Tutaj prezentujemy zestaw manipulacji masażem w szczurzym modelu porażenia mózgowego, które mogą znacznie poprawić funkcje motoryczne szczurów z porażeniem mózgowym.
Artykuł metodologiczny
Tutaj prezentujemy zestaw manipulacji masażem w szczurzym modelu porażenia mózgowego, które mogą znacznie poprawić funkcje motoryczne szczurów z porażeniem mózgowym.
Porażenie mózgowe (CP) jest chorobą o wysokim wskaźniku niepełnosprawności i zachorowalności. Objawami klinicznymi mózgowego porażenia dziecięcego są dysfunkcje ruchowe i nieprawidłowy rozwój postawy, którym często towarzyszą zaburzenia funkcji poznawczych. Masaż, tradycyjna terapia medycyny chińskiej, może koordynować Zang i Fu, regulować Qi i krew, sprawiać, że wnętrzności działają płynniej i uspokajać Yin i Yang. Co więcej, jest to skuteczna metoda leczenia CP w warunkach klinicznych. Ten artykuł podsumowuje zestaw prostych i ustandaryzowanych manipulacji masażem dla młodych szczurów z MPD, który jest łatwy do naśladowania. Procedura jest następująca: najpierw masaż czterech punktów akupunkturowych kończyn, w tym Quchi (LI11) i Zusanli (ST36); drugi masaż brzucha akupunkturów Zhongwan (RN12), Tianshu (ST25), Guanyuan (CV4) i Qihai (CV6); i wreszcie masaż brzucha szczurów. Ten zestaw metod masażu znacznie poprawił funkcje motoryczne młodych szczurów z MPD i jest prosty, ustandaryzowany i łatwy do naśladowania. Dostosowaliśmy ten zestaw metod manipulacji w modelach zwierzęcych, aby promować internacjonalizację i standaryzację masażu.
Porażenie mózgowe (CP) jest chorobą o wysokim wskaźniku niepełnosprawności i zachorowalności. Badania epidemiologiczne nad porażeniem mózgowym pokazują, że 3-5 niemowląt ma porażenie mózgowe na każde 1000 niemowląt1. Typowymi objawami porażenia mózgowego są utrzymujące się zaburzenia rozwoju motoryki i postawy ośrodkowej2, ograniczenie aktywności sensory3, percepcja, poznanie4, communication5, zaburzenia zachowania, epilepsja i wtórne problemy mięśniowo-szkieletowe1. Jak dotąd nie ma lekarstwa na tę chorobę powodującą niepełnosprawność na całe życie. Obecne metody leczenia obejmują terapię ruchową6, hydroterapię7, funkcjonalną stymulację elektryczną8, egzoszkielet mięśniowy9, terapię komórkami krwi pępowinowej10, wstrzyknięcie toksyny botulinowej i chirurgię11. Jednak rehabilitacja kliniczna trwa długo i pochłania dużo energii, a rehabilitacja wymaga aktywnej współpracy ze strony pacjentów, co utrudnia jej odtworzenie w modelach zwierzęcych. Operacja ma ograniczenia, wskazania i nieodwracalność. Leki doustne mają słabą skuteczność w leczeniu funkcji motorycznych u dzieci z porażeniem mózgowym12. Terapia egzoszkieletem mięśniowym i terapia krwią pępowinową wiążą się z wysokimi kosztami ekonomicznymi i trudno jest sobie na nie pozwolić, co sprawia, że tak ważne jest znalezienie odpowiednich strategii leczenia.
Masaż jest nieinwazyjną, wolną od skutków ubocznych, wysoce akceptowaną i opłacalną metodą leczenia dzieci. Udowodniono, że zarówno w badaniach klinicznych13, jak i w eksperymentach na zwierzętach14 poprawia dysfunkcję CP. Tradycyjna medycyna chińska uważa, że masaż może poprawić dysfunkcję CP poprzez regulację narządów i odblokowanie meridianów15. Jako skuteczna metoda leczenia TCM, masaż wymaga nowoczesnych metod badań medycznych, aby wyjaśnić jego mechanizm działania, aby promować go na świecie. Istnieją jednak obiektywne ograniczenia badawcze i etyczne w badaniu odpowiednich mechanizmów u dzieci z MPD. Dlatego badanie odpowiednich mechanizmów masażu w celu poprawy CP u zwierząt jest wygodniejsze. Chociaż zwierzęta różnią się od dzieci, badanie wpływu masażu na zwierzęta wymaga przestrzegania podstawowych teorii TCM. Z perspektywy zoologii klinicznej i eksperymentalnej odtworzymy tę technologię z ciała ludzkiego do ciała zwierzęcia, aby zbadać skuteczność masażu, co pomoże promować stosowanie terapii masażem.
Po pierwsze, tradycyjna medycyna chińska uważa, że CP należy do objawów "pięciu spóźnień" i "pięciu miękkości"16. Przyczynami MPD są wrodzona dysfunkcja płodu, niewydolność wątroby i nerek, niewystarczająca esencja i qi lub nabyte niedobory żywieniowe15. Nerka dominuje we wzroście, rozwoju lub regeneracji i naprawie ludzkich narządów i tkanek, a substancje te mają kluczowe znaczenie dla wzrostu, rozwoju, naprawy tkanek i zmartwychwstania organizmu. Niezbędna Qi nerki jest podstawą wzrostu i rozwoju. Niewystarczająca ilość esencji nerkowej może prowadzić do niewydolności szpiku kostnego, zaburzeń qi i krwi oraz braku odżywiania narządów wewnętrznych ciała, mięśni i kości. Dzieci z MPD są podatne na opóźniony wzrost i rozwój, zmniejszoną ruchomość stawów kończyn i zwiększone napięcie mięśni. Ponadto długotrwała choroba może prowadzić do nadmiernego niedoboru i zastoju krwi, powodując niedrożność meridianów, co prowadzi do niepełnosprawności intelektualnej, powolnej reakcji, zaburzeń motorycznych, niejednoznaczności językowej, osłabienia połykania i objawów ślinotokowania, takich jak zaburzenia ruchu kończyn.
Śledziona rządzi krążeniem i transformacją, służąc jako źródło qi i biochemii krwi oraz podstawa nabytych zdolności. Ludzkie meridiany łączące wnętrzności, ramiona i nogi to ścieżki, które krążą w qi i krwi, komunikują się w górę i w dół oraz regulują yin i yang. Masowanie meridianu Ren może poprawić funkcję nerek oraz regulować qi i krew. Zastosowanie punktów akupunkturowych na meridian śledziony stopy Tai-Yin, mełudian żołądka stopy Yang-Ming i mełudian jelita grubego ręki Yang-Ming w technikach masażu poprawia funkcjonowanie śledziony i żołądka, co pomaga promować krążenie Qi i krwi. Masaż wykorzystuje meridiany, określone części i punkty akupunkturowe, aby zapewnić łagodną stymulację fizyczną ciała dziecka, powodując reaktywne zmiany od powierzchni do wewnątrz i od zewnątrz do wewnątrz, poprawiając w ten sposób miejscowe i ogólne krążenie krwi, przywracając normalną pobudliwość i hamowanie mózgu oraz osiągając odpowiednią równowagę w trzewnej i tkankowej funkcji krwi. Zgodnie z tą teorią stosujemy głównie masaż na akupunkturach takich jak brzuch, Zhongwan (RN12), Tianshu (ST25), Guanyuan (CV4) i Qihai (CV6). Masaż brzucha może poprawić objawy kliniczne u dzieci z CP17,18,19, i jest wysoce prawdopodobne, że będzie sprzyjać naprawie uszkodzeń mózgu poprzez ścieżkę mózg-jelita20. Ponieważ śledziona i żołądek są podstawą rozwoju poporodowego, mogą wspomagać regenerację po urazach mózgu poprzez wzmacnianie śledziony, korzystnie wpływając na żołądek oraz uzupełniając qi i krew.
Powtórzyliśmy tę technikę na szczurach, aby jak najbardziej symulować interwencję TCM na CP i stwierdziliśmy, że masaż brzucha może poprawić dysfunkcję szczurów CP. Podsumowując, przedstawiamy zestaw metod badania masażu brzucha w celu zbadania odpowiednich mechanizmów poprawy CP poprzez masaż brzucha. Ponieważ istnienie wielu gatunków masażu bardzo utrudnia badanie mechanizmów masażu, konieczna jest standaryzacja metod masażu.
Komisja Etyki Zwierząt Szpitala Jinshan, afiliowanego przy Uniwersytecie Fudan w Szanghaju, zatwierdziła to badanie. Młode szczury Sprague Dawley (SD) były hodowane w pomieszczeniu dla zwierząt SPF ze światłem od 08:00 do 20:00, ciemnością od 20:00 do 08:00, temperaturą kontrolowaną na poziomie 22 °C i wilgotnością względną w pomieszczeniu 40%-50%. Mieli oni swobodny dostęp do żywności i wody. Wszystkie czynności doświadczalne na zwierzętach są zgodne z etyką dobrostanu zwierząt doświadczalnych i przepisami dotyczącymi bezpieczeństwa doświadczalnego na zwierzętach.
1. Model zwierzęcy encefalopatii niedotlenieniowo-niedokrwiennej noworodków 21
2. Parametry techniki masażu
UWAGA: Podstawowe techniki masażu obejmują uciskanie i pocieranie jako podstawowe techniki interwencji. Przed eksperymentem naukowcy skorzystali z działania testera techniki, który zebrał techniki od eksperta od masażu brzucha z Tianjin, Wang Jingui.
3. Manipulacja masażem
UWAGA: Upewnij się, że nacisk kciuka badacza na punkty akupunkturowe jest stabilny i długotrwały.
4. Lokalizacja punktu akupunkturowego
UWAGA: Dla szczurów urodzonych w ciągu 2 tygodni, waga i długość szczurów są takie same jak u myszy. Dlatego użyliśmy metod masażu myszy w odpowiedniej literaturze, aby masować szczury podczas 8-15 dni szczurów24.
5. Test wagi i zachowania
Po zakończeniu modelowania niedokrwienia i niedotlenienia27,28,29,30 (eksperyment przeprowadzono w pomieszczeniu dla zwierząt SPF), mózgi młodych szczurów pobrano po 48 h przeżycia w celu oceny obrzęku, rozrzedzenia i innych zjawisk, jak pokazano na Rysunku 3. Porównano zmiany masy ciała młodych szczurów w grupach pozornych (sham) i masażowej z grupą modelową (Tabela uzupełniająca S1). Przyrost masy ciała w grupie modelowej był wolniejszy niż w grupie masażowej (Rysunek 4), co wykazało, że masaż poprawia wzrost i rozwój młodych szczurów z CP. Wyniki testu na belce równowagi wykazały, że grupa modelowa potrzebowała więcej czasu na przejście przez belkę niż grupy pozorne i masażowa (Rysunek 5A oraz Tabela uzupełniająca S2).
Ponadto liczba poślizgów kończyn tylnych w grupie modelowej istotnie wzrosła w porównaniu z grupą sham (Tabela uzupełniająca S3). Z kolei liczba poślizgów kończyn tylnych uległa istotnemu zmniejszeniu w grupie masażowej w porównaniu z grupą modelową (Rycina 5B oraz Tabela uzupełniająca S3). Interwencja w postaci masażu istotnie poprawiła wzrost i funkcje motoryczne szczurów z CP.

Rysunek 1: Proces modelowania zwierzęcego i powiązane testy behawioralne. (A) Odizolowanie nerwu błędnego podczas modelowania. (B) Masaż 5-tygodniowych szczurów. (C) Szczury po zakończeniu niedokrwienia. (D) Test równoważności na belce. Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.

Rycina 2: Wykaz niektórych punktów akupunkturowych związanych z masażem brzucha26. Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.

Rycina 3: Obrzęk po jednej stronie mózgu 48 h po ustanowieniu modelu. Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.

Rysunek 4: Wpływ terapii masażem na masę ciała. Średnią masę ciała młodych szczurów (n = 6) mierzono od P7 do P40, a interwencję w postaci niedotlenienia i niedokrwienia przeprowadzono w dniu P7. Po modelowaniu HIE tempo przyrostu masy ciała w grupie modelowej uległo znacznemu obniżeniu, a terapia masażem istotnie je poprawiła (p < 0.05). Dane przedstawiono jako średnia ± SD; #p < 0.05 grupa masażu w porównaniu z grupą modelową. *p < 0.001 grupa modelowa w porównaniu z grupą sham. Kliknij tutaj, aby zobaczyć powiększoną wersję tego rysunku.

Rysunek 5: Wpływ masażu na dysfunkcje motoryczne u szczurów z porażeniem mózgowym. (A) Czas potrzebny szczurom na przejście przez belkę (n = 6). (B) Liczba poślizgów kończyn tylnych szczurów. Na podstawie wyników z Rysunku 4A,B, sprawność motoryczna w grupie z masażem była istotnie lepsza niż w grupie modelowej (p < 0.05). Dane przedstawiono jako średnia ± SD; *p < 0.001 Grupa modelowa w porównaniu z grupą sham. #p < 0.01 Grupa z masażem w porównaniu z grupą modelową. **p < 0.0001 Grupa modelowa w porównaniu z grupą sham. ##p < 0.0001 Grupa z masażem w porównaniu z grupą modelową. Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tego rysunku.
| LI11 | Wewnętrzne wgłębienie mięśnia prostownika promieniowego nadgarstka oraz | ||||
| SJ5 | zewnętrzne wgłębienie łokcia w zagłębieniu promieniowo-łokciowym, w punkcie 5/6 od strony dystalnej na linii wyimaginowanej | ||||
| LI4 | linia łącząca nadgarstek z łokciem, tylna w stosunku do prostownika wspólne ścięgno mięśni palców | ||||
| SP9 | na pierwszym mięśniu międzykostnym grzbietowym, przyśrodkowo w stosunku do środka drugiego kość śródręcza, w przedniej części stopy | ||||
| ST36 | w zagłębieniu poniżej kłykcia przyśrodkowego kości piszczelowej, między kością piszczelową a mięśniem brzuchatym łydki | ||||
| SP6 | w punkcie odpowiadającym proksymalnej jednej piątej linii prowadzącej od ST35 do przedniej bok zagięcia kostki | ||||
| LR3 | w punkcie proksymalnym dystalnej jednej piątej na linii wyimaginowanej połączenie SP9 z kostką przyśrodkową stawu skokowego | ||||
| CV4 | na końcu proksymalnym wgłębienia między pierwszym a drugim kości śródstopia | ||||
| ST25 | w punkcie 3/5 długości linii pośrodkowej brzusznej łączącej od pępka do guzka łonowego | ||||
| CV6 | bocznie od pępka, w połowie odległości między pępkiem a linią sutków w punkcie 3/10 wzdłuż linii środkowej brzusznej, łączącym od pępka do guzka łonowego | ||||
Tabela 1: Położenie anatomiczne poszczególnych punktów akupunkturowych26.
Tabela uzupełniająca S1: Surowe dane dotyczące masy wszystkich trzech grup szczurów. Prosimy kliknąć tutaj, aby pobrać ten plik.
Tabela dodatkowa S2: Surowe dane dotyczące czasu przejścia przez belkę równoważną dla wszystkich trzech grup szczurów. Prosimy kliknąć tutaj, aby pobrać ten plik.
Tabela uzupełniająca S3: Surowe dane dotyczące poślizgów kończyn tylnych we wszystkich trzech grupach szczurów. Prosimy kliknąć tutaj, aby pobrać ten plik.
Noworodkowy szczurzy model niedokrwienia i niedotlenienia jest najbardziej klasycznym modelem do badania porażenia mózgowego 27,28,29,30. Interweniowaliśmy na szczurach od8 do 40dnia, co jest w przybliżeniu równoważne ingerencji w ludzi w wieku od 3 miesięcy do 11,5 roku, czyli w złotym okresie dla wzrostui rozwoju człowieka. Wyniki wskazują, że masaż jest skuteczną metodą łagodzenia dysfunkcji CP. Wcześniejsze eksperymenty na zwierzętach wykazały, że masaż może zmniejszyć stan zapalny i poprawić funkcje motoryczne i poznawcze u młodych szczurów z CP14,32. Niektóre badania kliniczne wykazały, że masaż meridianów pleców i pęcherza moczowego poprawia funkcje motoryczne u dzieci z CP33. Wyniki te pokazują również, że masaż może skrócić czas przejścia młodych szczurów z MPD przez równoważnię i zmniejszyć liczbę poślizgnięć tylnych nóg. W ten sposób można zauważyć, że masaż brzucha może poprawić funkcje motoryczne młodych szczurów z MPD.
Tradycyjna medycyna chińska uważa, że MPD należy do pięciu opóźnionych i pięciu łagodnych objawów, przy czym podstawowym czynnikiem jest wrodzony niedobór qi nerek, a czynnikiem sprzyjającym jest nabyte osłabienie śledziony i żołądka. Nerka zarządza kością i wytwarza szpik, więc gdy nerka jest pełna qi, szpik staje się obfity, a inteligencja pozostaje normalna. Śledziona kontroluje mięśnie i kończyny, więc jeśli śledziona jest zdrowa, mięśnie będą silne, a stawy będą się swobodnie poruszać. Dlatego konieczne jest uzupełnienie śledziony i wzmocnienie nerek, poprawa funkcji przewodu pokarmowego, poruszanie kończynami i stawami oraz poprawa funkcji. Po pierwsze, teoria TCM utrzymuje, że brzuch jest korzeniem wszystkich chorób. Masaż brzucha może oczyszczać w górę iw dół, oddzielać yin i yang, usuwać stare i tworzyć nowe, wzbogacać pięć narządów wewnętrznych, wypędzać zewnętrzne zło i eliminować choroby wewnętrzne. Po drugie, badania wykazały, że dzieci z MPD mają niższą masę ciała i są podatne na niedożywienie, w tym nadmierne lub niezrównoważone spożycie, energię lub stan odżywienia 34,35,36,37. Opóźnienie wzrostu i niedożywienie są powszechne u dzieci z MPD i są bezpośrednio związane z poważniejszą dysfunkcją motoryczną37. Ryzyko niedożywienia jest ściśle związane z rokowaniem pacjentów z CP 34,38,39. Obecnie głównym obszarem badawczym masażu brzucha jest poprawa objawów żołądkowo-jelitowych, takich jak dyspepsja czynnościowa, zaparcia, biegunka i jadłowstręt u niemowląt 33,40,41,42. Ostatecznie liczne badania pokazują, że stymulacja Zhongwan, Tianshu, Guanyuan i Qihai może leczyć choroby żołądkowo-jelitowe, promować wchłanianie i poprawiać stan odżywienia 43,44,45. Punkty brzuszne mogą leczyć choroby związane z żołądkowo-jelitowym, przeczesywać mechanizm qi centralnego energetyka, uzupełniać pierwotną moc qi i promować biochemię qi i krwi. Dlatego wprowadziliśmy masaż brzucha do metody eksperymentalnej w celu poprawy dysfunkcji motorycznej u młodych szczurów z MPD.
Masaż brzucha łączy się głównie z punktami brzusznymi, uzupełnionymi punktami kończynowymi, takimi jak Quchi i Zusanli. Zewnętrzne poboczne i stawy czterech punktów akupunkturowych kończyn są połączone z narządami wewnętrznymi, a masaż brzucha stosuje się w celu osiągnięcia najlepszego efektu terapeutycznego. Z jednej strony eksperymentalne badania na zwierzętach pokazują, że akupunktura Zusanli nowonarodzonych szczurów z niedotlenieniem niedokrwiennym CP może poprawić funkcję młodych szczurów z CP46. Z drugiej strony, badania kliniczne pokazują, że akupunktura w Hegu47i inne punkty akupunkturowe mogą skutecznie wspomagać rozwój CP. Quchi i Zusanli to punkty akupunkturowe w jelicie grubym Yang-Ming meridian dłoni48 i meridian Foot-Yang-Ming na somatostatynie49, które są najczęściej stosowanymi punktami akupunkturowymi w klinicznym leczeniu udaru mózgu w Chinach w celu poprawy paraliżu kończyn50, Lokal mieszkalny 51. Ponadto Quchi i Zusanli są punktami zbiegu odpowiednio meridianów jelita grubego i żołądka. Od tego momentu meridian qi dociera do wnętrzności i jest połączony z górną i dolną częścią oraz meridianami i pobocznymi. Ponadto akupunktura i moksowanie oraz masaż wykazały lepszy wpływ na poprawę stanu dzieci z MPD w wynikach badań klinicznych52. Podsumowując, terapia TCM może pomóc w poprawie dysfunkcji pacjentów z MPD.
Chociaż przeprowadzono wiele badań na temat tego, jak masaż może poprawić CP, różnorodność technik masażu stała się ogromnym wyzwaniem. Istnieje wiele szkół masażu, a różnice w sile, kierunku i innych czynnikach stanowią liczne wyzwania. Nauczyliśmy się różnych metod masażu i poznaliśmy zestaw prostych i łatwych technik masażu. Nie możemy jednak symulować różnych technik masażu. Po drugie, czas masażu jest ważnym etapem w rozwoju młodych szczurów. Jego waga i szybki wzrost różnych układów organizmu prowadzą do ciągłej zmiany siły naszych palców u szczurów na różnych etapach. Należy kontynuować wysiłki w celu zbadania stabilności masażu.
Autorzy nie mają do ujawnienia żadnych konfliktów interesów.
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Maszyna do znieczulenia zwierząt | RWD OF SCIENCE | R550 | |
| Rękawice eksperymentalne | Sri Trang Gloves (Thailand) Co., Ltd | 0169 | |
| Isoflurane | RWD OF SCIENCE | R510-22-10 | |
| Rat | Shanghai Jihui Experimental Animal Breeding Co., Ltd. | ||
| Tester manipulacyjny YF-3 | Opracowany wspólnie przez Uniwersytet Fudan w Szanghaju i Uniwersytet Tradycyjnej Medycyny Chińskiej w Szanghaju | Numer patentu Chińskiej Republiki Ludowej |
Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE
Poproś o pozwolenie