Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł badawczy

Mechanistyczne spostrzeżenia na temat ochrony mitochondriów salidrozydu poprzez szlak AMPK/Sirt1/HIF-1α w niedotlenionych komórkach HT22

1.2K wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/66923

⸱

25 kwietnia 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1School of Pharmacy/School of Modern Chinese Medicine Industry, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 2Innovative Institute of Chinese Medicine and Pharmacy/Academy for Interdiscipline, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 3Research Service Office, Traditional Chinese Medicine Hospital of Meishan

W tym artykule

Podsumowanie

Obecne badanie zidentyfikowało unikalny mechanizm, dzięki któremu salidrozyd wywiera mitochondrialne działanie ochronne na niedotlenione komórki HT22, częściowo poprzez szlak AMPK/Sirt1/HIF-1α.

Streszczenie

Stwierdzono, że

Wprowadzenie

Mózg jest bardzo wrażliwy na tlen ze względu na wysokie wymagania metaboliczne, ograniczoną zdolność glikolityczną i zależność od fosforylacji oksydacyjnej. W rezultacie, narażenie na środowisko o niskiej zawartości tlenu na dużych wysokościach może łatwo doprowadzić do hipobrycznego niedotlenienia mózgu (HHBI)1,2. Badania epidemiologiczne wskazują, że gdy osoby nieprzyzwyczajone do dużych wysokości szybko wspinają się w regiony wysokogórskie, częstość występowania ostrej choroby górskiej może sięgać nawet 75%, przy śmiertelności około 1% w ciężkich przypadkach. Ponadto, w przypadku braku opieki medycznej, śmiertelność z powodu obrzęku mózgu lub płuc na dużych wysokościach może sięgać nawet 40%3,4.

HHBI charakteryzuje się szerokim spektrum objawów klinicznych. Łagodne lub umiarkowane przypadki mogą obejmować bóle głowy, zawroty głowy i utratę pamięci5, podczas gdy ciężkie przypadki mogą skutkować upośledzeniem funkcji poznawczych, zaburzeniami świadomości i potencjalnie śmiertelnymi skutkami5. Zapobieganie i leczenie HHBI w regionach wysokogórskich stało się kluczowym przedmiotem badań medycznych. Strategie prewencyjne obejmują przede wszystkim trening adaptacyjny w środowisku wysokogórskim, w tym odpowiedni odpoczynek, dobrze zbilansowaną dietę, prawidłowe odżywianie i odpowiednie ćwiczenia fizyczne6,7. Ponadto interwencje farmakologiczne mające na celu ochronę komórek mózgowych i złagodzenie niedotlenienia mózgu pozostają kluczowe dla obecnych badań nad HHBI.

Mitochondria służą jako główne centra produkcji energii w komórkach, syntetyzując trifosforan adenozyny (ATP) w celu zaspokojenia zapotrzebowania na energię komórkową. W warunkach niedotlenienia produkcja energii mitochondrialnej spada, co prowadzi do obniżenia poziomu ATP i upośledzenia funkcji komórek8. Uszkodzenie niedotlenienia zakłóca również mitochondrialną regulację homeostazyCa2+ i pH, wywołując apoptozę i martwicę9,10. Istnieje wzajemnie wzmacniający się związek między dysfunkcją mitochondriów a niedotlenieniem mózgu. Z jednej strony upośledzenie mitochondriów wywołane niedotlenieniem pogłębia niedobór tlenu, dodatkowo zmniejszając metabolizm energii komórkowej, tworząc błędne koło. Z drugiej strony, dysfunkcja mitochondriów podnosi wewnątrzkomórkowy poziom Ca2+, aktywując kaskady apoptotyczne i prowadząc do śmierci komórki11. Chociaż mechanizmy leżące u podstaw niedotlenienia mózgu pozostają złożone i nie w pełni poznane, wiele badań zidentyfikowało upośledzony metabolizm energii mitochondrialnej neuronów jako krytyczny czynnik w jego patogenezie12,13. W związku z tym dalsze badania funkcji mitochondriów mogą dostarczyć cennych informacji na temat potencjalnych celów terapeutycznych w przypadku niedotlenionego uszkodzenia mózgu.

Salidroside (Sal) jest aktywnym składnikiem pozyskiwanym z rośliny płaskowyżowej Rhodiola crenulata (Hook. f. et Thoms.) H. Ohba i jest szeroko stosowany w produktach zdrowotnych żywności i farmaceutykach14. Wzór cząsteczkowy Sal to C14H20O7 i jest również znany jako 2-(4-hydroksyfenylo)-etylo β-D-glukopiranozyd. Posiada różnorodne właściwości farmakologiczne, w tym przeciwdziałanie niedotlenieniu, przeciwutleniającemu, przeciwzmęczeniowemu, przeciwnowotworowemu, immunomodulującemu, przeciwzapalnemu oraz ochronne na układ sercowo-naczyniowy i naczyniowo-mózgowy15,16,17. Wśród nich jego działanie przeciwhipoksyjne jest jednym z najlepiej udokumentowanych. Ostatnie badania coraz częściej podkreślają znaczące ochronne działanie mitochondriów Sal jako potencjalny mechanizm jego prewencyjnego i terapeutycznego wpływu na uszkodzenia mózgu wywołane plateau u myszy14,18. Jednak dokładne mechanizmy molekularne, za pomocą których Sal wpływa na poziomy ATP, ADP i AMP, pozostają słabo poznane.

AMP (AMPK) pełni rolę kluczowego czujnika energii, który pomaga utrzymać homeostazę energii komórkowej. Aktywacja AMPK stymuluje Sirtuinę 1 (Sirt1), prowadząc do wzrostu wewnątrzkomórkowego poziomu NAD+19. Badania wykazały, że Sirt1 może regulować czynnik indukowany hipoksją 1-alfa (HIF-1α) w celu koordynowania odpowiedzi komórkowej na niedotlenienie20. Wcześniejsze badania wykazały, że Sal hamuje otwieranie porów przejściowych przepuszczalności mitochondriów neuronów, reguluje procesy energii mitochondrialnej za pośrednictwem HIF-1α, osłabia apoptozę neuronów i utrzymuje integralność bariery krew-mózg, chroniąc w ten sposób szczury przed uszkodzeniem mózgu wywołanym przez plateau14,21. Jednak wpływ Sal na ATP i jego metabolity, ADP i AMP, pozostaje niepewny.

Aby to zbadać, najpierw zastosowano wysokosprawną chromatografię cieczową (HPLC) do ilościowego określenia poziomów tych trzech nukleotydów. Dodatkowo wykorzystano komórkowy test przesunięcia termicznego (CETSA), szeroko stosowaną technikę biofizyczną wprowadzoną w 2013 roku do badania interakcji ligand-białko w nienaruszonych komórkach22. Metoda ta jest powszechnie stosowana do walidacji i ilościowego określania zaangażowania leku w cel w komórkach i tkankach różnych gatunków. W szczególności, po jednoczesnej inkubacji lizatów komórek docelowych z lekiem w różnych temperaturach przez określony czas, białko związane z lekiem wykazuje zwiększoną stabilność termiczną, dzięki czemu jest mniej podatne na denaturację i wytrącanie. Wytrącone niezwiązane białka są następnie usuwane przez wirowanie, a interakcje lek-cel są następnie identyfikowane za pomocą analizy western blot supernatantu22. Aby zidentyfikować potencjalne cele molekularne Sal, wybrano CETSA w celu oceny jego powinowactwa do wiązania z białkami związanymi ze szlakiem AMPK/Sirt1/HIF-1α.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

Szczegóły handlowe dotyczące odczynników i sprzętu użytego w tym badaniu znajdują się w Tabeli Materiałów.

1. Przygotowanie roztworu

  1. Przygotuj kompletną zmodyfikowaną pożywkę Eagle (DMEM) firmy Dulbecco, dodając 10% płodowej surowicy bydlęcej i 1% penicyliny-streptomycyny.
  2. Przygotować 20 mM roztwór Sal, rozpuszczając 3 mg Sal w 500 μl soli fizjologicznej buforowanej fosforanami (PBS)21.
  3. Przefiltrować 500 ml czystego chromatograficznie acetonitrylu (faza ruchoma A) za pomocą membrany organicznej o wielkości 0,45 μm.
  4. Przygotować 1000 ml ruchomej fazy B, dodając 3,5 ml odczynnika I do 1 litra wody dejonizowanej. Dostosuj pH do 6,15 za pomocą odczynnika II, postępując zgodnie z instrukcjami zestawu do oznaczania zawartości nukleotydów (ATP, ADP i AMP) (patrz Tabela materiałów).
    UWAGA: Odczynnik I i odczynnik II znajdują się w zestawie do oznaczania zawartości nukleotydów (ATP, ADP i AMP).
  5. Przefiltrować ruchomą fazę B za pomocą wodnej membrany 0,22 μm.
    UWAGA: Fazę mobilną B należy zużyć natychmiast po przygotowaniu. Ruchome fazy A i B powinny być sonikowane przez 30 minut przed użyciem w celu usunięcia pęcherzyków powietrza.
  6. Rozcieńczyć 1 μM ATP, ADP i AMP wzorcowym roztworem podstawowym wody dejonizowanej, aby uzyskać roztwory wzorcowe serii 0,5 μM, 0,1 μM, 0,05 μM, 0,01 μM i 0,005 μM ATP, ADP i AMP.
  7. Przefiltruj serię roztworów wzorcowych za pomocą mikroporowatej membrany filtracyjnej typu igłowego 0,22 μm.
    UWAGA: Brązowe butelki iniekcyjne powinny być używane do przechowywania seryjnych roztworów wzorcowych. Przygotowaną serię roztworów wzorcowych należy zużyć jak najszybciej.

2. Hodowla komórkowa

UWAGA: Hodowla komórek HT22 i model hipoksji stymulowanej CoCl2 zostały ustalone zgodnie z poprzednim raportem21.

  1. Hodować komórki HT22 w temperaturze 37 °C z 5% CO2 aż do osiągnięcia 80% konfluencji na szalce Petriego. Trawić komórki z 0,25% trypsyną przez 1 min.
  2. Seed 2 ×10 5 komórek z kroku 2.1 do płytek 6-dołkowych z kompletnym DMEM (grupa kontrolna bez leczenia farmakologicznego) lub kompletnym DMEM zawierającym lek (250 μM CoCl2, 250 μM CoCl2 + 10 μM Dor, 250 μM CoCl2 + 20 μM Sal i 250 μM CoCl2 + 10 μM Dor + 20 μM Sal). Inkubować przez 24 godziny w temperaturze 37 °C z 5% CO2,
    UWAGA: W każdej grupie ustawiono trzy równoległe próbki.

3. Test zawartości nukleotydów (ATP, ADP i AMP)

  1. Dodać 1 ml odczynnika ekstrakcyjnego I do każdej studzienki na płytkach 6-dołkowych z kroku 2.2.
    UWAGA: Odczynnik ekstrakcyjny I znajduje się w zestawie do oznaczania zawartości nukleotydów (ATP, ADP i AMP) (patrz Tabela materiałów).
  2. Liza komórek poprzez sonikację w łaźni lodowej przy użyciu ultradźwiękowego aparatu do rozbijania komórek (moc: 300 W, fale ultradźwiękowe przez 3 s, interwał 7 s, czas całkowity: 3 min).
  3. Odwirować zlizowane komórki w temperaturze 10,304 × g przez 10 minut w temperaturze 4 °C przy użyciu wirówki z chłodzeniem o dużej prędkości.
  4. Przenieść 0,75 ml supernatantu z kroku 3.3 do probówki o pojemności 2,0 ml. Dodać 0,75 ml odczynnika ekstrakcyjnego II, wstrząsnąć i wymieszać za pomocą mieszalnika wirowego i ponownie odwirować w temperaturze 10,304 × g przez 10 minut w temperaturze 4 °C.
    UWAGA: Odczynnik ekstrakcyjny II znajduje się w zestawie do oznaczania zawartości nukleotydów (ATP, ADP i AMP).
  5. Odpipetować supernatant z kroku 3.4 i przefiltrować go za pomocą mikroporowatej membrany filtracyjnej typu igłowego 0,22 μm do brązowej fiolki.
    Uwaga: ATP, ADP i AMP w wyekstrahowanej próbce nie są stabilne. Wszystkie procedury doświadczalne powinny być wykonywane w niskich temperaturach lub na lodzie. Próbki powinny być przetwarzane i badane tak szybko, jak to możliwe.
  6. Otwórz oprogramowanie chromatograficzne i ustaw następujące parametry: objętość iniekcji: 10 μL; temperatura kolumny: 27 °C; natężenie przepływu: 0,8 mL/min; długość fali detekcji: 254 nm; czas detekcji: 70 min. Ustawić procedurę elucji gradientowej zgodnie z tabelą 1.
  7. Kliknij przycisk wykonania, aby automatycznie wstrzyknąć próbkę i wykryć zawartość ATP, ADP i AMP w szeregowych roztworach wzorcowych (krok 1.7) i roztworach próbek (krok 3.5) zgodnie z programem ustawionym w kroku 3.6.
    UWAGA: Pod koniec eksperymentu umyj kolumnę chromatograficzną 98% ruchomą fazą B, aby zapobiec zatkaniu.
  8. Wykreśl standardowe krzywe ATP, ADP i AMP za pomocą oprogramowania do tworzenia wykresów i analizy statystycznej, z szeregowymi stężeniami wzorcowymi na osi x i obszarami pików na osi y.
  9. Oblicz zawartość ATP, ADP i AMP w próbkach, korzystając z równania krzywej standardowej z kroku 3.8.

4. Test komórkowego przesunięcia termicznego (CETSA)

  1. Lizować normalne komórki HT22 przez 20 minut na szalce Petriego przy użyciu lizatu zawierającego inhibitory proteazy (lizat: inhibitor proteazy = 100:1) poprzez wielokrotne pipetowanie komórek.
    UWAGA: Wykonaj ten krok w kąpieli lodowej, aby zapobiec degradacji białek.
  2. Zebrać lizat komórkowy z kroku 4.1 i poddać sonikacji na łaźni lodowej za pomocą ultradźwiękowego aparatu do rozbijania komórek (moc: 300 W, fale ultradźwiękowe przez 3 s, odstęp 7 s, czas całkowity: 3 min). Odwirować w temperaturze 10,304 × g, 4 °C przez 20 minut i zebrać supernatant.
    UWAGA: Podzielić supernatant na 14 porcji: 7 grup do komonetuacji z Sal i 7 grup do komonety z PBS jako kontrolą. W przypadku grupy leczonej Sal dodać 100 μl supernatantu i 0,1 μl 20 μM Sal na próbkę. Dla grupy kontrolnej dodać 100 μl supernatantu i 0,1 μl PBS na próbkę.
  3. Inkubować każdą próbkę w temperaturze pokojowej przez 30 minut, a następnie kontynuować inkubację w temperaturze 37 °C, 42 °C, 47 °C, 52 °C, 57 °C, 62 °C i 67 °C przez 3 minuty przy użyciu metalowego przyrządu do kontroli temperatury ogrzewania.
  4. Odwirować próbki z etapu 4.3 w temperaturze 10,304 × g przez 20 minut w temperaturze 4 °C i zebrać supernatant za pomocą pipety.
  5. Zmierzyć całkowite stężenie białka w supernatantze od kroku 4.4 za pomocą zestawu do oznaczania stężenia białka BCA, postępując zgodnie z instrukcjami producenta (patrz tabela materiałów).
  6. Przygotować 10% żel separacyjny za pomocą zestawu do szybkiego przygotowania żelu PAGE, postępując zgodnie z instrukcjami producenta (patrz Tabela materiałów).
  7. Załadować 3 μl wstępnie wybarwionego markera białkowego i 14 μl próbek do dołków żelu rozdzielającego (końcowa ilość białka na studzienkę: 20 μg).
  8. Uruchom żel za pomocą buforu do elektroforezy przez 1 godzinę przy napięciu 80-100 mV, aby uzyskać oddzielone białka.
  9. Przenieść białka z kroku 4.8 na membranę PVDF za pomocą roztworu do szybkiego przenoszenia membranowego i struktury warstwowej (bawełniana bibuła filtracyjna-membrana PVDF-żel białkowy-bibuła filtracyjna-bawełna) w temperaturze 400 mA przez 30 minut.
  10. Zablokuj membrany PVDF z kroku 4.9 5% roztworem albuminy surowicy bydlęcej (BSA) przez 1-2 godziny w temperaturze pokojowej.
    UWAGA: Przygotować 5% roztwór BSA, rozpuszczając 5 mg proszku BSA w 100 ml roztworu TBST zawierającego 100 ml buforu TBS i 0,05% Tween 20 .
  11. Inkubować błony PVDF z kroku 4.10 z 5 ml rozcieńczonego przeciwciała pierwszorzędowego w temperaturze 4 °C przez noc.
    UWAGA: Rozcieńczyć przeciwciało pierwszorzędowe w roztworze BSA (stosunek 1:1000).
  12. Przemyć membrany PVDF trzykrotnie TBST przez 5 minut każda, aby usunąć niezwiązane przeciwciała pierwszorzędowe.
  13. Inkubować błony z kroku 4.12 z rozcieńczonym przeciwciałem drugorzędowym sprzężonym z peroksydazą chrzanową (HRP) przez 2 godziny w temperaturze pokojowej na wytrząsarce do odbarwiania.
    UWAGA: Rozcieńczyć przeciwciało drugorzędowe sprzężone z HRP w roztworze BSA (stosunek 1:10 000) .
  14. Przemyć błony trzykrotnie TBST przez 5 minut każda, aby usunąć resztki przeciwciał drugorzędowych.
  15. Pokryj błony z kroku 4.14 chemiluminescencyjnym wywoływaczem ECL, a następnie zobrazuj sygnał białka docelowego za pomocą systemu obrazowania.
    UWAGA: Wykonaj ten krok w ciemności, aby zapobiec wygaszaniu fluorescencji.
  16. Przeanalizuj i określ ilościowo wartość szarości docelowych białek za pomocą oprogramowania ImageJ (patrz T able of Materials).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Krzywe wzorcowe dla ATP, ADP i AMP wykrytych za pomocą HPLC wynosiły odpowiednio Y = 7006,5X - 222,99, Y = 5217,3X - 17,796 oraz Y = 9280,1X + 22,749 (Rysunek 1A-C). Zawartość nukleotydów zmierzoną w każdej grupie metodą HPLC obliczono przy użyciu krzywych wzorcowych (Rysunek 1D-I). Stwierdzono, że CoCl2 znacząco obniżył poziomy ATP i ADP w komórkach HT22 w porównaniu z grupą kontroln...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

Mitochondria są kluczowymi organellami zaangażowanymi w terapeutyczną profilaktykę HHBI 23,24,25. Wcześniejsze badania przeprowadzone przez grupę potwierdziły, że Sal reguluje ekspresję białek AMPK, Sirt1 i HIF-1α, poprawiając funkcję mitochondriów neuronów i chroniąc przed HHBI21,24. Jednak bezpośredni wpływ Sal na nukleotydy w niedotlenionych komórkach wymaga dalszych ...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Podziękowania

Ta praca była wspierana przez Narodową Fundację Nauk Przyrodniczych Chin (82274207 i 82474185), Departament Nauki i Technologii Prowincji Syczuan (2024NSFSC1845), Fundację Naukową dla Młodzieży Departamentu Nauki i Technologii Prowincji Syczuan (2023NSFSC1776), Kluczowy Program Badawczo-Rozwojowy Ningxia (2023BEG02012), Projekt Wspierania Talentów Młodzieżowych Chińskiego Stowarzyszenia Medycyny Chińskiej na lata 2024-2026 (2024-QNRC2-B07) oraz Xinglin Projekt Promocji Badań Naukowych Uniwersytetu TCM w Chengdu (XKTD2022013 i QJJJ2024027).

WKŁAD AUTORA:
Pomysłodawcami tego projektu byli Xiaobo Wang, Yating Zhang, Ya Hou, Rui Li i Xianli Meng. Yating Zhang, Ya Hou i Tingting Kuang przeprowadzili eksperymenty i przeanalizowali dane. Yating Zhang i Hong Jiang napisali manuskrypt. Xiaobo Wang i Xianli Meng poprawili manuskrypt. Wszyscy autorzy przeczytali i zatwierdzili ostateczną wersję manuskryptu.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
AcetonitrylAladdinA104440
0,22 &mikro; m membrana wodnaJintengJTMF0445
0,22 &mikro; m mikroporowata membrana filtracyjna typu igłowegoJintengJTSFM013001
0,45 i mikro; m membrana organicznaOprogramowanie JintengJTMF0448
Agilent OpenLab   AgilentWersja 2.X
Przeciwciało-AMPKαTechnologia sygnalizacji komórkowej#2532
Przeciwciało-HIF-1&alfa;Technologia sygnalizacji komórkowej#41560
Przeciwciało-p-AMPK&alfa;Technologia sygnalizacji komórkowej#50081
Technologia sygnalizacji komórkowejprzeciwciało-Sirt12028
Technologia sygnalizacji komórkowejprzeciwciała-β-aktyny#4970
Zestaw do oznaczania stężenia białka BCATechnologia biologiczna Boster17E17B46
Albumina surowicy bydlęcejCywin Innovation (Beijing) Biotechnology Co., Ltd.SW127-02
Inhibitor fosfatazy o szerokim spektrum działania (100 razy;)Boster Biological TechnologyAR1183
Kolumna chromatograficznaAgilentSB-C18
CoCl2Sigma15862
Wytrząsarka do odbarwianiaKylin-BellTS-2
DorsomorphinMedChemExpress (MCE)HY-13418A
Zmodyfikowany orzeł Dulbecco średniGibco8121587
Bufor do elektroforezyNCM Biotech20230801
Płodowa surowica bydlęcaGibco2166090RP
Koza Anty-królicza IgG H& L (TRITC)ZenBioScience Co., Sp. z o.o.
Oprogramowanie GraphPad PrismOprogramowanie GraphPad, LLCWersja 9.0.0
Wysokosprawna chromatografia cieczowaAgilent1260 Infinity II Prime 
Wirówka z chłodzeniem o dużej prędkościThermo Fisher ScientificLegend Micro 17R
HRP sprzężona kozia koza anty-królicza IgG (H + L)Boster Biological Technology Co., Ltd.Ogniwa BA1054
HT22Guangzhou Jennio Biotech Co., Ltd.JNO-02001
Nadczuły zestaw chemiluminescencyjny ECLNCM BiotechP10300
Oprogramowanie Image JNational Institutes of Healthv1.8.0
Przyrząd do kontroli temperatury ogrzewania metaluBaiwan Electronictechnology Co., Ltd.HG221-X3
M116118metanolualadyny
(ATP, ADP i AMP)Beijing Solarbio Science & Technologia Co., Sp. z o.o.BC5114
PAGE Zestaw do szybkiego przygotowania żeluBiosharpPL566B-5
Penicylina-streptomycynaNCM BiotechC125C5
Sól fizjologiczna buforowana fosforanem (1&razy;)Gibco8120485
Wstępnie barwiony marker białkowy (10-180 kDa)Cywin Innovation (Beijing) Biotechnology Co., Ltd.SW176-02
Bufor ładujący białko (5x)Boster Biological TechnologyAR1112
PVDF (0,45 μ m)Cywin Innovation (Pekin) Biotechnology Co., Ltd.SW120-01
Rozwiązanie do szybkiego transferu membranyCywin Innovation (Beijing) Biotechnology Co., Ltd.SW171-02
Lizaat RIPABoster Biological Technology Co., Ltd.AR0105
SalidrozydChengdu Herbpurify Co., Ltd.RFS-H0400191102
Bufor TBSNCM Biotech23HA0102
Bufor transbłonowyNCM Biotech23CA2000
Trypsyna (0,25%, 1&razy;)HyCloneJ210045
Tween 20Shanghai Canspec Scientific Instruments Co., Ltd.
Ultradźwiękowy aparat do rozbijania komórekNingbo Xinyi sprzęt ultradźwiękowy Co., Ltd.JY92-IIDN
System obrazowania VisionworksAnalytik JenaUVP ChemStudio
Mikser VortexKylin-BellXW-80A
#511202 Zestaw do oznaczania zawartości nukleotydów PM12012

Bibliografia

  1. Marutani, E., Ichinose, F. Sulfide catabolism ameliorates hypoxic brain injury. Nat Commun. 12 (1), 3108(2021).
  2. Chen, X., Ma, W., Li, Y. Current situation of Chinese and Western medicine research on hypoxic brain injury at high altitude. Jilin Medical J. 43 (11), 3099-3101 (2022).
  3. Huo, Y., Zhao, A., Li, X., Li, J., Wang, R. Animal models of acute plateau disease. Chinese Pharmacol Bull. 37 (01), 26-30 (2021).
  4. Netzer, N., Strohl, K., Faulhaber, M., Gatterer, H., Burtscher, M. Hypoxia-related altitude illnesses. J Travel Med. 20 (4), 247-255 (2013).
  5. Lefferts, W. K., et al. Effect of hypoxia on cerebrovascular and cognitive function during moderate intensity exercise. Physiol Behav. 165, 108-118 (2016).
  6. Burtscher, J., Mallet, R. T., Burtscher, M., Millet, G. P. Conditioning the brain: From exercise to hypoxia. Exerc Sport Sci Rev. 49 (4), 291-292 (2021).
  7. Koester-Hegmann, C., et al. High-altitude cognitive impairment is prevented by enriched environment including exercise via VEGF signaling. Front Cell Neurosci. 12, 532(2019).
  8. Coimbra-Costa, D., Alva, N., Duran, M., Carbonell, T., Rama, R. Oxidative stress and apoptosis after acute respiratory hypoxia and reoxygenation in rat brain. Redox Biol. 12, 216-225 (2017).
  9. Nair, S., et al. Neuroprotection offered by mesenchymal stem cells in perinatal brain injury: Role of mitochondria, inflammation, and reactive oxygen species. J Neurochem. 158 (1), 59-73 (2021).
  10. Rodríguez, M., Valez, V., Cimarra, C., Blasina, F., Radi, R. Hypoxic-Ischemic encephalopathy and mitochondrial dysfunction: facts, unknowns, and challenges. Antioxid Redox Sign. 33 (4), 247-262 (2020).
  11. Li, T., et al. Overexpression of apoptosis inducing factor aggravates hypoxic-ischemic brain injury in neonatal mice. Cell Death Dis. 11 (1), 77(2020).
  12. March-Diaz, R., et al. Hypoxia compromises the mitochondrial metabolism of Alzheimer's disease microglia via HIF1. Nature Aging. 1 (4), 385-399 (2021).
  13. Aabdien, A., Mallard, C., Hagberg, H. Mitochondrial dynamics, mitophagy and biogenesis in neonatal hypoxic-ischaemic brain injury. FEBS Lett. 592 (5), 812-830 (2018).
  14. Bai, X. L., Deng, X. L., Wu, G. J., Li, W. J., Jin, S. Rhodiola and salidroside in the treatment of metabolic disorders. Mini-Rev Med Chem. 19 (19), 1611-1626 (2019).
  15. Ji, R., et al. Salidroside alleviates oxidative stress and apoptosis via AMPK/Nrf2 pathway in DHT-induced human granulosa cell line KGN. Arch Biochem Biophys. 715, 109094(2022).
  16. You, L., Zhang, D., Geng, H., Sun, F., Lei, M. Salidroside protects endothelial cells against LPS-induced inflammatory injury by inhibiting NLRP3 and enhancing autophagy. BMC Complement Med. 21 (1), 146(2021).
  17. Yang, S. X., et al. Salidroside alleviates cognitive impairment by inhibiting ferroptosis via activation of the Nrf2/GPX4 axis in SAMP8 mice. Phytomedicine. 114, 154762(2023).
  18. Hou, Y., et al. Salidroside intensifies mitochondrial function of CoCl2-damaged HT22 cells by stimulating PI3K-AKT-MAPK signaling pathway. Phytomedicine. 109, 154568(2023).
  19. Yang, H., et al. Black soybean peptide mediates the AMPK/SIRT1/NF-κB signaling pathway to alleviate Alzheimer's-related neuroinflammation in lead-exposed HT22 cells. Int J Biol Macromol. 286, 138404(2025).
  20. Yoon, H., Shin, S. H., Shin, D. H., Chun, Y. S., Park, J. W. Differential roles of Sirt1 in HIF-1α and HIF-2α mediated hypoxic responses. Biochem Bioph Res Co. 444 (1), 36-43 (2014).
  21. Hou, Y., et al. Rhodiola crenulata alleviates hypobaric hypoxia-induced brain injury by maintaining BBB integrity and balancing energy metabolism dysfunction. Phytomedicine. 128, 155529(2024).
  22. Jafari, R., et al. The cellular thermal shift assay for evaluating drug target interactions in cells. Nat Protoc. 9 (9), 2100-2122 (2014).
  23. Tang, Y., et al. Salidroside attenuates CoCl2-simulated hypoxia injury in PC12 cells partly by mitochondrial protection. Eur J Pharmacol. 912, 174617(2021).
  24. Wang, X., et al. Salidroside, a phenyl ethanol glycoside from Rhodiola crenulata, orchestrates hypoxic mitochondrial dynamics homeostasis by stimulating Sirt1/p53/Drp1 signaling. J Ethnopharmacol. 293, 115278(2022).
  25. Kristián, T. Metabolic stages, mitochondria and calcium in hypoxic/ischemic brain damage. Cell Calcium. 36 (3-4), 221-233 (2004).
  26. Carling, D. AMPK signalling in health and disease. Curr Opin Cell Biol. 45, 31-37 (2017).
  27. Steinberg, G. R., Hardie, D. G. New insights into activation and function of the AMPK. Nat Rev. Mol Cell Bio. 24 (4), 255-272 (2023).
  28. Zhang, N., et al. Restoration of energy homeostasis under oxidative stress: Duo synergistic AMPK pathways regulating arginine kinases. PLoS Genet. 19 (8), e1010843(2023).
  29. Wang, Y., et al. Irisin ameliorates neuroinflammation and neuronal apoptosis through integrin αVβ5/AMPK signaling pathway after intracerebral hemorrhage in mice. J Neuroinflamm. 19 (1), 82(2022).
  30. Liu, H., Li, Y., Xiong, J. The role of hypoxia-inducible factor-1 alpha in renal disease. Molecules. 27 (21), 7318(2022).
  31. Wu, H., et al. Mitochondrial dysfunction promotes the transition of precursor to terminally exhausted T cells through HIF-1α-mediated glycolytic reprogramming. Nat Commun. 14 (1), 6858(2023).
  32. Joo, H. Y., et al. NADH elevation during chronic hypoxia leads to VHL-mediated HIF-1α degradation via SIRT1 inhibition. Cell Biosci. 13 (1), 182(2023).
  33. Ham, P. B., Raju, R. Mitochondrial function in hypoxic ischemic injury and influence of aging. Prog Neurobiol. 157, 92-116 (2017).
  34. Dal Cortivo, G., Barracchia, C. G., Marino, V., D'Onofrio, M., Dell'Orco, D. Alterations in calmodulin-cardiac ryanodine receptor molecular recognition in congenital arrhythmias. Cell Mol Life Sci. 79 (2), 127(2022).
  35. Wang, Z. Q., et al. Cyclovirobuxine D inhibits triple-negative breast cancer via YAP/TAZ suppression and activation of the FOXO3a/PINK1-Parkin pathway-induced mitophagy. Phytomedicine. 136, 156287(2024).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Tagi

Ochrona mitochondri w przez salidrosydszlak AMPKszlak Sirt1HIF 1 alfazawarto nukleotyd wpoziomy ATPkom rkowe przesuni cie termicznewysokosprawna chromatografia cieczowatradycyjna medycyna chi ska

Ten artykuł został opublikowany

Film wkrótce dostępny

Skontaktuj się z nami
Poleć bibliotece

Prywatność

Warunki korzystania z usługi

Zasady

Prawa autorskie © 2026 MyJoVE Corporation. Wszelkie prawa zastrzeżone.