Ten artykuł szczegółowo opisuje procedury operacyjne i środki ostrożności, które należy podjąć podczas leczenia du-moxibustion w leczeniu zesztywniającego zapalenia stawów kręgosłupa u myszy eksperymentalnych.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Ten artykuł szczegółowo opisuje procedury operacyjne i środki ostrożności, które należy podjąć podczas leczenia du-moxibustion w leczeniu zesztywniającego zapalenia stawów kręgosłupa u myszy eksperymentalnych.
Zesztywniające zapalenie stawów kręgosłupa (AS) jest stopniowo pogarszającą się i upośledzającą formą zapalenia stawów, która dotyczy przede wszystkim szkieletu osiowego. Choroba ta obejmuje głównie kręgosłup i staw krzyżowo-biodrowy. Do zespolenia kręgosłupa i stawu krzyżowo-biodrowego może dojść w późniejszym stadium choroby, co skutkuje sztywnością kręgosłupa i kifozą, a także trudnościami w chodzeniu, co poważnie wpływa na jakość pracy i codziennych czynności życiowych oraz stanowi duże obciążenie dla pacjenta, rodziny i społeczeństwa. Coraz więcej uwagi poświęca się niefarmakoterapii jako alternatywnej terapii ZZSK. Moksowanie to starożytna technika terapeutyczna stosowana w Tradycyjnej Medycynie Chińskiej (TCM). Terapia Du-moxibustion, unikalna i innowacyjna terapia zewnętrzna opracowana na podstawie zwykłej moksacji, ma zdecydowany efekt terapeutyczny na ZZSK. Du-moxibustion umiejętnie łączy kompatybilne techniki TCM w celu zintegrowania meridianów, akupunktów, chińskiej medycyny ziołowej i moksoplastyki. W niniejszej pracy szczegółowo opisano procedury operacyjne i środki ostrożności, które należy podjąć podczas stosowania Du-moxibustion u myszy doświadczalnych, aby zapewnić eksperymentalną podstawę do badania mechanizmu Du-moxibustion w leczeniu ZZSK.
Zesztywniające zapalenie stawów kręgosłupa (AS) jest stopniowo pogarszającą się i upośledzającą formą zapalenia stawów, która dotyczy przede wszystkim szkieletu osiowego. Według najnowszego badania epidemiologicznego, ~0,01%-1,8% ludzi na świecie cierpi na tę chorobę1, z których większość to młodzi mężczyźni (stosunek mężczyzn do kobiet wynosi ~2-3:1)2. Częstość występowania AS w populacji chińskiej wynosi 0,2%-0,4%. Choroba ta obejmuje głównie kręgosłup i staw krzyżowo-biodrowy. Zrost kręgosłupa i stawu krzyżowo-biodrowego może wystąpić w późniejszych stadiach choroby, powodując sztywność kręgosłupa i kifozę, a także trudności w chodzeniu, co poważnie wpływa na jakość pracy i codziennych czynności życiowych oraz stanowi duże obciążenie dla pacjenta, rodziny i społeczeństwa1. Obecnie nie ma ostatecznego rozwiązania dla ZZSK, a oferowane leczenie, zarówno farmakologiczne, jak i niefarmakologiczne, koncentruje się przede wszystkim na łagodzeniu bólu, spowolnieniu postępu choroby i poprawie jakości życia. W ostatnich latach, ze względu na to, że opcje farmakoterapeutyczne były bardzo ograniczone3, coraz więcej uwagi poświęca się niefarmakoterapii, która stała się alternatywną terapią dla ZZSK. W Chinach pacjenci często preferują leczenie zewnętrzne polegające na Tradycyjnej Medycynie Chińskiej (TCM), które ma niewielkie skutki uboczne i dużą wygodę podczas leczenia.
Moxibustion to starożytna technika terapeutyczna stosowana w TCM. Du-moxibustion to zewnętrzna technika leczenia polegająca na "leczniczej moksowaniu z pianką" na odcinku kręgosłupa meridianu Du. Jest stosowany głównie w leczeniu ZZSK i wykazał bezpieczeństwo i skuteczność. W porównaniu ze zwykłą moksybustioną, Du-moxibustion charakteryzuje się szerokim obszarem moxibustion, dużym stożkiem moksy, dużą siłą ognia i wysoką temperaturą4. Systematyczny przegląd i metaanaliza sugerują, że moksowanie jest skutecznym leczeniem uzupełniającym AS5. Niedawne badanie potwierdziło, że objawy kliniczne i niektóre czynniki zapalne u pacjentów z ZA uległy poprawie dzięki moxibustion6. Badania wykazały, że du-moksowanie może zwiększać zawartość β-endorfin w mózgu i wywierać centralny efekt przeciwbólowy7, obniżać ekspresję genu HLA-B278 i opóźniać tempo nawrotów AS. Du-moxibustion ma również łagodzący wpływ na progresję ZZSK poprzez zmniejszenie wskaźnika zapalnego OB (ESR) i poziomu białka C-reaktywnego (CRP), C-końcowego peptydu kolagenu typu I (CTX-I) i białka Dickkopf1 (DKK1)9,10.
Inne badanie kliniczne wykazało, że Du-moxibustion może dodatkowo dostosować nieuporządkowane podzbiory limfocytów T, Ig i dopełniacza C3, aby zrównoważyć mechanizm immunologiczny11. Jeśli chodzi o metabolizm kości, moksoterapia może hamować wzrost fosfatazy alkalicznej w surowicy (ALP) i fosforu w surowicy (S-P), zwiększać stężenie wapnia w surowicy (S-Ca), gęstość mineralną kości (BMD) i wytrzymałość kości12. Co więcej, Du-moxibustion może naprawić funkcję kręgosłupa w wielu punktach, aby złagodzić objawy zmęczenia u pacjentów z ZZSK13. Niektóre badania na zwierzętach ujawniły potencjalny mechanizm moksoterapii w leczeniu ZZSK. Badanie wykazało, że moksowanie znacznie poprawiło ogólny stan zdrowia, zmniejszyło poziom grubości łap i obniżyło poziom IL-1β, PGE2, IL-6 i TNF-α w próbkach tkanki więzadłowej kręgosłupa. Analiza szlaku metabolicznego powiązała zidentyfikowane metabolity z cyklem TCA, a także metabolizmem lipidów, aminokwasów, flory jelitowej i puryn14. Inne badanie wykazało, że moksowanie hamowało ekspresję cytokin prozapalnych, IL-1β, TNF-α, IL-17 i IL-6; obniżył poziomy mRNA RANKL, RANK, ALP i OCN; i poprawił cechy histopatologiczne u myszy z ZZSK15.
Chociaż te badania sugerują, że moksowanie może być skuteczne w leczeniu ZZSK, potrzebne są dalsze badania, aby potwierdzić te wyniki i określić optymalny protokół leczenia moksowania u pacjentów z ZA. Nasz zespół stworzył i zmodyfikował terapię moksyterapii w oparciu o podstawową teorię i praktyczne działanie tradycyjnej chińskiej moksacji, która jest szeroko prowadzona i stosowana w chińskiej praktyce klinicznej od ponad 35 lat. Chociaż istnieje niewiele wysokiej jakości badań dotyczących leczenia ZZSK za pomocą Du-moxibustion, jego wskazania w leczeniu ZZSK zostały poparte dowodami. Jednak mechanizm leczenia ZZSK za pomocą Du-moxibustion jest wart dalszych badań. Badania na zwierzętach są ważną metodą badania mechanizmu du-moxibustion w leczeniu ZZSK. Kliniczne działanie Du-moxibustion jest stosunkowo dojrzałe, ale rzadko stosowane w badaniach nad mechanizmem w doświadczeniach na zwierzętach. W artykule tym szczegółowo opisano działanie i środki ostrożności, które należy podjąć podczas leczenia Du-moxibustion w leczeniu myszy doświadczalnych z użyciem ZZSK.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wszystkie eksperymenty na zwierzętach zostały zatwierdzone przez Komitet Oceny Etyki Dobrostanu Zwierząt Doświadczalnych Uniwersytetu Tradycyjnej Medycyny Chińskiej w Shandong (No. SDUTCM20230831301).
1. Przygotowanie zwierząt
2. Ustanowienie modelu myszy AS
UWAGA: Model AS został wywołany za pomocą proteoglikanu chrząstki (PG), który jest klasyczną metodą modelowania16,17,18,19,20,21. Myszy szczepu BALB/c były wielokrotnie immunizowane PG w celu wywołania zapalenia ścięgien i zapalenia stawów kręgosłupa. Szczegółowe informacje na temat materiałów, odczynników i przyrządów użytych w tym protokole można znaleźć w Tabeli materiałów.
3. Du-moxibustion
UWAGA: Przygotuj z wyprzedzeniem trzy najważniejsze surowce do Du-moxibustion (Rysunek 1).
4. Ocena wskaźnika zapalenia stawów (AI)
5. Test Rotarod
UWAGA: Test rotarodu służy do oceny koordynacji ruchowej i równowagi poprzez rejestrowanie czasu, jaki myszy spędzają na obracającym się bębnie. Eksperyment ten składał się z trzech prób oddzielonych 20-minutowymi odstępami. Oficjalne dane testowe zostały zarejestrowane z trzeciej próby, przy czym pierwsze dwa służyły jako ćwiczenia szkoleniowe.
6. Test w otwartym polu (OFT)
UWAGA: OFT służy do oceny stanu ruchu autonomicznego, mając na celu identyfikację patologicznych zachowań. Cztery kwadratowe areny otwarte (50 cm x 50 cm x 40 cm) zostały umieszczone razem, aby utworzyć aparaturę. Dno pudełka zostało podzielone na dziewięć równych kwadratów.
7. Eutanazja i pobieranie próbek
8. Analiza histologiczna
9. Test immunoenzymatyczny (ELISA)
10. Analiza statystyczna
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Myszy w modelu indukowanym PG rozwinęły objawy zapalenia stawów obwodowych, charakteryzujące się zaczerwienieniem i obrzękiem kończyn oraz palców, a następnie stopniowo rozwinęły zapalenie stawów osiowych już w 14. tygodniu, co jest bardzo podobne do obrazu klinicznego AS. W związku z tym model mysi AS uznano za udany, jeśli indeks zapalenia stawów (AI) przekroczył 3 punkty w 14. tygodniu po ostatniej iniekcji22. Gdy łapy myszy stały się obrzęknięte, przeprowadzono zabieg moksyburnacji Du raz w ty...
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Zespół Aspergera objawia się klinicznie bólem pleców, odcinka lędźwiowego i obrzękiem stawów, a w ciężkich przypadkach może wystąpić deformacja kręgosłupa i sztywność stawów26. Wczesna diagnoza i leczenie mogą poprawić jakość życia, zmniejszyć wskaźniki niepełnosprawności i poprawić rokowania pacjentów z ZZSK. Zgodnie z tradycyjną medycyną chińską (TCM), uważa się, że AS jest spowodowany niedoborem Yang w nerkach i meridianach Du, a także nagromadzeniem zimnego zła wewnętrznie. TCM stoi na stanowi...
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Autorzy nie mają do zadeklarowania konfliktu interesów.
Ta praca była wspierana przez Program Ogólny Narodowej Fundacji Nauk Przyrodniczych Chin (No.82174491) oraz Qilu School of Traditional Chinese Medicine Academic School Inheritance Project (No. Lu Weihan [2020]132). Dziękujemy Centrum Zwierząt Laboratoryjnych Uniwersytetu Tradycyjnej Medycyny Chińskiej w Shandong za zapewnienie nam warunków eksperymentalnych.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| 10% EDTA | Shanghai Macklin Biochemical Co., Ltd., Szanghaj, Chiny | ||
| Poduszki alkoholowe | HYNAUT, Qingdao Hainuo Biological Engineering Co., LTD, Qingdao, Chiny | ||
| Aparat anestezjologiczny | Artykuły medyczne i Usługi INT. LTD, Keighley, Wielka Brytania | ||
| probówki wirówkowe | Axygen, Corning, Nowy Jork, UAS | ||
| kompletny adiuwant Frecha (CFA) | aladdin, Szanghaj, Chiny | F393378 | |
| wacik | Henan RUIKE MEDICAL Equipment Co., Ltd., Xinxiang, Chiny | ||
| Bawełna | Henan RUIKE MEDICAL Equipment Co., Ltd., Xinxiang, Chiny | ||
| deska do krojenia | samodzielne przygotowanie | ||
| dekoracji z chrząstki stawowej bydła | Sigma-Aldrich, MO, USA | D8428 | |
| krem do depilacji | Veet, Reckitt Benckiser (China) Investment Co. LTD, Szanghaj, Chiny | ||
| elektroniczna | Shanghai Yajin Electronic Technology Co., Ltd., Szanghaj, Chiny | ||
| Rurka | EppendorfaAxygen, Corning, Nowy Jork, Smar do oczu UAS | ||
| Beijing Shuangji Pharmaceutical Co., LTD., Pekin, Chiny | |||
| samodzielne przygotowanie | imbiru | ||
| Oprogramowanie GraphPad Prism 7 | Oprogramowanie GraphPad, Boston, USA | ||
| maszynka do strzyżenia włosów | Super human Group CO LTD, Jinhua, Chiny | ||
| poduszki | grzewczeShenzhen Leshuo Tech Co., Ltd., Shenzhen, Chiny | ||
| niekompletne Freund' s adiuwant (IFA) | aladdin,Szanghaj, Chiny | F393371 | |
| iniekcji strzykawka | Shandong Xinhua Ande Medical Supplies Co., LTD, Zibo, Chiny | ||
| izofluran | Shenzhen Rayward Life Technology Co., LTD, Shenzhen, Chiny | R510-22-10 | |
| kij joss | Shijiazhuang Lidu Pachnący przemysł Co., LTD., Shijiazhuang, Chiny | ||
| sokowirówka | Braun (Shanghai) Co., Ltd., Szanghaj, Chiny | ||
| nóż | zapalniczka do samodzielnego przygotowania | ||
| Zhejiang tiger-lighter Co. LTD | |||
| moździerz | Luoyang Yinai Ceramic Technology Co., LTD., Luoyang, Chiny | ||
| Mysz IL-17 ELISA Kit | absin, Szanghaj, Chiny | abs520009-96T | |
| Mysz TNF-&alfa; Zestaw ELISA | Wuhan Sanying, Wuhan, Chińska Republika Ludowa | KE10002 | |
| papier morwowy | Hrabstwo Yishui Mulinsang paper Co., LTD, Linyi, Chiny | ||
| OFT Xinruan, Szanghaj, Chiny | XR-XZ301 | ||
| papierowe | do samodzielnego przygotowania | ||
| OXFORD BIO INSTRUMENTS INC., Oksford, Wielka Brytania | |||
| rafinowana aksamitna moksa | samodzielnego przygotowania | ||
| rotarod | Xinruan, Szanghaj, Chiny | XR-6C | |
| scientz-48L kriogeniczna szlifierka do tkanek o wysokiej przepustowości | Nożyczki Ningbo Xinzhi Biotechnology Co., LTD | ||
| Shandong Jiaren Medical Supplies Co., Ltd., Zibo, Chiny | |||
| półautomatyczna maszyna do cięcia parafiny | Leica Camera AG, Watznach, Niemcy | ||
| SPSS Oprogramowanie 25.0 | International Business Machines Corporation, Nowy Jork, UAS | ||
| proszku TCM | |||
| Biosharp, Labgic, Pekin, Chiny | |||
| Pędzel do pisania | Yishui County Mulinsang paper Co., LTD, Linyi, Chiny |
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.