Przewlekły nieprzewidywalny łagodny stres u szczurów na podstawie medycyny mongolskiej

Duże zaburzenie depresyjne (MDD) jest powszechną chorobą psychiczną, plasującą się jako trzecia najczęstsza przyczyna niepełnosprawności na świecie i dotykającą ponad 300 milionów ludzi^1,2,3. Warto zauważyć, że szacuje się, że co najmniej połowa osób dotkniętych chorobą nie otrzymuje odpowiedniego leczenia⁴. Biorąc pod uwagę tę lukę, modele zwierzęce służą jako kluczowe narzędzie do badania etiologii depresji. Do tej pory istnieje ponad 20 różnych zwierzęcych modeli depresji⁵. Wśród nich, model przewlekłego nieprzewidywalnego łagodnego stresu (CUMS), udoskonalony przez Paula Winera w 1987 roku, jest najczęściej używany⁶. Model CUMS opiera się na założeniu, że narażenie gryzoni na różnorodny zakres stresorów społeczno-środowiskowych prowadzi do objawów podobnych do lęku, napięcia i depresji. Metodologia polega na wystawianiu zwierząt na różne łagodne czynniki stresogenne przez kilka tygodni, których kulminacją jest szereg zmian behawioralnych, w tym anhedonia i zachowania podobne do depresji^7,8. Zmianom tym towarzyszą zmiany w profilach endokrynologicznych i neuroprzekaźników, takie jak zmniejszenie 5-HT^9,10. Wyniki te ściśle odzwierciedlają wyniki obserwowane u ludzi, u których zdiagnozowano MDD, potwierdzając w ten sposób użyteczność modelu. Model CUMS jest szczególnie ceniony ze względu na swoją skuteczność w ocenie leków przeciwdepresyjnych, wykazując wysoki poziom trafności powierzchniowej, strukturalnej i predykcyjnej^11,12. W przeciwieństwie do innych modeli, CUMS jest wrażliwy na skutki przewlekłego podawania monoaminergicznych leków przeciwdepresyjnych. Na przykład wykazano, że selektywne inhibitory wychwytu zwrotnego serotoniny (SSRI), takie jak citalopram, paroksetyna i fluoksetyna, zapobiegają i odwracają anhedonię w warunkach przewlekłego stresu^12,13. Ponadto nowe szybko działające leki przeciwdepresyjne, takie jak ketamina, również wykazały skuteczność w tym modelu^14,15. W przeciwieństwie do tego, inne testy, takie jak test wymuszonego pływania (FST) i test zawieszenia ogona (TST), są mniej wiarygodne w modelowaniu długoterminowych zmian w zachowaniu, często odzwierciedlając adaptacje do ostrego stresu, a nie trwałe objawy depresji¹⁶. Cechy te podkreślają solidną trafność modelu CUMS w badaniach nad depresją. Jedną z najbardziej istotnych cech modelu CUMS, uznaną za wysoce wiarygodną w badaniach klasycznych, jest anhedonia - niezdolność do odczuwania przyjemności lub zainteresowania codziennymi czynnościami^17,18. Zjawisko to jest powszechnie oceniane za pomocą testów preferencji sacharozy i wykazano, że wiele leków przeciwdepresyjnych odwraca zmniejszone spożycie sacharozy. Kilka innych wskaźników jest również powszechnie stosowanych w literaturze CUMS, w tym test otwartego pola (OFT), który ocenia dobrowolne zachowania motoryczne, tendencje eksploracyjne i napięcie, mierząc w ten sposób nasilenie depresji¹⁹. Inne testy, takie jak elevated plus maze (EPM) oceniają zachowania podobne do lęku, test labiryntu wodnego Morrisa (MWM) bada funkcjonowanie poznawcze ²⁰, a FST ocenia podatność na negatywne emocje i rozpacz behawioralną20. Co więcej, większość stresorów, które wpływają na ludzi, ma charakter społeczny. Osoby z nieoptymalnymi relacjami społecznymi, charakteryzującymi się ograniczoną aktywnością społeczną, sieciami i wsparciem, są narażone na zwiększone ryzyko różnych chorób^21,22. Ma to również znaczenie w przypadku gryzoni, które są zwierzętami społecznymi żyjącymi w grupach. Na przykład szczury trzymane w izolacji wykazują cechy tak zwanego syndromu izolacji, który wywołuje stres społeczny i przyspiesza wystąpienie depresji²³.

Medycyna mongolska, znacząca gałąź medycyny chińskiej, zakłada, że początek choroby to złożona interakcja między czynnikami wewnętrznymi i zewnętrznymi. Te czynniki zewnętrzne, określane jako cztery warunki pomocnicze, obejmują zmiany klimatu, dietę, styl życia i nagłe zdarzenia, takie jak infekcje, zaskakujące incydenty i zaburzenia psychiczne. Proces chorobowy jest konceptualizowany jako ciągła interakcja między trzema elementami - określanymi jako trzy typy homorów - a Siedmioma Składnikami Ciała w połączeniu z czterema warunkami pomocniczymi²⁴. Medycyna mongolska utrzymuje, że ciało ludzkie funkcjonuje jako zintegrowana jednostka, utrzymywana przez względną równowagę między trzema homorami. Zaburzenie tej równowagi jest uważane za prekursor choroby²⁴. Biorąc pod uwagę kluczową rolę eksperymentów na zwierzętach w łączeniu medycyny tradycyjnej i nowoczesnej, kluczowe znaczenie ma opracowanie modeli zwierzęcych, które są istotne dla badań w dziedzinie medycyny mongolskiej. W związku z tym zastosowaliśmy metodologię 28-dniowej izolacji w połączeniu z CUMS, aby symulować te fizjologiczne i psychologiczne czynniki stresogenne. Wybraliśmy dziewięć konkretnych nieprzewidywalnych stresorów i staraliśmy się oprzeć tę metodę modelowania na podstawie teorii trzech homorów medycyny mongolskiej. Stworzenie solidnego modelu zwierzęcego ma zasadnicze znaczenie dla postępu w badaniach podstawowych w medycynie mongolskiej i znacząco przyczyni się do ich podstawowego rozwoju.

Protokoły eksperymentalne otrzymały zgodę Komitetu ds. Etyki Opieki nad Zwierzętami Uniwersytetu Medycznego Mongolii Wewnętrznej (YKD202301172) i przestrzegały wytycznych Narodowych Instytutów Zdrowia dotyczących opieki nad zwierzętami i etyki. Numer licencji naszego centrum dla zwierząt to NO.110324230102364187. Dwadzieścia cztery samce szczurów Sprague-Dawley (SD), każdy w wieku 8 tygodni (200 g ± 20 g), zostały pozyskane i trzymane w kontrolowanym środowisku o temperaturze 22°C ± 2°C i wilgotności 55% ± 15%. Karm szczury dietą pielęgnacyjną dla gryzoni i czystą wodą z kolbami kukurydzy na ściółkę. Szczury poddano cyklowi 12 godzin/12 godzin światła/ciemności przez 1 tydzień przed eksperymentami.

1. Ustanowienie modelu szczura CUMS

1. grupowanie
   1. Podziel losowo 24 szczury na 2 grupy: grupę kontrolną (CON), która nie będzie narażona na izolację lub stres, oraz grupę modelową (MOD). Każda grupa składa się z 12 szczurów.
   2. Trzymaj szczury w standardowych klatkach o wymiarach 55 cm x 40 cm x 20 cm, po 6 szczurów w klatce. Przydział klatki należy zachować przez cały okres aklimatyzacji, chyba że wskazano inaczej.
   3. Napełnij każdą klatkę hodowlaną świeżą ściółką i wymieniaj ją dwa razy w tygodniu.
   4. Przeprowadź 1-tygodniowy okres aklimatyzacji. Pozwól szczurom na nieograniczony dostęp do pożywienia i wody, z wyjątkiem stosowania stresora CUMS. Utrzymuj stałe środowisko o temperaturze 22°C ± 2°C, wilgotności 55% ± 15% i 12 godzinnym cyklu światło/ciemność 12 godzin/12 godzin od 08:00 do 20:00, chyba że zaznaczono inaczej.
   5. Przed rozpoczęciem eksperymentu należy codziennie obchodzić się ze szczurami, aby przyzwyczaić je do badacza i zminimalizować dodatkowy stres podczas fazy eksperymentalnej.
2. Izolacja z przewlekłym, nieprzewidywalnym, łagodnym stresem
   1. Równolegle umieść grupy MOD i CON w oddzielnych pokojach. Trzymaj szczury z grupy MOD pojedynczo, jednocześnie trzymając szczury grupy CON razem. Utrzymuj wszystkie inne warunki na stałym poziomie.
   2. Zaimplementuj 28-dniowy schemat stresujący²⁵. Aby zapobiec przyzwyczajeniu i zapewnić nieprzewidywalność stresora, podawaj jeden losowy stresor dziennie, unikając stosowania tego samego stresora w kolejnych dniach.
   3. Losowo zastosuj jeden z następujących dziewięciu stresorów^26,27 w różne dni: 24-godzinny brak wody, 24-godzinny brak jedzenia, mokra wyściółka, nachylenie klatki, odwrócenie cyklu światła/ciemności, ekspozycja na zimno w 4 °C, ekspozycja na ciepło w 45 °C, 1 minuta zaciskania ogona lub 15 minut wstrząsania przy 160 obr./min. Konkretny projekt przedstawiono w tabeli 1.
   4. Podczas stosowania stresora ogranicz dostęp do jedzenia i wody do grupy MOD do czasu zakończenia stresu, z wyjątkiem odwrócenia cyklu światło/ciemność. Grupa CON nie była zobowiązana do ograniczania wody i diety.
3. Metody naprężeń
   1. Rozpocznij eksperyment od zastosowania bodźców depresyjnych w połączeniu z 28-dniową izolacją u wszystkich szczurów, z wyłączeniem grupy kontrolnej. Trzymaj te szczury w indywidualnych klatkach. Patrz Tabela 2, aby zapoznać się ze stanami związanymi z bodźcami depresyjnymi.
   2. Aby wykonać metodę zacisku ogonowego, zabezpiecz ogon szczura z grupy MOD, zaciskając ogon standardowym spinaczem do papieru w odległości 1-2 cm od nasady ogona szczura. Mierzyć czas zaciskania przez 1 minutę (n = 12).
   3. W metodzie pozbawiania wody wstrzymaj wodę szczurowi z grupy MOD, wyjmując jego butelkę z wodą i zapisuj przez 24 godziny
      UWAGA: Czas rozpoczęcia deprywacji wody został zarejestrowany, aby można było dokładnie obliczyć czas zakończenia; Zaobserwowano zachowanie szczurów w tym okresie, w tym aktywność, apetyt i stan psychiczny.
   4. W metodzie deprywacji żywnościowej należy wstrzymać jedzenie od szczura z grupy MOD i zapisać przez 24 godziny
      UWAGA: Zapisz czas, w którym zaczyna się deprywacja żywności, aby można było dokładnie obliczyć czas zakończenia; zapewnić, że szczury są odpowiednio nawodnione w tym okresie; i obserwuj zachowanie szczurów w tym okresie, w tym aktywność i stan psychiczny itp.
   5. W celu stymulacji zimnem w temperaturze 4 °C umieść szczura z grupy MOD w wiadrze z zimną wodą i nagrywaj przez 5 minut. Upewnij się, że temperatura wody pozostaje stała przez cały czas trwania testu. Po zakończeniu eksperymentu osusz szczura dmuchawą i włóż go z powrotem do pierwotnej klatki.
      UWAGA: Utrzymuj temperaturę zimnej wody na poziomie 4 °C za pomocą termometru i kostek lodu, aby regulować temperaturę wody, gdy rośnie. Woda powinna być regularnie wymieniana, aby zapewnić czystość wody i stałą temperaturę. Podczas pływania wszystkie kończyny i tułowia szczurów powinny być zanurzone w zimnej wodzie z wyjątkiem głowy. Głębokość wody musi być większa niż długość ciała szczura, aby zapobiec wyskakiwaniu szczura z wody w wyniku kontaktu z dnem wiadra.
   6. Aby zastosować stres cieplny w temperaturze 45 °C, należy umieścić szczura z grupy MOD w inkubatorze i nagrywać przez 5 minut, upewniając się, że temperatura pozostaje stabilna przez cały czas trwania testu.
   7. W odwróceniu cyklu światło-ciemność owiń klatkę czarną szmatką na 1 godzinę, aby symulować ciemność w ciągu dnia. Następnie oświetl klatkę przez 12 godzin w nocy, aby naśladować światło dzienne. Rejestruj zachowanie szczura, spożycie pokarmu i wody oraz wzorce snu przez 24 godziny.
   8. W eksperymencie z mokrą wyściółką wprowadź 200 ml wody do klatki zawierającej 100 g wyściółki. Trzymaj szczura z grupy MOD w mokrej klatce i rejestruj zachowanie szczurów pod wpływem stresu związanego z mokrą ściółką, w tym aktywność, apetyt, spożycie wody itp. Obserwuj, czy nie ma żadnych nieprawidłowych zachowań lub nieprzyjemnych reakcji, takich jak stan skóry i włosów szczurów, które mogą być spowodowane mokrą wyściółką, i rejestruj je na czas do późniejszej analizy przez 24 godziny. Po teście osusz szczura dmuchawą i umieść go z powrotem w klatce ze świeżymi wiórami drzewnymi.
   9. W metodzie nachylenia klatki umieść szczura z grupy MOD w klatce nachylonej pod kątem 45° do ściany i nagrywaj przez 24 godziny. Użyj konstrukcji ramy klatki, aby wyregulować kąt i zabezpieczyć klatkę na miejscu.
      UWAGA: Oblicz czas od początku do końca i obserwuj zachowanie szczurów w okresie przechylania klatki, w tym aktywność, apetyt i stan psychiczny, a także upewnij się, że kąt przechylonej klatki jest ustawiony prawidłowo i pozostaje stabilny, aby zapewnić dokładność i powtarzalność eksperymentu.
   10. W przypadku wytrząsania z dużą prędkością umieść szczura z grupy MOD w wytrząsarce mechanicznej ustawionej na 160 obr./min i nagrywaj szczura przez 15 minut. Metody testowania behawioralnego są następnie wykorzystywane do oceny pomyślnego ustanowienia modelu.
   11. Po zastosowaniu stresorów przenieś klatki grupy MOD z pomieszczenia CUMS z powrotem do pomieszczenia mieszkalnego. Podczas 4-tygodniowego okresu ekspozycji na stres utrzymuj grupę CON w klatkach domowych znajdujących się w pomieszczeniu mieszkalnym.
4. Środki ostrożności podczas eksperymentów
   1. Przenieś klatki z grupy MOD z powrotem do ogólnego pomieszczenia mieszkalnego po zastosowaniu stresora w pomieszczeniu CUMS.
   2. Monitorowanie zwierząt podczas modelowania CUMS
      1. Podczas zaciskania ogona zwierzę prawdopodobnie będzie miało problemy z powodu indukowanej stymulacji. Przez cały ten okres należy stale monitorować zacisk. Jeśli zostanie przemieszczony, zatrzymaj timer, ponownie załóż clamp, a następnie wznów timer na 1 minutę.
      2. Nie nakładaj jednocześnie niedoboru wody i stresorów związanych z mokrą ściółką.
         UWAGA: Unikanie jednoczesnego nakładania mokrej wyściółki i deprywacji wody pomaga utrzymać integralność eksperymentu, zmniejsza zmienne zakłócające i sprzyja dobrostanowi zwierząt.
      3. Temperatura ciała zwierzęcia i temperatura otoczenia w pomieszczeniu mogą podnieść temperaturę wody podczas pływania w zimnej wodzie. Dlatego dostosuj, dodając lodowatą wodę lub kostki lodu, aby utrzymać stałą temperaturę wody.
      4. Obserwuj szczury w odstępach 30-minutowych podczas stosowania stresorów, z wyjątkiem odwrócenia dobowego. Zwróć szczególną uwagę na oznaki nietypowego niepokoju, takie jak dreszcze, letarg lub brak ruchu. W przypadku zaobserwowania takich objawów - szczególnie potencjalnej hipotermii podczas pływania w zimnej wodzie o temperaturze 4 °C i mokrej ściółki - natychmiast usuń szczura ze stresora.
         UWAGA: Należy usunąć zwierzęta doświadczalne z badania, gdy mają problemy zdrowotne, takie jak infekcja, ciężki uraz, agresywne zachowania, nienormalna mobilność itp., Warunki usunięcia zwierząt z badania zazwyczaj koncentrują się na ochronie ich zdrowia i bezpieczeństwa przy jednoczesnym zapewnieniu integralności wyników eksperymentalnych.
      5. Przeprowadzaj codzienne kontrole pod kątem ran lub innych nieprawidłowości fizycznych lub behawioralnych u każdego szczura. W przypadku zaobserwowania jakichkolwiek nieprawidłowości skonsultuj się z weterynarzem laboratoryjnym, aby ustalić, czy szczur powinien zostać wykluczony z eksperymentu.
      6. Waż każdego szczura co 3 dni. Jeżeli zwierzę traci więcej niż 20% swojej podstawowej masy ciała przed karmieniem, musi zostać wykluczone z doświadczenia.

2. Testy behawioralne

1. Na początek podawaj bodźce depresyjne w połączeniu z izolacją przez 28 dni wszystkim szczurom, z wyjątkiem grupy kontrolnej. Trzymaj szczury w indywidualnych klatkach. Zapoznaj się z Tabelą 2, aby uzyskać szczegółowe informacje na temat stanów bodźców depresyjnych.
2. W przypadku testu w otwartym polu podziel czarną skrzynkę na 25 kwadratowych odcinków o równej powierzchni. Zainstaluj system analizy śledzenia wideo w pudełku. Umieść szczura na centralnym kwadracie i monitoruj jego aktywność poziomą i pionową przez czas 5 min.
   UWAGA: Wymiary pudełka to 500 mm x 500 mm x 300 mm. Dane dotyczące aktywności będą gromadzone za pomocą systemu śledzenia wideo w celu oceny zachowań związanych z lękiem u gryzoni wystawionych na działanie nowego środowiska.
3. Następnie policz liczbę kwadratów przebytych przez szczura, używając wszystkich łap, aby określić ilościowo aktywność poziomą. Policz przypadki stania i pielęgnacji jako wskaźniki aktywności pionowej. Po każdym teście zdezynfekuj pudełko za pomocą 75% alkoholu, aby wyeliminować wszelkie pozostałości zapachów szczurów do kolejnych testów.
4. Następnie anhedonię ocenia się za pomocą testu preferencji sacharozy. Umieść dwie butelki na pokrywie koszyka: butelka A zawiera czystą wodę, a butelka B zawiera 1% roztwór sacharozy. Zezwól szczurowi na dostęp ad libitum do obu rozwiązań. Zważ butelki przed i po spożyciu, aby obliczyć 60-minutowe preferencje sacharozy w dniach 0, 7, 14, 21 i 28. Wzór jest następujący:
   Zużycie sacharozy = × 100%
5. Aby zmierzyć pamięć przestrzenną i zdolności uczenia się, zastosuj test labiryntu wodnego Morrisa. Podziel pulę na cztery ćwiartki, numerując je od jednego do czterech. Umieść zanurzoną platformę spoczynkową 1 cm poniżej powierzchni wody w trzeciej ćwiartce.
6. Wprowadzić mleko do basenu, aby zwiększyć zmętnienie wody i utrzymać temperaturę wody na poziomie około 23 °C przez cały czas trwania procedury doświadczalnej.
7. Umieść każdego szczura w różnych ćwiartkach labiryntu, dając mu 120 sekund na zlokalizowanie ukrytej platformy. Szczury muszą polegać na pamięci przestrzennej i umiejętnościach uczenia się, aby zapamiętać lokalizację platformy. Gdy poznają lokalizację platformy, mogą podpłynąć bezpośrednio do niej. Nagraj czas opóźnienia za pomocą systemu śledzenia wideo Morris water labiryt.
8. Umieść szczura w ustalonym miejscu w basenie. Jeśli testerowi nie uda się zlokalizować ukrytej platformy w ciągu 120 sekund, zapisz opóźnienie jako 120 s.
9. Na koniec usuń ukrytą platformę, umieść szczura z powrotem w wodzie i zapisz liczbę przekroczeń stref w okresie 120 sekund.

3. Analiza statystyczna

1. Aby ocenić znaczące różnice w parametrach biochemicznych, należy zastosować jednoczynnikową analizę wariancji (ANOVA), a następnie test post hoc Duncana. Przedstaw dane jako średnią ± błędu standardowego (SE) i uznaj wartość p mniejszą niż 0,05 za statystycznie istotną.

Wyniki testów behawioralnych w modelu depresji szczurów wywołanej przez CUMS
Aby potwierdzić skuteczność procedury CUMS w wywoływaniu zachowań podobnych do depresji, przeprowadzono kontrolę manipulacji. Samce szczurów Sprague-Dawley (SD) zostały losowo przydzielone do grupy MOD lub CON na okres 4 tygodni, jak opisano w kroku 1.2.3. Następnie szczury zostały uśmiercone, a ich hipokampy zostały całkowicie wypreparowane w celu oceny 5-HT, neuroprzekaźnika silnie związanego z patofizjologią depresji10, przy użyciu testu immunoenzymatycznego (ELISA)28.

Przed indukcją CUMS nie zaobserwowano znaczących różnic między badanymi grupami w wyniku OFT, preferencji sacharozy czy analizie MWM.

Po ustanowieniu modelu CUMS, jednokierunkowa analiza wariancji (ANOVA) ujawniła znaczący wpływ CUMS na zachowania lękowe szczurów. W szczególności w OFT zaobserwowano istotne różnice między grupami. Grupa MOD wykazywała niższe wyniki pionowe i poziome w porównaniu z grupą CON (**P < 0,01; Rysunek 1A,B,E), sugerujący, że procedura CUMS była skuteczna w wywoływaniu lęku.

Następnie, test preferencji sacharozy (SPT) był przeprowadzany przez 5 dni, jak opisano w kroku 2.4, aby ocenić, czy szczury wykazywały oznaki anhedonii po ekspozycji na CUMS. Wyniki nie wykazały istotnych różnic w procentowym odsetku preferencji sacharozy między grupami w dniu 0. Jednak jednoczynnikowa ANOVA ujawniła istotną różnicę w spożyciu sacharozy między grupami w 28 dniu. W szczególności odsetek preferencji sacharozy w grupie MOD był niższy niż w grupie CON (**P < 0,01; Rysunek 1C), potwierdzając skuteczność protokołu CUMS w wywoływaniu anhedonii.

Jednokierunkowa ANOVA ujawniła, że CUMS znacząco wpływa na pamięć przestrzenną i zdolności uczenia się szczurów, co zostało ocenione przez test MWM. Opóźnienie grupy MOD w zlokalizowaniu platformy było znacznie większe niż w przypadku grupy CON (**P < 0,01). Jeśli chodzi o czasy krzyżowania, grupa MOD krzyżowała się mniej razy niż grupa CON (**P < 0,01; Rysunek 1D,F). Odkrycia te potwierdzają skuteczność protokołu CUMS w wywoływaniu zaburzeń pamięci u szczurów.

Wyniki poziomów 5-HT w hipokampie w modelu depresji szczurów wywołanej CUMS
Jednoczynnikowa ANOVA na poziomie 5-HT w hipokampie wykazała istotną różnicę między grupami (**P < 0,01). Grupa MOD wykazywała obniżony poziom 5-HT w hipokampie w porównaniu z grupą CON (Ryc. 2). Wyniki te sugerują, że protokół CUMS skutecznie obniżył poziom 5-HT w hipokampie, zjawisko powszechnie obserwowane w ludzkiej depresji29.

Rysunek 1: Efekty modelu depresji szczurów wywołanego przez CUMS. (A) Pionowe wyniki testu otwartego pola (OFT). (B) Wyniki poziome testu w terenie otwartym. (C) Poziomy spożycia sacharozy (%) w dniach 0 i 28. Anhedonia wywołana przez CUMS i zmniejszona preferencja sacharozy u szczurów. (D) Czas opóźnienia i numery przekroczenia stref w teście MWM. Wyniki przedstawiono jako średnią ± SE (n = 12 szczurów w grupie). **P < 0,01 wskazuje na istotne zmiany w grupie modelowej (MOD) w porównaniu z grupą kontrolną (CON) obliczone przy użyciu jednoczynnikowej analizy wariancji (ANOVA). (E) Ślady OFT dla szczurów w każdej grupie. (F) Ślady MWM dla każdej grupy szczurów. Kliknij tutaj, aby zobaczyć większą wersję tego rysunku.

Rysunek 2: Wpływ na poziom 5-HT w mózgu w modelu depresji wywołanej CUMS u szczurów. Szczury poddane 4-tygodniowej terapii CUMS wykazały znaczne obniżenie poziomu 5-HT w hipokampie w porównaniu z grupą kontrolną (CON). Wyniki przedstawiono jako średnią ± SE (n = 12 szczurów w grupie). **P < 0,01 wskazuje na istotne zmiany w grupie modelu (MOD) w porównaniu z grupą CON obliczone za pomocą jednoczynnikowej analizy wariancji (ANOVA). Kliknij tutaj, aby zobaczyć większą wersję tego rysunku.

Tabela 1: Harmonogram przewlekłego nieprzewidywalnego łagodnego stresu (CUMS). Czynniki stresogenne i daty wykonania indukcji CUMS u szczurów.

Tabela 2. Dziewięć stresorów z czterema warunkami pomocniczymi i teoria trzech homorów w medycynie mongolskiej. Wewnętrzny związek między dziewięcioma stresorami, teorią trzech homorów i czterema warunkami pomocniczymi w medycynie mongolskiej.

Autorzy nie mają do ujawnienia żadnych konfliktów interesów.