Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Wspomaganie rozwoju i wzrostu niemowląt szczurów z porażeniem mózgowym za pomocą selektywnych manipulacji kręgosłupa

1.4K wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/65659

⸱

2 lutego 2024

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Yunnan University of Traditional Chinese Medicine

* These authors contributed equally

W tym artykule

Podsumowanie

To badanie ilustruje wpływ selektywnej manipulacji kręgosłupa na wzrost i rozwój młodych szczurów z porażeniem mózgowym, kładąc nacisk na specyficzną procedurę i standardowy protokół. W celu oceny protokołu wykonano pomiar masy ciała, test Rotarod, ocenę usterki stopy, inne testy behawioralne i wykrywanie hormonu wzrostu.

Streszczenie

Porażenie mózgowe (CP) jest chorobą oporną na leczenie u dzieci o wysokiej częstości występowania, wysokim wskaźniku niepełnosprawności i trudnym leczeniu. Obecnie stosuje się różne metody leczenia MPD. Leczenie obejmuje terapię farmakologiczną i niefarmakologiczną. Tradycyjna terapia zewnętrzna Medycyny Chińskiej jest bardzo charakterystyczną metodą leczenia w terapii niefarmakologicznej. Jako jedna z zewnętrznych terapii tradycyjnej medycyny chińskiej, masaż jest stosowany w leczeniu porażenia mózgowego i ma dobrą skuteczność, niewielkie skutki uboczne i dużą operatywność. W ramach terapii zewnętrznej TCM, selektywna manipulacja kręgosłupa może skutecznie promować wzrost i rozwój niemowląt szczurów z porażeniem mózgowym. Operacja została podzielona głównie na cztery etapy: najpierw zastosowano metodę wcierania w kręgosłup i obie strony kręgosłupa przez 1 minutę. Metodę wyciskania i ugniatania stosowano na kręgosłup przez 5 min, a mięśnie po obu stronach kręgosłupa przez 5 min. Następnie wykonano uciskanie i ugniatanie wrażliwych miejscowych punktów akupunkturowych w kręgosłupie przez 2 minuty. Po trzecie, chorą kończynę leczono metodą skręcania przez 1 minutę. Po czwarte, metodę pocierania zastosowano do linii środkowej od czoła do tyłu mózgu przez 1 minutę. Badanie to miało na celu zastosowanie selektywnej manipulacji kręgosłupa w leczeniu niemowląt szczurów z porażeniem mózgowym. Wykryto wagę, test Rotarod, ocenę wady stopy i hormon wzrostu niemowląt szczurów z porażeniem mózgowym, aby zrozumieć wpływ selektywnej manipulacji kręgosłupa na wzrost i rozwój niemowląt szczurów z porażeniem mózgowym. Wyniki wykazały, że może sprzyjać przybieraniu na wadze, poprawiać równowagę i funkcje motoryczne, promować wzrost i rozwój niemowląt z porażeniem mózgowym, promować wydzielanie hormonu wzrostu i zwiększać temperaturę wrażliwych części pleców.

Wprowadzenie

Porażenie mózgowe (CP), spowodowane niepostępującym uszkodzeniem mózgu u płodu lub niemowlęctwa, to grupa zaburzeń charakteryzujących się nieprawidłowym rozwojem motorycznym i posturalnym1, zaburzenia rozwojowe, w tym powolny przyrost masy ciała2,3,4, oraz dysfunkcja motoryczna. Częstość występowania porażenia mózgowego w Chinach wynosi 2,48%, a częstość występowania wynosi odpowiednio 2,46‰ (1-6 lat)5. Badania zagraniczne wykazały rozpowszechnienie 2,4%-3,6%6. Porażenie mózgowe jest główną przyczyną urazów fizycznych i niepełnosprawności u dzieci, wśród których zaburzenia równowagi i poruszania się znacząco wpływają na codzienne czynności1. Porażenie mózgowe może być spowodowane przedwczesnym porodem, infekcją, genetyką, niedokrwieniem i niedotlenieniem noworodków, żółtaczką noworodków oraz innymi złożonymi i różnorodnymi czynnikami chorobotwórczymi7. Celem leczenia porażenia mózgowego jest poprawa sprawności fizycznej i jakości życia 8. Obecnie metody leczenia porażenia mózgowego obejmują głęboką stymulację mózgu9, trening chodu wspomagany przez robota10, akupunktura nadgarstka i kostki11 oraz akupunktura meridianów połączona z masażem12.

Tradycyjna medycyna chińska (TCM) jest coraz częściej stosowana jako skuteczna metoda leczenia CP13,14. Masaż, jako jego część, również odgrywa pewną rolę. Na przykład, selektywna manipulacja kręgosłupa może regulować stan hydroksymetylacji DNA w celu regulacji rozwoju neuronów i poprawy funkcji uczenia się i pamięci15. W leczeniu niemowląt szczurów z porażeniem mózgowym selektywna manipulacja kręgosłupa może poprawić homeostazę zapalną kory mózgowej i hipokampa poprzez regulację poziomu metylacji cytokin zapalnych TNF-α i regionu promotora genu IL-1016 i odgrywać pozytywną rolę terapeutyczną w zdolności do równoważenia zdolności niemowlęcia z porażeniem mózgowym16. Selektywna manipulacja kręgosłupa może poprawić funkcje poznawcze młodych szczurów z porażeniem mózgowym17. Selektywna manipulacja kręgosłupa została zastosowana w leczeniu niemowląt szczurów z porażeniem mózgowym i zaobserwowano, że miała ona również terapeutyczny wpływ na ich wzrost i rozwój18.

Celem tego badania jest zilustrowanie wpływu selektywnej manipulacji kręgosłupa na wzrost i rozwój młodych szczurów z porażeniem mózgowym poprzez pomiar masy ciała, test Rotarod19, Foot-fault score20,21, oraz inne testy behawioralne i wykrywanie hormonu wzrostu, a także dostarczenie pomysłów badawczych dla odpowiedniego personelu.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

To badanie zostało zatwierdzone przez Komitet Etyki Zwierząt Doświadczalnych Uniwersytetu Tradycyjnej Medycyny Chińskiej w Yunnan. Wszystkie operacje eksperymentalne na zwierzętach były zgodne z zasadą 3R polegającą na zmniejszeniu, optymalizacji i zastąpieniu zwierząt doświadczalnych (nr R-06202018). W tym doświadczeniu wykorzystano zdrowe szczury Sprague Dawley (SD) (14 samców i 7 samic) o stopniu wolnym od swoistych patogenów (SPF) o średniej masie ciała 250-300 g. Szczury były hodowane w pomieszczeniu dla zwierząt SPF Uniwersytetu Tradycyjnej Medycyny Chińskiej w Yunnan, numer certyfikatu: SYXK(Yunnan)K2022-0004. Wszystkie szczury trzymano w 12-godzinnym cyklu światło/ciemność w naturalnym środowisku kontrolowanym światłem w temperaturze pokojowej 22-26 °C i wilgotności względnej 40%-50%. Po 1 tygodniu karmienia adaptacyjnego stosunek samców do samic utrzymywał się na poziomie 1:2. Po 1 tygodniu ciężarne szczury były trzymane w jednej klatce, karmione normalnie, swobodnie jedząc i pijąc. Po naturalnym porodzie wybrano zdrowe młode szczury urodzone przez ciężarne szczury. Niemowlęta szczurów podzielono na grupy pozorowane, kontrolne i leczone, aby zaobserwować wpływ selektywnej manipulacji kręgosłupa na wzrost i rozwój niemowląt szczurów z porażeniem mózgowym. Z każdej grupy wybrano do eksperymentu 6 szczeniąt płci męskiej. Grupa leczona była leczona selektywną manipulacją kręgosłupa od 5dnia po urodzeniu, a leczenie podawano przez 6 dni, a następnie odpoczywano przez 1 dzień.

1. Ustalanie modelu porażenia mózgowego

  1. Wysterylizuj mikroskop, nożyczki okulistyczne, kleszcze, szew, płytkę chirurgiczną, nożyczki, waciki i rękawiczki wymagane do operacji i umieść je na sali operacyjnej.
  2. Oddziel szczenię tymczasowo od matki w trzecim dniu życia, umieść je w pojedynczej ramce i przetransportuj do sterylnej sali operacyjnej.
  3. Zmierz masę ciała. Do badania należy włączyć niemowlęta szczurów o masie ciała od 7 do 9 g i wykluczyć te, które nie dostosowały się do masy ciała. Losowo podziel młode szczury na grupy pozorowane, kontrolne i leczone.
  4. Wywołać znieczulenie izofluranem w stężeniu 2% i utrzymać znieczulenie na poziomie 1% za pomocą urządzenia do znieczulenia gazem wziewnym dla małych zwierząt.
    UWAGA: Ten eksperyment ma głównie na celu zaobserwowanie wpływu selektywnej manipulacji kręgosłupa na wzrost i rozwój niemowląt szczurów z porażeniem mózgowym. Znieczulenie zostało przeprowadzone zgodnie z ogólnymi wymaganiami podczas procesu modelowania, a dodatkowe znieczulenie będzie miało wpływ na wyniki obserwacji.
    1. Podłącz środek znieczulający gaz dla małych zwierząt do zasilania i otwórz zawór podłączony do skrzynki indukcyjnej.
    2. Włóż niemowlę szczura do pudełka indukcyjnego, przekręć pokrętło regulacji stężenia i dostosuj stężenie izofluranu do 2%, aby wywołać znieczulenie.
    3. Gdy mały szczur jest nieprzytomny, wyjmij go ze skrzynki indukcyjnej. Umieść go na płycie operacyjnej i zamknij kanał 1 aparatu do znieczulenia.
    4. Umieść niemowlę szczura na wznak. Zamocuj maskę inhalacyjną znieczulającą, aby utrzymać znieczulenie.
    5. Otwórz kanał podłączony do maski inhalacyjnej anestezjologicznej. Utrzymuj znieczulenie, obracając pokrętło regulacji stężenia i dostosowując stężenie izofluranu do 1%.
      UWAGA: Po znieczuleniu oceń głębokość znieczulenia, mocno podnosząc i szczypiąc palce u nóg i ogon małych szczurów. Brak reakcji, gdy palce u nóg i ogon zostały podniesione i uszczypnięte, potwierdza, że osiągnięto głębokość znieczulenia.
  5. Zdezynfekuj skórę szyi młodego szczura trzykrotnie 75% alkoholem i wytnij podłużne 1 cm nacięcie na skórze szyi, aby odsłonić tkankę podskórną.
    UWAGA: Podłużne nacięcie skóry szyi nie powoduje ubytku skóry.
  6. Przetnij skórę lewej szyi pod mikroskopem preparacyjnym i użyj pęsety ocznej, aby tępo oddzielić mięsień mostkowo-gnykowy i lewy mięsień mostkowo-sutkowy.
    1. Znajdź lewą tętnicę szyjną wspólną i nerw błędny i oddziel lewą tętnicę szyjną wspólną i nerw błędny.
    2. W grupie Modelowej odetnij lewą tętnicę szyjną wspólną za pomocą elektrycznego pisaka do koagulacji. Oczyść i zszyj nacięcie szyi.
    3. W grupie Sham należy oddzielić lewą tętnicę szyjną wspólną od nerwu błędnego.
  7. Po operacji umieść małego szczura w termostatycznej łaźni wodnej w pozycji leżącej do resuscytacji przez 1 h.
    UWAGA: Po naturalnej rekonwalescencji kolor skóry kończyn i całego ciała był rumiany. Młody szczur mógł autonomicznie poruszać kończynami i samodzielnie raczkować.
  8. Umieścić reanimowane szczury z grupy kontrolnej i leczonej w zamkniętym inkubatorze w temperaturze 37 °C w pozycji leżącej. Wprowadź mieszaninę 5% tlenu i 95% azotu gazowego, aby wywołać hipoksję i usuń szczury po 2 godzinach.
  9. Wyjmij młodego szczura, który zakończył proces niedotlenienia, z pudełka do hipoksji i umieść go w pozycji leżącej w pudełku o normalnej zawartości tlenu w atmosferze. Umieść je w termostatycznej łaźni wodnej o temperaturze 37 °C na 1 godzinę. Po całkowitym wyzdrowieniu przenieś młodego szczura z powrotem do klatki matki.
    UWAGA: Po naturalnym wyzdrowieniu kolor skóry kończyn i całego ciała był czerwony. Młode szczury mogły poruszać kończynami autonomicznie i mogły samodzielnie raczkować.
  10. Umieścić młodego szczura z grupy Sham w jednym pudełku o normalnej zawartości tlenu w atmosferze i umieścić pudełko w łaźni wodnej o temperaturze 37 °C na 1 godzinę. Po całkowitym wyzdrowieniu włóż młodego szczura z powrotem do klatki matki w celu karmienia.
    UWAGA: Po naturalnym wyzdrowieniu kolor skóry kończyn i całego ciała był czerwony. Młode szczury mogły poruszać kończynami autonomicznie i mogły samodzielnie raczkować. Cały proces operacyjny został zakończony w specjalnej sali operacyjnej sali dla zwierząt SPF Uniwersytetu Tradycyjnej Medycyny Chińskiej w Yunnan. Podczas resuscytacji i niedotlenienia operator cały czas obserwuje niemowlę szczura, aby zapobiec śmierci spowodowanej niewłaściwą postawą. Samice szczurów w okresie laktacji były karmione paszą hodowlaną wolną od specyficznych patogenów (SPF), a kiedy młode były w stanie samodzielnie się odżywiać, młode zostały odsadzone od matki (21 dzień po urodzeniu)22,23,24 i karmione karmą pielęgnacyjną SPF.

2. Eksperyment z odruchem prostowania

    W 4 dniu po urodzeniu (2 dzień po modelowaniu) wykonaj eksperyment z odruchem prostującym, aby sprawdzić, czy model się powiódł (Rysunek 1 i Tabela 1).
    1. Podnieś ogon małego szczura, oprzyj jego grzbiet na poziomej desce i użyj kciuka i palca wskazującego, aby zabezpieczyć jego brzuch i szyję. Sprawdź, czy szczur może powrócić do swojej normalnej pozycji. Niezdolność szczura do powrotu do normalnej pozycji z nieprawidłowej pozycji spowodowana utratą odruchu prostowania jest rejestrowana jako udany model16,25.
    2. Rejestruj czas, w którym każda grupa młodych przewraca się z pozycji leżącej na plecach do pozycji leżącej. Zacznij rejestrować czas, w którym kciuk i palec wskazujący są jednocześnie uwalniane w pozycji leżącej, pozwól niemowlęciu szczura obrócić się do pozycji leżącej i przestań nagrywać, gdy przednie i tylne łapy zostaną umieszczone na podłodze. Jeśli młody szczur nie mógł powrócić do normalnej pozycji przez ponad 20 s, zapisz czas prostowania jako 20 s.

3. Przygotowanie przed operacją

  1. Po modelowaniu należy oddzielić młodego szczura z porażeniem mózgowym od matki i przenieść go na salę operacyjną o stałej temperaturze pokojowej 22-26 °C na 2 minuty, aby przystosował się do otaczającego środowiska.
  2. Noś jednorazowe rękawiczki, aby dłoń była łagodna i miękka, a temperatura wynosiła 36-37 °C.
  3. Delikatnie połóż szczura w dłoni lewej ręki. Zegnij lewy kciuk, aby zakryć oczy szczura na 2 minuty, aby utworzyć ciemne pole widzenia, aby szczur mógł dostosować się do środowiska dłoni operatora. Do manipulacji używaj prawego palca wskazującego i środkowego.
    UWAGA: Zakrycie oczu małego szczura może stworzyć ciemne otoczenie. Zapobiegnie to pobudzeniu młodego szczura z powodu niebezpiecznego i niepewnego środowiska wpływającego na wyniki eksperymentalne.

4. Podział szczurów na grupę kontrolną i grupę leczoną

  1. Na drugi dzień po modelowaniu (P5) zweryfikuj model za pomocą testu odruchu prostego i losowo podziel młode szczury na grupy kontrolne i leczone. Przeprowadzić selektywną manipulację kręgosłupa u niemowląt szczurów z grupy leczonej.
  2. Ułóż małego szczura w pozycji leżącej. Upewnij się, że kręgosłup jest zawsze utrzymywany w prostej pozycji (Rysunek 2A).
  3. Masuj kręgosłup i obie strony kręgosłupa przez 1 min metodą rozcierania, a metodą uciskania i ugniatania do kręgosłupa i mięśni po obu stronach kręgosłupa przez 5 min.
    1. Masuj kręgosłup i skórę po obu stronach metodą pocierania, aby zrelaksować małego szczura i całkowicie złagodzić jego napięcie. Upewnij się, że częstotliwość pocierania wynosi 100-120 razy/min przez 1 minutę po tym, jak mały szczur jest cichy i bez pobudzenia.
      1. Użyj prawego palca wskazującego, środkowego i palca serdecznego jako powierzchni kontaktowej i wykonuj okrężny ruch pocierający powierzchnię skóry kręgosłupa szyjnego, piersiowego i lędźwiowego kręgosłupa od głowy do ogona, nie naruszając tkanki podskórnej.
      2. Z prawym palcem wskazującym, środkowym i palcem serdecznym jako powierzchniami kontaktowymi, wykonuj ruchy okrężne na powierzchni skóry mięśnia czworobocznego, powierzchownego mięśnia pośladkowego, mięśnia romboidalnego szyjnego, mięśnia romboidalnego piersiowego, mięśnia najszerszego grzbietu i mięśnia skośnego zewnętrznego w kolejności od głowy do ogona zgodnie ze standardem anatomicznym zwierzęcia26, nie naruszając tkanki podskórnej.
    2. Najpierw traktuj kręgosłup wyciskaniem i ugniataniem przez 5 minut, a następnie uciskaj i ugniataj mięśnie po obu stronach kręgosłupa przez 5 minut.
      1. Zastosuj metodę ugniatania do kręgosłupa z częstotliwością 120 razy/min przez 5 minut. Użyj prawego palca wskazującego lub środkowego jako powierzchni kontaktu. Od głowy do ogona wykonuj okrężne ugniatanie na powierzchni skóry kręgów szyjnych, piersiowych i lędźwiowych, połączone z uciskaniem w dół (1,77 ± 0,54 N). Upewnij się, że siła dociera do kręgów szyjnych, kręgów piersiowych, kręgów lędźwiowych i więzadeł nadkolcowych.
      2. Zastosuj metodę wyciskania i ugniatania do mięśni po obu stronach kręgosłupa z częstotliwością 120 razy/min przez 5 minut. Użyj prawego palca wskazującego lub środkowego jako powierzchni kontaktu. Zgodnie ze zwierzęcym standardem anatomicznym26, dociśnij powierzchnię skóry czworobocznego, powierzchownego pośladka, romboidalnej szyi, romboidalnej klatki piersiowej, mięśnia najszerszego grzbietu i zewnętrznych skośnych mięśni brzucha okrężnym ruchem ugniatającym od głowy do ogona, z siłą 1,77 ± 0,54 N, tak aby siła dotarła do mięśnia czworobocznego, powierzchownego pośladka, romboidalnej szyi, romboidalne mięśnie piersiowe, najszersze grzbietu i mięśnie brzucha skośne zewnętrzne (Ryc. 2B)26.
  4. Uciskaj i ugniataj wrażliwe punkty akupunkturowe kręgosłupa (takie jak Ganshu, Xinshu, Pishu, Shenshu i Feishu27) z częstotliwością 100-120 razy/min przez 2 minuty. Używając prawego palca wskazującego lub środkowego jako powierzchni kontaktu, wykonuj okrężne ugniatanie i wyciskanie w dół (1,77 ± 0,54 N) na powierzchni skóry lokalnych punktów akupunkturowych (takich jak Ganshu, Xinshu, Pishu, Shenshu i Feishu) u niemowląt szczurów z porażeniem mózgowym.
    UWAGA: Punkty akupunkturowe zostały wybrane zgodnie z "Mapą Punktów Akupunktury Zwierząt" sformułowaną przez Oddział Badań nad Akupunkturą Eksperymentalną Chińskiego Towarzystwa Akupunktury) (Rysunek 3)28.
  5. Miejscowo stymulować chorą kończynę metodą skręcania z częstotliwością 25 razy/min przez 1 min.
    1. Prawym kciukiem i palcem wskazującym uszczypnij dotkniętą kończynę niemowlęcia z porażeniem mózgowym, wywierając symetryczną siłę na oba palce. Upewnij się, że siła jest delikatna, a działanie lekkie i delikatne. Pocieraj prawy prostownik nadgarstka promieniowego, prostownik palca wspólnego, prostownik nadgarstka łokciowego, paliczek, staw międzypaliczkowy, mięsień brzuchaty łydki, mięsień półścięgnisty, kość śródstopia i staw międzyśródstopia małego szczura w przód iw tył.
  6. Zastosuj metodę pocierania do linii środkowej czoła do tyłu mózgu z częstotliwością 100-120 razy/min przez 1 min. Użyj prawego palca wskazującego jako powierzchni kontaktowej i użyj metody pocierania na wyimaginowanej linii od czoła do środka tylnej części mózgu młodego szczura (a mianowicie: jedna linia Baihui, Fengfu i Dazhui) (Rysunek 3).
    UWAGA: Masaż stosuje się głównie do skóry. Jest to okrężny ruch na powierzchni skóry głowy małego szczura z porażeniem mózgowym. Nie musi napędzać podskórnych ruchów mięśni małego szczura z porażeniem mózgowym.
  7. Pod koniec zabiegu pozostaw młodego szczura samego na 30 minut przed powrotem do klatki matki szczura.
    UWAGA: Z wiekiem sierść niemowląt szczurów staje się gęsta, dlatego konieczne jest usunięcie włosów z tyłu wszystkich grup niemowląt szczurów podczas operacji masażu, aby uniknąć wpływu na efekt eksperymentalny.

5. Wykrywanie temperatury lokalnych punktów akupunkturowych

  1. Użyj kamery termowizyjnej na podczerwień, aby wykryć temperaturę lokalnego obszaru akupunktu przed i po operacji.
    1. Przed selektywnym masażem kręgosłupa połącz interfejs Type-C telefonu komórkowego z interfejsem USB urządzenia do obrazowania w podczerwieni za pomocą do transmisji danych i włącz przycisk zasilania.
    2. Kliknij Analizuj, aby przejść do terminala telefonu komórkowego oprogramowania, wybierz Zdjęcie, aby przejść do trybu zdjęć, a następnie kliknij Tryb obrazu w obrazie w prawym dolnym rogu.
    3. Ustaw ostrość aparatu na obszarach akupunktów akupunkturowych Dazhui, Xinshu i Shenshu (Rysunek 3) na grzbiecie małego szczura, aby zrobić zdjęcia temperatury. Kliknij Zdjęcie, aby zakończyć przechwytywanie obrazu i zapisać go w formacie JPG.
    4. Podłącz komputer za pomocą do transmisji danych i prześlij zapisany obraz do komputera z zainstalowanym oprogramowaniem Fotric w celu analizy.
      1. Otwórz oprogramowanie Fotric na komputerze, otwórz plik lokalny i znajdź lokalizację obrazu.
      2. Wybierz obszar roboczy Termogram, wybierz obraz do analizy i przejdź do interfejsu analizy.
      3. Na ekranie Analiza wybierz zdjęcie w polu Obraz termowizyjny po prawej stronie i otwórz Zamek.
      4. Wybierz funkcję powiększania, dostosuj rozmiar obrazu termicznego i obrazu tła w lewym polu, aby się pokrywały, i wyłącz blokadę po prawej stronie.
      5. Znajdź prostokąt Ustaw pomiar na pasku narzędzi u góry i zaznacz na rysunku punkt akupunktur, który ma zostać wykryty.
      6. Kliknij przycisk Raport po prawej stronie, aby zarejestrować wartość temperatury.

6. Wykrywanie funkcji równowagi motorycznej u niemowląt szczurów z porażeniem mózgowym

  1. Użyj testu behawioralnego Rotarod19, aby wykryć funkcje motoryczne szczurów w grupie pozorowanej, kontrolnej i terapeutycznej w 61dniu po urodzeniu.
    1. Ustawienia parametrów: Uruchom wyłącznik zasilania, wybierz Wykonaj eksperyment, aby przejść do następnego kroku, wybierz Pozytywny, Szczury, Czas 5 min, aby przejść do następnego kroku, i wybierz Czas Acc: 10 s, Prędkość: 10 obr./min.
    2. Następnie umieść szczury na bieżni i rozpocznij test, klikając Biegnij, gdy staną twardo. Dostosuj stan pracy każdego uruchomienia do WŁ. Trenuj każdego szczura raz przez 5 minut, a następnie zacznij wykonywać test trzykrotnie.
    3. Po treningu umieść młode szczury na bieżni rotarodowej. Po ustabilizowaniu kliknij przycisk Uruchom i dostosuj stan pracy do WŁĄCZONY. Po upływie 5 minut wybierz opcję Data, aby zarejestrować czas i prędkość każdego szczura spadającego po raz pierwszy z toru biegu rotorodzi, tj. dane dotyczące czasu pracy.
  2. Użyj testu na wady stopy20,21, aby ocenić równowagę motoryczną prawej kończyny przedniej w grupie pozorowanej, kontrolnej i leczonej w 61dniu po urodzeniu.
    1. Umieść małe szczury na początku drabiny poziomej i nagraj film, jak przechodzą przez nią na drugi koniec (100 cm długości, a odległość między każdą drabiną wynosi 2 cm). Po jednej sesji treningowej wykonaj formalny test trzy razy dla każdego szczura w odstępach 5 minut.
    2. Obserwuj prawą kończynę przednią, gdy zwierzę przechodzi przez drabinę, korzystając z odtwarzania z małą prędkością, aby uzyskać wynik, jak pokazano w standardzie punktacji (tabela 2).

7. Western blotting

  1. Wykonaj analizę Western blot próbek tkanek zgodnie z wcześniejszym opisem29.
    UWAGA: Ilość lizatu określono w zależności od wielkości bloku tkankowego. Stosowane przeciwciała były następujące: pierwszorzędowe przeciwciało przeciwko hormonowi wzrostu (0,5 μg [0,5 ng/pas]); przeciwciało przeciwko receptorowi hormonu wzrostu (1/1000); wewnętrzne referencyjne przeciwciało anty-beta aktyny (1/2000) dla przeciwciał pierwszorzędowych; Kozioł anty-IgG KRÓLIKA H&L (HRP) (1/10000) dla przeciwciała wtórnego.

8. Wykrywanie siły ręki

  1. Załóż urządzenie służące do wykrywania siły manipulacji na dłoni używanej do masażu. Dopasuj palec używany do masażu małego szczura z chipem czujnika urządzenia i włącz przycisk zasilania.
  2. Podłącz interfejs dysku twardego, w którym przechowywane jest oprogramowanie testera ręcznego, do komputera i wprowadź dedykowany adres IP testera ręcznego w polu wprowadzania adresu URL.
  3. Zainstaluj klienta SpringVR na komputerze, kliknij, aby przejść do interfejsu kolekcji i wybierz wzór palca w prawym dolnym rogu, aby przetestować siłę manipulacji.
  4. Wybierz opcję Ciśnienie i kliknij przycisk Start, aby rozpocząć rejestrowanie siły ręcznej operatora podczas pracy. Oprogramowanie automatycznie zarejestruje intensywność manipulacji i wygeneruje tabelę danych na dysku lokalnym, na której zostaną znalezione dane w pliku o nazwie PressureSensor.

9. Dane statystyczne

UWAGA: oprogramowanie SPSS26.0 było używane do analizy statystycznej, Graphpad Prism9.0.0 do tworzenia wykresów słupkowych, a Image J do analizy wartości szarości pasm białkowych.

  1. Analizuj i przedstaw wszystkie dane jako średnią ± odchylenie standardowe (średnia ± SD).
    UWAGA: Norma testowa wynosiła α = 0,05, a P ≤ 0,05 uznano za statystycznie istotne. Test Fishera został użyty, ponieważ dane były analizowane przez analizę wariancji i normalności i były zgodne z charakterystyką rozkładu normalnego i jednorodnością wariancji.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Selektywna manipulacja kręgosłupa może sprzyjać przyrostowi masy ciała u szczurząt z mózgowym porażeniem dzieci.
W trakcie leczenia masę ciała mierzono w dniach postnatalnych 3, 14, 28, 42 i 61 (Rysunek 4, Tabela 3). W trzecim dniu po urodzeniu masa ciała w grupie Sham wynosiła 5,53 ± 0,035 g, a w grupie kontrolnej 3,15 ± 0,43 g. Masa ciała w grupie leczonej wynosiła 4,42 ± 0,13 g i nie różniła się ona istotnie od masy ciała w grupach Sham i kontrolnej p...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

Ponieważ niedokrwienie i niedotlenienie są ważnymi czynnikami patogennymi porażenia mózgowego, uznana na całym świecie metoda ustalania modelu porażenia mózgowego jest połączona z hipoksją w celu przygotowania modelu porażenia mózgowego 16,31,32,33. Kiedy rozwija się porażenie mózgowe, powoduje globalne opóźnienie rozwoju, w tym wagi i funkcji motorycznych, co może być związane z poziomem wydzi...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Autorzy nie mają konkurencyjnych finansowych lub innych konfliktów interesów w związku z tą pracą.

Podziękowania

Ta praca była wspierana przez Ogólny Program Narodowej Fundacji Nauk Przyrodniczych Chin (82374614), Główny Projekt Biomedyczny Departamentu Nauki i Technologii Prowincji Yunnan (202102AA100016), Wspólny Duży Projekt Stosowanych Badań Podstawowych Departamentu Nauki i Technologii Prowincji Yunnan -- Uniwersytet Tradycyjnej Medycyny Chińskiej Yunnan (201901AI070004), Wspierane przez kluczowe laboratorium akupunktury, moksoterapii i masażu w celu zapobiegania i leczenia encefalopatii w szkołach wyższych i uniwersytetach prowincji Yunnan (2019YGZ04), Departament Nauki i Technologii prowincji Yunnan - Młodzieżowy projekt podstawowego programu badawczego prowincji Yunnan (202101AU070002), Program Podyplomowy Funduszu Badań Naukowych Departamentu Edukacji prowincji Yunnan, (2023Y0433); Fundacja Badań Naukowych Departamentu Edukacji prowincji Yunnan, (2023Y0462).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Płytki 96-dołkoweBeijing Lanjieke Biotechnology Co., LTD11510Oznaczanie stężenia białka
Przeciwciało anty-beta aktynyAbacmAb8227Rozcieńczenie: 1/2000
Przeciwciało przeciw hormonowi wzrostuAbacmAb1268820,5 i mikro; g (0,5 ng/pas)
Przeciwciało przeciwko receptorowi hormonu wzrostuAbacmAb202964Rozcieńczenie: 1/1000
Podstawowy mikroskop operacyjnyShanghai YuYAN Scientific Instrument Co. LTDSM-101Tętnicę szyjną wspólną wyizolowano pod mikroskopem podczas modelowania
Deweloper BCABiyuntian Biological Engineering Co., LTDP0010Oznaczanie stężenia białka
System obrazowania chemiluminescencyjnegoShanghai Qinxiang Scientific Instrument Co., LTD100240073Obrazowanie pasm białkowych
Marker barwiony w kolorze z bezpośrednim obciążeniemBeijing Kangrunchengye Biotechnology Co., LTD (GenStar)M221Western Blot
DK-30Automatyczna kostkarka do lodu śnieżnegoHenan Brothers Instrument equipment Co., LTDSHDX0023
Zestaw podłoża luminescencyjnego ECLBeijing Lanjieke Biotechnology Co.,LTD BL520BKonwertuj obrazy utajone na naświetlonym filmie na obrazy widzialne
Podgrzewana elektrycznie termostatyczna łaźnia wodnaTAISITE INSTRUMENTDK-98-IIMłode szczury były reanimowane po modelowaniu
Wagi elektroniczneKunshan YoukeWEI ELECTRONIC Technology Co. LTDCN-LQC10002Zmierzono
masę ciała młodych szczurówNiemiecki mały biały elektryczny długopis do koagulacji hemostatHaohangL55 i razy; W125 razy; H37Służył do koagulacji lewej tętnicy szyjnej wspólnej
RękawicaJiangsu YANGzi LiDE Medical Device Co. LTDQ / 320684 YZYL001-2017Do operacji masażu
GlycineBeijing Soleibao Technology Co., Ltd.Cat#G8200Roztwór elektroforetyczny, skonfiguruj płyn transferowy
Goat Anti-RabbitIgG H& L (HRP) AbacmAb6721Rozcieńczenie: 1/10000
Inteligentna laboratoryjna ultra-czysta maszyna dowody Chongqing huachuag water treatment engineering co., LTDN/AFiltracja (15 L)
IsofluraneShandong Ante Animal Husbandry Technology Co. LTD15198Znieczulenie utrzymywano przez indukcję u młodych szczurów
LinkIRFOTIRCV1.3.2.134Oprogramowanie do analizy obrazu w podczerwieni
Niskotemperaturowa wysokoobrotowa szlifierkado tkanek Wuhan Servicebio technology CO., LTDSKZ3F20200191Mielenie tkanek
MetanolGuangdong Guanghua Sci-Tech Co., Ltd20220519 Skonfiguruj płyn transferowy
Mini-PROTEAN TetraBole Life Medical Products (Shanghai) Co., Ltd552BR 233193
Spektrofotometr mikropłytkowy Multiskan Spectrum do elektroforezyTECANSparkWykryto absorbancję i stężenie białka tkankowego
Inteligentne rękawice z czujnikiem naciskuJinan Super Sense Intelligent Technology Co. LTDMiigloveSłuży do pomiaru siły manipulacyjnej operatora membrany
PVDFMerckMillipore Corporation IPVH00010 Western Blot (Zachodnia plama)
Wirówka z chłodzeniemHettich Precision Technology (Zhuhai) Co., LTDMIKRO 220RWirówka
badawcza trzy w jednym kamera termowizyjnaFOTIRC226S (384 x 288)Pomiar temperatury
Lizat RIPAPekin Solaibao Technology Co., LTD (Solarbio)R0010Tkanka lityczna
SHA-CA cyfrowy wyświetlacz łaźni wodnej oscylator termostatycznyChangzhou Aohua Instrument Co. LtdSHA-CAMłode szczury zastosowano w niedotlenieniu
Aparat rotarod zmęczenia sześciu szczurówShanghai Duoyi Industry Co., LTDWykryto funkcję motoryczną DO01104RT703 CP
Odtłuszczone mleko w proszkuGuangzhou Saiguo Biotechnology Co., LTD (BIOFROXX)1172GR500Ograniczająca
płynna pasza hodowlanaSPF SPF (Beijing) biotechnology co., Ltd.A1EC30005A1S4285266Samice szczurów w okresie laktacji były karmione
karmą podtrzymującą SPFSPF (Beijing) biotechnology co., Ltd.A1EC30005A1S4285267Szczenięta były karmione po odsadzeniu Płytka
chirurgicznaShanghai YuYAN Scientific Instrument Co. LTD51002Model stołu operacyjnego został ustalony u młodych szczurów
TS-200 Wytrząsarka orbitalnaHaimen Qilin Bell Manufacturing Co., Ltd.TS-8SUtrwalanie żelu
Tween 80MedChemExpressHY-Y1819Konfiguracja TBST 
ZS-MV Przenośny aparat anestezjologicznyZHONGSHI NAUKA & TECHNOLOGIAZS-MV-IZnieczulenie indukowano i utrzymywano u zwierząt doświadczalnych
do wytwarzania lodu

Bibliografia

  1. Paul, S., Nahar, A., Bhagawati, M., Kunwar, A. J. A review on recent advances of cerebral palsy. Oxidative Medicine and Cellular Longevity. , 2622310(2022).
  2. Şimşek, T. T., Tuç, G. Examination of the relation between body mass index, functional level and health-related quality of life in children with cerebral palsy. Turk Pediatri Arsivi. 49 (2), 130-137 (2014).
  3. Dahlseng, M. O., et al. Feeding problems, growth and nutritional status in children with cerebral palsy. Acta Paediatrica. 101 (1), Oslo, Norway. 92-98 (2012).
  4. Fogarasi, A., et al. The purple n study: Objective and perceived nutritional status in children and adolescents with cerebral palsy. Disability and Rehabilitation. 44 (22), 6668-6675 (2022).
  5. Xiaojie, L., et al. Epidemiological characteristics of cerebral palsy in twelve province in China. Chinese Journal of Practical Pediatrics Clinical. 33 (5), 378-383 (2018).
  6. Kakooza-Mwesige, A., et al. Prevalence of cerebral palsy in Uganda: A population-based study. The Lancet. Global Health. 5 (12), e1275-1282 (2017).
  7. Korzeniewski, S. J., Slaughter, J., Lenski, M., Haak, P., Paneth, N. The complex aetiology of cerebral palsy. Nature Reviews. Neurology. 14 (9), 528-543 (2018).
  8. Vargus-Adams, J. N., Martin, L. K. Domains of importance for parents, medical professionals and youth with cerebral palsy considering treatment outcomes. Child: Care, Health and Development. 37 (2), 276-281 (2011).
  9. Koy, A., et al. Quality of life after deep brain stimulation of pediatric patients with dyskinetic cerebral palsy: A prospective, single-arm, multicenter study with a subsequent randomized double-blind crossover (stim-cp). Movement Disorders. 37 (4), 799-811 (2022).
  10. Pool, D., Valentine, J., Taylor, N. F., Bear, N., Elliott, C. Locomotor and robotic assistive gait training for children with cerebral palsy. Developmental Medicine and Child Neurology. 63 (3), 328-335 (2021).
  11. Li, J., et al. Evaluating the effects of 5-hz repetitive transcranial magnetic stimulation with and without wrist-ankle acupuncture on improving spasticity and motor function in children with cerebral palsy: A randomized controlled trial. Frontiers In Neuroscience. 15, 771064(2021).
  12. Chen, K., Shu, S., Yang, M., Zhong, S., Xu, F. Meridian acupuncture plus massage for children with spastic cerebral palsy. American Journal of Translational Research. 13 (6), 6415-6422 (2021).
  13. Gao, J., et al. Rehabilitation with a combination of scalp acupuncture and exercise therapy in spastic cerebral palsy. Complementary Therapies in Clinical Practice. 35, 296-300 (2019).
  14. Chen, Z., et al. Effects of traditional Chinese medicine combined with modern rehabilitation therapies on motor function in children with cerebral palsy: A systematic review and meta-analysis. Frontiers In Neuroscience. 17, 1097477(2023).
  15. Zhang, Y., et al. Tuina massage improves cognitive functions of hypoxic-ischemic neonatal rats by regulating genome-wide DNA hydroxymethylation levels. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine: ECAM. 2019, 1282085(2019).
  16. Zhang, P., et al. Chinese tuina protects against neonatal hypoxia-ischemia through inhibiting the neuroinflammatory reaction. Neural Plasticity. 2020, 8828826(2020).
  17. Niu, F., et al. Spinal tuina improves cognitive impairment in cerebral palsy rats through inhibiting pyroptosis induced by nlrp3 and caspase-1. Evidence-Based Complementary and Alternative Medicine: ECAM. 2021, 1028909(2021).
  18. Bowen, Z., Guangyi, X., Qian, Z., Xueping, H., Xiantao, T. Time-dose effect of spinal manipulation on growth and motor function in infant rat with cerebral palsy. Shi Zhen National Medicine and National Medicine. 28 (09), 2274-2277 (2017).
  19. Yang, L. J., Cui, H. Olig2 knockdown alleviates hypoxic-ischemic brain damage in newborn rats. Histology and Histopathology. 36 (6), 675-684 (2021).
  20. Martins, L. A., Schiavo, A., Xavier, L. L., Mestriner, R. G. The foot fault scoring system to assess skilled walking in rodents: A reliability study. Frontiers in Behavioral Neuroscience. 16, 892010(2022).
  21. Li, S., et al. Plxna2 knockdown promotes m2 microglia polarization through mtor/stat3 signaling to improve functional recovery in rats after cerebral ischemia/reperfusion injury. Experimental Neurology. 346, 113854(2021).
  22. Naomi, R., Rusli, R. N. M., Teoh, S. H., Bahari, H., Zakaria, Z. A. Remodulation effect of elateriospermum tapos yoghurt on metabolic profile of maternal obesity induced cognitive dysfunction and anxiety-like behavior in female offspring-an in vivo trial on sprague dawley rats. Foods (Basel, Switzerland). 12 (8), (2023).
  23. Naomi, R., et al. The role of elateriospermum tapos yoghurt in mitigating high-fat dietary cause of maternal obesity-an experimental study. Frontiers In Endocrinology. 14, 1131830(2023).
  24. Mukonowenzou, N. C., Dangarembizi, R., Chivandi, E., Nkomozepi, P., Erlwanger, K. H. Administration of ursolic acid to new-born pups prevents dietary fructose-induced non-alcoholic fatty liver disease in sprague dawley rats. Journal of Developmental Origins of Health and Disease. 12 (1), 101-112 (2021).
  25. Wei, W., et al. Neuroprotective effect of verbascoside on hypoxic-ischemic brain damage in neonatal rat. Neuroscience Letters. 711, 134415(2019).
  26. Taiyi, W., Ziyu, H. Anatomical Atlas of Experimental Animals in Chinese and English. , Liaoning Fine Arts Publishing House; Shenyang: Liaoning Science and Technology Press. Shenyang. (2000).
  27. Na, X. Study on the sensitization rule of dorsal acupoints in children with spastic cerebral palsy based on infrared thermal imaging technology and the effect of massage intervention. , (2021).
  28. China Association for Acupuncture and Moxibustion. Names and localization of commonly used acupoints in laboratory animals Part 2: Rats. Acupuncture Research. 46 (04), 351-352 (2021).
  29. Yinghua, S., Xiantao, T. Effect of spinal manipulation on the expression of growth hormone and its receptor protein in hypothalamus of infant rat with cerebral palsy. Sichuan Traditional Chinese Medicine. 39 (02), 55-59 (2021).
  30. Qi, H., et al. Effect of spinal manipulation on learning and memory in infant rat with cerebral palsy and its mechanism. Guide to Traditional Chinese Medicine. 24 (11), 36-39 (2018).
  31. Tai, W. -C., Burke, K. A., Dominguez, J. F., Gundamraj, L., Turman, J. E. Growth deficits in a postnatal day 3 rat model of hypoxic-ischemic brain injury. Behavioural Brain Research. 202 (1), 40-49 (2009).
  32. Huang, L., et al. Animal models of hypoxic-ischemic encephalopathy: Optimal choices for the best outcomes. Reviews In the Neurosciences. 28 (1), 31-43 (2017).
  33. Lyu, H., et al. A new hypoxic-ischemic encephalopathy model in neonatal rats. Heliyon. 7 (12), e08646(2021).
  34. Hegazi, M. A., et al. Growth hormone/insulin-like growth factor-1 axis: A possible non-nutritional factor for growth retardation in children with cerebral palsy. Jornal de Pediatria. 88 (3), 267-274 (2012).
  35. Boboc, I. K. S., et al. A preclinical systematic review and meta-analysis of behavior testing in rat models of ischemic stroke. Life. 13 (2), Basel, Switzerland. 567(2023).
  36. Lubrich, C., Giesler, P., Kipp, M. Motor behavioral deficits in the cuprizone model: Validity of the rotarod test paradigm. International Journal of Molecular Sciences. 23 (19), 11342(2022).
  37. Tan, Y., et al. Vof-16 knockout improves the recovery from hypoxic-ischemic brain damage of neonatal rats. Brain Research. 1748, 147070(2020).
  38. Xiantao, T., Pengyue, Z., Xinghe, Z. Construction and application of selective spinal manipulation in the treatment of children with cerebral palsy. China's Scientific and Technological Achievements. 23 (9), 1-2 (2022).
  39. Matos, L. C., Machado, J., Greten, H. J., Monteiro, F. J. Changes of skin electrical potential in acupoints from ren mai and du mai conduits during qigong practice: Documentation of a clinical phenomenon. Journal of Bodywork and Movement Therapies. 23 (4), 713-720 (2019).
  40. Levkovets, I. L., Kiryanova, V. V. Systemic and pathogenetic approach: A new look at traditional Chinese medicine. Voprosy Kurortologii, Fizioterapii, I Lechebnoi Fizicheskoi Kultury. 99 (1), 80-88 (2022).
  41. Efferth, T., Xu, A. -L., Lee, D. Y. W. Combining the wisdoms of traditional medicine with cutting-edge science and technology at the forefront of medical sciences. Phytomedicine: International Journal of Phytotherapy and Phytopharmacology. 64, 153078(2019).
  42. Zhang, Z., et al. Correlated sensory and sympathetic innervation between the acupoint bl23 and kidney in the rat. Frontiers In Integrative Neuroscience. 14, 616778(2020).
  43. Zhu, X., et al. Effects of electroacupuncture at st25 and bl25 in a sennae-induced rat model of diarrhoea-predominant irritable bowel syndrome. Acupuncture In Medicine: Journal of the British Medical Acupuncture Society. 35 (3), 216-223 (2017).
  44. Gimarc, K., Yandow, S., Browd, S., Leibow, C., Pham, K. Combined selective dorsal rhizotomy and single-event multilevel surgery in a child with spastic diplegic cerebral palsy: A case report. Pediatric Neurosurgery. 56 (6), 578-583 (2021).
  45. Zhang, W. -B., Wang, Y. -P., Li, H. -Y. Analysis on correlation between meridians and viscera in book the yellow emperor's internal classic. Acupuncture Research. 43 (7), 424-429 (2018).
  46. Wang, Y. -P., Hou, X. -S. Discussion on the classification of acupoints. Chinese Acupuncture & Moxibustion. 39 (10), 1069-1072 (2019).
  47. Chen, R. -X., Kang, M. -F. Clinical application of acupoint heat-sensitization. Chinese Acupuncture & Moxibustion. 27 (3), 199-202 (2007).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Przeglądaj więcej artykułów

Selektywna manipulacja kręgosłupamodel szczura niemowlęcegotradycyjna medycyna chińskaterapia zewnętrznapoprawa funkcji motorycznychwydzielanie hormonu wzrostuanaliza zachowania zwierzątstymulacja punktów akupunkturowych kręgosłupapediatryczne zaburzenia neurologiczne
Wspomaganie rozwoju i wzrostu niemowląt szczurów z porażeniem mózgowym za pomocą selektywnych manipulacji kręgosłupa
Skontaktuj się z nami
Poleć bibliotece

Prywatność

Warunki korzystania z usługi

Zasady

Prawa autorskie © 2026 MyJoVE Corporation. Wszelkie prawa zastrzeżone.