Opisujemy prosty protokół usuwania statocysty i związanych z nią tkanek w ctenoforze Mnemiopsis leidyi, który jest podatny na obrazowanie na żywo.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Chirurgiczne usunięcie złożonego narządu czuciowego w wysoce regeneracyjnych ctenoforach
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Ctenofor Mnemiopsis leidyi to klasyczny zwierzęcy model regeneracji całego ciała. Zwiększona podatność na manipulacje wieloma technikami laboratoryjnymi i ich filogenetyczne umiejscowienie jako prawdopodobnej grupy siostrzanej pozostałych Metazoa doprowadziło do niedawnego odnowienia zainteresowania naukowców pracą z ctenoforami. Mogą zregenerować każdy brakujący narząd lub typ komórki, w tym pełną regenerację całego ciała z fragmentu tak małego jak ~15% ciała, w ciągu kilku dni. Podobnie jak większość ctenoforów, M. leidyi mają nieudolnie zlokalizowany, wyczuwający grawitację narząd, który łączy bodźce sensoryczne z wyjściem motorycznym, aby kontrolować pozycję i orientację ciała. Protokół ten demonstruje chirurgiczne usunięcie kompleksu narządów brzusznych (AO) i powiązanych struktur u M. leidyi wraz z metodami hodowli, obsługi i montażu odpowiednimi do zobrazowania procesów gojenia i regeneracji ran, które zachodzą w ciągu kolejnych godzin do dni. Te proste techniki można w szerokim zakresie dostosować do różnych paradygmatów eksperymentalnych i kontekstów laboratoryjnych.
Wprowadzenie
Ctenofory, znane również jako galaretki grzebieniowe, są kosmopolityczne dla środowiska morskiego Ziemi i mogą być głównymi graczami w ekosystemach, szczególnie jako część sieci pokarmowej. Ctenofor Mnemiopsis leidyi jest historycznym i coraz bardziej popularnym zwierzęcym modelem regeneracji całego ciała 1,2. Ich zdolność do regeneracji brakujących narządów lub typów komórek pojawia się pod koniec embriogenezy i utrzymuje się przez całe życie postembrionalne 3,4 (~0,1 do >1,000 mm wielkości ciała). Są również przezroczyste przez całe życie i ....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
1. Przygotuj narzędzia i materiały
- Za pomocą standardowego palnika Bunsena ręcznie wyciągnij szklane igły do wycinki ze szklanych mikropipet kapilarnych. W przypadku zwierząt o wzroście powyżej 1 mm należy używać kalibrowanych mikropipet sodowo-wapiennych przeznaczonych do pracy z cieczami.
UWAGA: Rozmiar 100 μl działa dobrze w całym zakresie ogniskowych 0,5-3 mm.- Ustaw ostry niebieski stożek płomienia w palniku Bunsena.
- Przytrzymaj środkowy punkt szklanej pipety w płomieniu, aż zmięknie na tyle, aby poruszać się pod delikatnym naciskiem.
- Zdejmij pipetę z płomienia i natychmiast rozsuń obie strony, aby ....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
stadium cydippidów M. leidyi zazwyczaj całkowite zamknięcie rany w ciągu ok. 20 min po urazie (Rycina 4 i Rysunek 5), podczas gdy pełna regeneracja organu może trwać od 1 do 3 dni. Termin ten wykazuje pewną zmienność biologiczną, lecz proces ten niemal zawsze kończy się do 72 h po operacji (Rycina 6).
Chirurgiczne usunięcie komórek i mezoglei z kompleksu organu aboralnego oraz pobliskich tkanek, .......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Podobne eksperymenty można było przeprowadzić na dowolnej wielkości M. leidyi; Morogeneza narządu kończy się równocześnie z początkiem zdolności regeneracyjnych4. Zwierzęta mogą być zbierane ze środowiska naturalnego19 lub hodowane w laboratorium20,21. Jeśli pożądany jest określony rozmiar ciała, zwierzęta mogą zostać dopuszczone do tarła, a potomstwo podniesione do pożądanego rozmiaru. Rozmiar korpusu możn.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Autorzy nie mają do ujawnienia żadnych konfliktów interesów.
Podziękowania
Autorzy z wdzięcznością dziękują Jowcie Józefowi.
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| 0,2 μ m Filtr strzykawkowy SFCA | Thermo/Nalgene | 723-2520 | Stwórz sterylną wodę morską |
| Polistyrenowa szalka Petriego 35 mm | Sokół/Corning | 351008 | wykonywać cięcia; Kultura małych zwierząt |
| Jednorazowa strzykawka typu luer-lock 60 ml | Zaopatrzenie BH | BH60LL | Stwórz sterylną wodę morską |
| Kalibrowane pipety szklane, 100 μ L | Drummond | 2-000-100 | Wykonywanie cięć |
| Okulary nakrywkowe, #1.5, kwadrat 18 mm | Firma VWR | 16004-326 | Uchwyt do obrazowania |
| Ctenofory | Okazy z Zatoki Perskiej | żywe zwierzęta | |
| Prowadnice wpuszczane ze szkła dwukomorowego, 1,3 mm | Firma VWR | 470200-930 | Uchwyt do obrazowania |
| szklane szkiełka mikroskopowe | Firma VWR | 16004-398 | Uchwyt do obrazowania |
| Błyskawiczna sól morska oceaniczna | Natychmiastowy ocean | Pożywka do hodowli zwierząt | |
| mini linijka | Teda Pella | 13623 | Zmierz plastikowe pipety |
| modelina (plastelina) | Pepy Plastilina | Uchwyt do obrazowania | |
| wazelina | Wazelina | Uchwyt do obrazowania | |
| Plastikowe pipety transferowe (różne rozmiary) | Cole'a-Parmera | 06226-13, 06226-12, 06226-01 | Przemieszczaj małe zwierzęta |
| Powłoka szkła Rain-X | Deszcz-X | silanizowane szkiełka mikroskopowe | |
| linijka | Westcott powiedział: | 10564 | Zmierz plastikowe pipety |
| nożyczki | OXO | Wytnij plastikowe pipety |
Bibliografia
- Edgar, A., Mitchell, D. G., Martindale, M. Q. Whole-body regeneration in the lobate ctenophore Mnemiopsis leidyi. Genes. 12 (6), 867(2021).
- Martindale, M. Q., Henry, J. Q. Ctenophora. Evolutionary Developmental Biology of Invertebrates 1. , Springer. 179-201 (2015).
- Martindale, M. Q.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
