Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Wysokoprzepustowe podejście przesiewowe do oceny powinowactwa wiązania zanieczyszczeń środowiska z receptorami jądrowymi

859 wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/67327

⸱

20 września 2024

 , 
1School of Public Health, Qingdao University

W tym artykule

Podsumowanie

Ten protokół opisuje wysokoprzepustowy system przesiewowy, który wykorzystuje polaryzację fluorescencyjną określonej sondy fluorescencyjnej wiążącej się z receptorem jądrowym jako odczyt do badania zanieczyszczeń środowiska.

Streszczenie

Wykryto rosnące poziomy związków chemicznych w środowisku, powodując powszechne zanieczyszczenie i stwarzając zagrożenia dla zdrowia ludzkiego. Jednak pomimo ich dużego występowania w środowisku, istnieje bardzo niewiele informacji na temat ich skutków toksykologicznych. Pilne jest opracowanie wysokoprzepustowych metod badań przesiewowych (HTS), które mogłyby stanowić podstawę badań toksykologicznych. W tym badaniu opracowano test wiązania receptor-ligand przy użyciu systemu HTS w celu określenia siły wiązania zanieczyszczeń środowiskowych z receptorami jądrowymi. Test przeprowadza się przy użyciu czytnika mikropłytek (tj. 96-dołkowej płytki zawierającej różne substancje chemiczne) poprzez pomiar polaryzacji fluorescencji (FP) określonej sondy fluorescencyjnej. Test ten składa się z czterech części: budowy i transformacji wektorów rekombinowanych, ekspresji i oczyszczania białka receptorowego (domeny wiążącej ligand), wiązania receptor-sonda oraz konkurencyjnego wiązania substancji chemicznych z receptorem. W celu zilustrowania procedury oznaczania określono siłę wiązania dwóch zanieczyszczeń środowiska, kwasu perfluorooktanosulfonowego (PFOS) i fosforanu trifenylu (TPHP), z receptorem gamma aktywowanym proliferatorem peroksysomów (PPARγ). Na koniec omówiono również zalety i wady tej metody oraz jej potencjalne zastosowania.

Wprowadzenie

Duża liczba substancji chemicznych została powszechnie wykryta w środowisku i ciałach ludzkich, co budzi poważne obawy dotyczące ich wpływu na środowisko ekologiczne i zdrowie ludzi1,2,3. Pomimo częstego występowania w środowisku, informacje na temat ich skutków toksykologicznych są skąpe. W związku z tym pilne jest opracowanie wysokoprzepustowych metod badań przesiewowych (HTS) w celu ułatwienia oceny toksyczności chemicznej.

Zgłoszono kilka metod wysokoprzepustowych badań przesiewowych (HTS) do oceny toksyczności chemicznej, takich jak testy biologiczne HTS używane w programach Tox21 i ToxCast4,5. Metody te mogą szybko zidentyfikować potencjalne substancje toksyczne i dostarczyć cennych informacji na temat mechanizmów toksyczności chemicznej. Jednak te testy biologiczne HTS opierają się głównie na systemach opartych na komórkach, które mogą być złożone i kosztowne. Dodatkowo, metody sekwencjonowania o wysokiej przepustowości zostały również wykorzystane do oceny toksyczności chemicznej, ale osiągnięcie wysokoprzepustowej oceny chemikaliów pozostaje wyzwaniem6. W poprzednich badaniach opracowano testy konkurencyjnego wiązania receptor-ligand oparte na polaryzacji fluorescencyjnej (FP) w celu określenia siły wiązania kilku zanieczyszczeń środowiska, w tym substancji per- i polifluoroalkilowych (PFAS)7,8,9, bisfenol A (BPA)10,11 i cząstki stałe (PM)12, z receptorami jądrowymi, takimi jak receptor aktywowany proliferatorem peroksysomów (PPAR)7,8,9,10,13, farnezoidowy receptor X (FXR)11,12 i receptor tarczycy (TR)14,15. Takie podejście jest wydajne, ekonomiczne i zapewnia wgląd w mechanizmy mechaniczne.

W tym badaniu, protokół testu wiązania receptor-ligand jest opisany na podstawie wykrywania polaryzacji fluorescencji (FP) małej sondy fluorescencyjnej. Zasada testu wiązania receptor-ligand opartego na FP jest zilustrowana na Rysunek 1. Kiedy mała cząsteczka fluorescencyjna jest wzbudzana przez światło spolaryzowane w płaszczyźnie, emitowane światło staje się wysoce zdepolaryzowane z powodu szybkiej rotacji molekularnej. Jednak, gdy znacznik wiąże się z większym receptorem, jego rotacja jest spowolniona. Wysoka wartość FP jest wykrywana, gdy znacznik jest związany z dużym receptorem, podczas gdy niska wartość FP jest obserwowana, gdy znacznik jest wolny. Receptor gamma aktywowany proliferatorem peroksysomów (PPARγ) został oczyszczony w celu związania sondy z receptorem. Rozyglitazon (Rosi), kwas perfluorooktanosulfonowy (PFOS) i fosforan trifenylu (TPHP) były używane do konkurowania o wiązanie sondy z receptorem. Rosi, swoisty agonista PPARγ, był stosowany jako kontrola pozytywna w testach konkurencyjnego wiązania receptora. Ponadto PFOS i TPHP zostały wcześniej zidentyfikowane jako słabi agoniści PPARγ w poprzednich badaniach8,9,10,11,12,13,14,15,16,17. Ponadto należą one do różnych kategorii strukturalnych związków znanych z narażenia środowiskowego i wyróżniają się stosunkowo wysokimi wskaźnikami wykrywalności w populacjach ludzkich. Związki te wykorzystano do dalszej walidacji szerokiego zastosowania testu wiązania konkurencji. Procedura składa się z czterech etapów: budowy i transformacji wektorów rekombinowanych, ekspresji i oczyszczania białka receptorowego (domeny wiążącej ligand), wiązania receptor-sonda oraz konkurencyjnego wiązania substancji chemicznych z receptorem.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

Szczegóły dotyczące odczynników i sprzętu są wymienione w Tabeli Materiałów.

1. Budowa i transformacja wektorów rekombinowanych

UWAGA: PPARγ jest zależnym od ligandu czynnikiem transkrypcyjnym o klasycznej strukturze receptora jądrowego, składającej się z domeny wiążącej DNA, która reguluje geny docelowe i domeny wiążącej ligand aktywowanej przez ligandy. Po aktywacji liganda, PPARγ tworzy heterodimer z innym receptorem jądrowym, receptorem retinoidowym X (RXR) i wiąże się z elementami odpowiedzi PPARγ, regulując w ten sposób transkrypcję dalszych genów docelowych9,16.

  1. Zaprojektuj startery dla PPARγ-LBD (patrz Tabela 1) i amplifikuj segment DNA PPARγ-LBD (patrz Tabela 2 i Tabela 3).
  2. Linearyzuj wektor pET28a znakowany His×6, trawiąc go endonukleazami restrykcyjnymi XhoI i BamHI18.
  3. Sklonuj segment DNA PPARγ-LBD do wektora pET28a znakowanego His×6 za pomocą dostępnego na rynku zestawu do klonowania, w wyniku czego powstanie rekombinowany plazmid pET28a-PPARγ-LBD-6×His18.
  4. Transfekcja rekombinowanego plazmidu ekspresyjnego pET28a-PPARγ-LBD-6×His do komórek BL21 (DE3) Escherichia coli w celu ekspresji białka18.
  5. Dodać 5 μl rekombinowanego wektora do właściwych komórek BL21(DE3), inkubować na lodzie przez 30 minut, przeprowadzić szok termiczny w temperaturze 42 °C przez 45 s, a następnie natychmiast powrócić do lodu.
  6. Dodać 900 μl pożywki LB, wstrząsać w temperaturze 37 °C przez 1 godzinę (160-200 obr./min), następnie odwirować przy ~3000 x g przez 5 minut w temperaturze pokojowej.
  7. Wyrzucić supernatant, ponownie zawiesić osad bakteryjny w 100 μl pożywki LB i rozprowadzić na pożywce stałej. Odwrócić płytki i kulturę w temperaturze 37 °C przez 12-16 godzin.
  8. Wybierz poszczególne kolonie do sekwencjonowania, identyfikacji, a następnie ekspresji i oczyszczania białka.

2. Ekspresja i oczyszczanie białka receptorowego

  1. Inkubować przekształcone komórki BL21 (DE3) w 200 ml pożywki LB uzupełnionej 100 μg/ml ampicyliny na wytrząsarce orbitalnej (230 obr./min) przez 1-2 godziny w temperaturze 37 °C.
  2. Indukować komórki, gdy OD600 osiągnie 0,4-0,6 jednostek absorbancji, dodając 10 μM izopropylu β-D-1-tiogalaktopiranozydu (IPTG) i inkubować w temperaturze 16 °C przez 16 godzin.
  3. Zebrać zawiesinę bakteryjną i odwirować w temperaturze 8000 × g, 4 °C, przez 10 minut.
  4. Poddać komórki lizie w 20 ml rozpuszczalnego buforu do lizy (50 mM NaH2PO4, 300 mM NaCl, 10 mM imidazolu, pH 8,0), dodając 200 μl fluorku fenylometylosulfonylu (PMSF) i 200 μl lizozymu. Ponownie zawiesić osad bakteryjny za pomocą pipety o pojemności 5 ml, a następnie kontynuować sonikację przy 30% mocy przez 20 minut.
  5. Dodaj bufor do lizy równy 5-krotności objętości kolumny, aby zrównoważyć kolumnę niklu. Powtórz ten proces dwa razy i odłóż na bok.
  6. Odwirować sonikowaną zawiesinę bakteryjną o stężeniu 8000 × g przez 15 minut w temperaturze 4 °C w celu otrzymania bakteryjnego supernatantu lizatu (CL).
  7. Załaduj CL na kolumnę niklu (do adsorpcji białek), aby uzyskać przepływ (FT).
  8. Przemyć kolumnę 5-krotnością objętości buforu płuczącego (50 mM NaH2PO4, 300 mM NaCl, 20 mM imidazolu, pH 8,0) w celu otrzymania eluatu do przemywania (W1-W6).
  9. Przepłukać kolumnę 1 ml buforu elucyjnego (50 mM NaH2PO4, 300 mM NaCl, 250 mM imidazolu, pH 8,0) w celu elucji białka docelowego i otrzymania frakcji białkowych (E1-E5).
  10. Weź 20 μl podwielokrotności każdej frakcji (CL, FT, W1-W6 i E1-E5) i przeanalizuj za pomocą SDS-PAGE18 z barwieniem Coomassie Brilliant Blue. PPARγ-LBD działa jako białko o masie 34,9 kDa w żelu denaturującym.

3. Test wiązania receptora

UWAGA: W tym teście, C1-BODIPY-C12 został użyty jako specyficzna dla miejsca sonda fluorescencyjna do ustalenia systemu wiązania receptor-ligand. C1-BODIPY-C12, specyficzny ligand dla PPARγ, jest fluorescencyjnym analogiem kwasu tłuszczowego z grupą fluorescencyjną BODIPY wbudowaną w kwas tłuszczowy w pozycji C1.

  1. Rozcieńczyć oczyszczony ludzki PPARγ-LBD w buforze Tris-HCl (20 mM Tris, 100 mM NaCl, pH 8,0) do zakresu stężeń od 1 nM do 6400 nM. Sondę C1-BODIPY-C12 należy również rozcieńczyć w buforze Tris-HCl do stężenia 50 nM.
  2. Wymieszaj rozcieńczony roztwór PPARγ-LBD (55 μl na studzienkę) i roztwór sondy C1-BODIPY-C12 (55 μl na dołek) na 96-dołkowej czarnej płytce. Inkubować w temperaturze pokojowej przez 5 minut.
  3. Zmierz polaryzację fluorescencji (FP) za pomocą czytnika mikropłytek.
  4. Wykreślić wartości FP w stosunku do stężenia receptora, dopasować krzywą za pomocą specyficznego wiązania z równaniem nachylenia wzgórza za pomocą oprogramowania statystycznego i graficznego i obliczyć wartość Kd.

4. Konkurencyjny test wiązania

UWAGA: W tym teście do wiązania receptora użyto 800 nM ludzkiej sondy PPARγ-LBD i 50 nM sondy C1-BODIPY-C12. Rozyglitazon (Rosi), fosforan trifenylu (TPHP) i kwas perfluorooktanosulfonowy (PFOS) stosowano w celu konkurowania z wiązaniem sondy z PPARγ.

  1. Rozcieńczyć trzy związki w buforze Tris-HCl w zakresie stężeń od 0 do 200 μM.
  2. Przygotować roztwór wiążący receptor-sonda o końcowym stężeniu 800 nM ludzkiego PPARγ-LBD i 50 nM sondy C1-BODIPY-C12.
  3. Wymieszaj roztwór wiążący receptor-sonda (55 μl na dołek) i roztwór złożony (55 μl na dołek) w 96-dołkowej czarnej płytce. Inkubować w temperaturze pokojowej przez 5 minut.
  4. Zmierz polaryzację fluorescencji (FP) za pomocą czytnika mikropłytek.
  5. Wykreślić wartości FP w funkcji stężenia liganda. Uzyskaj połówkowe maksymalne stężenie hamujące (IC50) każdego liganda z krzywej konkurencji za pomocą modelu sigmoidalnego przetworzonego przez oprogramowanie do tworzenia wykresów i analizy.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Ekspresja i oczyszczanie białka PPARγ-LBD
Białko PPARγ-LBD wyekspresowano heterologicznie w szczepie BL21 (DE3) jako białko z tagiem histydynowym. Białko wykryto w frakcjach rozpuszczalnych, a oczyszczone PPARγ-LBD wykazało pojedynczy prążek w elektroforezie SDS-PAGE o pozornej masie cząsteczkowej około 34,9 kDa (Rysunek 2), co jest zgodne z przewidywaną masą cząsteczkową białka.

Wiązanie sondy C1-BODIPY-C12 z P...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

Polaryzacja fluorescencyjna (FP), powierzchniowy rezonans plazmonowy (SPR) i magnetyczny rezonans jądrowy (NMR) są powszechnymi technikami stosowanymi do oceny bezpośrednich oddziaływań wiążących między białkami i związkami19,20. FP jest szeroko stosowany w badaniu interakcji molekularnych w celu odkrywania leków i chemicznych badań przesiewowych 21,22,23. Dla porównania...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Autorzy oświadczają, że nie występują konflikty interesów.

Podziękowania

Ta praca była wspierana przez Narodową Fundację Nauk Przyrodniczych Chin (Grant nr 82103875).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Sonda C1-BODIPY-C12Thermo Fisher Scientific, Chiny102209-82-3Wiąże się z PPARγ-LBD i emituje fluorescencję.
Coomassie Brilliant Blue R-250Solarbio, Chiny6104-59-2Zabarwić pasma białkowe.
Pryzmat GraphPadDotmaticshttps://www.graphpad.com/features
imidazolSolarbio, ChinyI8090Przygotuj do procesu oczyszczania białek.
Izopropyl β-D-1-tiogalaktopiranozydSolarbio, Chiny367-93-1Indukuj ekspresję PPARγ-LBD
Czytnik mikropłytekBiotek, USASynergy H1 Wykrywanie wartości FP
Odczynnik NaClShanghai7647-15-5Przygotuj do procesu oczyszczania białka.
NaH2PO4 · 2H2OOdczynnik Shanghai13472-35-0Przygotuj do procesu oczyszczania białka.
Ni NTA Beads 6FFSmart-Lifesciences, ChinySA005005Oczyszczanie białek.
Pochodzenie 8.5 OriginLab, Northampton, Massachusetts, Stany Zjednoczone
Kwas perfluorooktanosulfonowy (PFOS)J& K Scientific Ltd, Chiny1763-23-1Wykryte zanieczyszczenia środowiska
Fluorek fenylometylosulfonylu (PMSF)Solarbio, ChinyP0100Hamują degradację białek.
PPARγ-Zestaw do oznaczania konkurencjiThermo Fisher ScientificPV6136https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/PV6136
PPARγ-Zestaw do badań przesiewowych ligandów LBDCayman600616https://www.caymanchem.com/product/600616
Rozyglitazon (Rosi)aladyn, Chiny122320-73-4Agoniści PPARγ
WytrząsarkaZHICHENG, ChinyZWY-211CEkspansja kultur bakteryjnych i indukcja ekspresji białek
Fosforan trifenylu (TPHP)Macklin, ChinyT819317Wykryte zanieczyszczenia środowiska
TrisSolarbio, ChinyT8230Przygotuj do procesu oczyszczania białek.
TryptoneOXOID Limited, ChinyLP0042BPrzygotuj bulion lizogeniczny (LB).
Myjka ultradźwiękowaKimberly, ChinyLHO-1Zakłóć bakterie, aby osiągnąć całkowitą
lizę MocznikSolarbio, ChinyU8020Przygotuj do procesu oczyszczania białek.
Ekstrakt drożdżowyOXOID Limited, ChinyLP0021BPrzygotuj bulion lizogeniczny (LB).

Bibliografia

  1. Maddela, N. R., Ramakrishnan, B., Dueñas-Rivadeneira, A. A., Venkateswarlu, K., Megharaj, M. Chemicals/materials of emerging concern in farmlands: sources, crop uptake, and potential human health risks. Environ Sci Process Impacts. 24 (12), 2217-2236 (2022).
  2. Naidu, R., et al. Chemical pollution: A growing peril and potential catastrophic risk to humanity. Environ Int. 156, 106616(2021).
  3. Ryu, H., Li, B., De Guise, S., McCutcheon, J., Lei, Y. Recent progress in the detection of emerging contaminants PFASs. J Hazard Mater. 408, 124437(2021).
  4. Alofe, O., et al. Determining the endocrine disruption potential of industrial chemicals using an integrative approach: Public databases, in vitro exposure, and modeling receptor interactions. Environ Int. 131, 104969(2019).
  5. Bajard, L., et al. Endocrine disrupting potential of replacement flame retardants - Review of current knowledge for nuclear receptors associated with reproductive outcomes. Environ Int. 153, 106550(2021).
  6. Chen, Q., Chou, W. C., Lin, Z. Integration of toxicogenomics and physiologically based pharmacokinetic modeling in human health risk assessment of perfluorooctane sulfonate. Environ Sci Technol. 56 (6), 3623-3633 (2022).
  7. Li, C. H., Ren, X. M., Cao, L. Y., Qin, W. P., Guo, L. H. Investigation of binding and activity of perfluoroalkyl substances to the human peroxisome proliferator-activated receptor β/δ. Environ Sci Process Impacts. 21 (11), 1908-1914 (2019).
  8. Li, C. H., et al. Chlorinated polyfluorinated ether sulfonates exhibit higher activity toward peroxisome proliferator-activated receptors signaling pathways than perfluorooctanesulfonate. Environ Sci Technol. 52 (5), 3232-3239 (2018).
  9. Li, C. H., Shi, Y. L., Li, M., Guo, L. H., Cai, Y. Q. Receptor-bound perfluoroalkyl carboxylic acids dictate their activity on human and mouse peroxisome proliferator-activated receptor γ. Environ Sci Technol. 54 (15), 9529-9536 (2020).
  10. Li, C. H., Zhang, D. H., Jiang, L. D., Qi, Y., Guo, L. H. Binding and activity of bisphenol analogues to human peroxisome proliferator-activated receptor β/δ. Ecotoxicol Environ Saf. 226, 112849(2021).
  11. Zhang, D., et al. Binding activity and risk assessment of bisphenols toward farnesoid X receptor pathway: In vitro and in silico study. Sci Total Environ. 869, 161701(2023).
  12. Zhang, D., et al. Fine particulate matter disrupts bile acid homeostasis in hepatocytes via binding to and activating farnesoid X receptor. Toxicology. 506, 153850(2024).
  13. Li, C. H., Ren, X. M., Guo, L. H. Adipogenic activity of oligomeric hexafluoropropylene oxide (perfluorooctanoic acid alternative) through peroxisome proliferator-activated receptor γ pathway. Environ Sci Technol. 53 (6), 3287-3295 (2019).
  14. Qin, W. P., Li, C. H., Guo, L. H., Ren, X. M., Zhang, J. Q. Binding and activity of polybrominated diphenyl ether sulfates to thyroid hormone transport proteins and nuclear receptors. Environ Sci Process Impacts. 21 (6), 950-956 (2019).
  15. Ren, X. M., Li, C. H., Zhang, J. Q., Guo, L. H. Binding and activity of sulfated metabolites of lower-chlorinated polychlorinated biphenyls towards thyroid hormone receptor alpha. Ecotoxicol Environ Saf. 180, 686-692 (2019).
  16. Evans, N., et al. In vitro activity of a panel of per- and polyfluoroalkyl substances (PFAS), fatty acids, and pharmaceuticals in peroxisome proliferator-activated receptor (PPAR) alpha, PPAR gamma, and estrogen receptor assays. Toxicol Appl Pharmacol. 449, 116136(2022).
  17. Kim, S., et al. Triphenyl phosphate is a selective PPARγ modulator that does not induce brite adipogenesis in vitro and in vivo. Arch Toxicol. 94 (9), 3087-3103 (2020).
  18. Matsumoto, H., Haniu, H., Komori, N. Determination of protein molecular weights on SDS-PAGE. Methods Mol Biol. 1855, 101-105 (2019).
  19. Nguyen, H. H., Park, J., Kang, S., Kim, M. Surface plasmon resonance: A versatile technique for biosensor applications. Sensors (Basel). 15 (5), 10481-10510 (2015).
  20. Hu, J., Kim, J., Hilty, C. Detection of protein-ligand interactions by 19F nuclear magnetic resonance using hyperpolarized water. J Phys Chem Lett. 13 (17), 3819-3823 (2022).
  21. LeBlanc, E. V., Shekhar-Guturja, T., Whitesell, L., Cowen, L. E. Fluorescence polarization-based measurement of protein-ligand interaction in fungal cell lysates. Curr Protoc. 1 (1), e17(2021).
  22. Huang, X., Aulabaugh, A. Application of fluorescence polarization in HTS assays. Methods Mol Biol. 1439, 115-130 (2016).
  23. Seethala, R., et al. A rapid homogeneous fluorescence polarization binding assay for peroxisome proliferator-activated receptors alpha and gamma using a fluorescein-tagged dual PPARalpha/gamma activator. Anal Biochem. 363 (2), 263-274 (2007).
  24. Hu, W., et al. Activation of peroxisome proliferator-activated receptor gamma and disruption of progesterone synthesis of 2-ethylhexyl diphenyl phosphate in human placental choriocarcinoma cells: Comparison with triphenyl phosphate. Environ Sci Technol. 51 (7), 4061-4068 (2017).
  25. Weatherman, R. V., Fletterick, R. J., Scanlan, T. S. Nuclear-receptor ligands and ligand-binding domains. Annu Rev Biochem. 68, 559-581 (1999).
  26. Khazaee, M., et al. Perfluoroalkyl acid binding with peroxisome proliferator-activated receptors α, γ, and δ and fatty acid binding proteins by equilibrium dialysis with a comparison of methods. Toxics. 9 (3), 45(2021).
  27. de Vera, I. M. S., et al. Synergistic regulation of coregulator/nuclear receptor interaction by ligand and DNA. Structure. 25 (10), 1506-1518.e4 (2017).
  28. Hendrickson, O. D., Taranova, N. A., Zherdev, A. V., Dzantiev, B. B., Eremin, S. A. Fluorescence polarization-based bioassays: New horizons. Sensors (Basel). 20 (24), 7132(2020).
  29. Liu, C., et al. Identification of a novel selective agonist of PPARγ with no promotion of adipogenesis and less inhibition of osteoblastogenesis. Sci Rep. 5, 9530(2015).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Przeglądaj więcej artykułów

Wiązanie ligandu z receptorempolaryzacja fluorescencjiczytnik mikropłytekekspresja białekwiązanie konkurencyjnePPAR gamma

Ten artykuł został opublikowany

Film wkrótce dostępny

Skontaktuj się z nami
Poleć bibliotece

Prywatność

Warunki korzystania z usługi

Zasady

Prawa autorskie © 2026 MyJoVE Corporation. Wszelkie prawa zastrzeżone.