Ten protokół opisuje wielobarwną technikę immunofluorescencji do oceny szczurzego modelu alergicznego nieżytu nosa.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Znakowanie immunofluorescencyjne w skrawkach tkanki błony śluzowej nosa alergicznych szczurów z nieżytem nosa za pomocą wielokolorowego testu immunologicznego
* These authors contributed equally
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Alergiczny nieżyt nosa (AR) jest przewlekłą, niezakaźną chorobą zapalną błony śluzowej nosa, w której pośredniczy głównie specyficzna immunoglobulina E (IgE), dotykającą około 10%-20% światowej populacji. Podczas gdy barwienie immunofluorescencyjne (IF) od dawna jest standardową techniką wykrywania ekspresji białek specyficznych dla choroby, konwencjonalne techniki IF mają ograniczoną zdolność do wykrywania poziomów ekspresji trzech lub więcej białek w tej samej próbce. W związku z tym w ostatnich latach opracowano wielokolorowe techniki IF, które umożliwiają jednoczesne znakowanie wielu celów w komórkach lub tkankach.
Ten protokół dostarcza kompleksowego przeglądu procesu tworzenia szczurzego modelu AR, pobierania próbek błony śluzowej nosa oraz technicznych procedur immunofluorescencji wielokolorowej. Wszystkie szczury w grupie AR wykazywały typowe objawy, takie jak kichanie, katar i swędzenie nosa, a obserwacje behawioralne uzyskały ≥5 punktu. Barwienie hematoksyliną i eozyną (H&E) wykazało zwiększoną liczbę komórek zapalnych i zaburzoną integralność błony śluzowej nosa w grupie AR. Immunofluorescencja wielobarwna (mIF) wykazała zwiększoną ekspresję RORγt i TICAM-1, podczas gdy ekspresja Foxp3 zmniejszyła się w tkance błony śluzowej nosa szczurów AR.
Wprowadzenie
Alergiczny nieżyt nosa (AR) jest przewlekłą, niezakaźną chorobą zapalną błony śluzowej nosa, w której pośredniczy głównie specyficzna immunoglobulina E (IgE)1,2. Charakteryzuje się objawami takimi jak kichanie, katar, przekrwienie błony śluzowej nosa i swędzenie nosa. Wraz z industrializacją i urbanizacją rozpowszechnienie AR stopniowo rośnie, dotykając około 10%-20% światowej populacji1. Technika immunofluorescencji (IF) to metoda barwienia fluorescencyjnego, która wykorzystuje reakcję wiązania przeciwciało-antygen. Można go wykorzystać do wykrywania i ilościowego określania poziomów d....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
Eksperymentalny protokół i procedury zostały zatwierdzone przez Komitet Administracyjny i Badań nad Zwierzętami Uniwersytetu Tradycyjnej Medycyny Chińskiej w Chengdu (numer rekordu: 2022DL-010). Ośmiotygodniowe samce szczurów Sprague Dawley (SD) o wadze 180-200 g uzyskano komercyjnie (patrz tabela materiałów) i trzymano w naturalnym cyklu światło/ciemność z kontrolowaną temperaturą (23 ± 2 °C) i wilgotnością względną (55% ± 10%). Dwanaście szczurów zostało losowo podzielonych na dwie grupy: grupę kontrolną i grupę AR. Wszystkie szczury zostały zaaklimatyzowane do tych warunków i zapewniono im swobodny dostęp do jedzenia i wody przez tydzień przed bada....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
U sześciu szczurów SD skutecznie wywołano model AR poprzez dopasowanie iniekcji OVA do jamy brzusznej oraz wyzwanie nosowe. AR wystąpił u wszystkich szczurów w grupie AR, co stanowiło 100% grupy. Wszystkie szczury w grupie AR wykazywały typowe objawy, takie jak kichanie, wyciek z nosa oraz świąd nosa. Wszystkie obserwacje behawioralne otrzymały ocenę ≥5 punktów (Tabela 2).
H&Wyniki barwienia E w dniu 21.Proszę podać tekst źródłowy do tłumaczenia. Dzień modelowan.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Alergiczny nieżyt nosa (AR) jest niezakaźną chorobą zapalną błony śluzowej nosa wynikającą z połączenia czynników środowiskowych i genetycznych. Stała się globalnym problemem zdrowotnym, wpływając na wydajność pracy, obniżając jakość życia, pogarszając sen, funkcje poznawcze oraz powodując drażliwość i zmęczenie. AR dotyka 10–20% światowej populacji¹ i wiąże się ze znacznymi kosztami ekonomicznymi, powodując roczne straty w wysokości do 30–50 mld euro w krajach UE18. Co więcej, kilka badań wykazał.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Autorzy nie mają nic do ujawnienia.
Podziękowania
Ta praca była wspierana przez Departament Nauki i Technologii Prowincji Syczuan (2021YJ0175).
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Al(OH)3 | Sollerbauer Biotechnology Co., Ltd | A7130 | |
| 75% etanolu | Anhui Yiren An Co., Ltd | 20210107 | |
| Ammonia | Chengdu Kolon Chemical Co., Ltd | 2021070101 | |
| Bezwodny etanol | Chengdu Kolon Chemical Co., Ltd | 2022070501 | |
| Uszczelniacz | antyfluorescencyjnySouthernBiotech | 0100-01 | |
| Automatyczna maszyna do farbowania | Thermo scientific | Varistain Gemini ES | |
| Prowadnice nośne | Nantong Mei Wei De Experimental Equipment Co., Ltd | 220518001 | |
| Bufor cytrynianowo-fosforanowy | Servicebio biotechnology co., Ltd | G1201 | |
| Roztwór naprawczy antygenu kwasu cytrynowego (PH 6,0) | Xavier Biotechnology Co., Ltd | G1201 | |
| Szkiełko nakrywkowe | Nantong Mei Wei De Experimental Equipment Co. | ||
| Szkiełko nakrywkowe | Nantong Mewtech Life Science Co., Ltd | CS01-2450 | |
| CY3-Tyramid | Sawell Biotechnology Co., Ltd | G1223-50UL | |
| DAPI | Sawell Biotechnology Co., Ltd | G1012 | |
| Wytrząsarka odbarwiająca | SCILOGEX | S1010E | |
| EDTA roztwór odwapniający | Wuhan Xavier Biotechnology Co., Ltd | ||
| Suszarka elektryczna z ogrzewaniem | Shanghai Yiheng Scientific Instruments Co., Ltd | DHG-9240A | |
| Maszyna do znakowania pudełek do zatapiania | Thermo scientific | Maszyna | |
| Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JB-P5 | ||
| Szybka maszyna do odwadniania tkanek | Thermo scientific | STP420 ES | |
| Zgrzewarka do folii | Thermo scientific | Autostainer 360 | |
| FITC-Tyramid | Sawell Biotechnology Co., Ltd | G1222-50UL | |
| Mikroskop fluorescencyjny | Słoneczny Technologia optyczna Co.Ltd | CX40 | |
| Foxp3 | Affinity Biosciences Co., Ltd | bs-10211R | |
| Stół zamrażalniczy | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JB-L5 | |
| Kozioł Anty-Królik IgG H& L (HRP) | Liankebio Co., Ltd | GAR0072 | |
| Serum kozie | Biosharp | BL210A | |
| H& Zestaw do barwienia E | Leagene | DH0020 | |
| Kleszcze hemostatyczne | Shanghai Medical Devices Co., Ltd | J31010 | |
| Kwas solny | Sichuan Xilong Science Co., Ltd | 210608 | |
| Długopis immunohistochemiczny | Biosharp | BC004 | |
| Kuchenka mikrofalowa | Midea M1-L213B | ||
| Guma neutralna | Grupa Sinopharm Chemical Reagent Co., Ltd | 10004160 | |
| Albumina jaja kurzego | Sollerbauer Biotechnology Co., Ltd | A804010 | |
| Piekarnik | Shanghai Yiheng Scientific Instruments Co., Ltd | DHG-9240A | |
| Wirówka palmowa | SCILOGEX | D1008E | |
| Paraformaldehyd | Beyotime Biotechnology Co., Ltd | P0099-100ml | |
| Skaner sekcji patologii | 3DHISTECH Kft | Pannoramic SCAN | |
| Bufor PBS | Pipeta Biosharp | G4202 | |
| Smok | KE0003087/KA0056573 | ||
| Rorγ t | Affinity Biosciences Co., Ltd | DF3196 | |
| Skalpel | Quanzhou Excellence Medical Co., Ltd | 20170022 | |
| Samofluorescencyjny środek hartowniczy Sudan Black B | Bioengineering Co., Ltd | A602008-0025 | |
| Krajalnica | Thermo scientific | HM325 | |
| Thermo scientific | HM325 | ||
| Slide | Nantong Mewtech Life Science Co., Ltd | PC2-301 | |
| Sprague Dawley szczury | Sichuan Academy of Traditional Chinese Medicine | SYX  2023-0100 | |
| TICAM-1 | Affinity Biosciences Co., Ltd | DF6289 | |
| Nożyczki do tkanek | Shanghai Medical Devices Co., Ltd | J22120 | |
| Maszyna do rozprowadzania tkanek do pieczenia | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JK-6 | |
| TYR-690 barwniki fluorescencyjne | Shanghai Rutron Biotechnology Co., Ltd | RC0086-34RM | |
| Mikser wirowy | SCILOGEX | SLK-O3000-S | |
| Suszarka do kąpieli wodnej | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JK-6 | |
| Trymer do wosku | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JXL-818 | |
| Xylene | Chengdu Kolon Chemical Co., Ltd | 2022051901 |
Bibliografia
- Brożek, J. L., et al. Allergic rhinitis and its impact on asthma (ARIA) Guidelines-2016 revision. The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 140 (4), 950-958 (2017).
- Maurer, M., Zuberbier, T. Und....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
