Artykuł metodologiczny

Interwencja Tuina w szczurzym modelu choroby zwyrodnieniowej stawu kolanowego wywołanym wstrzyknięciem monojodooctanu sodu

3.1K wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/65770

⸱

12 stycznia 2024

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Longhua Hospital Affiliated to Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, 2Shuguang Hospital Affiliated to Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, 3School of Acupuncture-Moxibustion and Tuina, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, 4School of Traditional Chinese Medicine, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, 5Yueyang Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, 6Shanghai Municipal Hospital of Traditional Chinese Medicine, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine

* These authors contributed equally

W tym artykule

Podsumowanie

Ten protokół opisuje metody interwencji Tuina w szczurzym modelu choroby zwyrodnieniowej stawu kolanowego (KOA) wywołanym wstrzyknięciem monojodooctanu sodu, który stanowi punkt odniesienia dla zastosowania Tuina w modelach zwierzęcych KOA. Protokół ten bada również skuteczny mechanizm Tuina dla KOA, a wyniki pomogą promować jego zastosowanie.

Streszczenie

Choroba zwyrodnieniowa stawu kolanowego (KOA), powszechna choroba zwyrodnieniowa stawów, charakteryzuje się przewlekłym bólem i niepełnosprawnością, która może prowadzić do nieodwracalnych uszkodzeń strukturalnych stawu. Badania nad związkiem między chrząstką stawową, mięśniami, błoną maziową i innymi tkankami otaczającymi staw kolanowy w KOA mają ogromne znaczenie. Obecnie zarządzanie KOA obejmuje modyfikacje stylu życia, ćwiczenia, leki i interwencje chirurgiczne; jednak nadal brakuje wyjaśnienia skomplikowanych mechanizmów leżących u podstaw bólu związanego z KOA. W związku z tym ból KOA pozostaje kluczowym wyzwaniem klinicznym i priorytetem terapeutycznym. Stwierdzono, że Tuina ma regulacyjny wpływ na układ motoryczny, odpornościowy i hormonalny, co skłania do zbadania, czy Tuina może złagodzić objawy KOA, spowodowane regulacją w górę czynników zapalnych, a ponadto, czy czynniki zapalne w mięśniach szkieletowych mogą zwiększać postęp KOA.

Losowo wybraliśmy 32 samce szczurów Sprague Dawley (SD) (180-220 g) do czterech grup po osiem zwierząt każda: antyPD-L1+Tuina (grupa A), model (grupa B), Tuina (grupa C) i pozorowana operacja (grupa D). Dla grup A, B i C wstrzyknęliśmy 25 μl roztworu monojodooctanu sodu (MIA) (4 mg MIA rozcieńczone w 25 μl sterylnego roztworu soli fizjologicznej) do prawej jamy stawu kolanowego, a dla grupy D wstrzyknięto taką samą ilość sterylnego fizjologicznego roztworu soli fizjologicznej. Wszystkie grupy oceniano za pomocą najmniej lub najbardziej stresujących testów (próg mechanicznego wycofania łapy, opóźnienie termiczne wycofania łapy, obrzęk prawego stawu kolanowego, wynik Lequesne MG, temperatura skóry) przed wstrzyknięciem oraz 2, 9 i 16 dni po wstrzyknięciu.

Wprowadzenie

Choroba zwyrodnieniowa stawu kolanowego (KOA) jest powszechną chorobą zwyrodnieniową stawów, charakteryzującą się przewlekłym bólem i niepełnosprawnością, a stosunkowo ciężkie KOA prowadzi do nieodwracalnych uszkodzeń strukturalnych stawu1. Wysokie globalne rozpowszechnienie KOA stało się głównym globalnym wyzwaniem dla zdrowia publicznego2,3, co poważnie pogarsza jakość życia pacjentów4,5. Badania wykazały, że KOA dotyka ponad 260 milionów ludzi na całym świecie6. Wraz ze starzeniem się populacji, całkowity wskaźnik rozpowszechnienia KOA w Chinach wynosi aż 17,0% w wieku powyżej 40 lat, co stanowi duże obciążenie dla rodzin osób dotkniętych tą chorobą7,8.

Według medycyny chińskiej, KOA należy do kategorii "paraliż"9, a Klasyka Medycyny Wewnętrznej Żółtego Cesarza kojarzy ścięgna, kości i ciało z paraliżem. Dlatego musimy zwrócić uwagę na połączenie między chrząstką, mięśniami, błoną maziową, a także innymi tkankami wokół stawu kolanowego w KOA. We współczesnej medycynie zarówno zapalenie mięśni, jak i kości, które są głównymi składnikami homeostazy immunologicznej zapalenia stawów, napędza postęp bólu KOA. Jednak większość badań koncentruje się na zapaleniu chrząstki i zapaleniu błony maziowej w stawach kostnych, a brakuje artykułów badających zjawiska zapalne w mięśniach szkieletowych. Dlatego potrzebne są dalsze badania nad rolą mięśni szkieletowych w zapaleniu, aby uzyskać bardziej kompleksowe zrozumienie KOA i dostarczyć pomysłów na skuteczniejsze metody leczenia. W przeglądzie piśmiennictwa stwierdziliśmy, że hamowanie liganda 1 programowanej śmierci czynnika związanego z układem odpornościowym (PD-L1) nasilało progresję KOA10,11 oraz że występowała zróżnicowana ekspresja IL-15 i FOXO1 w mięśniach szkieletowych pacjentów z KOA12, a także znaczne zapalenie mięśni szkieletowych u pacjentów ze schyłkowym stadium KOA, co wiązało się również ze zmianami w chodzie. Wykazano, że mięśnie szkieletowe mogą również wydzielać czynniki ściśle związane z odpornością zapalną, takie jak IL-6, oraz że TNF-α jest również ściśle związany ze szlakiem PD-L1 i KOA13,14,15.

Obecnie, dostępne metody leczenia KOA obejmują kontrolę wagi, ćwiczenia, leki i zabiegi chirurgiczne, które zazwyczaj obejmują zastrzyki dostawowe, leki przeciwbólowe, chirurgię artroskopową i osteotomię okołoprotezową kolana16. Obecnie progresji choroby KOA nie można całkowicie zatrzymać ani odwrócić, a bez jasnego zrozumienia złożonych mechanizmów leżących u podstaw bólu KOA, pacjenci z KOA są narażeni na ryzyko nadużywania leków przeciwbólowych i częstości występowania działań niepożądanych8. Większość strategii leczenia jest skuteczna tylko przez krótki czas i koncentruje się tylko na tymczasowym złagodzeniu objawów, a nie na patogenezie choroby. W związku z tym ból KOA pozostaje priorytetem i wyzwaniem dla leczenia, stanowiąc poważne wyzwanie kliniczne. Jednak Tuina może bezpośrednio stymulować mięśnie szkieletowe wokół chorego stawu w leczeniu KOA i może zapewnić pewne korzyści. W połączeniu z poprzednim opisem, jest to idealna terapia do badania roli tkanki mięśni szkieletowych w KOA, a wyjaśnienie roli tkanki mięśni szkieletowych w zapaleniu może również zapewnić lepsze wsparcie teoretyczne dla Tuina of KOA.

Badania wykazały, że terapia masażem, osteopatyczna terapia manipulacyjna i manipulacja kręgosłupa mogą pomóc złagodzić ból i przywrócić funkcje ciała17,18. Manipulacje te mogą działać na miejscowy stan zapalny i łagodzić skurcze i analgezje poprzez zewnętrzne działanie mechaniczne. Mogą łagodzić ból po całkowitej endoprotezoplastyce stawu kolanowego, zmniejszać stosowanie leków przeciwbólowych, wspomagać rekonwalescencję pooperacyjną i poprawiać równowagę biomechaniczną19. Masaż szwedzki jest możliwy w leczeniu choroby zwyrodnieniowej stawów i może zmniejszyć stres i poprawić jakość życia20. Terapeutyczne działanie leku Tuina na KOA zostało poprzedzone pewnymi badaniami.

W tym eksperymencie nasz zespół będzie badał, czy ekspresja PD-L1 i pokrewnych czynników zapalnych w mięśniach szkieletowych może indukować KOA i promować jego rozwój w oparciu o model KOA indukowany przez MIA u szczurów. Tuina zostanie również wdrożona, aby sprawdzić, czy może złagodzić objawy KOA spowodowane zwiększoną ekspresją czynnika zapalnego. Tuina zostanie połączona z hamowaniem PD-L1 w celu wykazania związku między szlakiem PD-1 za pośrednictwem Tuina w zapaleniu mięśni szkieletowych wpływającym na rozwój KOA i ból, kładąc podwaliny pod dalsze wielopoziomowe badania nad mechanizmami terapeutycznymi interwencji Tuina w KOA.

Podsumowując, ten artykuł opisuje badanie i opracowanie mechanizmów zapalenia mięśni szkieletowych w rozwoju KOA i jego bólu, a także terapeutyczne efekty Tuina na KOA, z perspektywy ekspresji czynnika immunologiczno-zapalnego, w połączeniu ze wskaźnikami behawioralnymi, aby dostarczyć nowoczesnych dowodów badawczych na teorię "nierównowagi ścięgien i kości" w tradycyjnej medycynie chińskiej.

Protokół

Wszystkie eksperymenty zostały zatwierdzone i nadzorowane przez Komitet ds. Opieki nad Zwierzętami i Użytkowania TUniwersytetu Tradycyjnej Medycyny Chińskiej w Szanghaju (numer zatwierdzenia: SYXK2018-0040), co jest zgodne z postanowieniami Deklaracji Helsińskiej Światowego Stowarzyszenia Medycznego.

1. Przygotowanie zwierząt

  1. W pomieszczeniu 32 samce szczurów Sprague Dawley (SD) w wieku 8 tygodni i o wadze 180-220 g w specjalnym aparacie wolnym od patogenów w 12 godzinach światła/12 godzinach ciemności w temperaturze 24 ± 2 °C i wilgotności 60% przy standardowej diecie granulowanej dla gryzoni. Wszystkie czynności doświadczalne na zwierzętach są zgodne z etyką dobrostanu zwierząt doświadczalnych i przepisami dotyczącymi bezpieczeństwa doświadczalnego na zwierzętach.
  2. Losowo podziel szczury na cztery grupy po osiem zwierząt po 1 tydzień karmienia adaptacyjnego: antyPD-L1 + Tuina (grupa A), model (grupa B), Tuina (grupa C) i pozorowana operacja (grupa D).

2. Dostawowe wstrzyknięcie jodoctanu sodu (MIA) w kolano

UWAGA: Z wyjątkiem grupy D, model szczura KOA zostanie przygotowany przez wstrzyknięcie MIA do jamy stawu kolanowego we wszystkich grupach. W przypadku grupy D wstrzyknąć 25 μl sterylnego soli fizjologicznej do prawej jamy stawu kolanowego.

  1. Znieczulij szczura, umieszczając go w klatce znieczulającej, a następnie wprowadzając 2,5% izofluranu, aż do całkowitego znieczulenia. Upewnij się, że zwierzę jest w pełni znieczulone, czekając na moment, w którym młody szczur leży na plecach, jego kończyny przestają się poruszać i nie ma reakcji w postaci szczypania palców u nóg (odruchu pedałowania), odruchu powiekowego i rozluźnienia mięśni.
  2. Dodaj maść do oczu zwierząt domowych i krople do oczu do znieczulonych młodych szczurów, aby zapobiec wysuszeniu oczu.
  3. Ogol prawą tylną kończynę szczurów i zdezynfekuj staw kolanowy trzema naprzemiennymi rundami jodoforu i 75% etanolu.
  4. Aby utrzymać ustandaryzowane warunki eksperymentalne, ostrożnie unieruchom zgięcie kolana pod precyzyjnym kątem 90°, upewniając się, że więzadło rzepki jest skierowane do góry. Następnie wstrzyknąć 25 μl roztworu MIA, składającego się z 4 mg MIA rozcieńczonego w 25 μl sterylnego roztworu soli fizjologicznej do prawej jamy stawu kolanowego szczurów.
    UWAGA: To wstrzyknięcie zostało przeprowadzone za pomocą specjalistycznego mikrowtryskiwacza, zapewniającego dokładność i spójność procedury21,22,23. Włóż szczury z powrotem do klatek, aż się obudzą. Zwierzę, które przeszło operację, nie wraca do towarzystwa innych zwierząt, dopóki w pełni nie wyzdrowieje.
  5. Pod koniec badania należy poddać szczury eutanazji poprzez wstrzyknięcie 1% pentobarbitalu sodu w dawce 100 mg/kg.

3. Implementacja Tuina

UWAGA: Implementacja Tuiny będzie kierowana teorią, że "dla pacjentów z zaburzeniami równowagi ścięgien i kości, ścięgna muszą być najpierw leczone". Obie grupy A i B rozpoczęły interwencję pierwszego dnia po pomyślnej ocenie modelu i obie grupy były operowane raz dziennie przez 14 dni. Pozostałe dwie grupy obserwowano tylko przez 14 dni bez żadnej interwencji. Operatorzy manipulacji muszą być ściśle przeszkoleni przed eksperymentem, aby zapewnić spójność siły, częstotliwości i rytmu.

  1. Dokładnie zlokalizuj punkt akupunktury szczura, w tym EX-LE4, ST35, SP10, ST34, SP9 i GB34 (Rysunek 1 i Tabela 1), gdzie metody ugniatania palcami będą przeprowadzane przy użyciu Akupunktury Eksperymentalnej24.
  2. Zamocuj szczura w pozycji leżącej na sprzęcie do mocowania szczurów.
  3. Po wyciszeniu i rozluźnieniu kończyn dolnych ugniataj EX-LE4 i ST35 chorej kończyny jednocześnie kciukiem i palcem wskazującym przez 4 minuty z prędkością 120-140 razy/min.
  4. Ugniataj mięśnie przednie i przyśrodkowo-boczne chorej kończyny kciukiem i palcem wskazującym przez 3 minuty z prędkością 120-140 razy / min, koncentrując się na SP10, ST34 i mięśniach w pobliżu stawu kolanowego. Podkreśl manipulację tymi sztywnymi mięśniami z intensywnością, aby szczur nie walczył
    5. .
  5. Ugniataj tylne mięśnie łydki chorej kończyny od góry do dołu przez 3 minuty z prędkością 120-140 razy / min za pomocą kciuka, palca wskazującego i palca środkowego. Aby całkowicie odsłonić obszar zabiegowy, użyj palca serdecznego i małego palca, aby przytrzymać staw skokowy chorej kończyny i delikatnie pociągnij chorą kończynę. Skoncentruj się na SP9, GB34 i mięśniach w pobliżu stawu kolanowego, z naciskiem na sztywne mięśnie i intensywność, aby szczur nie walczył
    6. .

4. Pomiar wskaźnika behawioralnego

  1. Pomiar progu bólu mechanicznego podeszwowego
    UWAGA: Zmierz próg bólu mechanicznego podeszwy 1 dzień przed wstrzyknięciem MIA, a także 2, 9 i 16 dni po wstrzyknięciu.
    1. Doprowadzić szczury do pomieszczenia do testów podeszwowych z dnem z siatki ze stali nierdzewnej i plastikowym korpusem klatki w cichym miejscu w temperaturze pokojowej (22 ± 2) °C przez 30 minut adaptacji.
    2. Użyj elektronicznego mechanicznego testera bólu z plastikową igłą testową o średnicy 0,8 mm, aby stymulować środkowy obszar prawej tylnej stopy szczurów w pionie. Równomiernie i stopniowo zwiększaj intensywność stymulacji, aż szczury wykażą reakcje chowania łap i unikania.
    3. Zapisz odczyt ekranu elektronicznego jako mechaniczny próg bólu prawej stopy podeszwowej szczura.
    4. Mierz każdego szczura 5x w odstępach 5 minut.
    5. Usuń wartości maksymalne i minimalne z pięciu wartości. Jako wynik należy przyjąć średnią wartość trzech środkowych wartości za pomocą metody średniej obciętej (tabela 2).
  2. Pomiar progu mechanicznego wycofania łapy
    UWAGA: Zmierz próg mechanicznego wycofania łapy 1 dzień przed wstrzyknięciem MIA, 2, 9 i 16 dni po wstrzyknięciu.
    1. Doprowadzić szczury do ogrzewanego pomieszczenia do testów podeszwowych ze szklanym dnem o temperaturze 30 °C i plastikowym korpusem klatki w cichym otoczeniu w temperaturze pokojowej (22 ± 2) °C przez 30 minut adaptacji.
    2. Stymulować prawą tylną część środkową podeszwy za pomocą urządzenia grzewczego ze źródłem światła w temperaturze stymulacji 65 °C, aż szczur wykaże reakcję wycofania łapy i unikania.
    3. Zapisz odczyt czasu na ekranie elektronicznym jako prawy próg bólu termicznego podeszwy szczura.
    4. Mierz każdego szczura 5 razy w sposób ciągły w odstępach 5 minut.
    5. Usuń wartości maksymalne i minimalne z pięciu wartości. Jako wynik należy przyjąć średnią wartość trzech środkowych wartości za pomocą metody średniej obciętej (tabela 3).

5. Pomiar obrzęku prawego stawu kolanowego

UWAGA: Zmierz obrzęk prawego stawu kolanowego szczurów 1 dzień przed wstrzyknięciem MIA, 2, 9 i 16 dni po wstrzyknięciu.

  1. Znieczulij szczura, umieszczając go w klatce znieczulającej i wystawiając na działanie 2,5% izofluranu, aż zostanie w pełni znieczulony.
  2. Umieść szczura w płaskiej pozycji na stole operacyjnym.
  3. Zmierz szerokość prawego stawu kolanowego za pomocą suwmiarki z noniuszem (Rysunek 2 i Tabela 4).

6. Pomiar wyniku Lequesne MG

UWAGA: Zmierz wynik Lequesne MG u szczurów po 2, 9 i 16 dniach od wstrzyknięcia MIA. Lequesne i wsp. opracowali wskaźnik nasilenia choroby zwyrodnieniowej stawu biodrowego (ISH), który można wykorzystać do oceny skuteczności interwencji terapeutycznych. Bierzemy pod uwagę cztery parametry: stymulację bólu, zmianę chodu, ruchomość stawów i obrzęk stawów.

  1. Przynieś szczury na platformę manipulacyjną w cichym otoczeniu w temperaturze pokojowej (22 ± 2) °C.
  2. Niech dwaj operatorzy, ślepi na siebie nawzajem, zmierzą miejscową reakcję na stymulację bólu, zmianę chodu, ruch stawów i obrzęk stawów.
    1. Stymuluj boczną stronę prawego stawu kolanowego za pomocą plastikowej igły testowej i oceń w skali 0-3 w zależności od odpowiedzi. 0 brak odpowiedzi; 3 dobra odpowiedź; 1 skurcz chorej kończyny; 2 skurcz i skurcz chorej kończyny, któremu towarzyszą łagodne uogólnione reakcje, takie jak drżenie, lizanie i ssanie.
    2. Połóż szczura na stole operacyjnym i obserwuj chód jego prawych kończyn tylnych. Wynik w skali 0-3 zgodnie z odpowiedzią. 0 brak zakłóceń w ruchu chorej kończyny, normalne bieganie i silna praca nóg; 3 chora kończyna nie może uczestniczyć w chodzeniu, dotykać ziemi ani deptać po ziemi; 1 łagodny trekking podczas biegu z silnymi tupnięciami; 2 Chora kończyna uczestniczy w chodzeniu, ale zakłócenia w poruszaniu się szczurów (trekking) są oczywiste.
    3. Zegnij i wyprostuj ręcznie prawy staw kolanowy szczura i obserwuj ruchomość stawu. Wynik w skali 0-3 zgodnie z odpowiedzią. 0 kąt ruchomości stawu większy niż 90°; 3 kąty ruchomości stawów mniejsze niż 15°; 1 kąt ruchomości stawu lub 45°-90°; 2 Kąt ruchomości stawów 15°-45°.
    4. Dotknij prawego stawu kolanowego szczura i porównaj reakcję z reakcją normalnego szczura. Wynik w skali 0-2 zgodnie z odpowiedzią. 0 brak widocznego obrzęku i widocznych oznaczeń kostnych; 2 wyraźne opuchlizny i brak oznaczeń kostnych; 1 łagodny obrzęk i powierzchowne znaczenia kostne.
    5. Dodać te wyniki, aby uzyskać wynik Lequesne MG dla każdego szczura i obliczyć średnią wartość za pomocą metody przycinania (Tabela 5).

7. Pomiar temperatury skóry

UWAGA: Zmierz temperaturę skóry 1 dzień przed wstrzyknięciem MIA oraz 9 i 16 dni po wstrzyknięciu.

  1. Znieczulij szczura, umieszczając go w klatce znieczulającej, a następnie wprowadzając izofluran, aż zostanie w pełni znieczulony.
  2. Umieścić szczura w pozycji bocznej na stole operacyjnym, w temperaturze pokojowej (22 ± 2) °C.
  3. Wyprostuj prawy staw kolanowy, delikatnie chwytając stopę dłonią. Zrób zdjęcie, aby określić temperaturę skóry za pomocą kamery termowizyjnej Filr.
  4. Odczytaj temperaturę skóry stawu kolanowego i wokół stawu kolanowego szczura za pomocą oprogramowania do edycji. Ustaw punkty kontrolne w stawie skokowym i kolanowym, w których temperatura stopniowo spada.

8. Analiza statystyczna

  1. Użyj oprogramowania statystycznego, aby wyrazić dane eksperymentalne w kwartylach.
  2. Użyj metody średniej przycinania, aby poradzić sobie z wartościami odstającymi. Wyniki testów behawioralnych są odnotowywane jako średnia ± błąd standardowy średniej.
  3. Wykonaj test t dla niezależnych prób w celu porównania między grupami. Analizuj dane behawioralne za pomocą dwukierunkowej analizy wariancji powtarzanych miar (ANOVA), a następnie wielokrotnych testów porównawczych Bonferroniego. W przypadku gdy dane nie wykazują normalności lub homoskedastyczności, należy przeprowadzić test nieparametryczny (próbki k Kruskala-Wallisa).
    UWAGA: P < 0,05 wskazuje, że różnice są istotne statystycznie. Wszystkie dane są zgodne z założeniami stosowanych testów statystycznych.

Wyniki

Opisany protokół został wdrożony w warunkach klinicznych w Szpitalu Zintegrowanej Tradycyjnej Medycyny Chińskiej i Medycyny Zachodniej w Yueyang. Rysunek 1 przedstawia dokładną lokalizację punktów akupunkturowych uciskanych u szczurów, a Tabela 1 ilustruje typowe korzyści wynikające ze stymulacji tych punktów. Tabela 2 oraz Tabela 3 dostarczają przekonujących dowodów na znaczne uśmierzenie bólu osiągnięte dzięki terapii Tuina, nawet w przypadku braku inhibicji szlaku PD-1. Wyniki przedstawione w Tabeli 4, Tabeli 5 oraz na Rysunku 2 dodatkowo ilustrują korelację między zastosowaniem terapii Tuina a progresją choroby zwyrodnieniowej stawów kolanowych (KOA), co sugeruje, że terapia manualna może służyć jako podejście wspomagające w poprawie kontroli objawów KOA u szczurów. Każdemu szczurowi w grupie terapii manualnej z anty-PD-L1 (MTA) wstrzyknęliśmy dawkę 200 µg anty-PD-L1 w celu zablokowania szlaku po 3 dniach od indukcji choroby zwyrodnieniowej za pomocą MIA. Następnie szczury poddawano terapii manualnej w punktach akupunkturowych szczura, w tym EX-LE4, ST35, SP10, ST34, SP9 i GB34, co 2 dni przez 2 tygodnie, stosując metody ugniatania palcami po 3 dniach od indukcji choroby zwyrodnieniowej.

Ilustracja punktów akupunktu u szczura, schemat punktów akupunktu GB34, ST35, SP9 na modelu szczura.
Rycina 1: Schemat punktów u szczurów. Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.

Porównanie obrzęku w chorobie zwyrodnieniowej stawów kolanowych; wykres pudełkowy; analiza statystyczna; skuteczność leczenia.
Rycina 2: Różny stopień obrzęku kolan u szczurów. Obrzęk można kontrolować poprzez zastosowanie Tuina. Przed zablokowaniem szlaku PD-L1 zmierzono średnice prawych stawów kolanowych (kolana, w które wstrzyknięto MIA) (19 styczniago), a następnie powtórzono pomiary po 1 tygodniu. Efekty Tuina w kontrolowaniu obrzęku kolana stają się nieistotne po blokadzie PD-L1. *** oznacza P < 0.0001, ** oznacza P < 0.01, * oznacza P < 0.05). Kliknij tutaj, aby wyświetlić powiększoną wersję tej ryciny.

Punkty akupunkturyFunkcje
EX-LE4Łagodzenie obrzęku i bólu kolana
ST35Łagodzenie dysfleksji stawowej
SP10Łagodzenie przyśrodkowego bólu uda
ST34Interwencja w przypadku porażenia stawów
SP9Łagodzenie bólu kolana
GB34Leczenie paraliżu kończyn dolnych

Tabela 1: Efekt stymulacji tych punktów.

Poziom wyjściowy1 tydzień2 tygodnie
Grupa A58.0129.6127.9
(anty-PD-L1 + Tuina)
Grupa B31.762523.52
(model)
Grupa C34.1532.4537.53
(Tuina)
Grupa D40.2643.9351.3
(Operacja pozorowana)

Tabela 2: Porównanie progów bólu mechanicznego między grupami w punkcie wyjściowym (w dniu blokady PD-L1), 1 tydzień oraz 2 tygodnie po skutecznej indukcji. Dane w tabeli stanowią wartości średnie dla każdej grupy zmierzone w danym dniu. Wartość P między dowolnymi dwiema grupami wynosi <0,05, z wyjątkiem wartości P między grupami A i B.

Wartość wyjściowa1 tydzień2 tygodnie
Grupa A9.676.727.82
(anty-PD-L1 + Tuina)
Grupa B7.57.256.39
(model)
Grupa C11.678.639.26
(Tuina)
Grupa D12.810.810.14
(operacja pozorowana)

Tabela 3: Porównanie progów bólu termicznego między grupami w punkcie wyjściowym, 1 tydzień oraz 2 tygodnie po udanej indukcji. Dane w tabeli stanowią wartości średnie dla każdej grupy zmierzone w danym dniu. Wartość P między dowolnymi dwiema grupami wynosi <0,05, z wyjątkiem wartości P między grupami A i B.

Wartość bazowa1 tydzień2 tygodnie
Grupa A10.9611.6810.56
(anty-PD-L1 + Tuina)
Grupa B11.312.1811.79
(model)
Grupa C11.7510.8810.35
(Tuina)
Grupa D10.811.2310.49
(Operacja pozorowana)

Tabela 4: Porównanie obrzęku stawu kolanowego w modelu choroby zwyrodnieniowej stawów między grupami w punkcie wyjściowym, 1 tydzień oraz 2 tygodnie po udanej indukcji. Dane w tabeli stanowią wartości średnie dla każdej grupy zmierzone w danym dniu. Wartość P między dowolnymi dwiema grupami wynosi <0.05, z wyjątkiem wartości P między grupami A i B)

Wartość bazowa1 tydzień2 tygodnie
Grupa A3.134.253.88
(anty-PD-L1 + Tuina)
Grupa B2.634.54.75
(model)
Grupa C2.751.882.25
(Tuina)
Grupa D000
(Operacja pozorowana)

Tabela 5: Porównanie indeksu Lequesne MG pomiędzy grupami w punkcie wyjściowym, w 1. i 2. tygodniu po skutecznej indukcji. Dane w tabeli stanowią wartości średnie dla każdej grupy zmierzone w danym dniu. Wartość P pomiędzy dowolnymi dwiema grupami wynosi <0,05, z wyjątkiem wartości P pomiędzy grupami A i B.

Dyskusja

Badanie to ma na celu ocenę poprawy KOA po interwencji Tuina przy użyciu standaryzowanych wskaźników behawioralnych oraz zbadanie mechanizmów Tuina dla KOA i związku między mięśniami szkieletowymi a KOA. W przeciwieństwie do terapii farmakologicznych i chirurgicznych, Tuina ma pozytywny wpływ regulacyjny na układ motoryczny, odpornościowy i hormonalny. Tuina może łagodzić stany zapalne i ból wywołany chorobą, działając na różne cele. Na przykład, regulując szlak TLR4 i miRNA, może hamować aktywację komórek glejowych, modulować zmienione funkcje mózgu, regulować cytokiny zapalne i tłumić zapalenie obwodowe 25,26,27. W tym samym czasie Tuina może również interweniować w autonomiczny układ nerwowy i oś podwzgórze-przysadka-nadnercza, które są dysfunkcyjne w przewlekłych zaburzeniach bólowych, pomagając w ten sposób przywrócić homeostazę autonomicznego układu nerwowego i wywołać odpowiedź immunoendokrynną, która może złagodzić ból poprzez regulację procesów endokrynologicznych i fizjologicznych 28,29,30. Dodatkowo, gdy Tuina zewnętrznie stymuluje mięśnie, pobudzenie przywspółczulne31 i ciśnienie pozanaczyniowe in vitro powodują skurcz mięśni szkieletowych i rozszerzenie naczyń krwionośnych, co przyczynia się do odpowiedzi zastoinowej i wspomaga metabolizm32,33. Dlatego, jako leczenie niefarmakologiczne i niechirurgiczne, Tuina jest obiecującą terapią łagodzącą KOA.

Dokonaliśmy również przeglądu piśmiennictwa na temat terapeutycznych efektów ćwiczeń aerobowych, tradycyjnej medycyny chińskiej (TCM) i elektroakupunktury w modelu KOA indukowanej jodoctanem sodu (MIA). Ćwiczenia aerobowe mogą hamować apoptozę chondrocytów poprzez regulację ekspresji TRPV5, a połączenie ćwiczeń aerobowych i kapsułek z chlorowodorkiem glukozaminy może być jeszczebardziej skuteczne. Związki oczyszczone z chińskich ziół, takie jak kastycyna i kwas wanilinowy, mogą zmniejszać chorobę zwyrodnieniową stawu kolanowego, zapalenie błony maziowej i zachowania związane z bólem / mediator in vivo. Związki oczyszczone z chińskich ziół, takie jak kastycyna i kwas wanilinowy36, mogą zmniejszać zapalenie błony maziowej KOA i zachowania związane z bólem / mediator w chorobie zwyrodnieniowej stawu kolanowego in vivo. Ponadto kwas wanilinowy może chronić stawy kolanowe poprzez hamowanie aktywacji inflamasomu NLRP337. Ponadto wykazano, że elektroakupunktura hamuje inflamasom NLRP3 i zmniejsza piroptozę, prowadząc do zachowania tkanki chrzęstnej i leczenia KOA38.

W przeciwieństwie do TCM, Tuina wymaga różnych form ruchu w leczeniu klinicznym, łącząc wiele technik i bierny ruch pacjenta, co często stanowi problem dla początkujących praktyków w wyborze odpowiedniej techniki, miejsca działania i siły działania. Ponadto ocena skuteczności po leczeniu jest głównym wyzwaniem w terapii manipulacyjnej, ponieważ w większości ogranicza się do subiektywnych opisów pacjentów, bez obiektywnych danych do oceny metod i praktyk. Dlatego naszym celem było zbadanie mechanizmów zapalenia mięśni szkieletowych w rozwoju KOA i bólu oraz zbadanie efektów terapeutycznych Tuiny na KOA w oparciu o szczurzy model KOA, indukowany MIA, w połączeniu ze wskaźnikami związanymi z czynnikami behawioralnymi i zapalnymi. Jednocześnie, ponieważ Tuina kieruje się teorią, że "dla pacjentów z zaburzeniami równowagi ścięgien i kości ścięgna muszą być najpierw leczone", lista punktów akupunktury szczurów w Akupunkturze Eksperymentalnej zostanie wykorzystana do dokładnego zlokalizowania EX-LE4, ST35, SP10, ST34, SP9 i GB34 w celu wdrożenia metod pocierania palcami. W związku z tym operatorzy wykonujący manipulację powinni zostać ściśle przeszkoleni przed zastosowaniem interwencji, aby zapewnić spójność siły, częstotliwości i rytmu.

Tabele 2 i 3 dostarczają dowodów na to, że ból został znacznie złagodzony przez Tuina bez blokady szlaku PD-1. Wyniki w Tabeli 4, Tabeli 5 i Rycinie 2 dodatkowo pokazują związek między wdrożeniem Tuina a progresją KOA, co sugeruje, że terapia manualna może być dodatkowym leczeniem KOA w celu poprawy objawów KOA u szczurów. Dlatego leczenie lekiem Tuina może być skuteczną interwencją w zwalczaniu progresji KOA; Potrzebne są jednak bardziej dogłębne badania, aby wyjaśnić jego mechanizm.

Co więcej, istnieją pewne ograniczenia tego eksperymentalnego protokołu. Po pierwsze, ponieważ istnieją nadaktywne lub ciche szczury i może wystąpić pewien błąd w pomiarze bólu mechanicznego, każdy pomiar musi być mierzony w regularnych odstępach czasu między każdym pomiarem. Po drugie, ten eksperymentalny projekt ma na celu zbadanie modelu szczurzego KOA indukowanego przez MIA i potrzebne są dalsze badania, aby zilustrować kliniczne efekty terapeutyczne Tuina. Jednak nasz zespół skupił się na wpływie KOA na mięśnie szkieletowe, poprawie mięśni i KOA przez Tuinę oraz związku ze szlakiem PD-1, mając na celu zbadanie mechanizmu interwencji Tuina w KOA. W przyszłości będziemy dążyć do promowania wykonalności, bezpieczeństwa i skuteczności terapii manipulacyjnej oraz prowadzenia dalszych badań nad kliniczną skutecznością leku Tuina na mięśnie szkieletowe. Badając związek między ścięgnami a kośćmi, patogenezę KOA i mechanizmy interwencji terapii manipulacyjnej, mamy również nadzieję zastosować nasze wyniki badań i pomysły do innych chorób.

Oświadczenia

Autorzy oświadczają, że nie występują konflikty interesów.

Podziękowania

To badanie jest wspierane przez Narodową Fundację Nauk Przyrodniczych Chin (NO.82105042, 82205302); Program Doskonałości Podoktorskiej w Szanghaju (NO.2020371); Chińska Fundacja Nauk Podoktoranckich (NR 2021M692156); Szanghajski Program Żeglarski (NO.20YF1450900); Fundacja Naukowa Szpitala Zintegrowanej Tradycyjnej Medycyny Chińskiej i Zachodniej Yueyang (NO.2021yygq03). Fundatorzy nie odgrywali żadnej roli w projektowaniu, realizacji ani pisaniu badania.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
AB80276 AB80276
IITC/Nauki przyrodnicze, Woodland Hills, Kalifornia, Stany ZjednoczoneALMEMO 2450
GraphPad Prism 9.0OprogramowanieOprogramowanie do analizy statycznej
jodoctan soduSigma-Aldrich IncI9148Przekształcony w normalną sól fizjologiczną do wstrzykiwań
pentasoorbitalnego soduSigma-Aldrich IncP3761
Sprague Dawley (SD) samce szczurówShanghai Jihui Experimental Animal Breeding Co., LtdNo. SCXK (Hu) 2017-0012
termiczny tester przeciwbólowyIITC/Life ScienceModel 390
Elektryczny estezjometr von Freya GraphPad

Bibliografia

  1. Katz, J. N., et al. Diagnosis and treatment of hip and knee osteoarthritis: A review. JAMA. 325 (6), 568-578 (2021).
  2. Culvenor, A. G., et al. Prevalence of knee osteoarthritis features on magnetic resonance imaging in asymptomatic uninjured adults: a systematic review and meta-analysis. Br J Sports Med. 53 (20), 1268-1278 (2019).
  3. Safiri, S., et al. regional and national burden of osteoarthritis 1990-2017: a systematic analysis of the Global Burden of Disease Study 2017. Ann Rheum Dis. 79 (6), 819-828 (2020).
  4. Kong, L., et al. Traditional Chinese exercises on pain and disability in middle-aged and elderly patients with neck pain: a systematic review and meta-analysis of randomized controlled trials. Front Aging Neurosci. 14, 912-945 (2022).
  5. Nevitt, M. C., et al. Symptoms of knee instability as risk factors for recurrent falls. Arthritis Care Res (Hoboken). 68 (8), 1089-1097 (2016).
  6. Hunter, D. J., March, L., Chew, M. Osteoarthritis in 2020 and beyond: a Lancet Commission). Lancet. 396 (10264), 1711-1712 (2020).
  7. Fan, Z. J., et al. Interpretation and evaluation of the Chinese Osteoarthritis Treatment Guidelines (2021 Edition). Chinese Journal of Evidence-Based Medicine. 22 (06), 621-627 (2022).
  8. Chen, W., et al. Design of an epidemiological survey on the prevalence of osteoarthritis of the knee in a middle-aged and elderly population in China. Journal of Hebei Medical University. 36 (04), 487-490 (2015).
  9. Shao, S. Study on the mechanism of regulating the "balance of tendon and bone force" in the treatment of knee osteoarthritis by Tui Na manipulation. Shanghai University of Traditional Chinese Medicine. , 107-108 (2020).
  10. Liu, S. Role and mechanism of PD-1/PD-L1 pathway in osteoarthritis in mice. Shandong University. , 130-134 (2020).
  11. Shoujian, PD-1 promotes the repair and regeneration of contused skeletal muscle by regulating Treg cells and macrophages. Shanghai Institute of Physical Education. , 54-58 (2020).
  12. Levinger, P., et al. The level of FoxO1 and IL-15 in skeletal muscle, serum and synovial fluid in people with knee osteoarthritis: a case control study. Osteoporos Int. 27 (6), 2137-2143 (2016).
  13. Niu, Q., Xie, C., Jiang, Z. Advances in Chinese medicine based on PI3K/AKT signaling pathway for the treatment of knee osteoarthritis. Massage and Rehabilitation Medicine. , 1-5 (2022).
  14. Liu, S., et al. Blocking of checkpoint receptor PD-L1 aggravates osteoarthritis in macrophage-dependent manner in the mice model. Int J Immunopathol Pharmacol. 33, 2058-2073 (2019).
  15. Molanouri, S. M., et al. Combined effect of aerobic interval training and selenium nanoparticles on expression of IL-15 and IL-10/TNF-alpha ratio in skeletal muscle of 4T1 breast cancer mice with cachexia. Cytokine. 90, 100-108 (2017).
  16. Mahmoudian, A., et al. Early-stage symptomatic osteoarthritis of the knee - time for action. Nat Rev Rheumatol. 17 (10), 621-632 (2021).
  17. Nahin, R. L., et al. Evidence-based evaluation of complementary health approaches for pain management in the United States. Mayo Clin Proc. 91 (9), 1292-1306 (2016).
  18. Bervoets, D. C., et al. Massage therapy has short-term benefits for people with common musculoskeletal disorders compared to no treatment: a systematic review. J Physiother. 61 (3), 106-116 (2015).
  19. Xu, H., et al. Effectiveness of tui na in treating pain after total knee replacement for knee osteoarthritis. Chinese Tissue Engineering Research. 25 (18), 2840-2845 (2021).
  20. Ali, A., et al. Massage therapy and quality of life in osteoarthritis of the knee: a qualitative study. Pain Med. 18 (6), 1168-1175 (2017).
  21. Yoh, S., et al. Intra-articular injection of monoiodoacetate induces diverse hip osteoarthritis in rats, depending on its dose. BMC Musculoskelet Disord. 23 (1), 494-487 (2022).
  22. Lockwood, S. M., et al. Characterisation of peripheral and central components of the rat monoiodoacetate model of osteoarthritis. Osteoarthritis Cartilage. 27 (4), 712-722 (2019).
  23. McCoy, A. M. Animal models of osteoarthritis: Comparisons and key considerations. Vet Pathol. 52 (5), 803-818 (2015).
  24. Guo, X. Exploring the effect of pushing on cartilage in rats with knee osteoarthritis based on ROCK/LIMK1/Cofilin signaling pathway. Chongqing Medical University. , 42-44 (2022).
  25. Liu, Z. F., et al. Tuina for peripherally-induced neuropathic pain: A review of analgesic mechanism. Front Neurosci. 16, 1096-1104 (2022).
  26. Gebremariam, L., et al. Subacromial impingement syndrome--effectiveness of physiotherapy and manual therapy. Br J Sports Med. 48 (16), 1202-1208 (2014).
  27. Yao, C., et al. Transcriptome profiling of microRNAs reveals potential mechanisms of manual therapy alleviating neuropathic pain through microRNA-547-3p-mediated Map4k4/NF-kappab signaling pathway. J Neuroinflammation. 19 (1), 211-221 (2022).
  28. Valera-Calero, A., et al. Endocrine response after cervical manipulation and mobilization in people with chronic mechanical neck pain: a randomized controlled trial. Eur J Phys Rehabil Med. 55 (6), 792-805 (2019).
  29. Kovanur, S. K., et al. Measureable changes in the neuro-endocrinal mechanism following spinal manipulation. Med Hypotheses. 85 (6), 819-824 (2015).
  30. Colombi, A., Testa, M. The effects induced by spinal manipulative therapy on the immune and endocrine systems. Medicina (Kaunas). 55 (8), 312-314 (2019).
  31. Afify, A., Mark, H. F. Fluorescence in situ hybridization assessment of chromosome 8 copy number in stage I and stage II infiltrating ductal carcinoma of the breast. Cancer Genet Cytogenet. 97 (2), 101-105 (1997).
  32. Kirby, B. S., et al. Mechanical influences on skeletal muscle vascular tone in humans: insight into contraction-induced rapid vasodilatation. J Physiol. 583, 861-874 (2007).
  33. Sefton, J. M., et al. Therapeutic massage of the neck and shoulders produces changes in peripheral blood flow when assessed with dynamic infrared thermography. J Altern Complement Med. 16 (7), 723-732 (2010).
  34. Chen, B., et al. Aerobic exercise combined with glucosamine hydrochloride capsules inhibited the apoptosis of chondrocytes in rabbit knee osteoarthritis by affecting TRPV5 expression. Gene. 830, 146465(2022).
  35. Fang, L., et al. The mechanism of aerobic exercise combined with glucosamine therapy and circUNK in improving knee osteoarthritis in rabbits. Life Sci. 275, 119375(2021).
  36. Li, X., et al. Casticin suppresses monoiodoacetic acid-induced knee osteoarthritis through inhibiting HIF-1alpha/NLRP3 inflammasome signaling. Int Immunopharmacol. 86, 106745(2020).
  37. Ma, Z., et al. Vanillic acid reduces pain-related behavior in knee osteoarthritis rats Through the inhibition of NLRP3 inflammasome-related synovitis. Front Pharmacol. 11, 599022(2020).
  38. Zhang, W., et al. Electroacupuncture ameliorates knee osteoarthritis in rats via inhibiting NLRP3 inflammasome and reducing pyroptosis. Mol Pain. 19, 17448069221147792(2023).

Przedruki i uprawnienia

Tagi

Terapia Tuinamodel z monojodooctanem sodumodel kolana szczurazapalenie mi niterapia niefarmakologicznapomiar progu b lumechaniczny test b lutermiczny test b luocena obrz ku stawu
Interwencja Tuina w szczurzym modelu choroby zwyrodnieniowej stawu kolanowego wywołanym wstrzyknięciem monojodooctanu sodu
Skontaktuj się z nami
Poleć bibliotece

Prywatność

Warunki Korzystania

Zasady

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Wszelkie prawa zastrzeżone.