Opisany tutaj protokół heterotopowego pomocniczego przeszczepu wątroby u szczurów stanowi praktyczne narzędzie badawcze do badania mechanizmów odrzucania alloprzeszczepu wątrobowego. Model ten pomaga złagodzić przeszkody chirurgiczne i stres zwierząt związany z ortotopowym przeszczepem wątroby u szczurów.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Heterotopowy pomocniczy model przeszczepu szczura całej wątroby z wykorzystaniem hepaticoureterostomii do badań odrzucenia przeszczepu allogenicznego
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Modele przeszczepów małych zwierząt są niezbędne w badaniach tolerancji narządów badających wykonalne interwencje terapeutyczne w badaniach przedklinicznych. Protokoły przeszczepu wątroby szczura (LTx) zazwyczaj wykorzystują model ortotopowy, w którym natywna wątroba biorcy jest usuwana i zastępowana wątrobą dawcy. Ten wymagający technicznie zabieg chirurgiczny wymaga zaawansowanych umiejętności mikrochirurgicznych i jest dodatkowo skomplikowany przez długi czas niedokrwienia wątroby i dolnej części ciała. Skłoniło to do opracowania mniej skomplikowanej metody heterotopowej, którą można wykonać szybciej, bez czasu znieczulenia wątroby lub niedokrwienia dolnej części ciała, zmniejszając stres pooperacyjny u zwierzęcia biorcy.
Ten heterotopowy protokół LTx obejmuje dwa główne etapy: wycięcie wątroby od szczura dawcy i przeszczepienie całej wątroby szczurowi biorcy. Podczas wycięcia wątroby dawcy chirurg podwiązuje żyłę główną nadwątrobową (SHVC) i tętnicę wątrobową (HA). Po stronie biorcy chirurg usuwa lewą nerkę i ustawia wątrobę dawcy z żyłą wrotną (PV), żyłą podwątrobową (IHVC) i przewodem żółciowym skierowanym w stronę naczyń nerkowych. Ponadto chirurg zespolenia żyły nerkowej biorcy od końca do końca z IHVC wątroby i tętnicze PV z tętnicą nerkową za pomocą stentu. Hepaticoureterostomia jest wykorzystywana do drenażu dróg żółciowych poprzez zespolenie przewodu żółciowego z moczowodem biorcy, co umożliwia odprowadzanie żółci przez pęcherz moczowy.
Średni czas trwania przeszczepu wynosił 130 minut, czas trwania zimnego niedokrwienia wynosił około 35 minut, a czas trwania ciepłego niedokrwienia wynosił mniej niż 25 minut. Histologia hematoksyliny i eozyny wątroby pomocniczej po przeszczepach syngenicznych wykazała prawidłową strukturę hepatocytów bez istotnych zmian miąższowych 30 dni po przeszczepie. W przeciwieństwie do tego, 8-dniowe próbki przeszczepów allogenicznych po przeszczepie wykazały rozległy naciek limfocytarny z wynikiem wskaźnika aktywności odrzucenia schematu Banffa wynoszącym 9. W związku z tym ta metoda LTx ułatwia alternatywny dla orttopowego LTx model odrzucenia o niskiej zachorowalności.
Wprowadzenie
LTx dla małych zwierząt jest nieocenionym modelem do badania mechanizmów odrzucania wątroby. Heterotopowe pomocnicze przeszczepienie wątroby z arterializacją żyły wrotnej (HALT-PVA) u szczurów zostało wprowadzone w 1968 roku przez Lee iEdgingtona 1, kiedy zgłosili użycie żyły nerkowej i tętnicy biorcy do rewaskularyzacji przeszczepionej wątroby pomocniczej. Następnie Hess i wsp.2 udoskonalili protokół, łagodząc funkcjonalną konkurencję między wątrobą natywną i pomocniczą poprzez zmniejszenie rozmiaru wątroby natywnej i wątroby dawcy wraz z rekonstrukcją połączenia dróg żółciowych dawcy, co skutkowało długoterminowym prze....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
Zwierzęta były hodowane i trzymane w określonych warunkach wolnych od patogenów w placówkach opieki nad zwierzętami w Instytucie Badań Medycznych Uniwersytetu Wisconsin (UW)-Madison zgodnie z wytycznymi instytucjonalnymi. Protokół badania (nr M006022) został zatwierdzony przez Instytucjonalną Komisję ds. Opieki i Wykorzystania Zwierząt w Szkole Medycyny i Zdrowia Publicznego UW, a wszystkie zwierzęta były traktowane etycznie.
1. Zwierzęta
- Jako szczury dawcy należy użyć dorosłych samic szczurów rasy Lewis o wadze 205-235 g i samców szczurów Lewisa o wadze 250-280 g. Jako biorców należy użyć dorosłych samców szczu....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
Obecnie do opracowania protokołu HALT-PVA wykorzystano 29 par szczurów: 17 w przypadku przeszczepów syngeneicznych oraz 12 w przypadku przeszczepów allogenicznych. Wątroby przeszczepione syngeneicznie przeżyły do wyznaczonego 8- lub 30-dniowego punktu końcowego eksperymentu ze skutecznością wynoszącą 70%, natomiast wątroby przeszczepione allogenicznie przeżyły do wyznaczonych 3- lub 8-dniowych punktów końcowych ze skutecznością na poziomie 50%. Niepowodzenia obejmowały szczury, które padły z powodu powikłań chirurgicznyc.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Przeszczep wątroby jest jedyną opcją leczenia dla pacjentów ze schyłkową niewydolnością wątroby, z prawie 9 000 LTxs wykonywanych rocznie w USA13. Niestety, odrzucenie immunologiczne obserwuje się nawet u 25% biorców LTx, a odrzucenie to jest szkodliwe dla przeszczepionego narządu i pacjenta14,15. Aby poprawić wyniki po LTx, konieczne jest opracowanie innowacyjnych modeli do badania odrzucenia narządu i wdrożenia strategii zmniejszających .......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Autorzy nie mają nic do ujawnienia.
Podziękowania
Badania te były wspierane przez Narodowy Instytut Zdrowia (NIH) K08AI155816, przyznany DA.
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| 3-0 Szew jedwabny | Etyka | Zobacz materiał C013D | |
| 5-0 Krawaty jedwabne | Narzędzia naukowe | 18020-50 | |
| 6-0 Krawaty jedwabne | Narzędzia naukowe | 18020-60 | |
| 7-0 Krawaty jedwabne | Teleskop Teleflex | 103-S | |
| 9-0 Szew poliamidowy | AROSurgiczny | T05A09N10-13 | Czarny |
| Kauteryzacja bipolarna | Codman & Shurtleff Inc. | P.H. 234 | |
| Buprenorfina HCL | Hospira | 409201232 | |
| Kleszcze, Adson-Brown | Narzędzia naukowe | 11627-12 | 12,5 cm |
| Kleszcze kątowe Dumont | Narzędzia naukowe | 11253-25 | Medyczny #5/45 11 cm |
| Kleszcze, wiązanie szwów | Narzędzia naukowe | 18025-10 | 10 cm |
| Heparyna sodowa do wstrzykiwań, USB | Fresenius Kabi | 504015 | 10 000 jednostek USP na 10 ml |
| Kaniula hydrodysekcyjna | Ambler Chirurgiczny | Numer katalogowy 1021E | 27 gramów |
| Izofluran | Produkty weterynaryjne Dechra | 17033-091-25 | |
| Cewnik dożylny | Kendall | 2619PUR (wersja angielska) | 26 G x 3/4" |
| Magnetyczny system wciągania | Narzędzia naukowe | 18200-50 | |
| Mikro zaciski | Narzędzia naukowe | 18055-05 | 6 mm |
| Mikro zaciski | Narzędzia naukowe | 18055-06 | Grubość 4 mm |
| Aplikator Micro Clamp | Narzędzia naukowe | 18057-14 | 14 cm |
| Mikro uchwyt na igłę | S& T | Samolot C-14 | 14 cm |
| Mikroskop | Zeiss | Uniwersalny S3 | Podwójna głowica |
| Maść okulistyczna | Puralube (Purałub) | 14590500 | |
| Rurki poliimidowe | Cole'a Parmera | 95820-04 | OD 0.0215", ID 0.0195", ściana 0.0010" |
| Słony | Baxter | 281324 | 0,9% chlorek sodu |
| Chirurgiczne nożyczki sprężynowe | S& T | Zobacz materiał SDC-15 | 14 cm |
| Chirurgiczne nożyczki sprężynowe | Narzędzia naukowe | 15021-15 | Vanny 14 cm |
Bibliografia
- Lee, S., Edgington, T. S. Heterotopic liver transplantation utilizing inbred rat strains. Am J Pathol. 52 (3), 649-669 (1968).
- Hess, F., Jerusalem, C., Van der Heyde, M. N. Advantages of auxiliary liver homotransplantation in rats. Arch Surg. 104, 76-80 (1972).
- M....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
