Protokół opisuje rozwój dwóch modeli gryzoni naśladujących terapie hormonalne afirmujące płeć poprzez podskórne podawanie testosteronu lub estradiolu z octanem cyproteronu (stosowanych w terapiach dla ludzi transpłciowych): ustalanie dawek, identyfikacja odpowiednich biomarkerów i ocena efektów.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Stworzenie modeli szczurów naśladujących terapie hormonalne afirmujące płeć
* These authors contributed equally
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Osoby transpłciowe (TG) to osoby, których tożsamość płciowa i płeć przypisana przy urodzeniu nie są zgodne. Często przechodzą one hormonalną terapię afirmującą płeć (GAHT), interwencję medyczną, która pozwala na nabycie drugorzędowych cech płciowych bardziej zgodnych z ich indywidualną tożsamością płciową, zapewniając spójne wyniki w poprawie wielu zmiennych społeczno-psychologicznych. Jednak, GAHT jest ukierunkowany na różne układy organizmu, i niektóre działania niepożądane są rejestrowane, Chociaż nie są jeszcze w pełni zidentyfikowane i scharakteryzowane. W związku z tym osoby z TG poddawane GAHT mogą być uważane za podatną podgrupę populacji i należy zwrócić szczególną uwagę w ramach oceny ryzyka, np. poprzez wykorzystanie ukierunkowanych modeli zwierzęcych. W niniejszej pracy opisano procedury mające na celu wdrożenie dwóch modeli szczurzych naśladujących GAHT: model demaskulinizująco-feminizujący (dMF) naśladujący GAHT dla kobiet TG oraz model defeminizyzująco-maskulinizujący (dFM) naśladujący GAHT dla mężczyzn TG. Modele te zostały wdrożone poprzez podawanie tych samych hormonów, które są stosowane w ludzkim GAHT, a mianowicie β-estradiolu w połączeniu z octanem cyproteronu w przypadku dMF i testosteronu w przypadku dFM, tymi samymi drogami ekspozycji przez okres 2 tygodni. Szczury są codziennie sprawdzane podczas leczenia w celu oceny stanu zdrowia i potencjalnie agresywnych zachowań. W momencie uśmiercenia pobrano próbki krwi i tkanek docelowych i przechowywano je do analizy biochemicznej, molekularnej i histopatologicznej. Oceniono również parametry specyficzne dla płci, a mianowicie liczbę plemników i wymiary łechtaczki. Ponadto izoformy CYP450, ulegające wyłącznej i/lub preferencyjnej ekspresji w wątrobie samców i samic szczurów, zostały zidentyfikowane i scharakteryzowane jako nowe biomarkery w celu zweryfikowania skuteczności GAHT i ustalenia modelu. Zbadano również zajęcie tarczycy jako kluczowy cel w układzie hormonalnym.
Wprowadzenie
Psychologiczne postrzeganie przez jednostkę bycia mężczyzną, kobietą, żadnym, ani jednym, drugim, lub gdzieś pomiędzy1 nazywa się tożsamością płciową. Może być dopasowany do płci biologicznej (cisgender) lub może być różny (transgender - TG). Mężczyzna TG to osoba urodzona jako kobieta, ale identyfikująca się jako mężczyzna. Kobieta TG rodzi się jako mężczyzna, ale identyfikuje się jako kobieta2. Szacuje się, że obecnie na całym świecie jest 25 milionów osób z TG3, większość z nich cierpi na dysforię płciową, stan psychiczny charakteryzujący się niezgodnością między ich płcią a tą, którą przypisan....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
Badania są przeprowadzane zgodnie z Dyrektywą 2010/63/UE, włoskim dekretem ustawodawczym nr 26 z dnia 4 marca 2014 r. oraz Zasadami Dobrej Praktyki Laboratoryjnej (GLP) OECD. Protokół badania został zatwierdzony przez włoskie Ministerstwo Zdrowia (autoryzacja nr 806/2021-PR). Tutaj 16 młodych, dojrzałych płciowo szczurów Sprague-Dawley obu płci (304 ± samców szczurów o wadze 13 g i 190 ± samic szczurów o wadze 7 g w wieku 8-9 tygodni) jest kupowanych i trzymanych w dwóch klatkach w standardowych warunkach laboratoryjnych (22 ± 0,5 °C, 50%-60% wilgotności względnej, 12 godzin naprzemiennego ciemnego światła z 12-14 wymianami powietrza na godzinę) z wodą i pokarmem dost....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
Jak wykazali Tassinari i wsp.14 oraz Tammaro i wsp.33, następujące wyniki potwierdziły skuteczność GAHT u szczurów oraz zasadność zastosowania tych modeli.
Nie odnotowano śmiertelności ani nieprawidłowych zachowań, takich jak agresja, i nie zaobserwowano klinicznych objawów toksyczności lub cierpienia (np. zmniejszonej aktywności, piloerekcji oraz zaniedbanego wyglądu)14.
Stężenia T w osoczu u d.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Wdrożenie modeli gryzoni naśladujących GAHT ma kluczowe znaczenie dla zbadania potencjalnej specyficznej podatności i wrażliwości osób z TG oraz długoterminowych wyników terapii, zwykle trwających przez całe życie.
Biorąc pod uwagę niewielką liczbę podobnych badań w literaturze, krytycznym punktem tego eksperymentu jest dobór dawek do ustawienia modeli; Dawki takie powinny być wystarczająco małe, aby można je było zastosować do długotrwałego podawania zwierzętom, nie powodując przy tym działań.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Autorzy deklarują, że badanie zostało przeprowadzone bez jakichkolwiek powiązań handlowych lub finansowych, które mogłyby potencjalnie powodować konflikt interesów.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Waga analityczna ABJ 320-4NM | Kern | Z741091 | |
| Bouin | Biooptica | 05-M01008 | |
| Wirówka 5415 R | Eppendorf | Do eppendorf | |
| Octan cyproteronu | Sigma-Aldrich | C3412 | |
| D-MEM podłoże | Gibco | ||
| ExcelTaq 2X Fast Q-PCR Master Mix (SYBR, ROX), 200 RXN | Smobio | TQ1210 | |
| Roztwór formaliny, buforowany neutralnie, 10% | Oprogramowanie Sigma-Aldrich | HT501128 | |
| GraphPad Prism w wersji 5.0 dla systemu Windows | Oprogramowanie | ||
| Hematoxylin | Biooptica | 05-06002/L | |
| Heosin | Biooptica | 05-10007/L | |
| Oprogramowanie do obrazowania | Nikon | NIS-BR | |
| Oprogramowanie statystyczne JMP 10 | SAS Institute | ||
| Microm | Thermo Scientific | HM 325 | |
| Mikroskopia | Nikon Microphot FX | ||
| Mysz / szczur Testosteron ELISA | Biovendor | RTC001R | 96T |
| Spektrofotometr NanoDrop 1000 | Thermo Scientific | ND-1000 | |
| Paraffina | Biooptica | 087910 | |
| Wagi przenośne SCOUT STX2202 | OHAUS | 30253064 | |
| Primers | Life Technologies | Zaprojektowane przez PrimerBlast | |
| Rat Estradiol ELISA | Biovendor | RTC009R | 96T |
| Rat TSH (hormon tyreotropowy) Zestaw ELISA | ELK Biotechnology | ELK2283 | 96T |
| Szczur TSH (hormon tyreotropowy) Zestaw ELISA | ELK Biotechnology | ELK2283 | 96T |
| Zestaw do syntezy SensiFASTcDNA Bioline | BIO-65053 | 50 reaction | |
| Sesam Oil | ACROS | AC241000010 | |
| Sprague Dawley szczury piesek i suczka | Envigo | 8/9 tygodni | |
| Diety standardowe | Mucedola | 4RF18 | |
| T4 (tyroksyna) Zestaw ELISA | ELK Biotechnology | ELK8716 | 96T |
| Testosteron enanthate | Sigma-Aldrich | T3006 | |
| Thermal Cycler LineGene 9600 Plus Bioer | Aurogene | ||
| Procesor tkanek | Shandon Excelsior ES, Thermo Scientific) | ||
| Zestaw do całkowitego oczyszczania RNA | Norgen | 17200 | 50 kolumn |
| Victor 3 Czytnik Multilabel | Perkin Elmer | ||
| β-Estradiol 17-walerianian | Sigma-Aldrich | E1631 |
Bibliografia
- Rokach, A., Patel, K. Human sexuality: Function, dysfunction, paraphilias, and relationships. , Academic Press. (2021).
- American Psychological Association. Guidelines for psychological practice with transgender and gender nonconforming people. Am Psychol. 70 (9), 832-864 (2015).
- Ammari, T., Sluiter, E. C., Gast, K., Kuzon, W. M.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
