Przygotowanie przemytych ludzkich płytek krwi do ilościowych badań przepływu metabolicznego

Samantha Siska; Cara Sake; Keith B. Neeves; Nanette Boyle

doi:10.3791/67639

Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Przygotowanie przemytych ludzkich płytek krwi do ilościowych badań przepływu metabolicznego

1.6K wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/67639

⸱

10 stycznia 2025

Samantha Siska¹ , Cara Sake¹ , Keith B. Neeves²^,³ , Nanette Boyle¹^,⁴

¹Depeartment of Chemical and Biological Engineering, Colorado School of Mines, ²Department of Bioengineering, University of Colorado Denver, Anschutz Medical Campus, ³Department of Pediatrics, Section of Hematology, Oncology, and Bone Marrow Transplant, University of Colorado Denver, Anschutz Medical Campus, ⁴Quantitative Biosciences and Engineering, Colorado School of Mines

W tym artykule

Podsumowanie

Metabolizm płytek krwi jest interesujący, szczególnie w odniesieniu do roli nadmiernej i hipoaktywności płytek krwi w krwawieniach i zaburzeniach zakrzepowych. Izolowanie płytek krwi z osocza jest konieczne w przypadku niektórych testów metabolicznych; Przedstawiono metodę izolacji metabolitów wewnątrzkomórkowych z przemytych płytek krwi

Streszczenie

Płytki krwi to komórki krwi, które odgrywają integralną rolę w hemostazie i wrodzonej odpowiedzi immunologicznej. Nadpobudliwość i hipoczynność płytek krwi są związane z zaburzeniami metabolicznymi, zwiększając ryzyko zarówno zakrzepicy, jak i krwawienia. Aktywacja płytek krwi i metabolizm są ze sobą ściśle powiązane, przy czym istnieje wiele metod pomiaru tych pierwszych, ale stosunkowo niewiele w przypadku tych drugich. Aby zbadać metabolizm płytek krwi bez ingerencji innych komórek krwi i składników osocza, płytki krwi muszą być izolowane, co nie jest trywialne ze względu na wrażliwość na ścinanie płytek krwi i zdolność do nieodwracalnej aktywacji. Przedstawiono protokół izolacji (przemywania płytek krwi), w wyniku którego powstają płytki krwi w stanie spoczynku, wrażliwe na stymulację przez agonistów płytek krwi. Kolejne etapy wirowania z dodatkiem inhibitorów płytek krwi stosuje się w celu wyizolowania płytek krwi z krwi pełnej i ponownego ich zawieszenia w kontrolowanym, izosmotycznym buforze. Ta metoda w sposób powtarzalny zapewnia 30%-40% odzysk płytek krwi z krwi pełnej przy niskiej aktywacji, mierzonej za pomocą markerów wydzielania ziarnistości i aktywności integryny. Liczba płytek krwi i stężenie paliwa mogą być precyzyjnie kontrolowane, aby umożliwić użytkownikowi badanie różnych sytuacji metabolicznych.

Wprowadzenie

Płytki krwi to małe (2-4 μm średnicy), bezjądrzaste komórki, które odgrywają ważną rolę w hemostazie, ściśle regulowanym procesie tworzenia skrzepów¹. Chociaż płytki krwi są niezbędne dla integralności naczyń krwionośnych, są również zaangażowane w niepożądane zdarzenia zdrowotne. Płytki krwi biorą udział w zakrzepicy żył głębokich (DVT) i zakrzepicy tętniczej (AT), które są skrzepami, które zamykają naczynia krwionośne, prowadząc do miejscowego zmniejszenia dopływu krwi lub, jeśli kawałki skrzepu oderwą się (zatorują), mogą blokować dopływ krwi do płuc, serca lub mózgu^2,³^,