Badanie wyborów dotyczących historii życia: wykorzystanie temperatury i rodzaju podłoża jako czynników oddziałujących na larwy plujki i preferencje samic

Summary

Tutaj szczegółowo opisano dwa protokoły oceny preferencji dotyczących źródła pożywienia i składania jaj u larw i samic plujek. Składają się one z czterech opcji, w których na siebie oddziałują dwa czynniki: rodzaj podłoża i temperatura. Testy umożliwiają określenie preferencji larw dotyczących źródła pożywienia oraz preferencji miejsca składania jaj przez samice.

Abstract

Plujki (Diptera: Calliphoridae) prezentują szeroki zakres larwalnego trybu życia, zazwyczaj klasyfikowany jako obligatoryjne pasożytnictwo, fakultatywne pasożytnictwo i kompletna sapro-nekrofagia. Kilka gatunków pasożytniczych, zarówno obligatoryjnych, jak i fakultatywnych, uważa się za mające znaczenie sanitarne i gospodarcze, ponieważ ich larwy mogą powodować muszycę (inwazję larw w żywych tkankach). Warto jednak zauważyć, że dorosła samica odgrywa decydującą rolę, ponieważ wybiera miejsce składania jaj, a zatem w dużej mierze decyduje o zwyczaju żywieniowym i warunkach rozwoju larw. W tym badaniu zaproponowano dwa protokoły do badania preferencji żywieniowych larw i preferencji miejsca składania jaj przez samice, biorąc pod uwagę dwa oddziałujące na siebie czynniki: rodzaj podłoża mięsnego i temperaturę. Przedstawione tu konfiguracje pozwoliły na przetestowanie larw Lucilia cuprina i grawitujących samic w teście czterokrotnego wyboru z dwiema temperaturami (33 ± 2 °C i 25 ± 2 °C) i dwoma rodzajami substratów mięsnych (świeże mięso uzupełnione krwią i 5-dniowe zgniłe mięso). Larwy lub ciężarne samice mogą zdecydować się na zakopywanie się lub składanie jaj odpowiednio w jednym z następujących elementów: zgniłe mięso w temperaturze 25 °C (symulujące stan gatunku nekrafagicznego), świeże mięso uzupełnione krwią w temperaturze 33 °C (symulujące stan gatunku pasożytniczego) oraz dwie grupy kontrolne, zgniłe mięso w temperaturze 33 °C lub świeże mięso uzupełnione krwią w temperaturze 25 °C. Preferencję ocenia się, licząc liczbę larw lub jaj złożonych w każdym wariancie dla każdej kontrpróby. Porównanie obserwowanych wyników z rozkładem losowym pozwoliło na oszacowanie istotności statystycznej preferencji. Wyniki wskazują, że larwy L. cuprina silnie preferują zgniłe podłoże w temperaturze 25 °C. I odwrotnie, preferencje samic dotyczące miejsca składania jaj były bardziej zróżnicowane w zależności od rodzaju mięsa. Metodologię tę można dostosować do badania preferencji innych gatunków owadów o podobnej wielkości. Inne pytania można również zbadać, stosując alternatywne warunki.

Introduction

Muchy, szczególnie muskowate (w tym między innymi plujki, muchy domowe, muchy i muchy mięsne), prezentują szeroki zakres stylu życia, obejmujący zachowania pasożytnicze i nekropafagiczne¹. Gatunki pasożytnicze zazwyczaj powodują muszycę, czyli zarażenie żywych tkanek przez larwy ². W rodzinie Calliphoridae zarówno obligatoryjne, jak i fakultatywne gatunki pasożytnicze są głównymi szkodnikami zwierząt gospodarskich odpowiedzialnymi za straty ekonomiczne i niski dobrostan zwierząt z powodu inwazji robaków^2,3,4,

Protocol

Próbki much zostały pobrane za pomocą pułapek, a nie na zainfekowanych zwierzętach. Wydano licencję SISBIO (67867-1) na zbieranie i przetrzymywanie much z rodziny Calliphoridae w niewoli w warunkach laboratoryjnych. Próbki owadów są zwolnione z oceny etycznej w badaniach prowadzonych w Brazylii. Wołowina i krew bydlęca były pozyskiwane w handlu i nie było wymagane żadne zezwolenie etyczne.

1. Preferencje żywieniowe larw

1. Przygotowanie szalek Petriego zawierających 2% agaru
   1. Przygotuj cztery szalki Petriego z 2% agarem. Aby to zrobić, dodaj 6 g agaru bakteriologicznego do 300 ml wody i rozpuść tę miesza....

Results

Aby zademonstrować skuteczność prezentowanych metod, eksperymenty przeprowadzono na laboratoryjnej populacji Lucilia cuprina (rodzina: Calliphoridae), fakultatywnej pasożytniczej muchówki plujki². Cały surowy zbiór danych uzyskany dla tego gatunku można znaleźć w pliku uzupełniającym S3 z wynikami testów preferencji larw i substratów żeńskich. Aby ocenić, czy larwy i samice preferują jakikolwiek substrat, obserwowane dane porównano z 1000 symulowanych zestawów danych, z k.......

Discussion

Zrozumienie ewolucji nawyków żywieniowych, szczególnie w kontekście pasożytnictwa u plujek, wymaga zbadania preferencji podłoża na różnych etapach życia w zakresie żerowania lub składania jaj. Dlatego w niniejszym badaniu zaproponowano solidne i proste metody badania preferencji podłoża u larw i samic plujek. Metody te zostały przetestowane na Lucilia cuprina, fakultatywnej pasożytniczej muchówce². Co ciekawe, eksperymenty ujawniły wyraźną skłonność larw L . cuprina do gnijącego .......

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Agar	Sigma-Aldrich	05038-500G	Do mikrobiologii
Czarne kartony	-	-	70x50 cm
Krew bydlęca z antykoagulatem	-		50% czystej krwi bydlęcej z antykoagulantem (3,8% cytrynianu sodu) + 50% filtrowanej wody
Mięso mielone bydlęce	-		około 7-8% tłuszczu
Szczotka	-		wykonana z tworzywa sztucznego
Rurka stożkowa	Falcon lub Generic-50		ml
Szklane pojemniki w kształcie krzyża	Ręcznie robione	NA	48x48 cm, 8 cm wysokości i 8 cm szerokości
Erlenmeyer	Vidrolabor	NA	500 mL
70% Etanol	Synth	A1084.01.BL	70% absolut etanolu etylowego + 30% przefiltrowana woda
Butla z podziałką	Nalgon lub Generic-500		ml i 50 mL Poduszka
grzewcza			cm wymiary, 40 W, 127 V
Termometr na podczerwień	HeTaiDa	HTD8808	Bezdotykowy termometr do ciała (częstotliwość próbkowania: 0,5 s, Dokładność: ± 0,2 &stopni; C, Wymiary: 5-15 cm)
szalka Petriego (szkło)	Precyzja	NA	150x20 mm wymiary
			(Uwaga: szalki Petriego mogą być plastikowe, jeśli zostaną użyte tylko raz)
Szalka Petriego PS	Cralplast	18130	Wymiary 60x15 mm
Plastikowa pipeta Pasteura	-		3 ml (objętość całkowita)
Cytrynian sodu	Synth	C11033.01.AG	3,8% Cytrynian sodu (38 g rozcieńczony w 1 l przefiltrowanej wody)
Łyżki	-		Potrzeba więcej niż jednej łyżki. Użyj jednego dla każdego rodzaju podłoża mięsnego. Najlepiej ze stali nierdzewnej.
Szpatułka ze stali nierdzewnej	Generic-Flat		end i końcówka łyżkowa
Stereoskop			/22 soczewki
Pęseta	-		wykonana z metalu i drobna końcówka
Białe paski świetlne led	NA	NA 4,8	W, 2x0,05 mm², 320 lumenów, Temperatura barwowa:6500 K (biały)