Zoptymalizowana i uproszczona technika produkcji i hodowli precyzyjnie krojonych plastrów wątroby

Dany Perocheau; Claire Duff; Sonam Gurung; Loukia Touramanidou; Garima Sharma; Julien Baruteau

doi:10.3791/67202

Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Zoptymalizowana i uproszczona technika produkcji i hodowli precyzyjnie krojonych plastrów wątroby

3.4K wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/67202

⸱

22 listopada 2024

Dany Perocheau¹ , Claire Duff¹ , Sonam Gurung¹ , Loukia Touramanidou¹ , Garima Sharma¹ , Julien Baruteau¹^,²^,³

¹Great Ormond Street Institute of Child Health, University College London, ²Great Ormond Street Hospital for Children NHS Foundation Trust, ³National Institute of Health Research Great Ormond Street Biomedical Research Centre

W tym artykule

Podsumowanie

Protokół produkcji i hodowli precyzyjnie ciętych plastrów wątroby (PCLS) do badania wątroby myszy. W artykule skupiono się na kluczowych aspektach protokołu, który wymaga jedynie standardowego sprzętu laboratoryjnego z dostępem do wibratomu i pozwala na przeżycie PCLS przez minimum 4 dni.

Streszczenie

Ten protokół przedstawia prosty system do tworzenia i hodowli precyzyjnie ciętych plastrów wątroby (PCLS). PCLS zawiera wszystkie komórki w nienaruszonym środowisku i dlatego przypomina mini model całego narządu. Umożliwiają one badanie żywych tkanek przy jednoczesnej replikacji ich złożonych fenotypów. Protokół ten umożliwia przygotowanie plastrów z wątroby myszy przy użyciu wibratomu i standardowego sprzętu laboratoryjnego. Protokoły produkcji i hodowli PCLS nie są ustandaryzowane i mogą się dość drastycznie różnić w zależności od tkanki będącej przedmiotem zainteresowania, rodzaju użytego wibratomu i zapotrzebowania na tlen. Mogą one być trudne do odtworzenia w niektórych laboratoriach, które mają dostęp tylko do podstawowego wibratomu i powszechnych urządzeń do hodowli tkankowych. Opracowaliśmy protokół, w którym skupiliśmy się na znaczeniu niektórych kluczowych kroków w ramach różnych już dostępnych protokołów. Protokół ten podkreśla zatem znaczenie metody osadzania, orientacji cięcia, systemu dynamicznego i statycznego oraz znaczenia minimalnej objętości hodowli. Protokół ten można ustalić i odtworzyć w prosty sposób w większości laboratoriów, które mają dostęp do podstawowego krajalnika do tkanek. Podsumowując i zgodnie z tym protokołem, PCLS mogą pozostać przy życiu przez co najmniej 4 dni. PCLS jest prostym, ekonomicznym i powtarzalnym modelem do badania patofizjologicznych i terapeutycznych badań przesiewowych narządów, takich jak wątroba.

Wprowadzenie

Precyzyjnie wycięte plastry tkanek (PCTS) to cienkie fragmenty narządów. Pozwalają one na zachowanie architektury narządu, replikując mini-narząd, przy jednoczesnym zachowaniu trójwymiarowego aspektu sąsiednich komórek i macierzy zewnątrzkomórkowej. Jest to atrakcyjny model ze względu na łatwy dostęp, oszczędność kosztów i mniej pracochłonne cechy przy jednoczesnym zachowaniu architektury tkankowej.

PCTS wypełnia lukę między badaniami na komórkach in vitro a badaniami na zwierzętach in vivo, pokonując większość wad obu modeli. PCTS został wygenerowany z różnych narządów, takich jak wątroba¹, intesti....