Ten protokół przedstawia zoptymalizowany system testów biologicznych z oderwanymi liśćmi do oceny skuteczności grzybów entomopatogenicznych (EPF) przeciwko mszycy musztardowej (Lipaphis erysimi (Kalt.)), owadowi partenogenetycznemu. Metoda ta przedstawia w zarysie proces gromadzenia danych podczas eksperymentów na szalce Petriego, umożliwiając naukowcom konsekwentne mierzenie zjadliwości EPF wobec mszyc musztardowych i innych owadów partenogenetycznych.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Ocena wpływu mszyc grzybów entomopatogenicznych na owada partenogenetycznego, mszycę musztardową, Lipaphis erysimi (Kalt.)
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Mszyca musztardowa (L. erysimi) jest szkodnikiem, który atakuje różne rośliny krzyżowe i przenosi wirusy roślinne. Aby osiągnąć przyjazną dla środowiska ochronę przed szkodnikami, grzyby entomopatogeniczne (EPF) są potencjalnymi środkami zwalczania mikrobiologicznego do zwalczania tego szkodnika. W związku z tym przed zastosowaniem w terenie konieczne jest badanie przesiewowe zjadliwości izolatów EPF na szalce Petriego. Jednak mszyca musztardowa jest owadem partenogenetycznym, co utrudnia rejestrowanie danych podczas eksperymentów na szalce Petriego. Aby rozwiązać ten problem, opracowano zmodyfikowany system do testów biologicznych na oderwanych liściach, wykorzystując mikrorozpylacz do inokulacji konidiów na mszycach i zapobiegania utonięciom poprzez ułatwienie suszenia powietrzem po zawieszeniu zarodników. System utrzymywał wysoką wilgotność względną przez cały okres obserwacji, a tarcza liściowa pozostawała świeża przez ponad dziesięć dni, umożliwiając partenogenetyczną reprodukcję mszyc. Aby zapobiec gromadzeniu się potomstwa, wdrożono proces codziennego usuwania za pomocą pędzla malarskiego. Protokół ten demonstruje stabilny system oceny zjadliwości izolatów EPF wobec mszyc gorczycowych lub innych mszyc, umożliwiając wybór potencjalnych izolatów do zwalczania mszyc.
Wprowadzenie
Mszyca musztardowa (L. erysimi) jest znanym szkodnikiem, który atakuje różne rośliny krzyżowe, powodując znaczne straty ekonomiczne1. Chociaż zalecono kilka systematycznych środków owadobójczych w celu zwalczania inwazji mszyc, częste stosowanie tych insektycydów budzi obawy o odporność na pestycydy2,3. W związku z tym, jeśli chodzi o przyjazną dla środowiska ochronę przed szkodnikami, grzyby entomopatogeniczne (EPF) mogą służyć jako odpowiednia alternatywna strategia zwalczania. EPF jest patogenem owadziem, który ma zdolność infekowania żywicieli poprzez wnikanie w ich skórki,....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
UWAGA: Kompletny schemat blokowy jest pokazany w Rysunek 1.
1. Zbieranie i pielęgnacja mszyc musztardowych
- Kolekcja mszyc musztardowych
- Odwróć liście i sprawdź wzrokowo, czy mszyce gorczycowe nie są poszkodowane na uprawach krzyżowych na polu.
- Zapisz informacje o miejscu pobierania próbek (tj. GPS) i roślinie żywicielskiej (roślinach) żywicielskiej oraz potwierdź historię stosowania insektycydów z rolnikami.
- Za pomocą aspiratora do owadów lub cienkiego pędzla malarskiego (patrz tabela materiałów) zebrać około 50 mszyc gorcz....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
Przedstawiony schemat blokowy ilustruje stabilny stan mszyc kapustnych od momentu ich zebrania w terenie do badań wirulencji. Utrzymanie mszyc zebranych w terenie zapewniło stabilny wzrost kolonii mszyc przy odpowiedniej podaży pokarmu. Tożsamość zebranych z terenu mszyc jako mszyc kapustnych potwierdzono przy użyciu markerów molekularnych, w tym wielkości amplikonu PCR oraz sekwencjonowania LeCO1. Badania wirulencji, przeprowadzone metodą odciętego liścia, wykazały stały poziom przeżywalności mszyc kapustnych, przy czym.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Rośliny krzyżowe, grupa warzyw, są często atakowane przez wiele gatunków mszyc, w tym mszycę musztardową (L. erysimi) i mszycę kapuścianą (Brevicoryne brassicae)26. Oba gatunki zostały zgłoszone na Tajwanie27 i możliwe jest ich współistnienie w miejscu zbioru. Aby rozróżnić blisko spokrewnione gatunki mszyc, w badaniu wykorzystano technikę identyfikacji molekularnej przy użyciu multipleksowego zestawu starterów21. Projektując marker.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Autorzy deklarują, że w tej pracy nie występuje konflikt interesów.
Podziękowania
To badanie było wspierane przez 109-2313-B-005 -048 -MY3 z Ministerstwa Nauki i Technologii (MOST).
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| 10 μ L Pętla do zaszczepiania | NEST Scientific | 718201 | |
| 100 pz Drabinka DNA III | Geneaid | DL007 | |
| 2x SuperRed PCR Master Mix | Biotools | TE-SR01 | |
| 50 ml probówka wirówkowa | Bioman Scientific | ET5050-12 | |
| 6 cm szalka Petriego | Alpha Plus Scientific | 16021 | |
| Aspirator do owadów 6 mm | MegaView Science | BA6001 | |
| Bibuła filtracyjna 70 mm NO.1 | Toyo Roshi Kaisha | ||
| 70% etanol | |||
| 9 cm szalka Petriego | Alpha Plus Scientific | 16001 | |
| Agar | Bioman Scientific | AGR001.1 | Klasa mikrobiologiczna |
| Agaroza | Bioman Scientific | PB1200 | |
| BioGreen Bezpieczny bufor żelowy DNA | Bioman Scientific | SDB001T | |
| Chromas | Technelysium | ||
| GeneDoc | |||
| GenepHlow Gel/PCR Kit | Geneaid | DFH300 | https://www.geneaid.com/data/files/1605861013102532959.pdf |
| Gene-Spin Zestaw do izolacji genomowego DNA | Technologia Protech | PT-GD112-V3 | http://www.protech-bio.com/UserFiles/file/Gene-Spin%20Genomic%20DNA%20Kit.pdf |
| Hemocytometr | Paul Marienfeld | 640030 | |
| Liście Komatsuna (Brassica rapa var. perviridis) | Tai Cheng Farm | 1-010-300410 | |
| Mikroopryskiwacz | |||
| MiniAmp Thermal Cycler | Thermo Fisher Scientific | A37834 | |
| Mszyca musztardowa (Lipaphis erysimi) | |||
| Pędzel malarski | firmy Tian Cheng pędzel 4716608400352 | ||
| Parafilm M | Bemis | PM-996 | |
| Tłuczek do pelletu | Bioman Scientific | GT100R | |
| Sabouraud Bulion dekstrozowy | HiMedia | MH033-500G | |
| SPSS Statystyki | IBM | ||
| TAE buffer 50x | Bioman Scientific | TAE501000 | |
| Tween 80 | PanReac AppliChem | 142050.1661 |
Bibliografia
- Ghosh, S., Roy, A., Chatterjee, A., Sikdar, S. R. Effect of regional wind circulation and meteorological factors on long-range migration of mustard aphids over indo-gangetic plain. Scientific Reports. 9, 5626(2019).
- Dhillon, M. K., Singh, N., Yadava, D. K.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
