Method Article

Optymalizacja technologii przetwarzania oleju baraniego Epimedii folium i badanie jego wpływu na rozwój embrionalny danio pręgowanego

DOI:

10.3791/65096

⸱

March 17th, 2023

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Chongqing Academy of Chinese Materia Medica, 2Bioengineering College of Chongqing University

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

W tym protokole, technologia przetwarzania oleju baraniego w Epimedii folium (EF) została zoptymalizowana poprzez zastosowanie eksperymentalnej metodologii projektowania i odpowiedzi Box-Behnken, a wpływ prymitywnego i zoptymalizowanego EF ekstrahowanego wodą na rozwój embrionalny danio pręgowanego został wstępnie zbadany.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Jako tradycyjna medycyna chińska (TCM), Epimedii folium (EF) ma historię w medycynie i żywności, która ma > 2000 lat. Klinicznie EF przetwarzany z olejem baranim jest często stosowany jako lek. W ostatnich latach stopniowo wzrastały doniesienia o zagrożeniach dla bezpieczeństwa i niepożądanych reakcjach związanych z produktami, w których wykorzystuje się ślad środowiskowy jako surowiec. Przetwarzanie może skutecznie poprawić bezpieczeństwo TCM. Zgodnie z teorią TCM, przetwarzanie oleju baraniego może zmniejszyć toksyczność EF i wzmocnić jego tonizujące działanie na nerki. Brakuje jednak systematycznych badań i oceny technologii przetwarzania oleju baraniego EF. W tym badaniu wykorzystaliśmy eksperymentalną metodologię powierzchni projektowo-reakcyjnej Boxa-Behnkena w celu optymalizacji kluczowych parametrów technologii przetwarzania poprzez ocenę zawartości wielu składników. Wyniki pokazały, że optymalna technologia przetwarzania oleju baraniego w EF była następująca: podgrzanie oleju baraniego w temperaturze 120 °C ± 10 °C, dodanie surowego EF, delikatne smażenie go w temperaturze 189 °C ± 10 °C, aż stanie się równomiernie błyszczący, a następnie usunięcie go i schłodzenie. Na każde 100 kg EF należy użyć 15 kg oleju baraniego. Toksyczność i teratogenność wodnego ekstraktu z surowego oleju i EF przetworzonego z oleju baraniego porównano w modelu rozwoju zarodka danio pręgowanego. Wyniki wykazały, że grupa surowych ziół była bardziej narażona na powodowanie deformacji danio pręgowanego, a jej o połowę maksymalne stężenie śmiertelnego EF było niższe. Podsumowując, zoptymalizowana technologia przetwarzania oleju baraniego była stabilna i niezawodna, z dobrą powtarzalnością. Po podaniu pewnej dawki wodny ekstrakt EF był toksyczny dla rozwoju zarodków danio pręgowanego, a toksyczność była silniejsza w przypadku leku surowego niż w przypadku leku przetworzonego. Wyniki pokazały, że przetwarzanie oleju baraniego zmniejszyło toksyczność surowego EF. Odkrycia te mogą być wykorzystane do poprawy jakości, jednorodności i bezpieczeństwa klinicznego EF przetwarzanego z oleju baraniego.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Epimedii folium (EF) to suszone liście Epimedium brevicornu Maxim., Epimedium sagittatum (Sieb. et Zucc.) Maxim., Epimedium pubescens Maxim., lub Epimedium koreanum Nakai. EF może być stosowany w leczeniu osteoporozy, zespołu menopauzalnego, guzków piersi, nadciśnienia, choroby niedokrwiennej serca i innych chorób1. Jako tradycyjna medycyna chińska (TCM), EF ma ponad 2000-letnią historię w medycynie i żywności. Ze względu na niską cenę i niezwykłe działanie tonizujące nerki, jest szeroko stosowany w lekach i zdrowej żywności. EF jest przetwarzany przez smażenie go z olejem baranim, proces ten został po raz pierwszy opisany w Teorii Przetwarzania Lei Gong napisanej przez Lei Xiao w okresie Liu Song2. Skuteczność surowego EF i smażonego EF jest zupełnie inna. Surowy EF głównie rozwiewa reumatyzm, podczas gdy smażony EF ogrzewa nerki, aby wzmocnić yang3. Obecnie EF jest szeroko stosowany jako surowiec w lekach i zdrowej żywności; istnieje 399 chińskich leków opatentowanych, dziewięć importowanych zdrowych produktów spożywczych i 455 krajowych zdrowych produktów spożywczych z EF jako surowcem4. Ten materiał leczniczy ma duże perspektywy zastosowania. Jednak w ostatnich latach pojawiło się coraz więcej doniesień o niepożądanych reakcjach i uszkodzeniach wątroby u ludzi spowodowanych przez zdrową żywność i chińskie leki patentowe wykorzystujące EF jako surowiec, a także powiązane badania toksyczności5,6,7 zgłosiły, że EF jako surowiec stanowi potencjalne zagrożenie dla bezpieczeństwa.

Chińskie przetwarzanie medyczne odnosi się do technik farmaceutycznych, które mogą skutecznie zmniejszyć lub wyeliminować toksyczność i poprawić bezpieczeństwo TCM. Tradycyjną metodą przetwarzania EF jest smażenie z olejem baranim, co zmniejsza toksyczność EF i wzmacnia jego działanie rozgrzewające nerki i promujące yang8. Ta metoda przetwarzania jest zawarta w Farmakopei Chińskiej i różnych specyfikacjach przetwarzania1. Proces EF jest określony tylko w następujący sposób: na każde 100 kg EF dodaje się 20 kg oleju owodniowego (rafinowanego) i jest on łagodnie wypalany, aż do uzyskania jednolitej i błyszczącej konsystencji1. W powyższych standardach nie ma ścisłych parametrów metody przetwarzania śladu środowiskowego, więc lokalne specyfikacje przetwarzania nie zostały ujednolicone w celu zapewnienia spójności. W związku z tym przydatne byłoby przeprowadzenie systematycznego badania procesu śladu środowiskowego. W artykule wykorzystano eksperymentalną metodę powierzchni projektowo-reakcyjnej Boxa-Behnkena w celu optymalizacji technologii przetwarzania EF.

Eksperymentalny projekt Boxa-Behnkena jest zazwyczaj stosowaną metodą do optymalizacji czynników w procesie. Parametry ekstrakcji można zoptymalizować, ustalając zależność funkcjonalną między czynnikami dopasowania równania regresji wielokrotnej a wartościami efektu. Ostatnio metoda ta jest szeroko stosowana do badania ekstrakcji TCM5,6,7 i processing9,10,11. Różne badania wykazały metody przygotowania TCM obejmujące przetwarzanie soli, przetwarzanie wina i smażenie zgodnie z projektem Box-Behnken, takie jak dla przetworzonych solą Psoraleae fructus12, przetworzonych winem Cnidii fructus13 i pieczonego Cinnamomi ramulus14. Ta metoda ma skrócony czas testu, wysoką dokładność testu i nadaje się do testów wieloczynnikowych i wielopoziomowych. Metoda jest prostsza niż metoda badania projektu ortogonalnego i bardziej kompleksowa niż metoda projektowania jednolitego15. Uzyskane zależności mogą wyznaczyć przewidywaną wartość dowolnego punktu testowego w zakresie testowym, co jest dużą zaletą. Model danio pręgowanego można wykorzystać do sprawdzenia, czy ślad środowiskowy jest mniej toksyczny po przetworzeniu.

W badaniach toksyczności TCM, model danio pręgowanego ma podwójne zalety: wysoką przepustowość eksperymentów komórkowych i podobieństwa do eksperymentów na gryzoniach16. Model ten charakteryzuje się niewielkimi rozmiarami, wysoką szybkością tarła, krótkim cyklem rozrodczym i łatwością hodowli. Model może być używany w dużych eksperymentach synchronicznych na płytkach do hodowli komórkowych, a eksperymentalna dawka leku jest niewielka, cykl eksperymentalny jest krótki, koszt jest niski, a cały proces eksperymentalny jest łatwy do zaobserwowania i obsługi17. Zarodki danio pręgowanego są przezroczyste i szybko się rozwijają. W związku z tym toksyczność i teratogenne działanie leków na tkanki trzewne na różnych etapach rozwoju można bezpośrednio zaobserwować pod mikroskopem18. Homologia genów między danio pręgowanym a ludźmi wynosi aż 85%18. Ścieżka transdukcji sygnału u danio pręgowanego jest podobna do ścieżki ludzkiej18. Struktura biologiczna i funkcja fizjologiczna danio pręgowanego są bardzo podobne do tych u ssaków18. W związku z tym model danio pręgowanego do testowania leków może dostarczyć zwierząt doświadczalnych, które są wiarygodne i w pełni stosowane u ludzi19.

W tym badaniu użyliśmy metodologii powierzchni projektowo-zwrotnej Box-Behnken, aby zoptymalizować ilość i temperaturę oleju baraniego oraz temperaturę smażenia stosowaną w technologii przetwarzania EF, z zawartością ikaryny, epimedyny A, epimedyny B, epimedyny C i baohuozydu I jako wskaźników oceny. Model danio pręgowanego wykorzystano do wstępnego zbadania wpływu ekstraktu wodnego z EF na rozwój embrionalny danio pręgowanego przed i po przetworzeniu, aby ocenić wpływ przetwarzania na tłumienie śladu środowiskowego.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Wszystkie eksperymenty związane z udziałem zwierząt zostały przeprowadzone za zgodą Komitetu Etyki Eksperymentów Instytutu Chongqing TCM (numer certyfikatu oceny etyki zwierząt laboratoryjnych: ZJS2022-03).

1. Oznaczanie składników bioaktywnych

UWAGA: Gatunkiem użytym w tych badaniach był Epimedium sagittatum, a próbki zostały zebrane w hrabstwie Fengdu, Chongqing. Próbka została zidentyfikowana jako sucha nadziemna część E. sagittatum (Sieb. et Zucc.) Maksyma. przez naukowców z Instytutu Medycyny Biologicznej Instytutu Tradycyjnej Medycyny Chińskiej w Chongqing.

  1. Przygotować roztwór produktu kontrolnego, dokładnie ważąc odpowiednią ilość każdej substancji odniesienia, a mianowicie ikaryny, epimedyny A (EA), epimedyny B (EB), epimedyny C (EC) i baohuozydu I (BI), używając elektronicznej wagi analitycznej, i rozpuścić w metanolu. Korzystając z nich, przygotuj mieszany referencyjny roztwór podstawowy zawierający 381,61 μg/ml ikaryny, 124,14 μg/ml EA, 110,24 μg/ml EB, 1091,75 μg/ml EC i 184,98 μg/ml BI.
  2. Przygotować roztwór badanego produktu, rozdrabniając EF przez sito nr 3. Umieścić około 0,2 g (przy użyciu elektronicznej wagi analitycznej) rozdrobnionego EF w zakorkowanej kolbie Erlenmeyera, dodać 20 ml rozcieńczonego etanolu, a następnie ultrasonizować przy mocy 400 W i częstotliwości 50 kHz przez 1 godzinę. Dobrze wstrząsnąć i przepuścić przez filtr membranowy 0,22 μm w celu uzyskania roztworu testowego.
  3. Przeprowadzić chromatografię w następujący sposób. Stosować wysokosprawną chromatografię cieczową (HPLC) z kolumną C18 o wymiarach 4,6 mm x 250 mm i średnicy wewnętrznej 5 μm. Acetonitryl należy stosować jako fazę ruchomą A, a wodę ultraczystą jako fazę ruchomą B. Należy stosować następujące parametry elucji gradientowej: 0-30 min, 24% A do 26% A; 30-31 min, od 26% A do 45% A; 31-45 min, od 45% A do 47% A. Użyj długości fali detekcji 220 nm (dla zastosowanego detektora patrz Tabela materiałów). Utrzymuj temperaturę kolumny na poziomie 30 °C, a aktualną prędkość na poziomie 1,0 ml/min i użyj próbki o wielkości 10 μl.
  4. Aby zbadać zależność liniową, należy użyć zmieszanego roztworu referencyjnego, jak w kroku 1.1, rozcieńczonego 2 razy, 4 razy, 8 razy, 16 razy i 32 razy, odpowiednio dla ikaryny, EA, EB, EC i BI. Użyj acetonitrylu jako ruchomej fazy A i ultraczystej wody jako ruchomej fazy B.
  5. Stosować następujące parametry elucji gradientowej: 0-30 min, 24% A do 26% A; 30-31 min, 26% A do 45% A; 31-45 min, 45% A do 47% A. Stosować długość fali detekcji 220 nm (dla zastosowanego detektora patrz Tabela materiałów). Utrzymuj temperaturę kolumny na poziomie 30 °C, a aktualną prędkość na poziomie 1,0 ml/min i użyj próbki o wielkości 10 μl. Na koniec zapisz obszary szczytów. Wykreślić regresję liniową ze stężeniem odniesienia (oś x, μg/ml) jako odciętą i powierzchnią piku (oś y) jako rzędną za pomocą profesjonalnego oprogramowania (patrz tabela materiałów).
  6. Przeprowadzić badanie precyzyjne, mierząc zmieszany roztwór kontrolny sześć razy z rzędu za pomocą HPLC, stosując warunki chromatograficzne przedstawione w kroku 1.3. Zapisać czas wykrywania i obszary pików każdego składu chemicznego i obliczyć względne odchylenia standardowe (RSD) obszarów pików, aby ocenić precyzję (odtwarzalność) przy użyciu poniższego wzoru:
    RSD% = odchylenie standardowe (SD)/średnia arytmetyczna obliczonych wyników (X) x 100 %
  7. Aby przeprowadzić badanie odtwarzalności, należy dokładnie zważyć proszek EF i przygotować sześć części roztworu badanego produktu równolegle zgodnie z metodą opisaną w kroku 1.2. Przygotowane roztwory poddać HPLC w warunkach chromatograficznych przedstawionych w kroku 1.3. Zapisać czasy retencji i obszary pików każdego składu chemicznego i obliczyć ilości każdego związku z krzywej wzorcowej (powierzchnie pików w funkcji stężeń). Oblicz RSD% jak wyżej.
  8. W celu przeprowadzenia badania stabilności należy przechowywać roztwory testowe w temperaturze pokojowej i zmierzyć ich zawartość metodą HPLC opisaną w kroku 1.3 po 0 godzinach, 2 godzinach, 4 godzinach, 8 godzinach, 12 godzinach i 24 godzinach od przygotowania w celu oceny stabilności. Zapisać czasy retencji i obszary pików każdego składu chemicznego i obliczyć RSD% obszarów pików, jak powyżej.
  9. W celu przeprowadzenia testu odzysku próbki należy odważyć 0,2 g proszku EF w kolbie Erlenmeyera z korkiem w celu uzyskania sześciu powtórzeń. Dodać odpowiednią ilość roztworu odniesienia (ilość substancji odniesienia dodanej do próbki odpowiada 100% znanej zawartości próbki) i przygotować roztwór badany zgodnie z metodą przedstawioną w kroku 1.2.
  10. Wstrzyknąć próbki do chromatografu i przeanalizować zgodnie z warunkami chromatograficznymi opisanymi w kroku 1.3. Zapisz obszary pików i oblicz średnie wartości odzysku i RSD%, jak poniżej:
    Współczynnik odzysku próbki wzbogaconej = (zawartość próbki wzbogaconej − zawartość próbki)/ilość próbki x 100%

2. Optymalizacja technologii przetwarzania oleju baraniego EF przy użyciu metodologii powierzchni projektowo-zwrotnej Box-Behnken

  1. Wybierz kluczowe parametry w przetwarzaniu śladu środowiskowego, takie jak ilość oleju baraniego (A; 15%-35%), temperatura oleju baraniego (B; 50-120 °C) i temperatura smażenia (C; 80-300 °C), jako czynniki wpływające. Użyj kompleksowych wyników zawartości icariin, EA, EB, EC i BI jako indeksów oceny. Procentowa zawartość oleju baraniego jest tutaj procentem masowym.
  2. Użyj oprogramowania do analizy powierzchni odpowiedzi (patrz tabela materiałów), aby zaprojektować eksperymenty z powierzchnią odpowiedzi Boxa-Behnkena, zbadać kwadratową powierzchnię odpowiedzi i skonstruować model wielomianowy drugiego rzędu. Wybierz nowy projekt Box-Behnken i ustaw opcję Czynniki liczbowe na 3; ustaw współczynniki A, B i C. Kliknij Kontynuuj. Ustaw opcję Odpowiedzi na 1 (co było wynikiem kompleksowym). Kliknij Kontynuuj, aby zakończyć projekt. Ogółem zaplanowano 17 eksperymentów (patrz Tabela 1).
    UWAGA: Zmienne niezależne i zależne wraz z ich niskimi, średnimi i wysokimi poziomami znajdują się w tabeli 2.
  3. Roztwór EF należy przetworzyć zgodnie ze szczegółowymi parametrami podanymi w tabeli 1; na przykład dla numeru zamówienia 1 zważyć rafinowany olej barani jako 15% v/v, a następnie podgrzać do temperatury 50 °C, aby go stopić. Dodać surowy EF do roztopionej baraniny, smażyć na delikatnym ogniu (190 °C), aż będzie równomiernie błyszcząca, a następnie wyjąć i ostudzić. Wykonano 17 operacji eksperymentalnych. W ramach tych prac uzyskano łącznie 17 grup produktów przetworzonych z śladu środowiskowego.
    UWAGA: Olej baraniny jest stały w temperaturze pokojowej (25 °C) i topi się w płyn po podgrzaniu. Jako substancję pomocniczą można stosować olej baraniny w stanie ciekłym.
  4. Przygotować roztwory testowe przetworzonych produktów zgodnie z metodą opisaną w kroku 1.2. Następnie przeanalizować je za pomocą HPLC zgodnie z warunkami chromatograficznymi opisanymi w kroku 1.3. Zapisać czasy retencji i obszary pików każdego składu chemicznego i obliczyć zawartość ikaryny, EA, EB, EC i BI w każdym roztworze badanym w stosunku do zewnętrznej krzywej wzorcowej. Skorzystaj z poniższego wzoru na kompleksowe obliczanie wyniku, aby obliczyć kompleksowe wyniki 17 grup eksperymentalnych:
    Kompleksowy wynik = Z/Zmax × 0,5 + BI/BImax × 0,5
    gdzie Z jest sumą zawartości ikaryny, EA, EB i WE; Zmax jest maksymalną wartością sumy zawartości ikaryny, EA, EB i EC w 17 grupach doświadczalnych; BI to zawartość BI; a BImax to maksymalna wartość zawartości BI w 17 grupach eksperymentalnych.
  5. Zaimportuj kompleksowe wyniki punktacji dla 17 grup eksperymentów do oprogramowania do analizy danych (patrz tabela materiałów), aby przeanalizować dane eksperymentalne. W obszarze elementów oceny wybierz opcję kwadratowej kolejności procesów i opcję typu modelu wielomianowego.

3. Testowanie wpływu przetwarzania na rozwój embrionalny danio pręgowanego

  1. Przygotowanie próbki
    1. Zmiażdżyć surowy i przetworzony EF przez sito nr 3 (patrz tabela materiałów). Do 100 g każdej próbki EF dodaj 1 000 ml ultraczystej wody. Moczyć EF przez 0,5 godziny, gotować wodę dwa razy przez 30 minut, a następnie przefiltrować bibułą filtracyjną.
    2. Połączyć filtraty i zagęścić próbkę przez ogrzewanie. Dodać ultraczystą wodę do końcowej objętości 100 ml, aby otrzymać przetworzone roztwory podstawowe EF (PEF, 1 g/ml) i surowego EF (CEF,1 g/ml). Zmierzyć ilość surowca w każdym roztworze podstawowym.
    3. Umieścić podwielokrotności roztworów podstawowych o stężeniach 1 ml, 1,5 ml, 2,5 ml, 5 ml i 7,5 ml w kolbach miarowych o pojemności 10 ml, a następnie dodać ultraczystą wodę do objętości, aby przygotować roztwory testowe o stężeniach 100 mg/mL, 150 mg/mL, 200 mg/mL, 250 mg/mL, 500 mg/ml i 750 mg/ml do badania embriotoksyczności danio pręgowanego.
      UWAGA: Stężenia roztworów badanych przygotowano, odwołując się do odpowiedniej literatury20,21 oraz przeprowadzając wstępne doświadczenia w celu uzyskania 10-krotnego gradientu stężeń stosowanego w normalnej toksykologii. CEF był próbką nieprzetworzoną, a PEF był próbką przygotowaną przy użyciu najlepszej technologii przetwarzania opisanej w sekcji 2.
  2. Hodowla danio pręgowanego i leczenie zarodków21
    1. Przystosować danio pręgowanego typu dzikiego (patrz tabela materiałów) w kontrolowanej temperaturze przez 2 dni, trzymać je w akwarium przepływowym o pH 7,0-7,4 i karmić dwa razy dziennie.
      UWAGA: Zahamowanie tworzenia melaniny u danio pręgowanego osiągnięto poprzez dodanie 1-fenylo-2-tiomocznika w stężeniu 0,003% (masa/objętość) do pożywki hodowlanej, co sprawiło, że ich ciała były przezroczyste do obserwacji morfologicznej.
    2. Wybierz dorosłe płodne danio pręgowane typu dzikiego wieczorem i oddziel je za pomocą przegród w pudełkach godowych. Usuń przegrody następnego ranka i pozwól rybom na tarło przez 30 minut. Zapłodnione jaja zbierano za pomocą zakraplacza co 15 minut. W sumie zebrano 520 zdrowych zarodków typu dzikiego. Przechowywać zarodki danio pręgowanego w inkubatorze w temperaturze 28,5 °C przez 24 godziny.
    3. Zdrowe zarodki po 24 godzinach od zapłodnienia (hpf) należy losowo przydzielić do 13 grup i wraz z jedną grupą kontrolną oddzielnie zanurzyć w 10 ml każdego z następujących roztworów w naczyniu hodowlanym: PEF: 100 μg/ml, 150 μg/ml, 200 μg/ml, 250 μg/ml, 500 μg/ml, 750 μg/ml; CEF: 100 μg/ml, 150 μg/ml, 200 μg/mL, 250 μg/mL, 500 μg/mL, 750 μg/ml . Potraktuj ślepą próbę kontrolną z pożywką jako roztwór. Każda grupa zawierała 40 zarodków w tym badaniu.
      UWAGA: Skład podłoża to 0,15 M NaCl, 5 mM KCl, 0,25 mM Na2HPO4, 0,45 mM KH2PO4, 1,3 mM CaCl2, 1,0 mMMgSO4 i 4 mM NaHCO3.
    4. Hoduj danio pręgowanego w inkubatorze o stałej temperaturze do 120 hpf. Policz liczbę martwych larw każdego dnia, obserwuj morfologię głównych narządów larw w każdej grupie doświadczalnej pod mikroskopem stereoskopowym (podziałka = 500 μm, patrz tabela materiałów) i oblicz stężenie półśmierci (LC50) zebry przy 72 hpf za pomocą oprogramowania do analizy danych (patrz Tabela materiałów).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Wyniki badań metodologicznych
Zaobserwowano liniową zależność między stężeniem ikaryny, EA, EB, EC, BI i chromatograficznych powierzchni pików (patrz Tabela 3). Wartości RSD% (n = 6) chromatograficznych obszarów pików ikaryny, EA, EB, EC i BI wynosiły odpowiednio 0,28%, 1,22%, 0,65%, 1,67% i 1,06%, co wskazuje, że precyzja pomiarów HPLC była dobra. Wartości RSD% (n = 6) zawartości ikaryny, EA, EB, EC i BI wynosiły odpowiednio 1,59%, 1,46%, 1,86%, 2,29% i 0,98%, co wskazuje, że metoda...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Zmienne niezależne i wyznaczanie ich poziomów
Technologia przetwarzania śladu środowiskowego jest opisana tylko w wydaniu Farmakopei Chińskiej z 2020 r. oraz w lokalnych specyfikacjach przetwarzania medycyny chińskiej opublikowanych przez 26 prowincji, gmin i regionów autonomicznych w całym kraju1. Opis obejmuje następujące kroki: pobranie oleju baraniego i podgrzanie go do stopienia, dodanie wiórków EF, smażenie na wolnym ogniu, aż stanie się jednolity i błyszczący, wyjęcie ...

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Autorzy deklarują brak konfliktu interesów.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ta praca jest wspierana przez Projekt Biznesowy Podstawowych Badań Naukowych Akademii Tradycyjnej Medycyny Chińskiej w Chongqing (Numer projektu: jbky20200013), Projekt Wytycznych Motywacyjnych Instytucji Naukowo-Badawczych w Chongqing (Numer Projektu: cstc2021jxjl 130025) oraz Projekt Budowy Kluczowej Dyscypliny Chińskiej Materia Medica Processingu Komisji Zdrowia Miasta Chongqing.

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
AcetonitrylFisher197164
Baohuoside figure-materials-1 (Bfigure-materials-2 ) Chengdu Manst Biotechnology Co., Sp. z o.o.MUST-20042402
Kolumna chromatograficznaWaters CorporationSymetria C18
Design Expert oprogramowanieStat- Ease Inc., Minneapolis, MNWersja próbna8.0.6.1
DetektorWaters Corporation2998
DezintegratorHefei Rongshida Small Household Appliance Co., Ltd.Elektroniczna waga analityczna S-FS553
Mettler-Toledo International Inc.
Epimedin A (EA)Chengdu Manst Biotechnology Co., Ltd.MUST-21112118
Epimedin B (EB)Chengdu Manst Biotechnology Co., Ltd.MUST-20080403
Epimedin C (EC)Chengdu Manst Biotechnology Co., Ltd.MUST-20080310
EtanolChongqing Chuandong Chemical ( Group ) Co., Ltd.
OprogramowanieGraphpad GraphPad Software Inc., San Diego, CA, USA6.02
Wysokosprawna chromatografia cieczowa (HPLC)Waters Corporation2695
IcariinChengdu Glip Biotechnology Co., Ltd.
MetanolChongqing Chuandong Chemical (Group) Co., Ltd.
Membrana mikroporowataTianjin Jinteng Experimental Equipment Co., Ltd.0,22μ m
Olej baraninyKuoshan Zhiniu Fresh Food Store20211106
Office Excel oprogramowanie biuroweMicrosoftOffice Excel 2021
Sito farmakopeiShaoxing Shangyu Huafeng Hardware Instrument Co., Ltd.R40/3
Maszyna do czystej wodyChongqing Andersen Environmental Protection Equipment Co., Ltd.AT Sro 10A
Jakościowa bibuła filtracyjnaShanghai Leigu Instrument Co., Ltd.18 cm
Carl Zeiss, Oberkochen, NiemcyMyjka ultradźwiękowa Stemi 2000
Branson Ultrasonics (Shanghai) Co., Ltd.BUG25-12
Danio pręgowanyChińskie Centrum Zasobów Danio Pręgowanego (CZRC)Szczep
MS205DU201808012109140120171101Mikroskop stereoskopowy AB

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Chinese Pharmacopoeia Commission. Chinese Pharmacopoeia. Volume I. , China Medical Science and Technology Press. Beijing, China. (2020).
  2. Wang, X. T. Collection of Traditional Chinese Medicine Processing Methods. , Nanchang Science and Technology Press. Jiangxi, China. (1998).
  3. Chen, L. L., Jia, X. B., Jia, D. S. Advances in studies on processing mechanism of Epimedii Folium. Chinese Traditional and Herbal Drugs. 12 (12), 2108-2111 (2010).
  4. Zhao, W., et al. Optimized extraction of polysaccharides from corn silk by pulsed electric field and response surface quadratic design. Journal of The Science of Food and Agriculture. 91 (12), 2201-2209 (2011).
  5. Zhao, L. C., et al. The use of response surface methodology to optimize the ultrasound-assisted extraction of five anthraquinones from Rheum palmatum L. Molecules. 16 (7), 5928-5937 (2011).
  6. Mao, W. H., Han, L. J., Shi, B. Optimization of microwave assisted extraction of flavonoid from Radix Astragali using response surface methodology. Separation Science and Technology. 43 (12), 671-681 (2008).
  7. Liu, W., et al. Optimization of total flavonoid compound extraction from Gynura medica leaf using response surface methodology and chemical composition analysis. International Journal of Molecular Sciences. 11 (11), 4750-4763 (2010).
  8. Guo, G. L., et al. Research progress on processing mechanism of Epimedium fried with sheep fat oil based on warming kidney and promoting yang. Journal of Liaoning University of TCM. 22 (07), 1-5 (2020).
  9. Shen, X. J., Zhou, Q., Sun, L. -L., Dai, Y. -P., Yan, X. -S. Optimization for cutting procedure of astragali radix with Box-Behnken design and response surface method. China Journal of Chinese Materia Medica. 39 (13), 2498-2503 (2014).
  10. Wang, L. H., et al. Optimization of processing technology of honey wheat bran based on Box-Behnken response surface methodology. Chinese Traditional and Herbal Drugs. 52 (12), 3538-3543 (2021).
  11. Zhang, J. B., et al. Study on integrated process of producing area and processing production for Paeoniae Radix Alba based on Box-Behnken response surface methodology. Chinese Traditional and Herbal Drugs. 53 (18), 5657-5662 (2022).
  12. Li, N., Zhang, X. M., Yao, Y. Y., Chen, Y. L., Fan, Q. Optimization of processing technology for Psoraleae Fructus by D-optimal response surface methodology with UHPLC. Chinese Traditional and Herbal Drugs. 39 (05), 42-44 (2022).
  13. Jia, Y. Q., et al. Optimization of processing technology with wine of Cnidii Fructus by AHP-entropy weight method combined with response surface method. Journal of Chinese Medicinal Materials. 10, 2338-2343 (2022).
  14. Chen, F. G., et al. Optimization of the baked drying technology of Cinnamomi Ramulus based on CRITIC combined with Box-Behnken response surface method. Journal of Chinese Medicinal Materials. 2022 (08), 1838-1842 (2022).
  15. Wang, W. D., et al. Optimization extraction of effective constituents from Epimedii Herba based on central composite design-response surface methodology and orthogonal experimental design. Lishizhen Medicine and Materia Medica. 21 (11), 2766-2768 (2010).
  16. Yang, L., et al. Zebrafish embryos as models for embryotoxic and teratological effects of chemicals. Reproductive Toxicology. 28 (2), 245-253 (2009).
  17. Kanungo, J., Cuevas, E., Ali, S. F., Paule, M. G. Zebrafish model in drug safety assessment. Current Pharmaceutical Design. 20 (34), 5416-5429 (2014).
  18. Jayasinghe, C. D., Jayawardena, U. A. Toxicity assessment of herbal medicine using zebrafish embryos: A systematic review. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. 2019, 7272808(2019).
  19. Scholz, S. Zebrafish embryos as an alternative model for screening of drug induced organ toxicity. Archives of Toxicology. 87 (5), 767-769 (2013).
  20. Ling, J., et al. Analysis of Folium Epimedium toxicity in combination with Radix Morindae Officinalis based on zebrafish toxicity/metabolism synchronization. Acta Pharmaceutica Sinica. 53 (1), 74(2018).
  21. Wang, Y., et al. Tri-n-butyl phosphate delays tissue repair by dysregulating neutrophil function in zebrafish. Toxicology and Applied Pharmacology. 449, 116114(2022).
  22. Sheng, Z. L., Li, J. C., Li, Y. H. Optimization of forsythoside extraction from Forsythia suspensa by Box-Behnken design. African Journal of Biotechnology. 10 (55), 11728-11737 (2011).
  23. Pang, X., et al. Prenylated flavonoids and dihydrophenanthrenes from the leaves of Epimedium brevicornu and their cytotoxicity against HepG2 cells. Natural Product Research. 32 (19), 2253-2259 (2018).
  24. Zhong, R., et al. The toxicity and metabolism properties of Herba Epimedii flavonoids on laval and adult zebrafish. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine. 2019, 3745051(2019).
  25. Zhang, L., et al. Effect of 2" -O-rhamnosyl icariside II, baohuoside I and baohuoside II in Herba Epimedii on cytotoxicity indices in HL-7702 and HepG2 cells. Molecules. 24 (7), 1263(2019).
  26. Chen, Y., Yang, R. J., Yu, M., Ding, S. L., Chen, R. Q. Application of response surface methodology in modern production process optimization. Science & Technology Vision. 2016 (19), 36-39 (2016).
  27. Zhang, Y., et al. Progress in using zebrafish as a toxicological model for traditional Chinese medicine. Journal of Ethnopharmacology. 282, 114638(2022).
  28. Oliveira, R., Domingues, I., Grisolia, C. K., Soares, A. M. V. M. Effects of triclosan on zebrafish early-life stages and adults. Environmental Science and Pollution Research. 16 (6), 679-688 (2009).
  29. Ton, C., Lin, Y., Willett, C. Zebrafish as a model for developmental neurotoxicity testing. Birth Defects Research. Part A, Clinical and Molecular Teratology. 76 (7), 553-567 (2006).
  30. He, Q., et al. Toxicity induced by emodin on zebrafish embryos. Drug and Chemical Toxicology. 35 (2), 149-154 (2012).
  31. Chen, Y., et al. Developmental toxicity of muscone on zebrafish embryos. Chinese Journal of Pharmacology and Toxicology. (6), 267-273 (2014).
  32. He, Y. L., et al. Effects of shikonin on zebrafish's embryo and angiogenesis. Chinese Traditional Patent Medicine. 38 (2), 241-245 (2016).
  33. Zhou, Y. The transformation research on the chemical compositions in the processing of Epimedium. , Kunming University of Science and Technology. Kunming, China. (2016).
  34. Xiao, Y. P., Zeng, J., Jiao, L. -N., Xu, X. -Y. Review for treatment effect and signaling pathway regulation of kidney-tonifying traditional Chinese medicine on osteoporosis. China Journal of Chinese Materia Medica. 43 (1), 21-30 (2018).
  35. Wang, R. H. Study on modern pharmacological effects of traditional Chinese medicine for tonifying kidney yang. Journal of Hubei University of Chinese Medicine. 13 (04), 63-66 (2011).
  36. Luo, L., et al. Advances in the chemical constituents and pharmacological studies of Epimedium. Asia-Pacific Traditional Medicine. 15 (6), 190-194 (2019).
  37. Liu, S., et al. Effects of icariin on ERβ gene expression and serum estradiol level in ovariectomized rats. Hunan Journal of Traditional Chinese Medicine. 32 (1), 150-152 (2016).
  38. Liu, Y., et al. Effects of epimedin A on osteoclasts and osteoporotic male mice. Chinese Journal of Veterinary Science. 41 (07), 1359-1364 (2021).
  39. Liu, Y. L., et al. Effects of icariin and epimedium C on microstructure of bone tissue in glucocorticoid osteoporosis model mice based on Micro-CT technique. Drug Evaluation Research. 43 (09), 1733-1739 (2020).
  40. Zhan, Y. Evaluation of antiosteoporotic activity for micro amount icariin and epimedin B based on the osteoporosis model using zebrafish. Chinese Pharmaceutical Journal. (24), 30-35 (2014).
  41. Zhan, Y., Wei, Y. -J., Sun, E., Xu, F. -J., Jia, X. -B. Two-dimensional zebrafish model combined with hyphenated chromatographic techniques for evaluation anti-osteoporosis activity of epimendin A and its metabolite baohuoside I. Acta Pharmaceutica Sinica. 49 (06), 932-937 (2014).

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Epimedii FoliumMutton Oil ProcessingResponse Surface MethodBox Behnken DesignZebrafish Embryo DevelopmentHPLC AnalysisToxicity AssessmentChinese Medicine PreparationIcariin ContentTeratogenicity Testing

Related Articles