Obecny protokół opisuje metodę tworzenia mysiego modelu ksenoprzeszczepu pochodzącego od pacjenta (PDX) przy użyciu ludzkiej tkanki kostniakomięsaka.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Opracowanie mysiego modelu ksenoprzeszczepu pochodzącego od pacjenta z tkankami ludzkiego kostniakomięsaka
* These authors contributed equally
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Kostniakomięsak jest najczęstszym pierwotnym złośliwym nowotworem kości u dzieci i młodzieży. Pomimo opracowania nowych planów leczenia w ostatnich latach, rokowanie dla pacjentów z kostniakomięsakiem nie uległo znacznej poprawie. Dlatego tak ważne jest stworzenie solidnego modelu przedklinicznego o wysokiej wierności. Model ksenoprzeszczepu pochodzącego od pacjenta (PDX) wiernie zachowuje genetyczne, epigenetyczne i heterogeniczne cechy nowotworów złośliwych u każdego pacjenta. W związku z tym modele PDX są uważane za autentyczne modele in vivo do badania różnych nowotworów w badaniach transformacji. W artykule przedstawiono kompleksowy protokół tworzenia i utrzymywania mysiego modelu PDX, który dokładnie odzwierciedla cechy morfologiczne ludzkiego kostniakomięsaka. Polega to na natychmiastowym przeszczepieniu świeżo wyciętej tkanki ludzkiego kostniakomięsaka myszom z obniżoną odpornością, a następnie kolejnym pasażowaniu. Opisany model służy jako platforma do badania wzrostu, oporności na leki, nawrotu i przerzutów kostniakomięsaka. Dodatkowo pomaga w badaniach przesiewowych docelowych terapii i ustalaniu spersonalizowanych schematów leczenia.
Wprowadzenie
Kostniakomięsak jest pierwotnym nowotworem złośliwym kości wywodzącym się z komórek płata międzykostnego i występuje najczęściej zarówno u młodzieży, jak i u dzieci. Często występuje w nasadach trzonu długiego i charakteryzuje się wysoką złośliwością, wczesnymi przerzutami i złym rokowaniem1,2. Przerzuty do płuc są główną przyczyną zgonów pacjentów z kostniakomięsakiem. 5-letni wskaźnik przeżycia pacjentów z kostniakomięsakiem bez przerzutów wynosi 65%-70%3. Jednak w ciągu ostatnich 40 lat 5-letni wskaźnik przeżycia (tylko 20%) pacjentów z kostniakomięsakiem z przerzutami nie uległ znac....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
Wszystkie badania z udziałem tkanek ludzkich zostały zatwierdzone przez Instytucjonalną Komisję Oceny Etyki Szpitala Longhua, powiązanego z Shanghai University of Traditional Chinese Medicine (Shanghai, China) (2013LC52), a pisemna świadoma zgoda została uzyskana od pacjentów zgodnie z Deklaracją Helsińską. Liczba IACUC dla tego badania na zwierzętach wynosi PZSHUTCM221017013. Czterotygodniowe samce myszy CAnN.Cg-Foxn1nu / Crl zostały zaopatrzone w podwójny lew Napromieniowana dieta dla gryzoni GB 14924.3 i sterylną wodę i zostały umieszczone w klatce dla myszy IVC z pięcioma myszami na klatkę, w warunkach SPF z 12-godzinnym cyklem światła / ciemności.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
Niniejszy protokół opisuje szczegółową procedurę tworzenia modelu mysiego PDX, zachowującego cechy morfologiczne ludzkiego osteosarcoma po bezpośrednim przeszczepieniu świeżo wyresekowanej tkanki ludzkiego osteosarcoma oraz kolejnych pasażach u myszy. W ramach opracowanej metody pomyślnie stworzono model mysi PDX z wykorzystaniem tkanki ludzkiego osteosarcoma.
Rysunek 3A przedstawia reprezentatywną mysz PDX w generacji P0, dwa miesiące po transplantacji tkanki kos.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Modele PDX mogą symulować charakterystykę nowotworów u ludzi i zachowywać większe podobieństwo do guza pierwotnego, w tym zmiany genetyczne i genomowe, histologię, heterogeniczność i profil ekspresji genów 16,17,18,19. W związku z tym zachowują fenotypy molekularne i genotypy pacjentów z rakiem, zapewniając innowacyjne podejścia do badania biologii i oceny potencjalnych terapii. Podejścia te ob.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Autorzy deklarują brak sprzecznych interesów finansowych.
Podziękowania
Ta praca jest wspierana przez granty od (1) National Nature Science Foundation (81973877 i 82174408); (2) Projekt budowy Centrum Badawczego o Najwyższym Priorytecie w Szanghaju (2022ZZ01009); (3) Krajowy Kluczowy Program Badawczo-Rozwojowy Chin (2020YFE0201600); (4) Szanghajskie Centrum Innowacji Współpracy w Transformacji Przemysłowej Przygotowania TCM w Szpitalu oraz (5) Projekty badawcze w ramach budżetu Uniwersytetu Tradycyjnej Medycyny Chińskiej w Szanghaju (2021LK047).
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| 10% neutralny roztwór formaliny | Wuhan Saiweier Biotechnology Co., Ltd | G1101-500ml | Napraw tkanki |
| Autoklaw | Japonia Hiryama Company | HVE-50 | Narzędzia chirurgiczne do sterylizacji |
| CAnN.Cg-Foxn1nu/Crl | Shanghai SLAC Laboratory Animal Co, Ltd. | / | Suwmiarka dla zwierząt |
| Yantai Green Forest Tools Co., Ltd. | 034180A | Zmierz objętość guza | |
| Naczynie (60 mm) | Shanghai NianYue Biotechnology Co., Ltd | 430166, Corning | Umieszczenie próbki podczas przeszczepu |
| Waciki dezynfekujące | Shanghai Honglong Industrial Co., Ltd. | 20230627 | Dezynfekcja skóry myszy |
| Jednorazowe sterylne rękawiczki | Guilin Hengbao Health Protection Co., Ltd. | YT21131 | Sterylna operacja |
| Podwójny lew Napromieniowana dieta dla gryzoni | Suzhou Shuangshi Experimental Animal Feed Technology Co., Ltd. | GB 14924.3 | Pasza dla zwierząt |
| Waga elektroniczna | Shanghai NianYue Biotechnology Co., Ltd | 1-2000 | Zważ masę guza |
| Eosin | Shanghai Gengyun Biotechnology Co., Ltd | E4009-25G | Hematoksylina eozyna barwienie |
| Hematoxylin | Shanghai Gengyun Biotechnology Co., Ltd | H3136-25G | Hematoksylina eozyna barwnik |
| Isoflurane | Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd | Znieczulenie myszy VETEASY | |
| Klatka na myszy IVC | Suzhou Monkey King Animal Experimental Equipment Technology Co., Ltd. | HH-MMB-2 | Długopis z barierą dla zwierząt |
| Zebra Trading (Shenzhen) Co., Ltd. | YYST5 | Zaznacz nacięcie chirurgiczne | |
| Mikroskop optyczny Olympus | Japońska firma Olympus | BH20 | Skanuj plastry tkanek Maść |
| okulistyczna | Shanghai Gengyun Biotechnology Co., Ltd | SOICOEYEGRL | Unikaj suchych oczu myszy podczas znieczulenia |
| Nożyczki okulistyczne | Shanghai NianYue Biotechnology Co., Ltd | Y00030 JZ | Wytnij skórę |
| Pęseta okulistyczna | Shanghai NianYue Biotechnology Co., Ltd | BS-ZER-S-100 Biosharp | Przytrzymaj tkanki kostniakomięsaka podczas przeszczepu |
| Parafina | Jiangsu Shitai Sprzęt eksperymentalny Co., Ltd. | 80200-0015 | Zakopana kostniakomięsak |
| maszyna do krojenia parafiny | Lyca Microsystem (Shanghai) Trading Co., Ltd. | RM2235 | Sekcja tkankowa kostniakomięsaka |
| sól fizjologiczna | Guangzhou Jinsheng Biotechnology Co., Ltd. | 605-004057 | Płukanie i tymczasowe przechowywanie skalpeli tkankowych kostniakomięsaka |
| Fabryka | narzędzi chirurgicznych Shanghai Medical Devices (Group) Co., Ltd. | J11010-10# JZ | Oddzielenie tkanki kostniakomięsaka i wykonanie nacięć chirurgicznych |
| Sterylny kaptur | Thermo Fisher Technology (China) Co., Ltd. | ECO0.9 | Stół operacyjny |
| sterylne obłożenia chirurgiczne | Henan Huayu Medical Equipment Co., Ltd. | 20160090 | Zapewnij sterylny obszar chirurgiczny |
| Prosty uchwyt igły | Shanghai Gengyun Biotechnology Co., Ltd | J31050 JZ | Zszyj ranę |
| Linia do szycia | Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., Ltd | F3124 | Zszyj ranę |
| Igła do szycia | Shanghai Pudong Jinhuan Medical Products Co., Ltd | F3124 | Zszyj ranę |
| Roztwór ochronny tkanek | Nanjing Shenghang Biotechnology Co., LTD | BC-CFM-03 | Utrzymuj aktywność komórek tkankowych |
| Rurka (50 ml) | Shanghai Baisai, Biotechnology Co., Ltd. | BLD-BL2002500 | Zainstaluj roztwór do utrwalania formaliny |
Bibliografia
- Saraf, A. J., Fenger, J. M., Roberts, R. D. Osteosarcoma: accelerating progress makes for a hopeful future. Front Oncol. 8, 4(2018).
- Ligon, J. A., et al. Pathways of immune exclusion in metastatic osteosarcoma are associated with inferio....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
