S
Oscylacyjna termostatyczna wanna metalowaAbsonNA
Maszyna do zatapiania parafinyPrecyzja (Changzhou) Sprzęt medyczny Co.PBM-A
Krajalnica do parafinyJinhua Kratai Instruments Co.NA
(PBS) BiosharpBL601A
Sól fizjologiczna Pierwszy Szpital Ludowy w mieście HuainanPipety Eppendorf
NA
PMSFBeyotime BiotechnologicalST505
Mikroskop światła spolaryzowanegoOlympusBX51
Waga precyzyjnaAcculabALC-110.4
Prism7.0GraphPad Wersja 7.0
Membrany PVDFMillipore3010040001
RIPABeyotime BiotechnologyP0013B
RODI IOT inteligentny wielofunkcyjny system oczyszczania wodyRSJRODI-220BN
Scilogex SK-D1807-E Wytrząsarka 3DScilogexNA
SDS-PAGE zestaw do przygotowania żeluBeyotime BiotechnologiaP0012A Dwutlenek krzemu
Sigma#BCBV6865
Syriusz czerwone barwienieNanjing SenBeiJia Biological Technology Co., Ltd.
Maszyna do znieczulania małych zwierzątAnhui Yaokun Biotech Co., Ltd.ZL-04A Uniwersalne końcówki
do pipet (0,1– 10 &mikro; L)KIRGENKG1011
(100– 1000 &mikro; L)KIRGENKG1313
(1– 200 i mikro; L)KIRGENKG1212
Vortex  mikser VWRNA
ZEISS GeminiSEM 500Zeiss NiemcySEM 500
β-aktynaBiossbs-0061R
Zestaw chromogeniczny Bufor fosforanowy Bufor do lizy 181012 Uniwersalne końcówki do pipet Uniwersalne końcówki do pipet

Bibliografia

  1. Olsson, A., Kromhout, H. Occupational cancer burden: the contribution of exposure to process-generated substances at the workplace. Molecular Oncology. 15 (3), 753-763 (2021).
  2. The Lancet Respiratory. The world is failing on silicosis. The Lanc....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

W knienie p ucpoda kropelkowa do jam nosowychhistologia p ucbarwienie Massonabarwienie immunohistochemiczneWestern blotaktywacja makrofag w

Powiązane artykuły