Tutaj prezentujemy protokół do stworzenia mysiego modelu kardiomiopatii cukrzycowej oraz mysie urządzenie do mocowania elektroakupunktury do stosowania elektroakupunktury u myszy, które może łagodniej utrwalać myszy podczas leczenia.
Artykuł metodologiczny
* These authors contributed equally
Tutaj prezentujemy protokół do stworzenia mysiego modelu kardiomiopatii cukrzycowej oraz mysie urządzenie do mocowania elektroakupunktury do stosowania elektroakupunktury u myszy, które może łagodniej utrwalać myszy podczas leczenia.
Kardiomiopatia cukrzycowa (DCM) jest powikłaniem cukrzycy, które może prowadzić do niewydolności serca i jest ograniczane przez stosowanie leków. Elektroakupunktura jest skutecznym sposobem leczenia kardiomiopatii cukrzycowej jako tradycyjna metoda leczenia zewnętrznego medycyny chińskiej. Urządzenie do mocowania elektroakupunktury u myszy może łatwo i delikatnie unieruchomić myszy podczas leczenia elektroakupunkturą i odsłonić punkty akupunkturowe na brzuchu i kończynach myszy. W tym artykule opisano metody stosowane do wytwarzania urządzenia do mocowania elektroakupunktury u myszy ze wszystkimi krokami i środkami ostrożności, ustanawiając mysi model kardiomiopatii cukrzycowej z kompleksowymi środkami w celu kompleksowego rejestrowania zmian wskaźników biochemicznych krwi, takich jak poziom glukozy we krwi. Eksperyment przeprowadzono w 3 grupach: grupie kontrolnej, grupie modelowej i grupie przed leczeniem, z 10 myszami w każdej grupie. Grupa przed leczeniem była leczona elektroakupunkturą Biaoben acupoints raz na drugi dzień, w sumie 7 sesji. Po elektroakupunkturze myszy w grupie przed leczeniem wykazały spadek stężenia glukozy we krwi, któremu towarzyszyło zmniejszenie objawów cukrzycy.
Kardiomiopatia cukrzycowa (DCM) jest częstym powikłaniem cukrzycy charakteryzującym się zmianami w strukturze serca oraz funkcji rozkurczowej i kurczliwej komór określonej zmiany, która dalej rozwija się w niewydolność serca. Jest to jedna z głównych przyczyn zgonów u pacjentów z cukrzycą1,2, a jego rosnące rozpowszechnienie przyciągnęło powszechną uwagę w ostatnich latach3. Stwierdzono, że patogeneza tej choroby obejmuje głównie insulinooporność, odpowiedź zapalną, nieprawidłowy metabolizm lipidów, stres oksydacyjny, uszkodzenia mitochondriów4,5.
Obecnie kliniczne leczenie kardiomiopatii cukrzycowej opiera się głównie na doustnych lekach do kontrolowania poziomu glukozy we krwi i łagodzenia objawów chorób serca, ale ma pewne ograniczenia, takie jak reakcje na leki, wpływ funkcji nerek i uzależnienie od długotrwałych leków6. Akupunktura, jako tradycyjna metoda leczenia zewnętrznego medycyny chińskiej, ma lepszy wpływ regulujący poziom glukozy we krwi, lipidów we krwi i odpowiedź zapalną u pacjentów z kardiomiopatią cukrzycową, a skuteczność kliniczna jest niezwykła7. Akupunktura nie ma negatywnego wpływu na funkcje przewodu pokarmowego i nerek, a długotrwałe leczenie nie powoduje uzależnienia. Teoria punktów akupunkturowych Biaoben jest ważną metodą wyboru i wykorzystania punktów akupunkturowych w tradycyjnej teorii akupunktury8. Definiuje akupunkty, które mogą poprawić objawy chorób jako punkty akupunkturowe Biao, a punkty akupunkturowe, które mogą regulować podstawowe funkcje organizmu związane z chorobami i leczyć podstawowe przyczyny chorób, nazywane są punktami akupunkturowymi Ben. Stymulacja punktów akupunkturowych Biao i akupunkturów Ben w tym samym czasie z akupunkturą może osiągnąć cel leczenia chorób, a także zwiększenia odporności organizmu na choroby oraz zapobiegania zaostrzeniom i nawrotom chorób9. Może zapobiec zaostrzeniu i nawrotom choroby. Współczesne badania dowiodły, że akupunktura z akupunkturami Biaoben jest skuteczna w leczeniu cukrzycy i jej wielu powikłań, w tym cukrzycowej choroby serca, nefropatii cukrzycowej, retinopatii cukrzycowej, stopy cukrzycowej i tak dalej10,11. Schemat wyboru punktów akupunkturowych zgodny z teorią punktów akupunkturowych Biaoben polega na wybraniu PC6 (Neiguan), który może regulować funkcje serca i poprawiać odpowiedź zapalną, jako akupunkt Biao12 i ST36 (Zusanli), który może poprawić poziom glukozy i cukru we krwi, poprawić insulinooporność i zmniejszyć stres oksydacyjny, jak klasa akupunkturów Bena13.
Modele zwierzęce są ważnym narzędziem w badaniach nad kardiomiopatią cukrzycową, ponieważ eksperymentalnie wykazano, że modele szczurów lub myszy dobrze naśladują nieprawidłowości strukturalne i zmiany funkcjonalne serca spowodowane kardiomiopatią cukrzycową i dostarczają próbek wymaganych do biochemicznego wykrywania wskaźników kardiomiopatii cukrzycowej14,15. Stosowanie paszy o wysokiej zawartości cukru i tłuszczu w połączeniu z roztworem streptozotocyny w celu indukcji myszy może prowadzić do powstania modeli cukrzycowych w ciągu 4-5 tygodni, skutecznie skracając czas modelowania i poprawiając wskaźnik sukcesu, a także nie ma specjalnych wymagań dotyczących środowiska hodowlanego16,17. Kardiomiopatia cukrzycowa to rodzaj kardiomiopatii spowodowanej uszkodzeniem struktury i funkcji serca spowodowanym ciągłą hiperglikemią. Wraz z przedłużeniem przebiegu choroby, model choroby serca cukrzycowego może być naturalnie rozwijany przez model cukrzycowy w warunkach długotrwałej hiperglikemii18,19,20. Wstępne leczenie akupunkturą odnosi się do wstępnego leczenia myszy po powstaniu cukrzycy i przed powstaniem oczywistego uszkodzenia mięśnia sercowego. Jednak po wielokrotnej stymulacji eksperymentalnej myszy często stają się ruchliwe i trudne do unieruchomienia, a irytujące eksperymentalne techniki manipulacji mogą spowodować obrażenia myszy lub sprawić, że będą one maniakalne lub przygnębione21. Dlatego potrzebna jest odpowiednia metoda unieruchamiania myszy. Powszechnie stosowane metody unieruchamiania myszy obejmują znieczulenie i wiązanie22. Chociaż metoda anestezjologiczna może lepiej wyeksponować punkty akupunkturowe, może wpływać na przewodnictwo nerwowe i ostatecznie wpływać na wyniki eksperymentalne. Metoda spinania taśmą jest metodą fizycznego unieruchomienia i nie daje takich samych efektów fizjologicznych jak znieczulenie, ale związane myszy będą zestresowane i staną się trudne do współpracy22,23. Ponadto igła nie może łatwo osiągnąć żądanej pozycji. Tutaj przedstawiamy mysie urządzenie do mocowania elektroakupunktury, które może być używane do zapewnienia, że myszy się nie poruszają, a także odsłaniają punkty akupunkturowe podczas leczenia elektroakupunkturą, dzięki czemu zabieg elektroakupunktury może być wykonywany wygodnie, bezpiecznie, bez przemocy i bez następstw.
Ten artykuł szczegółowo opisuje produkcję urządzenia do mocowania elektroakupunktury u myszy oraz stworzenie mysiego modelu kardiomiopatii cukrzycowej. Leczyliśmy kardiomiopatię cukrzycową za pomocą wstępnego leczenia elektroakupunkturą Biaoben acupoints, pokazaliśmy, w jaki sposób jej działanie zostało zrealizowane na urządzeniu do fiksacji myszy i oceniliśmy efekt terapeutyczny wstępnego leczenia elektroakupunkturą Biaoben acupoints na kardiomiopatię cukrzycową, mierząc wskaźniki związane z metabolizmem glikolipidów.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wszystkie eksperymenty na zwierzętach są zgodne z zasadą 3R etyki zwierząt i zostały sprawdzone i zatwierdzone przez Komitet ds. Etyki Eksperymentów na Zwierzętach Uniwersytetu Tradycyjnej Medycyny Chińskiej w Hubei (numer poświadczenia etycznego HUCMS00309300). Tutaj uzyskano 30 myszy klasy SPF z Centrum Kontroli i Zapobiegania Chorobom prowincji Hubei (certyfikat jakości nr 42010200009690).
1. Produkcja urządzenia do mocowania elektroakupunktury
2. Ustalenie mysiego modelu kardiomiopatii cukrzycowej
3. Barwienie hematoksyliną-eozyną (HE)
4. Obserwacje na myszach
5. Analiza statystyczna
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Postępowaliśmy zgodnie z procedurą opisaną powyżej i stworzyliśmy mysi model kardiomiopatii cukrzycowej. Jak można zaobserwować na obrazach wybarwionych HE (Ryc. 4), myszy w grupie kontrolnej miały nienaruszoną strukturę tkanki mięśnia sercowego, regularne rozmieszczenie kardiomiocytów i brak widocznych zmian. W grupie modelowej komórki mięśnia sercowego były nieregularnie ułożone, niektóre komórki mięśnia sercowego były uszkodzone i rozpadły się (strzałka), a w śródmiąższu zaobserwowano wyraźny nacie...
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
W tym badaniu myszy, które miały wysoki poziom glukozy we krwi i wykazywały oznaki cukrzycy, uzyskano przez dootrzewnowe wstrzyknięcie roztworu Streptozotocyny, co jest skuteczną i uznaną metodą modelowania27. PC6 został wybrany jako punkt Biao, a ST36 został wybrany jako punkt Bena zgodnie z teorią punktów akupunkturowych Biaoben28. Wszystkie te punkty znajdują się na kończynach myszy, więc akrylowe rurki, które mogą odsłonić brzuch i unieruchomić kończyny, dobrze nadają s...
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Autorzy nie mają nic do ujawnienia.
Ta praca jest wspierana przez grant z Hubei Natural Science Foundation wspólny projekt 2022CFD024; Chińska Narodowa Fundacja Nauk Przyrodniczych, nr 81704142; Hubei University of Traditional Chinese Medicine 2023 podwójny pierwszorzędny projekt budowlany kluczowy specjalny projekt naukowo-badawczy,2023ZZXT005; Zbadanie mechanizmu wstępnego kondycjonowania elektroakupunktury Biaoben acupoints do regulacji ferroptozy komórek mięśnia sercowego u szczurów z uszkodzeniem niedokrwienno-reperfuzyjnym mięśnia sercowego (MIRI) w ramach kluczowego projektu Administracji Tradycyjnej Medycyny Chińskiej prowincji Hubei, ZY2025D001; Projekt Innowacji Wiedzy Biura Nauki i Technologii w Wuhan, nr 2023020201010172; Hubei Shi Zhen Projekt Inżynierii Talentów, E Wei Han [2024]256.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| akrylowa pusta plastikowa | Henan Zhike | ZK-GDQ | |
| Hwato | 0,3 mm x 13 mm | ||
| C57BL/6 myszy | Hubei Prowincjonalne Centrum Kontroli i Zapobiegania | ||
| Monohydrat kwasu cytrynowego | Sigma | C1909 | |
| instrument do terapii elektroakupunkturą | Hwato | SDZ-V | |
| waga elektroniczna | Glukometry Henan Zhike | ZK-DST | |
| LifeScan | OneTouch VerioVue | ||
| pasek testowy glukozy | LifeScan | OneTouch Verio | |
| streptozotocyna | Sigma | S0130 | |
| cytrynian trisodowy dwuwodny | Sigma | W302600 | |
| pęseta | Labshark | 130302001 |
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE
Poproś o pozwolenie