Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Określanie relacji samo(nie)zgodności i między (nie)zgodnością w cytrusach za pomocą ręcznego zapylania, mikroskopii i analiz genotypu S

3.2K wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/65056

⸱

30 czerwca 2023

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1National Key Laboratory for Germplasm Innovation & Utilization of Horticultural Crops, Huazhong Agricultural University

W tym artykule

Podsumowanie

Ten protokół zapewnia szybką metodę określania zgodności i niezgodności pyłków w odmianach cytrusowych.

Streszczenie

Citrus wykorzystuje samoniezgodność opartą na S-RNazie do odrzucania własnego pyłku i dlatego wymaga pobliskich drzew zapylających do udanego zapylania i nawożenia. Jednak identyfikacja odpowiednich odmian, które mogą służyć jako zapylacze, jest czasochłonnym procesem. Aby rozwiązać ten problem, opracowaliśmy szybką metodę identyfikacji odmian cytrusów kompatybilnych z zapylaniem, która wykorzystuje elektroforezę w żelu agarozowym i barwienie błękitem anilinowym. Zgodność pyłków określa się na podstawie identyfikacji genotypów S poprzez ekstrakcję całkowitego DNA i przeprowadzenie testów genotypowania opartych na PCR ze specyficznymi starterami. Dodatkowo style zbiera się 3-4 dni po ręcznym zapyleniu i wykonuje się barwienie na niebiesko aniliną. Na koniec stan wzrostu łagiewek pyłkowych obserwuje się za pomocą mikroskopu fluorescencyjnego. Zgodność i niezgodność pyłków można ustalić, obserwując, czy wzrost łagiewki pyłkowej jest odpowiednio normalny, czy stłumiony. Ze względu na swoją prostotę i opłacalność metoda ta jest skutecznym narzędziem do określania zgodności i niezgodności pyłku różnych odmian cytrusów w celu ustalenia grup niezgodności i relacji niezgodności między różnymi odmianami. Metoda ta dostarcza informacji niezbędnych do pomyślnego wyboru odpowiednich drzew zapylających, a tym samym ułatwia zakładanie nowych sadów i wybór odpowiednich rodziców do programów hodowlanych.

Wprowadzenie

Niezgodność (SI) jest genetycznie kontrolowanym mechanizmem obecnym u około 40% gatunków roślin okrytozalążkowych. W tym procesie słupek odrzuca pyłek z rośliny o tym samym genotypie SI, a tym samym zapobiega samozapłodnieniu1,2. Ma jia pummelo to lokalna odmiana w prowincji Jinagsu w Chinach, o doskonałych właściwościach dużych, różowych owoców, bogatej zawartości soku, słodko-kwaśnym smaku i grubej skórce3. Chociaż SI sprzyja krzyżowaniu zewnętrznemu, negatywnie wpływa na plon i jakość owoców4 i wymaga odpowiednich drzew zapylających o różnych genotypach SI w celu uzyskania niezawodnych wskaźników zawiązywania owoców i wysokich plonów. Obecnie istnieją dwa główne typy SI: samoniezgodność sporofityczna (SSI), reprezentowana przez Brassicaceae, oraz samoniezgodność gametofityczna (GSI), reprezentowana przez Rosaceae, Papaveraceae, Rutaceae i Solanaceae5,6,7,8.

Cytrusy to jedna z najważniejszych upraw owocowych na świecie. System GSI oparty na S-RNazie znajduje się w wielu odmianach cytrusów i negatywnie wpływa na szybkość zawiązywania owoców9. W tym systemie SI jest kontrolowany przez locus S, pojedynczy polimorficzny locus z dwoma złożonymi allelami, które przenoszą determinanty słupka S i determinanty S pyłku7. Żeńskim wyznacznikiem jest rybonukleaza S (S-RNaza), a wyznacznikiem męskim jest locus S F-box (SLF)7. Komórki słupka wydzielają białka S-RNazy. Nie-własne S-RNazy są rozpoznawane przez białka SLF, co prowadzi do ubikwitynacji i degradacji nie-własnych S-RNaz przez szlak proteasomu 26S. W przeciwieństwie do tego, własne S-RNazy są w stanie gromadzić i hamować wzrost łagiewki pyłkowej (PT), ponieważ unikają białek SLF, a zatem są chronione przed ubikwitynizacją10,11,12,13.

Tutaj opisujemy technikę in vivo, która jest przydatna do identyfikacji genotypów S oraz stopni zgodności i niezgodności pyłku. Protokół polega na ekstrakcji całkowitego DNA z liści i przewidywaniu genotypu S za pomocą starterów specyficznych dla S. Co więcej, barwienie błękitem anilinowym i mikroskopia fluorescencyjna, a następnie zapylanie ręczne, dostarczają dowodów na stopień zgodności i niezgodności. Procedura zapylania semi in vivo, która polega na ręcznym zapylaniu kwiatów w laboratorium14,15, została również dostosowana do oceny stopnia samozgodności i niezgodności. Zastosowaliśmy jednak również zapylanie w terenie, a następnie pakowanie kwiatów w worki, aby uniknąć zanieczyszczenia niepożądanym pyłkiem, aby umożliwić rozwój łagiewki pyłkowej w warunkach naturalnych. Protokół ten jest prosty i nieskomplikowany i dostarcza informacji niezbędnych do pomyślnego wyboru odpowiednich drzew zapylających.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

1. Przygotowanie do barwienia na niebiesko anilinowe

  1. Przygotuj następujące odczynniki i narzędzia do eksperymentu: szczotkę do zapylaczy, pęsetę, ołówek, papier siarczanowy, worek do zapylania, woreczki z zamkiem błyskawicznym, spinacze do papieru, formaldehyd, lodowaty kwas octowy, absolutny etanol, probówki wirówkowe, kleszcze, zakraplacze kleju, szkiełka podstawowe, szkiełka nakrywkowe, skalpele i glikol polietylenowy.
  2. Przygotować pożywkę do kiełkowania in vitro zawierającą 0,02%MgSO4, 0,01% KNO3, 0,03% Ca(NO3)2, 0,01% H3BO3, 20% PEG-4000 i 15% sacharozy. Dostosuj pH do 6,0-6,2 za pomocą KOH. Użyj mieszadła magnetycznego, ponieważ PEG-4,000 jest trudny do rozpuszczenia.
  3. Przygotuj roztwór utrwalający Carnoya, który jest absolutnym etanolem i lodowatym kwasem octowym zmieszanymi w stosunku 3:1. Przygotuj roztwór utrwalający FAA, który składa się w 40% z formaldehydu, w 80% z etanolu i lodowatego kwasu octowego (1:8:1). Przygotować 4 M roztwór wodorotlenku sodu (NaOH) i błękitu anilinowego, który składa się z 0,1% błękitu anilinowego w 0,1 M K3PO4 . Użyj bursztynowej butelki do przechowywania roztworu błękitu anilinowego, ponieważ jest on wrażliwy na światło.

2. Zbieranie pyłku

  1. Poznaj z wyprzedzeniem okres kwitnienia drzew doświadczalnych (Ma jia pummelo w tym badaniu). Zbierz dojrzałe, nieotwarte kwiaty od początku okresu kwitnienia do szczytowej fazy kwitnienia i umieść je w torbie z zamkiem błyskawicznym. Kwiaty można przechowywać w lodówce w temperaturze 4 °C przez 24 godziny.
  2. Zanieś kwiaty do laboratorium. Użyj pęsety, aby zebrać pylniki i umieść je na szalce Petriego zawierającej bibułę filtracyjną. Zbierz pylniki od 20 do 30 kwiatów.
  3. Umieścić szalkę Petriego zawierającą pylniki w piekarniku o temperaturze 28 °C na 24 godziny, aż ziarna pyłku wyschną. Aby uzyskać szczegółową organizację kwiatów, zobacz Hu et al.9.
  4. Wysuszony pyłek należy umieścić w probówce wirówkowej o pojemności 1,5 ml. Przechowuj pyłek w hermetycznej torbie z zamkiem błyskawicznym zawierającej zmieniający kolor żel krzemionkowy (środek osuszający). Zamknij worek i oznacz go nazwą odmiany pyłku i datą przechowywania. Suszony pyłek można przechowywać w lodówce w temperaturze -20 °C przez 96 tygodni16.

3. Test kiełkowania pyłku in vitro

  1. Wlać 300 μl płynnej pożywki do naczynia do hodowli komórkowych lub nakrętki probówki wirówkowej o pojemności 2 ml i równomiernie rozsypać pyłek za pomocą pędzla do zapylania. Pyłek należy inkubować w temperaturze 28 °C w wilgotnym, ciemnym otoczeniu przez 12 godzin.
  2. Zdejmij górny 1 mm końcówki końcówki pipety o pojemności 1 000 μl. Za pomocą pipety wchłonąć pyłek niewielką ilością roztworu hodowlanego i przesunąć go na środek szkiełka mikroskopowego. Przykryj go szkiełkiem nakrywkowym. Obserwuj preparat za pomocą odwróconego mikroskopu za pomocą obiektywu 10x.
  3. Wykonaj trzy niezależne powtórzenia, używając w przybliżeniu tej samej gęstości pyłku dla każdej kontrpróby17. Wizualnie zarządzaj ilością pyłku, upewniając się, że cała szalka Petriego jest pokryta pyłkiem i że każda szalka Petriego ma prawie równą ilość pyłku.
  4. Kiełkujący pyłek wytwarza łagiewkę pyłkową o długości około dwukrotnie większej od średnicy. Oblicz szybkość kiełkowania na podstawie 20 pól wizualnych, co daje procentową zawartość kiełkującego pyłku we wszystkich polach pyłku.

4. Zapylanie

  1. Wybierz słoneczny dzień bez wiatru do zapylania. Wybierz 10 w pełni rozwiniętych pąków, które mają się otworzyć, ostrożnie oderwij płatki i uważaj, aby ich nie posiniaczyć.
  2. Użyj pędzla do zapylania, aby rozprowadzić wystarczającą ilość żywego pyłku na powierzchni znamienia i uważaj, aby nie uszkodzić słupka. Do samozapylenia należy użyć pyłku z tej samej rośliny/odmiany. Do zapylenia krzyżowego użyj pyłku z rośliny o innym genotypie.
  3. Przykryj zapylone kwiaty papierową torbą siarczanową. Użyj spinacza do papieru, aby uszczelnić worek i zapobiec zapyleniu przez genotypowo odrębne pyłki.
  4. Na etykiecie napisz nazwę gatunku oraz liczbę i czas zapylenia. Zawieś etykietę na gałęziach w pobliżu zapylanych kwiatów.

5. Pobieranie próbek, utrwalanie i konserwacja

  1. Usuń worki do zapylania około 3-4 dni po zapyleniu i zbierz zapylone kwiaty w torebkach z zamkiem błyskawicznym.
  2. Natychmiast usuń płatki, pojemniki i jajniki z kwiatów i zanurz znamiona zrośnięte ze stylami w probówce wirówkowej zawierającej świeżo przygotowany roztwór utrwalający. Inkubować znamiona i style w roztworze utrwalającym przez noc w temperaturze 4 °C.
  3. Następnego dnia wyrzuć roztwór utrwalający i umyj znamiona i fryzury dwa do trzech razy w 95% etanolu.
  4. Przenieś style do 70% roztworu etanolu. Upewnij się, że próbka jest całkowicie zanurzona w roztworze. Modele na tym etapie można przechowywać w temperaturze 4 °C przez 1-2 miesiące.

6. Barwienie błękitem anilinowym

  1. Próbki stylu przechowywane w 70% etanolu należy umyć wodą destylowaną trzy do czterech razy. Zanurzyć w 4 M roztworze NaOH, zamknąć i inkubować w łaźni wodnej o temperaturze 65 °C przez 60 minut. Na tym etapie kolor stylu zmienia się z żółto-białego na pomarańczowo-czerwony.
  2. Namocz style w wodzie destylowanej przez 30 minut. Wylej wodę destylowaną i umyj je wodą destylowaną trzy do czterech razy lub do momentu, gdy kolor stylu stanie się żółty.
  3. Umieść próbkę w probówce o pojemności 10 ml, dodaj błękit anilinowy, aż próbka zostanie zanurzona, i farbuj przez 12 godzin w ciemności.
  4. Obserwuj wzrost łagiewki pyłkowej za pomocą mikroskopu fluorescencyjnego.

7. Mikroskopia fluorescencyjna

  1. Przed obserwacją próbek umieść szkiełko na płaskim stole i dodaj dwie do trzech kropli glikolu polietylenowego na powierzchnię szkiełka.
  2. Umyj styl, który ma być obserwowany, wodą destylowaną. Za pomocą skalpela podziel go na dwie połówki wzdłuż osi podłużnej. Umieść połowę stylu na szkiełku podstawowym i przykryj szkiełkiem nakrywkowym.
  3. Umieść szkiełko na stoliku mikroskopu nad aperturą i wizualizuj za pomocą obiektywu 10x. Stosować filtr DAPI (wzbudzenie: 325-375 nm; emisja: 435-485 nm). Obserwuj pięć stylów dla każdego rodzaju zapylania. Obserwuj wzrost łagiewki pyłkowej.

8. Identyfikacja genotypu S na podstawie PCR

  1. Wyodrębnij genomowe DNA z próbki znamienia za pomocą metody CTAB18.
    1. Zebrane liście należy umieścić w probówce wirówkowej o pojemności 2 ml i zamknąć w ciekłym azocie. Przygotować bufor HCl:EDTA:NaCl:H2O w stosunku 1:1:3:5 i mieszaninę alkoholu izoamylowego chloroformu w stosunku 24:1
    2. Dodać 10 ml przygotowanego buforu, 0,2 g CTAB i 200 μl merkaptoetanolu do probówki wirówkowej o pojemności 50 ml i umieścić w łaźni wodnej o temperaturze 65 °C na 5 minut, aż roztwór stanie się klarowny i przezroczysty.
    3. Włóż ostrza do moździerza, dodaj zamrożone próbki, dodaj ciekły azot i zmielić. Zmieloną próbkę umieścić w probówce wirówkowej o pojemności 2 ml, dodać 600 μl mieszaniny CTAB, umieścić w łaźni wodnej o temperaturze 65 °C na 60 minut i mieszać do góry nogami co 30 minut.
    4. Dodać 700 μl mieszaniny alkoholu izoamylowego z chloroformem (24:1) i mieszać do góry nogami przez 10 minut. Odwirować w temperaturze 24 °C przy 12 000 x g przez 10 minut, odpipetować supernatant i przenieść do probówki wirówkowej o pojemności 1,5 ml.
    5. Dodać 60 μl 5 M roztworu NaCl i 1 ml absolutnego etanolu i wymieszać do góry nogami. Zamrażać w temperaturze -20 °C przez 30 minut, a następnie odwirowywać w temperaturze 24 °C i 9 000 x g przez 5 minut.
    6. Odrzucić sklarowany sklarant, dodać 1 ml 70% roztworu etanolu i pozostawić w temperaturze pokojowej na 1-2 godziny. Odwirować w temperaturze 24 °C, 9 000 x g przez 5 minut, odrzucić supernatant, odessać nadmiar roztworu etanolu i suszyć na powietrzu przez 5 minut.
    7. Dodać 100 μl sterylnej wody do rozpuszczenia, zmierzyć stężenie DNA za pomocą spektrofotometru i zamrozić w zamrażarce o temperaturze -4 °C do długotrwałego przechowywania.
    8. Skonfiguruj system reakcji RT-PCR. Przygotować następującą mieszaninę reakcyjną na 10 μl zawierającą 5 μl 2x PCRMix, po 0,25 μl startera do przodu i do tyłu, 1 μl DNA (100 ng / μl) i 3,5 μl H2O.
  2. Skonfiguruj program PCR zgodnie z tabelą 1. Program PCR dla wszystkich izoform wynosił 95 °C przez 5 min 32x (95 °C przez 30 s, 55 °C przez 30 s i 72 °C przez 1 min) i 72 °C przez 5 min. Rozdziel produkty na 1,5% żelach agarozowych TAE i sfotografuj9. Zweryfikuj określony genotyp S za pomocą genomowego DNA.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Do przeprowadzonych tutaj doświadczeń wybrano dojrzałe kwiaty, zebrano pręciki, wysuszono je w piekarniku, a następnie kiełkowano pyłek w temperaturze 28°C przez 12 h. Żywotność i wskaźniki kiełkowania pyłku określono ilościowo, zgodnie z przedstawieniem na Rysunku 1.

Cytrusy zostały zapylone ręcznie, a kompatybilność i niekompatybilność pyłku oceniono za pomocą barwienia błękitem anilinowym i mikroskopii fluorescencyjnej. Kompatybilny pyłek mógł kiełkować na powi...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

W uprawach owocowych zarówno partenokarpia, jak i SI są ważnymi cechami, ponieważ torują drogę do owoców bezpestkowych - cecha ta jest bardzo ceniona przez konsumentów. Samoniezgodność sprzyja odrzuceniu własnego pyłku, a tym samym zapobiega chowowi wsobnemu20. Wśród cytrusów pummelo jest odmianą niekompatybilną7. Prawie 40% wszystkich gatunków okrytozalążkowych wykazuje SI21. Ta cecha zapobiega zawiązywaniu się owoców, obniża plony i przynosi hodowc...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Autorzy oświadczają, że nie mają nic do ujawnienia.

Podziękowania

Ten projekt był wspierany finansowo przez Narodową Fundację Nauk Przyrodniczych Chin (32122075, 32072523).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
etanol absolutnySinopharm Chemical ReagentCo., Ltd10009218
Błękit anilinowySinopharm Chemical Reagent Co., Ltd
Kwas borowy, H3BO3Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd10004818
Brązowa butelkaLabgic Technology Co., Ltd
Azotan wapnia tetrahydrat, Ca(NO3 )2Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd80029062
Rurka odśrodkowaLabgic Technology Co., Ltd
probówki wirówkoweLabgic Technology Co., Ltd
CTABGEN-VIEW SCIENTIFIC INC57-09-0(CAS)
UpuszczanieJiangsu Songchang Sprzęt medyczny Co., Ltd
Kwas etylenodiaminotetraoctowy, EDTASinopharm Chemical Reagent Co., Ltd10009617
KleszczeLUXIANZI Biotechnology Co., Ltd
formaldehydSinopharm Chemical ReagentCo., Ltd10010018
W pełni automatyczny szybki młynek do próbekShanghai Jingxin Industrial Development Co., LtdTissuelyser-96
lodowaty kwasoctowySinopharm Chemical ReodagentCo., Ltd10000218
Rura szlifierskaShanghai Jingxin Industrial Development Co., Ltd
Alkohol izoamylowySinopharm Chemical Reagent Co., Ltd10003218
Alkohol izopropylowySinopharm Chemical Reagent Co., Ltd80109218
etykietaM& G Chenguang Stationery Co., Ltd.
Leica DMi8Shanghai Leica Co., Ltd21903797
Siarczan magnezu siedmiowodny, MgSO4Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd10013018
MIKROSKOP Szkło osłonoweZhejiang Shitai Industrial Co., Ltd
NaClSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd10019318
spinacze do papieruM& G Chenguang Stationery Co., Ltd.
ołówekM& G Chenguang Stationery Co., Ltd.
do zapylaniaShanghai Yimei Plastics Co., Ltd
Glikol polietylenowy, PEG 6000Pekin Dingguo Changsheng Biotechnology Co., LtdDH229-1
Glikol polietylenowy, PEG-4000Guangzhou saiguo biotech Co., Ltd1521GR500
Wodorotlenek potasu, KOHSinopharm Chemical ReagentCo., Ltd10017008
Azotan potasu, KNO3Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd10017218
SkalpelJiangsu Songchang Medical Equipment Co., Ltd
SlideZhejiang Shitai Industrial Co., Ltd
Wodorotlenek sodu, NAOHSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd10019718
SacharozaSinopharm Chemical ReagentCo., Ltd
papier siarczanowytermostatu Taizhou Jinnong Mesh Factory
Shanghai Jinghong Experimental Equipment Co., LtdL-909193
TrichlorometanSinopharm Chemical Reagent Co., Ltd10006818
Trójwodny fosforan tripotasowy, K3PO4Shanghai Lingfeng Chemical Reagent Co., Ltd20032318
Tris-HClGEN-VIEW SCIENTIFIC INC1185-53-1
torby z zamkiem błyskawicznymM& G Chenguang Stationery Co., Ltd.
β-MerkaptoetanolGEN-VIEW SCIENTIFIC INC60-24-2(CAS)
szczotka 10021418 Łaźnia wodna

Bibliografia

  1. Matsumoto, D., Tao, R. Recognition of S-RNases by an S locus F-box like protein and an S haplotype-specific F-box like protein in the Prunus-specific self-incompatibility system. Plant Molecular Biology. 100 (4-5), 367-378 (2019).
  2. Goldberg, E. E., et al. Species selection maintains self-incompatibility. Science. 330 (6003), 493-495 (2010).
  3. Zhang, L., Wang, R., Zhao, G., Wang, A., Lin, G. Comparative study on fruit quality of Guangfeng Ma jia pummelo and Pinghe red pummelo. China Agricultural Science Bulletin. 37 (22), 126-130 (2021).
  4. Min, H. E., Chao, G. U., Juyou, W. U., Shaoling, Z. Recent advances on self-incompatibility mechanism in fruit trees. Acta Horticulturae Sinica. 48 (4), 759-777 (2021).
  5. Fujii, S., Kubo, K., Takayama, S. Non-self- and self-recognition models in plant self-incompatibility. Nature Plants. 2 (9), 2-9 (2016).
  6. Meng, X., Sun, P., Kao, T. S-RNase-based self-incompatibility in Petunia inflata. Annals of Botany. 108 (4), 637-646 (2011).
  7. Liang, M., et al. Evolution of self-compatibility by a mutant Sm-RNase in citrus. Nature Plants. 6 (2), 131-142 (2020).
  8. Thomas, S. G., Franklin-Tong, V. E. Self-incompatibility triggers programmed cell death in Papaver pollen. Nature. 429, 305-309 (2004).
  9. Hu, J., et al. Downregulated expression of S2-RNase attenuates self-incompatibility in "Guiyou No. 1" pummelo. Horticulture Research. 8 (1), 199(2021).
  10. Guo, H., Halitschke, R., Wielsch, N., Gase, K., Baldwin, I. T. Mate selection in self-compatible wild tobacco results from coordinated variation in homologous self-Incompatibility genes. Current Biology. 29 (12), 2020-2030 (2019).
  11. Sun, P., Li, S., Lu, D., Williams, J. S., Kao, T. Pollen S-locus F-box proteins of petunia involved in S-RNase-based self-incompatibility are themselves subject to ubiquitin-mediated degradation. The Plant Journal. 83 (2), 213-223 (2015).
  12. Hua, Z., Kao, T. Identification and characterization of components of a putative petunia S-locus F-box-containing E3 ligase complex involved in S-RNase-based self-incompatibility. Plant Cell. 18 (10), 2531-2553 (2006).
  13. Entani, T., et al. Ubiquitin-proteasome-mediated degradation of S-RNase in a solanaceous cross-compatibility reaction. The Plant Journal. 78 (6), 1014-1021 (2014).
  14. Abdallah, D. Analysis of self-incompatibility and genetic diversity in diploid and hexaploid plum genotypes. Frontiers in Plant Science. 10, 896(2019).
  15. Herrera, S., Lora, J., Hormaza, J. I., Herrero, M., Rodrigo, J. Optimizing production in the new generation of apricot cultivars: self-incompatibility, S-RNase allele identification, and incompatibility group assignment. Frontiers in Plant Science. 9, 527(2018).
  16. Yuan, S. C., Chin, S. W., Lee, C. Y., Chen, F. C. Phalaenopsis pollinia storage at sub-zero temperature and its pollen viability assessment. Botanical Studies. 59 (1), 1(2018).
  17. Liang, M. Identification and evolution of genes related to self-incompatibility in citrus. , Huazhong Agricultural University. Wu'han, China. PhD Thesis (2019).
  18. Cheng, Y. J., Guo, W. W., Yi, H. L., Pang, X. M., Deng, X. X. An efficient protocol for genomic DNA extraction from Citrus species. Plant Molecular Biology Reporter. 21 (2), 177-178 (2003).
  19. Wei, Z., et al. Identification of S-genotypes of 63 pummelo germplasm resources. Acta Horticulturae Sinica. 49 (5), 1111-1120 (2021).
  20. de Nettancourt, D. Incompatibility in angiosperms. Sexual Plant Reproduction. 10, 185-199 (1997).
  21. Igic, B., Lande, R., Kohn, J. R. Loss of self-incompatibility and its evolutionary consequences. International Journal of Plant Sciences. 169 (1), 93-104 (2008).
  22. Guerrero, B. I., Guerra, M. E., Rodrigo, J. Establishing pollination requirements in Japanese plum by phenological monitoring, hand pollinations, fluorescence microscopy and molecular genotyping. Journal of Visualized Experiments. (165), e61897(2020).
  23. Herrera, S., Lora, J., Hormaza, J. I., Rodrigo, J. Determination of self- and inter-(in)compatibility relationships in apricot combining hand-pollination, microscopy and genetic analyses. Journal of Visualized Experiments. (160), e60241(2020).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Tagi

Samoniezapłodnienie cytrusówanaliza genotypu Skompatybilność pyłkubarwienie błękitem anilinowymelektroforeza w żelu agarozowymmikroskopia fluorescencyjnawzrost rurek pyłkowychgenotypowanie PCRwybór zapylacza
Określanie relacji samo(nie)zgodności i między (nie)zgodnością w cytrusach za pomocą ręcznego zapylania, mikroskopii i analiz genotypu S
Skontaktuj się z nami
Poleć bibliotece

Prywatność

Warunki korzystania z usługi

Zasady

Prawa autorskie © 2026 MyJoVE Corporation. Wszelkie prawa zastrzeżone.