Tutaj prezentujemy protokół dla zautomatyzowanego systemu hodowli komórek. Ten zautomatyzowany system hodowli zmniejsza nakład pracy i przynosi korzyści użytkownikom, w tym naukowcom niezaznajomionym z obsługą indukowanych pluripotencjalnych komórek macierzystych (iPS), od utrzymania komórek iPS po różnicowanie w różne typy komórek.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Zautomatyzowany system hodowli do utrzymywania i różnicowania pluripotencjalnych komórek macierzystych indukowanych przez człowieka
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Ludzkie indukowane pluripotencjalne komórki macierzyste (hiPSC) o nieskończonej zdolności do samoproliferacji mają zastosowanie w wielu dziedzinach, w tym w wyjaśnianiu rzadkich chorób patologicznych, opracowywaniu nowych leków i medycynie regeneracyjnej mającej na celu odbudowę uszkodzonych narządów. Mimo to społeczne wdrażanie hiPSC jest nadal ograniczone. Wynika to częściowo z trudności w odtworzeniu zróżnicowania w kulturze, nawet przy użyciu zaawansowanej wiedzy i wyrafinowanych umiejętności technicznych, ze względu na wysoką wrażliwość iPSC na drobne zmiany środowiskowe. Zastosowanie zautomatyzowanego systemu hodowli może rozwiązać ten problem. Eksperymentów o wysokiej odtwarzalności, niezależnych od umiejętności badacza, można oczekiwać zgodnie z procedurą wspólną dla różnych instytutów. Chociaż wcześniej opracowano kilka zautomatyzowanych systemów hodowli, które mogą utrzymywać kultury iPSC i indukować różnicowanie, systemy te są ciężkie, duże i kosztowne, ponieważ wykorzystują humanizowane, wieloprzegubowe ramiona robotów. Aby rozwiązać powyższe problemy, opracowaliśmy nowy system wykorzystujący prosty system szyn ślizgowych osi x-y-z, dzięki czemu jest on bardziej kompaktowy, lżejszy i tańszy. Ponadto użytkownik może łatwo modyfikować parametry w nowym systemie, aby opracowywać nowe zadania manipulacyjne. Po ustaleniu zadania wszystko, co użytkownik musi zrobić, to przygotować iPSC, wcześniej dostarczyć odczynniki i materiały eksploatacyjne potrzebne do wykonania żądanego zadania, wybrać numer zadania i określić czas. Potwierdziliśmy, że system może utrzymywać iPSC w stanie niezróżnicowanym przez kilka przejść bez komórek zasilających i różnicować się w różne typy komórek, w tym kardiomiocyty, hepatocyty, progenitory nerwowe i keratynocyty. System umożliwi przeprowadzanie wysoce powtarzalnych eksperymentów w różnych instytucjach bez konieczności zatrudniania wykwalifikowanych badaczy i ułatwi społeczne wdrażanie hiPSC w szerszym zakresie dziedzin badawczych poprzez zmniejszenie przeszkód dla nowych uczestników.
Wprowadzenie
Ten artykuł ma na celu przedstawienie rzeczywistych i szczegółowych procedur postępowania z automatycznym systemem hodowli ludzkich indukowanych pluripotencjalnych komórek macierzystych (iPSC), które wyprodukowaliśmy współpracując z firmą, oraz pokazanie reprezentatywnych wyników.
Od czasu publikacji artykułu w 2007 roku, iPSC przyciąga uwagę na całym świecie1. Ze względu na jego największą cechę, jaką jest zdolność do różnicowania się w dowolny typ komórki somatycznej, oczekuje się, że znajdzie zastosowanie w różnych dziedzinach, takich jak medycyna regeneracyjna, wyjaśnianie przyczyn trudnych do opanowania chorób i opracowywanie nowych leków terapeutycznych2,3. Ponadto wykorzystanie ludzkich komórek somatycznych pochodzących z iPSC może ograniczyć liczbę eksperymentów na zwierzętach, które podlegają znacznym ograniczeniom etycznym. Chociaż do badań nad nowymi metodami z wykorzystaniem iPSC stale potrzebne są liczne jednorodne komórki iPS, zarządzanie nimi jest zbyt pracochłonne. Co więcej, obsługa iPSC jest trudna ze względu na jego wysoką wrażliwość, nawet na subtelne zmiany kulturowe i środowiskowe.
Aby rozwiązać ten problem, oczekuje się, że zautomatyzowane systemy hodowli będą wykonywać zadania zamiast ludzi. Niektóre grupy opracowały kilka zautomatyzowanych systemów hodowli ludzkich pluripotencjalnych komórek macierzystych do utrzymania i różnicowania komórek i opublikowały swoje osiągnięcia4,5,6. Systemy te wyposażone są w wieloprzegubowe ramiona robotyczne. Ramiona robotyczne mają nie tylko zaletę polegającą na tym, że w dużym stopniu naśladują ruchy ludzkiego ramienia, ale także na tym, że wymagają wyższych kosztów za ramię (ramiona), większego i cięższego opakowania systemu oraz czasochłonnych wysiłków edukacyjnych inżynierów w celu uzyskania ukierunkowanych ruchów7,8. Aby ułatwić wprowadzenie aparatury do większej liczby placówek badawczych w punktach ekonomicznych, kosmicznych i zużycia zasobów ludzkich, opracowaliśmy nowatorski zautomatyzowany system hodowli do utrzymywania i różnicowania iPSC na różne typy komórek9.
Naszym uzasadnieniem dla nowego systemu było przyjęcie systemu szyn osi X-Y-Z zamiast wieloprzegubowych ramion robotycznych9. Aby zastąpić złożone funkcje przypominające dłoń w ramionach robotycznych, zastosowaliśmy nowy pomysł w tym systemie, który może automatycznie zmieniać trzy typy określonych funkcjonalnych końcówek ramion. W tym miejscu wskazujemy również, w jaki sposób użytkownicy mogą łatwo tworzyć harmonogramy zadań za pomocą prostych zamówień w oprogramowaniu ze względu na brak wymagań dotyczących wkładu inżynierów w całym procesie.
Jeden z systemów hodowli robotycznej zademonstrował tworzenie ciał embrionalnych przy użyciu 96-dołkowych płytek jako agregatów komórek 3D do różnicowania4. Opisany tutaj system nie obsługuje płytek 96-dołkowych. Jeden z nich osiągnął obecną ocenę dobrej praktyki produkcyjnej (cGMP) przy użyciu linii komórkowej, chociaż nie była to ludzka pluripotencjalna komórka macierzysta 5. Opisany tutaj zautomatyzowany system hodowli został opracowany w konkretnym celu, jakim jest pomoc w eksperymentach laboratoryjnych (Rysunek 1). Ma jednak wystarczająco dużo systemów, aby utrzymać poziom czystości równoważny szafie bezpieczeństwa poziomu IV.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
Komisja Etyki Uniwersytetu Medycznego Kansai zatwierdziła wytwarzanie i używanie zdrowych iPSC pochodzących od ochotników o nazwie KMUR001 (zatwierdzenie nr 2020197). Dawca, który został otwarcie zrekrutowany, wyraził formalną świadomą zgodę i zgodził się na naukowe wykorzystanie komórek.
UWAGA: Obecny interfejs (specjalne oprogramowanie o nazwie "ccssHMI" działające pod systemem operacyjnym Windows XP) jest podstawowym ekranem operacyjnym. Pod wspomnianym interfejsem rozmieszczony jest szereg zakładek, które pozwalają użytkownikom inicjować różne operacje.
1. Operacje wczytywania
- Kliknij przycisk Ładowanie na górnym ekranie oprogramowania. Kliknij przycisk Rozpoczęcie przygotowania do wczytywania.
- Umieść naczynia lub talerze, które mają zostać wprowadzone do urządzenia, w odpowiednim miejscu w urządzeniu.
UWAGA: Informacje niezbędne do identyfikacji naczynia powinny być umieszczone na każdej pokrywie. - Ręcznie zamknąć przednią szybę przesuwną i nacisnąć mechaniczny przycisk potwierdzenia bezpieczeństwa.
- Wybierz rodzaj i ilość naczyń lub talerzy w oprogramowaniu.
- Kliknij przycisk Przygotowanie do załadunku zakończone. Kliknij przycisk Wczytywanie Start.
- Po załadowaniu anteny do systemu wybierz w oprogramowaniu informacje na czaszy, takie jak z komórkami iPS lub bez komórek iPS. Rejestruj notatki dotyczące każdej potrawy w oprogramowaniu.
- Kliknij przycisk Rejestracja na końcu, aby zakończyć operację ładowania.
2. Operacja rozładunku
- Kliknij przycisk Rozładuj na górnym ekranie oprogramowania. Wybierz naczynia do usunięcia w oprogramowaniu.
- Po wybraniu potraw kliknij przycisk Rozpoczęcie przygotowania do rozładunku. Kliknij przycisk Rozpoczęcie rozładowywania.
- Po przeniesieniu szalki (naczyń) z inkubatora na stół warsztatowy w systemie, naciśnij przycisk Wyjmowanie naczynia.
- Ręcznie otwórz przednie okno przesuwne i wyjmij naczynia. Ręcznie zamknąć przednią szybę przesuwną i nacisnąć mechaniczny przycisk potwierdzenia bezpieczeństwa.
3. Uzupełnienie materiałów eksploatacyjnych: pipety, probówki i medium
- Aby uzupełnić materiały eksploatacyjne, takie jak pipety, probówki i nośniki, kliknij przycisk Materiały eksploatacyjne na górnym ekranie oprogramowania, a następnie wybierz artykuł, który chcesz uzupełnić.
- Pipety
- Kliknij przycisk Pipeta. Wybierz przycisk Uzupełnij.
- Wybierz stojak, który użytkownik chce uzupełnić w oprogramowaniu. Kliknij przycisk Uzupełnij Start.
- Po upewnieniu się, że pokrywa schowka na pipety na stole warsztatowym jest otwarta, ręcznie otwórz przednie okno przesuwne i w razie potrzeby uzupełnij pipety.
- Ręcznie zamknąć przednią szybę przesuwną i nacisnąć mechaniczny przycisk potwierdzenia bezpieczeństwa. Kliknij przycisk Uzupełnienie zakończone.
- Kliknij przycisk Ustawienia uzupełniania zapasów i wprowadź informacje dotyczące uzupełnienia, a następnie kliknij przycisk Rejestracja.
- Kliknij przycisk Uzupełnienie zakończone.
- Rury
- Kliknij przycisk Rura. Wybierz przycisk Uzupełnij.
- Wybierz stojak, który użytkownik chce uzupełnić w oprogramowaniu. Kliknij przycisk Uzupełnij Start.
- Po potwierdzeniu, że stojak przesunął się na górę, kliknij przycisk Uzupełnij rurkę.
- Ręcznie otwórz przednie okno przesuwne i w razie potrzeby uzupełnij rurki.
- Ręcznie zamknąć przednią szybę przesuwną i nacisnąć mechaniczny przycisk potwierdzenia bezpieczeństwa.
- Kliknij przycisk Uzupełnienie zakończone.
- Kliknij przycisk Ustawienia uzupełniania zapasów i wprowadź informacje dotyczące uzupełnienia, a następnie kliknij przycisk Rejestracja. Kliknij przycisk Zamknij.
- Średni
- Kliknij przycisk Średni. Wybierz przycisk Uzupełnij w oprogramowaniu.
- Wybierz jeden stojak z trzech, który użytkownicy chcą uzupełnić. Kliknij przycisk Uzupełnij Start.
- Po upewnieniu się, że pokrywa schowka na nośnik została otwarta, ręcznie otwórz przednie okno przesuwne i uzupełnij nośnik.
- Ręcznie zamknąć przednią szybę przesuwną i nacisnąć mechaniczny przycisk potwierdzenia bezpieczeństwa.
- Kliknij przycisk Uzupełnienie zakończone.
- Kliknij przycisk Uzupełnij i wprowadź informacje o nośniku, w tym nazwę i ilość nośnika. W razie potrzeby wprowadź dodatkowe komentarze.
- Kliknij przycisk Rejestracja.
- Kliknij przycisk Zamknij.
- Pipety
4. Wybór zadania
- Kliknij przycisk Zadanie na górnym ekranie oprogramowania.
- Wybierz przycisk Ustawienia zadania. Wybierz żądane zadanie z listy zadań i kliknij przycisk Następny krok.
- Określ datę i godzinę wykonania zadania, a następnie kliknij przycisk Rejestracja. Wybierz danie lub talerz do wykonania zadania, a następnie kliknij przycisk Rejestracja.
- Po ponownym potwierdzeniu wybranego zadania kliknij przycisk Rejestracja. Upewnij się, że zadanie zostało zarejestrowane na następnym ekranie.
- W razie potrzeby ustaw następne zadanie w ten sam sposób.
- Kliknij przycisk Start na końcu. Następnie zadanie rozpocznie się automatycznie w określonym dniu i godzinie.
UWAGA: Natychmiast po zakończeniu każdego zadania automatycznie włączają się lampy UV (umieszczone po dwóch stronach okapu), a po 5-30 minutach, zgodnie z ustawieniem pomocniczym, są wyłączane, aby utrzymać okap w stanie aseptycznym. Aby zatrzymać, użytkownicy mogą kliknąć przycisk Start. - Jeśli użytkownicy chcą anulować zaplanowane zadanie z wyprzedzeniem, kliknij przycisk Zatrzymaj.
- Po wybraniu zadania, które ma zostać przerwane, kliknij przycisk Edytuj zadanie.
- Kliknij przycisk Anuluj zadanie. Upewnij się, że zadanie zostało usunięte na następnym ekranie.
5. Sprawdź zdjęcia komórek
- Każde zadanie obejmuje obserwacje mikroskopowe (robienie zdjęć) przed i po pracy nad zadaniem. Obserwuj postęp hodowli komórkowej na zdjęciach, włączając zadanie fotografii mikroskopowej przed lub po każdym zadaniu.
- Wybierz wstępnie ustawione programy zadań, w tym wybór wielu określonych lokalizacji naczynia lub płytki studzienki z wyprzedzeniem w celu obserwacji w stałym punkcie w celu monitorowania tej samej lokalizacji w czasie.
6. Przejście i różnicowanie
- Postępuj zgodnie z instrukcjami w sekcjach 1-5 i ustaw automatyczny system hodowli komórkowej tak, aby przeprowadzał pasażowanie i różnicowanie. Ustawienia przyrządów do pasażowania, różnicowania kardiomiocytów, różnicowania hepatocytów, różnicowania neuronalnych komórek prekursorowych i różnicowania keratynocytów przedstawiono odpowiednio w Tabeli 1, Tabeli 2, Tabeli 3, Tabeli 4 i Tabeli 5.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
Utrzymanie ludzkich indukowanych pluripotencjalnych komórek macierzystych
Wykorzystaliśmy trzy linie hPSC (RIKEN-2F, 253G1 oraz KMUR001). Zoptymalizowaliśmy protokół utrzymania poprzez codzienne eksperymenty wykonywane ręcznie, a następnie dodatkowo zoptymalizowaliśmy szczegółowe programy poprzez siedem wstępnych eksperymentów przeprowadzonych przez system. Na przykład naprężenia ścinające wywołane prędkością przepływu cieczy z różnych pipet obsługiwanych przez ludzi i system są bardzo różne; dlatego...
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Krytycznym krokiem w protokole jest to, że jeśli użytkownik znajdzie jakiekolwiek usterki, kliknij przycisk Anuluj, Zatrzymaj lub Zresetuj w dowolnym momencie i zacznij od pierwszego kroku. Oprogramowanie pozwala uniknąć błędów ludzkich, w tym podwójnej rezerwacji, otwierania drzwi, gdy zadania systemu są aktywne, oraz braku uzupełniania zapasów. Innym krytycznym punktem dla udanego i skutecznego różnicowania do pożądanej komórki somatycznej jest właściwy dobór pluripotencjalnych linii komórek macierzystych, ponieważ każ...
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Autor nie ma nic do zdradzienia.
Podziękowania
To badanie zostało wsparte grantem z Centrum Promocji Nowego Biznesu, Panasonic Production Engineering Co., Ltd., Osaka, Japonia.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| 0,15% frakcja albuminy surowicy bydlęcej V | Fuji Film Wako Chemical Inc., Miyazaki, Japonia | 9048-46-8 | |
| 1% GlutaMAX | Thermo Fisher Scientific | 35050061 | |
| 10 cm talerze plastikowe | Corning Inc., NY, Stany Zjednoczone | 430167 | |
| 253G1 | RKEN Bioresource Research Center | HPS0002 | |
| 2-merkaptoetanol | Thermo Fisher Scientific | 21985023 | |
| Aktynina mysz | Abcam | ab9465 | |
| Activin A | Nacali Tesque | 18585-81 | |
| Adenina | Thermo Fisher Scientific | A14906.30 | |
| Albumina królik | Dako | A0001 | |
| Kwas all-trans retinowy | Fuji Film Wako Chemical Inc. | 186-01114 | |
| Zautomatyzowany system hodowli | Panasonic | ||
| B-27 suplement | Thermo Fisher Scientific | 17504044 | |
| bFGF | Fuji Film Wako Chemical Inc. | 062-06661 | |
| BMP4 | Thermo Fisher Scientific | PHC9531 | |
| Albumina surowicy bydlęcej | Merck | 810037 | |
| CHIR-99021 | MCE, NJ, Stany Zjednoczone #HY-10182 | 252917-06-9 | |
| Zdefiniowany keratynocyt-SFM | Thermo Fisher Scientific | 10744019 | Ludzkie podłoże keratynocytowe |
| Deksametazon | Merck | 266785 | |
| Dihexa | TRC, Ontario, Kanada | 13071-60-8 | rac-1,2-diheksadyloglicerol |
| Jednorazowy hemocytometr | CountessTM Szkiełka z komorą do liczenia komórek, Thermo Fisher Scientific | C10228 | |
| Dorsomorphin | Thermo Fisher Scientific | 1219168-18-9 | |
| Dulbecco' s zmodyfikowany Eagle średni/F12 | Fuji Film Wako Chemical Inc. | ||
| EGF | Fuji Film Wako Chemical Inc. | 053-07751 | |
| Niezbędny 8 | Thermo Fisher Scientific | A1517001 | Pożywka dla ludzkich pluripotencjalnych komórek macierzystych |
| Surowica bydlęca | Biowest, FL, Stany Zjednoczone | S140T | |
| FGF-basic | Nacalai Tesque Inc. | 19155-07 | |
| Forskolin | Thermo Fisher Scientific | J63292. | |
| Glutamina | Thermo Fisher Scientific 25030081 | Suplement glutaminy | |
| Kozi IgG(H+L) AlexaFluo546 | Thermo Scientific | A11056 | |
| HNF-4A koza | Santacruz | 6556 | |
| Hydrokortyzon | Thermo Fisher Scientific | A16292.06 | |
| Hydrokortyzon 21-hemibursztynian | Merck | H2882 | |
| iMatrix511 Jedwab | Nippi Inc., Tokio, Japonia | 892 021 | Macierz hodowli komórkowych |
| Insulina-transferyna-selen | Thermo Fisher Scientific | 41400045 | |
| Keratyna 1 mysz | Santacruz | 376224 | |
| Keratyna 10 królik | BioLegend | 19054 | |
| KMUR001 | Uniwersytet Medyczny Kansai | Komórki iPS pochodzące od pacjenta | |
| Zamiennik serum nokautującego | Thermo Fisher Scientific | 10828010 | |
| 2-fosforan L-askorbinowy | A8960, Merck | A8960 | |
| Leibovitz' s L-15 średni | Fuji Film Wako Chemical Inc. | 128-06075 | |
| Matrigel | Corning Inc. | ||
| Mysia IgG(H+L) AlexaFluo488 | Suplement Thermo Scientific | A21202 | |
| N-2 | Thermo Fisher Scientific | 17502048 | |
| Nestin mysz | Santacruz | 23927 | |
| Podłoże neuropodstawowe | Thermo Fisher Scientific | 21103049 | |
| Neurofilament królik | Chemicon | AB1987 | |
| Neutristem | Sartrius AG, Gö ttingen, Niemcy | 05-100-1A | pożywka do hodowli komórkowych |
| 3/4 października mysz | BD | 611202 | |
| PBS(-) | Nacalai Tesque Inc., Kioto, Japonia | 14249-24 | |
| IgG królika (H+L) AlexaFluo488 | Thermo Scientific | A21206 | |
| IgG królika (H+L) AlexaFluo546 | Thermo Scientific | A10040 | |
| Rekombinowana albumina ludzka | A0237, Merck, Darmstadt, Niemcy | A9731 | |
| Inhibitor kinazy Rho, Y-27632 | Sellec Inc., Tokio, Japonia | 129830-38-2 | |
| RIKEN 2F | RKEN Bioresource Research Center | HPS0014 | niezróżnicowane hiPSC |
| Specyfikacja RPMI 1640 | Thermo Fisher Scientific #11875 | 12633020 | |
| SB431542 | Thermo Fisher Scientific | 301836-41-9 | |
| L-askorbinian sodu | Merck | A4034-100G | |
| SSEA-4 mysz | Millipore | MAB4304 | |
| StemFit AK02N | Ajinomoto, Tokio, Japonia | Pożywka do hodowli komórkowych | AK02 |
| TnT królik | Abcam | ab92546 | |
| TRA 1-81 mysz | Millipore | MAB4381 | |
| Trijodotyronina | Thermo Fisher Scientific | H34068.06 | |
| TripLETM ekspresowy enzym | Thermo Fisher Scientific, Waltham, MA, Stany Zjednoczone | 12604013 | |
| Roztwór błękitu trypanowego | Nacalai Tesque, Kioto, Japonia | 20577-34 | |
| Rosół z fosforanu tryptozy | Merck | T8782-500G | |
| Wnt-C59 | Bio-techne, NB, Wielka Brytania | 5148 | |
β  Tublin mysz | Promega | G712A |
Bibliografia
- Okita, K., et al. A more efficient method to generate integration-free human iPS cells. Nature Methods. 8 (5), 409-412 (2011).
- Tanaka, T., et al. In vitro pharmacologic testing using human induced pluripotent stem cell-derived cardiomyocytes. Biochemical and Biophysical Research Communications. 385 (4), 497-502 (2009).
- Egashira, T., et al. Disease characterization using LQTS-specific induced pluripotent stem cells. Cardiovascular Research. 95 (4), 419-429 (2012).
- Sasamata, M., et al. Establishment of a robust platform for induced pluripotent stem cell research using Maholo LabDroid. SLAS technology. 26 (5), 441-453 (2021).
- Tristan, C. A., et al. Robotic high-throughput biomanufacturing and functional differentiation of human pluripotent stem cells. Stem Cell Reports. 16 (12), 3076-3092 (2021).
- Konagaya, S., Ando, T., Yamauchi, T., Suemori, H., Iwata, H. Long-term maintenance of human induced pluripotent stem cells by automated cell culture system. Scientific Reports. 5, 16647(2015).
- McClymont, D. W., Freemont, P. S. With all due respect to Maholo, lab automation isn't anthropomorphic. Nature Biotechnology. 35 (4), 312-314 (2017).
- Gonzalez, F., Zalewski, J. Teaching joint-level robot programming with a new robotics software tool. Robotics. 6 (4), 41(2017).
- Bando, K., Yamashita, H., Tsumori, M., Minoura, H., Okumura, K., Hattori, F. Compact automated culture system for human induced pluripotent stem cell maintenance and differentiation. Frontiers in Bioengineering and Biotechnology. 10, 1074990(2022).
- Tohyama, S., et al. Glutamine oxidation is indispensable for survival of human pluripotent stem cells. Cell Metabolism. 23 (4), 663-674 (2016).
- Yamashita, H., Fukuda, K., Hattori, F. Hepatocyte-like cells derived from human pluripotent stem cells can be enriched by a combination of mitochondrial content and activated leukocyte cell adhesion molecule. JMA journal. 2 (2), 174-183 (2019).
- Shimojo, D., et al. Rapid, efficient and simple motor neuron differentiation from human pluripotent stem cells. Molecular Brain. 8 (1), 79(2015).
- Nishimoto, R., Kodama, C., Yamashita, H., Hattori, F. Human induced pluripotent stem cell-derived keratinocyte-like cells for research on Protease-Activated Receptor 2 in nonhistaminergic cascades of atopic dermatitis. The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. 384 (2), 248-253 (2023).
- International Stem Cell Initiative. Screening ethnically diverse human embryonic stem cells identifies a chromosome 20 minimal amplicon conferring growth advantage. Nature Biotechnology. 29 (12), 1132-1144 (2011).
- Keller, A., et al. Genetic and epigenetic factors which modulate differentiation propensity in human pluripotent stem cells. Human Reproduction Update. 24 (2), 162-175 (2018).
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
