Obecny protokół opisuje technikę mankietową dla modelu przeszczepu lewego płuca myszy. Technika ta była rozwijana przez kilka lat i dobrze się sprawdza, skutecznie służąc w badaniach immunologicznych.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Obecny protokół opisuje technikę mankietową dla modelu przeszczepu lewego płuca myszy. Technika ta była rozwijana przez kilka lat i dobrze się sprawdza, skutecznie służąc w badaniach immunologicznych.
W ciągu ostatniej dekady, nasze laboratorium poczyniło znaczne postępy w rozwoju i udoskonalaniu unaczynionych modeli przeszczepów płuc myszy przy użyciu wydajnej i wysoce niezawodnej techniki transplantacji "mankietowej". W artykule opisano zaawansowaną i kompleksową metodę ortotopowego przeszczepu płuc w unaczynionym ortotopowym modelu płuc, reprezentującym najbardziej fizjologiczny i klinicznie istotny model przeszczepu płuc u myszy. Proces przeszczepu składa się z dwóch odrębnych etapów: pobrania od dawcy i późniejszego wszczepienia implantu biorcy. Metoda została pomyślnie opanowana, a po kilku miesiącach wystarczającego szkolenia, wykwalifikowany praktyk może wykonać zabieg w około 90 minut od skóry do skóry. Co zaskakujące, gdy osoby pokonają początkową krzywą uczenia się, wskaźnik przeżycia w okresie okołooperacyjnym zbliża się do prawie 100%. Model mysi pozwala na wykorzystanie wielu dostępnych na rynku transgenicznych i zmutowanych szczepów myszy, umożliwiając badanie tolerancji i odrzucenia. Ponadto unikalne cechy tego modelu sprawiają, że jest on cennym narzędziem do badania biologii i immunologii nowotworów.
Podczas gdy terapie zastępcze, takie jak dializa i urządzenia wspomagające pracę komór, istnieją dla osób z niewydolnością nerek i serca, przeszczep płuc pozostaje główną opcją leczenia dla pacjentów cierpiących na schyłkową niewydolność płuc. Ta procedura służy jako jedyny wybór ratujący życie dla osób, u których zdiagnozowano zwłóknienie płuc1. Dodatkowo stosuje się go w celu przedłużenia życia osób borykających się ze schyłkową obturacyjną chorobą płuc, taką jak rozedma płuc, a także osób ze stanami ropnymi, takimi jak mukowiscydoza1.
Podczas gdy wskaźniki krótkoterminowego przeżycia popraw....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wszystkie procedury związane ze zwierzętami zostały przeprowadzone zgodnie z Instytucjonalnym Komitetem ds. Opieki nad Zwierzętami i Użytkowania na Uniwersytecie Maryland w Baltimore i otrzymały od niego zgodę. Zaleca się stosowanie samców myszy w wieku 8-12 tygodni (20-25 g) BALB/c jako dawcy i myszy C57BL/6 jako biorcy. Zwierzęta zostały pozyskane ze źródła komercyjnego (patrz tabela materiałów).
1. Przygotowanie mankietów oskrzelowych i naczyniowych
Czas: 10 min (dla trzech mankietów)
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Na podstawie doświadczeń z tym modelem w ciągu ostatnich 10 lat, osoby z podstawowymi umiejętnościami mikrochirurgicznymi zazwyczaj wymagają nauki około 50 zwierząt. Po osiągnięciu biegłości procedury dawstwa trwają zwykle 15-30 minut, podczas gdy procedury biorcy trwają około 60 minut. Po początkowej krzywej uczenia się, śmiertelność okołooperacyjna jest zwykle bardzo niska.
W Rysunek 4A,B, morfologia płuc siedem dni po wszczepieniu płuc dawcy Balb/cJ do.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Technika mankietowa do przeszczepu mysiego lewego płuca stanowi znaczący postęp w badaniach transplantacyjnych10,11. Krytyczne kroki obejmują precyzyjne i skrupulatne rozwarstwienie struktury wnęki i bezpieczne zespolenia. Modyfikacje mogą być wprowadzane w celu zaspokojenia potrzeb eksperymentalnych, ale wymaga to krzywej uczenia się. Nasza grupa zmodyfikowała pozycję myszy odbiorcy z tylnej na przednią, uzyskując lepszy widok wnęki poprzez zgięcie myszy odbiorc.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Autorzy nie mają nic do ujawnienia w związku z tematyką tego manuskryptu.
ASK, AEG i DK są obsługiwane przez P01 AI116501. ASK i EJ są dalej wspierane przez R01AI145108-01, R01HL166402. ASK są obsługiwane przez I01 BX002299-05. AEG i DK są dodatkowo wspierane przez RO1HL09601. CL jest wspierany przez R01 HL128492. Ta praca jest częściowo wspierana przez Chucka i Mary Meyers oraz Richarda i Eibhlin Henggelerów.
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| 10-0 Nylonowy szew | Surgical Specialties Corporation, Reading PA | AK-0106 | |
| 2 kleszcze Dumont #5 | Fine Science Tools Inc., Foster City, CA | 11251-20 | |
| 2 Zakrzywiona końcówka zacisku Halsted-Mosquito | Fine Science Tools Inc., Foster City, CA | 91309-12 | |
| 6-0 pleciony jedwabny szew | Henry Schein Inc., Melville, NY, | 100-5597 | |
| 6-0 Szew z polidioksanonu PDS II i | Ethicon Inc., Somerville, NJ. | Z117H | |
| 70% etanolu | Pharmco Products Inc., Brookfield, CT | 111000140 | |
| Kleszcze Adson | Fine Science Tools Inc., Foster City, CA | 91127-12 | |
| Myszy Balb/c | Jackson Laboratories, Bar Harbor, Maine, USA | 000651 | 8– 12 tygodni; Mężczyzna |
| Koagulator bipolarny | Valleylab Inc., Boulder, CO | SurgII-20, E6008/E6008B | |
| C57BL/6 myszy | Jackson Laboratories, Bar Harbor, Maine, USA | 000664 | 8– 12 tygodni; Mężczyzna |
| Bezbarwne soczewki Hibiclens z chlorheksydyną | , Mö lnlycke Health Care US, LLC, Norcross, GA | 57591 | |
| Elektrokoagulacja | Bovie | ||
| Drobne nożyczki sprężynowe w stylu vannas | Fine Science Tools Inc., Foster City, CA | 15000-03 | |
| Uchwyt na igłę Halsey | Fine Science Tools Inc., Foster City, CA | 91201-13 | |
| Aparat Harvard Wentylator dla myszy VentElite | Harvard Apparatus, Holliston, MA | 55-7040 | ustawienia 3L O2/min, częstość oddechów 130 uderzeń na minutę, objętość oddechowa 0,4 cm³ |
| Roztwór heparyny | Abraxis Pharmaceutical Products, Schaumburg, IL | 504031 | 100 U/ml |
| sól fizjologiczna do wstrzykiwań | Hospira Inc., Lake Forest, IL | NDC 0409-4888-20 | |
| Ketamina | VetOne, Boise, ID | 501072 | 50 mg/kg |
| Mikro kleszczyki pediatryczne König Mixter Szczęki kątowe | Medline, Northfield, IL,MDS1247714 | Extra Fine, Długość całkowita 5 1/2" (14cm) | |
| Wysokotemperaturowa kauteryzacja Medline, z cienką końcówką | Leica Microsystems, Inc., Allendale, NJ | 10 450 290 | |
| Mikroskop Leica M80 F12 Statyw podłogowy | Fine Science Tools Inc., Foster City, CA | 15396-00 | |
| Bardzo cienkie nożyczki sprężynowe Moria | Parkland Scientific, Coral Springs, FL | V3000i | |
| Ohio Waporyzator izofluranowy | Vitrolife Inc., Englewood, CO, | 19001 | |
| Perfadex roztwór glukozy o niskiej zawartości dekstranu potasu | Becton Dickinson Labware, Franklin Lakes, NJ | 353025 | Roztwór do konserwacji elektrolitów |
| polistyrenowe Petrrydzy | Fine Science Tools Inc., Foster City, CA | 00632-11 i 00649-11 | 150 &razy; 25 mm i 60 &-razy; 25 mm |
| S& T Kleszcze SuperGrip prosta i kątowa końcówka | Fine Science Tools Inc., Foster City, CA | 18200-20 | |
| System chowania małych zwierząt | Puritan Medical Company LLC, Guilford, Maine | 823-WC | stożkowe mini bawełniane końcówki 3-calowe aplikatory |
| sterylne Q-tips | Terumo Medical Corporation, Elkton, MD& | nbsp; | |
| Cewnik dożylny SROX2419Z Surflo etfe, żółty, 24 G x 0,75" | Terumo Medical Corporation, Elkton, MD | SROX1851Z | |
| Cewnik dożylny Surflo etfe; Zielony, 18 G x 2" | Terumo Medical Corporation, Elkton, MD | SROX2032Z | |
| Cewnik dożylny Surflo etfe; Różowy, 20 G x 1,25" | Thermocare, Inc., Incline Village, NV | ||
| System OIOM dla małych zwierząt ThermoCare, | A do Z Vet Supply, Drezno, TN | 008679 | 10 mg/kg |
| ksylazyny | Aesculap, Inc., Dolina Środkowa, PA, | FT480T | |
| Yasargil Clip Applier | Aesculap, Inc., Center Valley, PA, | FT264T | |
| Yasargil Tymczasowe klipsy do tętniaka | Medline, Northfield, IL, |
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Ten artykuł został opublikowany
Film wkrótce dostępny