Oczyszczanie, ekspansja i fenotypowanie oparte na cytometrii przepływowej mezenchymalnych komórek macierzystych szpiku kostnego pochodzenia mysiego

Chenglong Wang; Junjie Tong; Junli Chang; Weiwei Dai; Xingyuan Sun; Peng Zhao; Suxia Guo; Chujie Zhou; Yanping Yang

doi:10.3791/67600

Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Oczyszczanie, ekspansja i fenotypowanie oparte na cytometrii przepływowej mezenchymalnych komórek macierzystych szpiku kostnego pochodzenia mysiego

2.1K wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/67600

⸱

11 lipca 2025

Chenglong Wang^*¹^,² , Junjie Tong^*¹^,³ , Junli Chang¹^,³ , Weiwei Dai¹^,² , Xingyuan Sun¹^,³ , Peng Zhao¹^,³ , Suxia Guo¹^,³ , Chujie Zhou¹^,³ , Yanping Yang¹^,³

¹Longhua Hospital, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, ²Central Laboratory for Science and Technology, Shanghai University of Traditional Chinese Medicine, ³Key Laboratory of Theory and Therapy of Muscles and Bones, Ministry of Education

^* These authors contributed equally

W tym artykule

Podsumowanie

Niniejszy protokół opisuje opłacalną metodę oczyszczania, namnażania i charakteryzowania wysoce jednorodnych mezenchymalnych komórek macierzystych szpiku kostnego (BMSC) od myszy. Takie podejście ułatwia pozyskiwanie dużych ilości BMSC o wysokim potencjale proliferacji i różnicowania, wspierając modele mysie i posuwając naprzód badania przedkliniczne.

Streszczenie

Mezenchymalne komórki macierzyste (MSC) to populacja komórek macierzystych, które mogą samoodnawiać się i różnicować w wiele linii komórkowych. Wśród nich MSCs znajdujące się w szpiku kostnym, znane jako mezenchymalne komórki macierzyste szpiku kostnego (BMSC), odgrywają kluczową rolę w osteogenezie, wspomaganiu układu krwiotwórczego, naprowadzaniu/migracji i immunosupresji. BMSC są szeroko stosowane w badaniach biologii komórki i inżynierii tkankowej ze względu na ich potencjał w komórkowych strategiach terapeutycznych, a także ich łatwą dostępność, stabilność genetyczną i niską immunogenność. Hematopoetyczne komórki macierzyste (HSC) i BMSC współistnieją w szpiku kostnym, ale mają odrębne komórki progenitorowe. Podczas ekstrakcji komórek ze szpiku kostnego zwykle uzyskuje się wiele typów komórek, co może prowadzić do niejednorodności populacji komórek, potencjalnie powodując stronniczość i nie spełniając wysokich standardów eksperymentalnych. Dlatego tak ważne jest opracowanie skutecznych technik poprawy jednorodności i wydajności BMSC in vitro. W badaniu przedstawiono szczegółowy protokół oczyszczania, ekspandowania i fenotypowania opartego na cytometrii przepływowej BMSC uzyskanych od myszy BALB/c. Jednorodność i fenotyp komórek macierzystych BMSC trzeciego pasażu scharakteryzowano za pomocą cytometrii przepływowej, wykazując dodatniość dla CD29, CD44 i Sca-1, ujemność dla CD45 i CD31 oraz potwierdzając ich zdolność do różnicowania osteogennego i adipogennego. Ten ekonomiczny protokół zapewnia łatwą i wydajną metodę uzyskania wystarczającej liczby jednorodnych BMSC o wysokim potencjale proliferacji i różnicowania, co jest niezbędne do postępu badań na modelach mysich i szeroko zakrojonych badań przedklinicznych.

Wprowadzenie

Mezenchymalne komórki macierzyste szpiku kostnego (BMSC) są znane ze swoich właściwości multipotencjalnych i są szeroko stosowane w leczeniu różnych chorób ze względu na ich właściwości samoodnawialne, różnicujące i immunomodulujące ^1,2. BMSC są łatwo dostępne, zdolne do rozległej ekspansji, wykazują właściwości immunosupresyjne i nie wywołują natychmiastowych reakcji immunologicznych³, co czyni je atrakcyjnymi do zastosowań w inżynierii tkankowej i skutecznymi nośnikami w terapii komórkowej.

W szpiku kostnym głównymi mieszkańcami są dwie główne populacje kom....