Pomimo znacznych wysiłków w leczeniu ran przewlekłych, sukces był ograniczony. Procesy komórkowe i molekularne, które zakłócają normalne gojenie i przyczyniają się do inicjacji i rozwoju ran przewlekłych, nie są dobrze poznane. W rezultacie, opracowanie skutecznych metod leczenia tych ran okazało się wyzwaniem. Dzieje się tak przede wszystkim z powodu braku modeli zwierzęcych, które naśladują rany przewlekłe u ludzi oraz dlatego, że eksperymenty na ludziach z ranami przewlekłymi są ograniczone. Wcześniej opublikowaliśmy model mysi do badania ran przewlekłych, które mają wiele cech wspólnych z przewlekłymi ranami cukrzycowymi u ludzi. Model ten uwzględnia obecność biofilmów powstałych naturalnie z bakterii występujących w mikrobiocie skóry i środowisku bez konieczności wprowadzania bakterii zewnętrznych do ran. W związku z tym model ten może potencjalnie przyczynić się do pogłębienia podstawowej wiedzy na temat tego, w jaki sposób rany stają się przewlekłe. Tutaj przedstawiamy aktualizację oryginalnego protokołu rozwoju tego modelu myszy. Skoncentrowaliśmy się na zmniejszeniu śmiertelności myszy z ~30% do ~5%. Opisujemy również, w jaki sposób model ten został wykorzystany do zrozumienia inicjacji i progresji przewlekłości ran poprzez zastosowanie podejść transkryptomicznych nowej generacji, wyjaśnienie dynamiki populacji bakterii podczas infekcji i rozwoju biofilmu oraz wykazanie wartości testowania skuteczności leczenia, w tym małych cząsteczek. Jak dotąd jest to jedyny model rany przewlekłej, który nie goi się bez interwencji.
Artykuł metodologiczny
Protokół tworzenia ran przewlekłych u myszy z cukrzycą - aktualizacja opublikowanego protokołu
W tym artykule
Streszczenie
Wprowadzenie
To jest aktualizacja istniejącego artykułu. Kliknij tutaj, aby zobaczyć oryginalną wersję.
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
AKTUALIZACJE:
To jest aktualizacja protokołu przedstawionego wcześniej1
Wszystkie eksperymenty zostały zakończone zgodnie z przepisami federalnymi oraz polityką i procedurami Uniwersytetu Kalifornijskiego, które zostały zatwierdzone przez Uniwersytet Kalifornijski, Riverside IACUC.
1. Zwierzę
Dodaj następującą notatkę do kroku 1.1:
UWAGA: Jeśli homozygotyczne myszy z cukrzycą są kupowane bezpośrednio od dostawców, trzymaj je w konwencjonalnym wiwarium, aby umożliwić kolonizację sk....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
Rysunek 1: Genotypowanie w celu identyfikacji heterozygot w celu stworzenia hodowców. Przykładowy żel pokazuje wyniki 8 nieznanych próbek myszy. Próbki 2 i 5 są heterozygotami, ponieważ zawierają 3 prążki (610 pz, 406 pz i 264 pz). Próbki 1, 3, 4, 6, 7 i 8 są typami dzikimi, ponieważ zawierają tylko 2 pasma (610 pz i 264 pz).
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Wyniki badań przeprowadzonych przy użyciu tego modelu ran przewlekłych:
Model ten został wykorzystany do przeprowadzenia kilku badań w celu zrozumienia komórkowych i molekularnych mechanizmów inicjacji i progresji ran przewlekłych. Wykazano, że poprzez hamowanie enzymów przeciwutleniających u myszy db / db mogą powstawać przewlekłe rany. Rany początkowo zawierały społeczność wielodrobnoustrojową, która z czasem została wyselekcjonowana pod kątem określonych bakterii .......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Dziurkacz do uszu 1 mm | Fisherbrand | 13812201 | Średnica otworu 2 mm |
| 3-Amino-1,2,4-triazol (ATZ) | TCI | A0432 | |
| 70% etanol | |||
| Acu Punch 7mm stemple do biopsji skóry | Acuderm Inc. | P750 | |
| agaroza | |||
| Klasa B6. BKS(D)-Leprdb/J | Laboratorium Jacksona | 00697 | Dostępne homozygoty i heterozygoty |
| Buprenex (chlorowodorek buprenorfiny) | Henry Stein Animal Health | 059122 | 0,3 mg / ml, barwnik |
| ładujący żel klasy 3, fioletowy (6X) | New England Biolabs | B7024S Rękawiczki | |
| Balsam do depilacji z kojącym aloesem i lanoliną | Nair | chemiczna depilacja | |
| Terapia cieplna Pompa (woda) HTP-1500 | Adroit MedicalSystems | ||
| Poduszka grzewcza | Conair | Moist Dry Adaptery węży do podkładek grzewczych | |
| Adroit MedicalSystems | |||
| Strzykawki insulinowe | BD | 329461 | 0,35 mm (28G) x 12,7 mm (1/2") |
| Isoflurane | Henry Schein Animal Health | 029405 | NDC 11695-6776-2 |
| Waporyzator izofluranowy | JA Baulch & Współpracownicy | ||
| Kimwipes | |||
| Maxi-Therm Koc Hiperhipotermia | Cincinnati Sub-Zero | Nr kat. 247 | 22" x30" Wielorazowa podkładka HeavyDuty Kwas |
| merkaptobursztynowy (MSA) | Aldrich | 88460 | |
| Stożek | |||
| Zbiornik tlenu | musi być kompatybilny z systemem waporyzacji | ||
| Roztwór buforu fosforanowego (PBS) | sterylizowany w autoklawie | ||
| Ostre nożyczki | |||
| małe plastikowe pojemniki | |||
| Wodorotlenek sodu | |||
| Taq 2X Master Mix | New England Biolabs | M0270L | |
| Tegaderm | 3M | Ref: 1624W | Przezroczysty opatrunek foliowy (6 cm x 7 cm) |
| Cienka metalowa szpatułka | |||
| Tri-HCl | |||
| Pęseta | |||
| do rurki | |||
| Maszynka do strzyżenia włosów | Wahl | Lithium Ion Pro |
Bibliografia
- Kim, J. H., Martins-Green, M. Protocol to create chronic wounds in diabetic mice. J Vis Exp. (151), e57656(2019).
- He, J. -F., Tan, T., Zhu, H. A novel and quick PCR-based method to genotype mice with a leptin receptor mutation (db/db mice). Acta Pharmacol Sin.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE
Poproś o pozwolenie