Artykuł metodologiczny

Ocena salidrozydu jako środka terapeutycznego do zwapnienia naczyń krwionośnych przy użyciu farmakologii sieciowej i eksperymentalnych modeli szczurów

DOI:

10.3791/67728

⸱

31 stycznia 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Encephalopathy, The Affiliated Hospital of Changchun University of Chinese Medicine, 2Research Center of Traditional Chinese Medicine, The Affiliated Hospital to Changchun University of Chinese Medicine, 3Department of Nephrology, The Affiliated Hospital to Changchun University of Chinese Medicine, 4Scientific Research Office, The Affiliated Hospital to Changchun University of Chinese Medicine, 5Rehabilitation Department, The Affiliated hospital to Changchun University of Chinese Medicine

* These authors contributed equally

W tym artykule

Podsumowanie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

To badanie ustanawia szczurzy model zwapnienia naczyń krwionośnych wywołanego dietą wysokotłuszczową (HFD) w połączeniu z witaminą D3 (VD3). Model wykorzystano do oceny skuteczności terapeutycznej salidrozydu w zapobieganiu i leczeniu zwapnienia naczyń krwionośnych, dostarczając informacji na temat jego potencjalnych mechanizmów działania poprzez farmakologię sieciową i eksperymenty in vivo.

Streszczenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Zwapnienie naczyń krwionośnych (VC) jest krytycznym stanem patologicznym związanym ze znaczną zachorowalnością i śmiertelnością. W badaniu tym wykorzystano hybrydowe podejście farmakologii sieciowej i biologii molekularnej w celu nakreślenia mechanizmów terapeutycznych salidrozydu (SAL), aktywnego związku z Rhodiola crenulata, przeciwko VC. Dzięki eksploracji baz danych i analizie sieci zidentyfikowano 388 celów SAL przecinających się z 2871 celami powiązanymi z VC, w wyniku czego powstało 208 wspólnych celów. Sieć interakcji białko-białko (PPI) skonstruowana na podstawie bazy danych String i analizy topologicznej w Cytoscape 3.9.1 wskazała 10 kluczowych celów, w tym między innymi IL6, TNF, TP53, IL1B, HIF1A, CASP3 i STAT3. Zidentyfikowane geny były skoncentrowane w szlaku lipidowym i miażdżycowym, co wskazuje, że poprawa VC przez SAL może nastąpić poprzez regulację nieprawidłowej ekspresji lipidów i czynników zapalnych. Stwierdzono również, że SAL hamuje nieprawidłową ekspresję czynników zapalnych, aktywując w ten sposób szlak JAK2/STAT3 do interwencji w progresję VC. Szlak JAK2/STAT3 jest kluczowym mechanizmem molekularnym, dzięki któremu SAL zapobiega dalszemu pogarszaniu się VC. Analizy wzbogacenia funkcjonalnego ujawniły udział tych celów w reakcjach zapalnych i metabolizmie lipidów, kluczowych szlakach w VC. Badania in vivo na szczurach wykazały skuteczność SAL w łagodzeniu dyslipidemii i zapalenia naczyń krwionośnych, z poprawą profilu lipidowego surowicy i zmniejszeniem naczyniowego odkładania się wapnia. Badania mechanistyczne, oparte na analizie Western blot, wykazały zdolność salidrozydu do regulowania szlaku sygnałowego JAK2/STAT3, podkreślając jego potencjał jako modulatora w tym krytycznym mechanizmie molekularnym i oferując potencjalny cel terapeutyczny dla VC. Siła tych badań tkwi w ich metodologicznym rygorze, łączącym przewidywania obliczeniowe z walidacją in vivo. To kompleksowe podejście ustanawia solidne ramy do badania mechanizmów terapeutycznych związków naturalnych w zwalczaniu VC.

Wprowadzenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Zwapnienie naczyń krwionośnych (VC) odnosi się do nieprawidłowego odkładania się wapnia w ścianach naczyń, co prowadzi do usztywnienia tętnic i zmniejszenia elastyczności, ostatecznie upośledzając funkcję naczyń krwionośnych. Tradycyjnie VC dzieli się na dwa typy: zwapnienie błony wewnętrznej, związane z gromadzeniem się lipidów, i zwapnienie przyśrodkowe. Ten pierwszy jest ściśle związany z naciekiem zapalnym, wywołującym osteogenną transformację w ścianie naczynia, charakteryzującą się migracją, proliferacją i różnicowaniem komórek mięśni gładkich naczyń krwionośnych (VSMC) w komórki podobne do osteoblastów1.

Zdolność VSMC do ulegania różnicowaniu osteogennemu, na które wpływają takie czynniki jak starzenie się, genetyka i warunki środowiskowe, takie jak cukrzyca i przewlekła choroba nerek, jest głównym czynnikiem przyczyniającym się do VC związanego z wiekiem. Ta podobna do osteoblastów transformacja nasila zwapnienie i zwyrodnienie tętnic1.

VC to wieloaspektowa choroba, spowodowana zmianami zwyrodnieniowymi, zaburzeniami równowagi metabolicznej i różnymi schorzeniami ogólnoustrojowymi. Około 80% urazów naczyniowych i 90% przypadków choroby wieńcowej wykazuje VC, co znacznie zwiększa ryzyko poważnych zdarzeń sercowo-naczyniowych1,2. Dlatego istnieje pilna potrzeba odkrycia metod leczenia farmakologicznego, które skutecznie łagodzą lub odwracają ten stan.

Obecnie, strategie leczenia VC obejmują różne interwencje farmakologiczne, chociaż żadne leki nie są specjalnie zaprojektowane do tego celu. Pacjentom z łagodnym zwapnieniem często przepisuje się statyny w celu ustabilizowania blaszek miażdżycowych. Jednakże, chociaż mogą zmniejszać zwężenie tętnicy wieńcowej poprzez obniżanie poziomu lipidów, ich wpływ na zwapnienie jest ograniczony2.

Biorąc pod uwagę złożoność miażdżycy, wielu pacjentów wykazuje zwiększoną aktywację płytek krwi, co wymaga stosowania leków przeciwpłytkowych, takich jak aspiryna lub klopidogrel, w celu zahamowania agregacji płytek krwi i zmniejszenia ryzyka zakrzepicy. Jednak terapia aspiryną jest korzystna tylko dla osób z wysokim wynikiem wapnia w tętnicach wieńcowych i niskim ryzykiem krwawienia3.

Dodatkowo, badania nad suplementami, takimi jak witamina K, sugerują potencjał w zapobieganiu progresji VC4. W ciężkich przypadkach można rozważyć interwencje inwazyjne, chociaż często nie są one odpowiednie dla powszechnego VC5. Dla osób bez istniejącego VC zarządzanie czynnikami ryzyka, takimi jak ciśnienie krwi, profile lipidowe i styl życia, pozostaje krytyczne6.

Rhodiola crenulata, wieloletnie zioło z rodziny gruboszowatych, jest tradycyjnie stosowane w medycynie chińskiej. Jego główny składnik bioaktywny, salidrozyd, przyciąga znaczną uwagę ze względu na swoją godną uwagi aktywność biologiczną. Salidrozyd jest znany ze swojej zdolności do hamowania apoptozy, wykazuje silne właściwości przeciwutleniające i posiada właściwości przeciwzapalne7,8. Atrybuty te przyczyniają się do jego potencjału do poprawy funkcji naczyniowych, opóźnienia starzenia się naczyń krwionośnych i ochrony śródbłonka naczyniowego. Jako potencjalny środek terapeutyczny dla VC, salidrozyd ma istotną wartość dla badań. Jednak dokładne mechanizmy, za pomocą których salidrozyd łagodzi VC, nie zostały jeszcze w pełni wyjaśnione i wymagają dalszych badań w celu wykorzystania jego potencjału terapeutycznego w leczeniu VC.

Aby zbadać te mechanizmy, badanie to wykorzystuje farmakologię sieciową, innowacyjną metodologię, która łączy farmakologię, bioinformatykę i informatykę do analizy systemów biologicznych i wyjaśnienia mechanizmów działania leków. W porównaniu z tradycyjnymi badaniami nad lekami jednocelowymi, farmakologia sieciowa oferuje bardziej kompleksowe podejście polegające na analizie wpływu leku na wiele celów biologicznych i szlaków sygnałowych. Jako kluczowe narzędzie w nowoczesnym opracowywaniu leków, konstruuje sieci leków, celów i ścieżek, aby ujawnić mechanizmy leżące u podstaw działania leków9,10. Pomimo jego szerokiego zastosowania w badaniu mechanizmów terapeutycznych, przeprowadzono ograniczone badania nad mechanizmami interakcji między salidrozydem a VC z perspektywy bioinformatyki i farmakologii sieciowej.

To badanie tworzy molekularną mapę sieci potencjalnego wpływu salidrozydu na VC, identyfikując i analizując kluczowe cele poprzez obszerne przeszukiwanie baz danych. Generowana jest sieć interakcji białko-białko (PPI) i stosowana jest analiza topologiczna w celu wyróżnienia krytycznych węzłów w procesie zwapnienia.

Aby potwierdzić przewidywania obliczeniowe, opracowano szczurzy model VC poprzez podawanie diety wysokotłuszczowej z witaminą D3 (VD3). Model ten odwzorowuje patologiczne cechy ludzkiego VC. Uszkodzenie naczyń krwionośnych ocenia się za pomocą technik histologicznych, profile lipidowe surowicy i markery stanu zapalnego są oceniane w celu zbadania ogólnoustrojowych skutków salidrozydu, a ekspresja białek związanych z anty-VC SAL jest mierzona za pomocą Western blotting w celu zbadania wpływu salidrozydu na eksperymentalnie indukowaną VC, badanie to ma na celu wniesienie cennych informacji na temat potencjału tego związku jako strategii terapeutycznej w zwalczaniu VC.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Protokół został zatwierdzony przez Komitet ds. Zwierząt Doświadczalnych Uniwersytetu Medycyny Chińskiej w Changchun (Zatwierdzenie nr 2023091). Badanie to jest zgodne z międzynarodowymi wytycznymi, w tym wytycznymi Wspólnoty Europejskiej i dyrektywą EWG z 1986 r., zapewniając etyczne traktowanie zwierząt przez cały czas trwania badania. Do badań wykorzystano samce szczurów rasy Wistar (8-10 tygodni, waga 200-220 g). Szczegółowe informacje na temat stosowanych odczynników i sprzętu są wymienione w Tabeli Materiałów.

1. Sieciowe przewidywanie farmakologiczne potencjalnych celów salidrozydu-VC

UWAGA: Farmakologia sieciowa wykorzystuje metody obliczeniowe i analizę danych na dużą skalę do badania złożonych interakcji między cząsteczkami leków a celami biologicznymi, takimi jak szlaki, geny i białka w organizmie11,12. Takie podejście pomaga rozszyfrować biologiczne funkcje i relacje badanych jednostek. Metodologia obejmuje wykorzystanie bazy danych, przetwarzanie informacji chemicznej, pozyskiwanie danych o bioaktywności, pobieranie danych o białkach, analizę profili ekspresji genów, budowę sieci interakcji oraz analizę wzbogacania szlaków11. Rysunek 1 pokazuje sieć interakcji głównych celów między salidrozydem a zwapnieniem naczyń krwionośnych.

  1. Budowa bazy danych docelowych "Składnik"
    1. Użyj słowa kluczowego "Salidroside" dla składników, aby przeszukiwać bazy danych13 (patrz Tabela uzupełniająca 1), takich jak HERB, TCMSP, PubChem, SwissTargetPrediction, CTD, PharmMapper, SEA i STITCH.
    2. Przegląd odpowiedniej literatury w celu zidentyfikowania celów związanych z salidrozydem, z gatunkami przypisanymi do Homo sapiens. Po usunięciu duplikatów standaryzuj docelowe białka za pomocą UniProt (patrz Tabela Uzupełniająca 1) i utwórz obszerną bazę danych docelowych salidrozydów14.
  2. Budowa docelowej bazy danych "Choroba"
    1. Użyj słowa kluczowego "Vascular calcification" do przeszukiwania baz danych15 (patrz tabela uzupełniająca 1), w tym GeneCards, OMIM, PharmGkb i DrugBank, z gatunkiem ustawionym na Homo sapiens. Po deduplikacji utwórz bazę danych docelowego zwapnienia naczyń krwionośnych.
  3. Przewidywanie potencjalnych celów terapeutycznych
    1. Wprowadzić cele salidrozydu i zwapnienia naczyń krwionośnych (patrz tabela uzupełniająca 1), aby zidentyfikować wspólne cele. Wygeneruj diagram Venna, aby zobrazować potencjalne cele terapeutyczne salidrozydu w leczeniu zwapnienia naczyń krwionośnych.
  4. Budowa sieci interakcji białko-białko (PPI) "Salidrozyd-Zwapnienie Naczyniowe"
    1. Skompiluj potencjalne cele w Listę Wielu Białek i przeanalizuj je za pomocą STRING (patrz Tabela Uzupełniająca 1), z organizmem ustawionym na Homo sapiens i wynikiem interakcji ustawionym na średni poziom ufności (>0,4)16. Wyodrębnij dane PPI w formacie TSV do dalszej analizy.
      UWAGA: Biorąc pod uwagę, że 85% genów szczurów jest homologicznych do genów ludzkich, pełniących podobne funkcje biologiczne, szczury zostały wybrane jako obiekty eksperymentalne w celu walidacji wpływu salidrozydu na zwapnienie naczyń krwionośnych17.
  5. Wybór i budowa sieci kluczowych celów
    1. Zaimportuj dane sieci PPI do Cytoscape 3.9.1 (patrz Tabela uzupełniająca 1) w celu analizy za pomocą wtyczki CytoNCA do oceny parametrów, takich jak Betweenness (BC), Closeness (CC), Degree (DC), Eigenvector (EC), Local Average Connectivity (LAC) i Network Central (NC). Wybierz kluczowe cele o CC=1, aby skonstruować mapę spektrum działań głównego celu dla "SAL-VC".
    2. Użyj wtyczki CytoHubba, aby zidentyfikować 10 najważniejszych genów hubów na podstawie obliczeń Maximal Clique Centrality (MCC), Maximum Neighborhood Component (MNC) i Degree, generując mapę widma Hub-genes.
  6. Analiza wzbogacania szlaków GO i KEGG
    1. Przeprowadź konwersję identyfikatora genu za pomocą DAVID (patrz Tabela Uzupełniająca 1), wybierając ENSEMBL_GENE_ID dla genu typu 9606 w celu uzyskania informacji o gatunku. Przeanalizuj przekształconą listę genów za pomocą Omicshare (patrz Tabela Uzupełniająca 1) w celu wzbogacenia funkcjonalnego GO i szlaku KEGG, z istotnością ustawioną na wartość P < 0,0518,
      UWAGA: Analiza funkcjonalna GO obejmuje funkcję molekularną (MF), proces biologiczny (BP) i komponent komórkowy (CC). Analiza ścieżki KEGG obejmuje wzbogacanie ścieżek i wzbogacanie klasyfikacji ścieżek19. Wyniki analizy wzbogacania są przedstawione w Rysunek 2.

2. Eksperyment na zwierzętach

  1. aklimatyzacja
    1. Aklimatyzuj szczury Wistar w określonych warunkach wolnych od patogenów (SPF) z 12-godzinnym cyklem światła/ciemności. Upewnij się, że mają dostęp ad libitum do jedzenia i wody, aby utrzymać swoje zdrowie przed rozpoczęciem eksperymentów. Wykonuj karmienie adaptacyjne przez 1 tydzień.
  2. Modelowe ustanowienie
    1. Zaaklimatyzuj szczury do warunków środowiskowych i losowo przypisz je do pięciu grup: grupa kontrolna (Ctrl, ND + Pojazd), grupa modelowa (Model, HFD + Pojazd), grupa niskodawkowej SAL (SAL-L, HFD + SAL 5 mg / kg), grupa wysokiej dawki SAL (SAL-H, HFD + SAL 10 mg / kg) i grupa symwastatyny (SIM) (HFD + SIM 5 mg / kg).
    2. Podawaj normalną dietę (ND) grupie Ctrl i dietę wysokotłuszczową (HFD) pozostałym grupom przez cały czas trwania eksperymentu. W pierwszym dniu po podaniu HFD należy wstrzyknąć pojedynczą dawkę podskórną 600 000 j.m./kg VD3 wszystkim grupom z wyjątkiem grupy Ctrl20,21. Następnie należy wykonywać cotygodniowe wstrzyknięcia podskórne w ilości 100 000 j.m./kg VD3 przez kolejne 8 tygodni (Ryc. 3).
    3. Codziennie monitoruj stan zdrowia i przeżywalność zwierząt. Rozpocznij eksperymentalne interwencje w dziewiątym tygodniu.
    4. Poddać zwierzęta eutanazji po zakończeniu badania (zgodnie z instytucjonalnie zatwierdzonymi protokołami). Zbierz próbki surowicy, odstaw je na 30 minut i odwiruj w celu wyizolowania surowicy (zgodnie z wcześniej opublikowanymi raportami20,21). Wypreparuj tkanki naczyniowe (aortę brzuszną) i spłucz solą fizjologiczną buforowaną fosforanami (PBS) w celu usunięcia krwi.
    5. Utrwal jedną część tkanki w 4% paraformaldehydzie do badania histologicznego i przechowuj drugą porcję w ciekłym azocie do analizy molekularnej.
      UWAGA: Przed użyciem rozcieńczyć salidrozyd ciepłą wodą.

3. Ocena uszkodzenia tkanki naczyniowej za pomocą barwienia HE, VK, EVG

UWAGA: Utrwal tkankę naczyniową (aortę brzuszną) w 4% paraformaldehydzie, odwodnij w etanolu po 48 godzinach i zatopij w parafinie. Pokrój osadzone bloki parafiny na plastry o wielkości 5 μm w celu barwienia Hematoxylin-Eosin (HE), Elastica van Gieson (EVG) i Von Kossa (VK) i obserwuj morfologię histologiczną pod mikroskopem świetlnym. Barwienie HE służy do oceny zmian w morfologii tkanek. W tkance naczyniowej podkreśla zmiany strukturalne w ścianie naczynia, w tym proliferację komórek mięśni gładkich, zdezorganizowany układ komórek i stan zapalny. Barwienie EVG wizualizuje włókna elastyczne i kolagenowe, co jest niezbędne do oceny uszkodzenia włókien elastycznych lub przebudowy w tkance naczyniowej i pomaga w zrozumieniu wpływu zwapnienia na elastyczność naczyń. Barwienie VK wykrywa złogi wapnia, kluczową cechę VC, co czyni je kluczowym dla oceny zakresu i rozkładu zwapnień w tkance naczyniowej22,23.

  1. Barwienie HE do wykrywania uszkodzeń tkanki naczyniowej
    1. Deparafinowanie i ponowne nawodnienie
      1. Odparafinować skrawki w dwóch przemianach ksylenu przez 8 minut każda i ponownie uwodnić przez stopniowaną serię etanolu (100%, 95%, 85%, 75%) przez 3 minuty na krok. Następnie spłucz przez 2 minuty pod bieżącą wodą z kranu.
    2. Barwienie hematoksyną
      1. Zabarwić skrawki hematoksyliną przez 5-10 minut i umyć, aby usunąć nadmiar plamy, a następnie spłukać bieżącą wodą z kranu.
        UWAGA: Zaleca się jasne barwienie trwające 5 minut, aby uniknąć zbyt ciemnego zabarwienia, które może wpływać na kolor cytoplazmatyczny.
    3. różniczkowanie
      1. Różnicuj skrawki w roztworze różnicującym przez 30 sekund, a następnie dwukrotnie płucz w wodzie z kranu przez 3 minuty każde.
    4. Barwienie przeciwstawne eozyny
      1. Umieść skrawki w plamie eozynowej na 1 minutę. Po usunięciu nadmiaru plamy wykonaj szybkie odwodnienie.
    5. Odwodnienie, klarowanie i montaż
      1. W celu szybkiego odwodnienia zanurz sekcje w 75%, 85%, 95% i 100% etanolu na 3 sekundy każda, a następnie 100% etanolu na 1 min.
        UWAGA: Zaleca się szybkie odwodnienie, ponieważ eozyna może tracić kolor w gradientach wody i etanolu.
  2. Barwienie VK do wykrywania wapnia
    1. Deparafinowanie i ponowne nawodnienie
      1. Wykonaj ten krok zgodnie z krokiem 3.1.1.
    2. Reakcja azotanu srebra
      1. Osusz sekcje, obrysuj je cienkim pędzlem i bejcuj Von Kossa (patrz Tabela materiałów). Wystaw je na działanie światła ultrafioletowego przez 4 godziny, a następnie dokładnie spłucz bieżącą wodą z kranu.
    3. Przeciwbarwienie hematoksyliną
      1. Zabarwić skrawki hematoksyliną przez 5 minut, spłukać pod bieżącą wodą z kranu, rozróżnić i ponownie spłukać, a następnie spłukać bieżącą wodą z kranu.
    4. Barwienie przeciwstawne eozyny
      1. Odwodnić skrawki za pomocą sortowanego etanolu (85% i 95% przez 5 minut każdy), a następnie zabarwić eozyną przez 5 minut.
    5. Odwodnienie i montaż
      1. Odwodnić skrawki w kąpielach etanolowych (100% etanol I, II, III przez 5 min każda) i sklarować w kąpielach ksylenowych (ksylen I i II po 5 min każda). Następnie zamontuj sekcje za pomocą neutralnego balsamu.
    6. Badania mikroskopowe i przechwytywanie obrazu
      1. Zbadaj poplamione skrawki pod mikroskopem świetlnym i uchwyć obrazy do analizy.
        UWAGA: Upewnij się, że osady wapnia są brązowo-czarne do ciemnoczarnych, jądra są niebieskie, a tło jest czerwone. Bezpośrednio przed użyciem przygotować roztwór azotanu srebra do świeżego barwienia VK.
  3. Barwienie EVG dla włókien elastycznych i kolagenowych
    1. Deparafinowanie i ponowne nawodnienie
      1. Skrawki parafiny należy podgrzać przez 50 minut, a następnie zanurzyć je w ksylenie na 20 minut, aby usunąć parafinę. Kontynuuj, poddając sekcje serii sortowanych etanolu (100%, 95%, 85%, 75%) przez 5 minut każda, kończąc płukaniem pod bieżącą wodą z kranu przez 5 minut.
    2. Barwienie EVG
      1. Nałóż roztwór barwiący EVG (patrz tabela materiałów) przez 10 minut, a następnie krótko spłucz pod bieżącą wodą z kranu przez 5 sekund, aby usunąć nadmiar plamy.
      2. Następnie nanieść roztwór roboczy Verhoeffa (patrz tabela materiałów) przez 5 minut, a następnie ponownie krótko płukać pod bieżącą wodą z kranu przez 5 sekund. Stosować roztwór różnicujący Verhoeffa przez 5 s, aż włókna elastyny będą wyraźnie widoczne, a następnie spłukiwać bieżącą wodą z kranu przez 5 s.
        UWAGA: Wymieszaj składniki A, B i C (dostarczone w dostępnym na rynku zestawie) w stosunku 5:2:2, aby przygotować roztwór roboczy Verhoeffa przed użyciem. Roztwór należy zużyć w ciągu 2 godzin i uzupełniać w razie potrzeby podczas procesu barwienia, aby zapobiec wysychaniu skrawków.
    3. Odwodnienie i montaż
      1. Odwodnić skrawki za pomocą serii stopniowanego etanolu (75%, 85%, 95% i 100%) przez 5 s każda, a następnie sklarować w dwóch zmianach ksylenu przez 1 minutę każda. Po krótkim okresie schnięcia na powietrzu zamontuj sekcje neutralnym balsamem.
    4. Badania mikroskopowe i analiza obrazu
      1. Zbadaj poplamione skrawki pod mikroskopem świetlnym, aby uwidocznić włókna elastyczne i kolagenowe oraz uchwyć obrazy do późniejszej analizy.

4. Test fosfatazy alkalicznej (ALP)

UWAGA: Użyj ALP jako kluczowego wskaźnika do oceny skuteczności leczenia zwapnienia.

  1. Przygotowanie odczynnika
    1. Rozpuścić podłoże wybarwiające w lodowatym buforze węglanowym o pH 9,6 o wartości 0,05 M do końcowej objętości 2,5 ml.
      UWAGA: Przygotować bufor, rozpuszczając 1,59 g węglanu sodu i 2,93 g wodorowęglanu sodu w 1,000 ml podwójnie destylowanej wody.
  2. Rozcieńczenie substratu
    1. Rozcieńczyć 10 μl roztworu p-nitrofenolu (10 mM) buforem węglanowym o pH 9,6 o 0,05 M do końcowej objętości 0,2 ml, aby uzyskać końcowe stężenie 0,5 mM.
  3. Przygotowanie próbki
    1. Homogenizuj aortę brzuszną w buforze do lizy. Odwirować homogenat (~12 000 x g przez 10 minut w temperaturze 4 °C) i zebrać supernatant do wykrywania aktywności ALP.
      UWAGA: Upewnij się, że bufor do lizy jest wolny od inhibitorów fosfatazy. Przechowywać oczekujące próbki do badań w temperaturze -80 °C, unikając powtarzających się cykli zamrażania i rozmrażania.
  4. Przygotowanie mikropłytek do oznaczania
    1. Przygotować 96-dołkową płytkę z dołkami zerowymi, wzorcowymi i dołkami na próbki. Dodać 50 μl roztworu wzorcowego do studzienek wzorcowych i 50 μl oczekujących próbek testowych do studzienek do pobierania próbek. Inkubować płytkę w temperaturze 37 °C przez 10 minut.
  5. Zakończenie reakcji i pomiar absorbancji
    1. Dodać 100 μl roztworu zatrzymującego do każdej studzienki, aby zakończyć reakcję. Zmierzyć absorbancję przy 405 nm i obliczyć aktywność ALP na podstawie wartości absorbancji (postępując zgodnie z instrukcjami producenta, patrz Tabela materiałów).
      UWAGA: Studzienki zawierające wzorzec lub próbki z aktywnością ALP będą miały różne odcienie żółtego. Kolor jest stabilny do 2 godzin.

5. Oznaczanie zawartości wapnia

UWAGA: Określenie zawartości wapnia jest kluczowe dla oceny stopnia mineralizacji w tkankach biologicznych.

  1. Przygotowanie tkanek
    1. Zmiel tkankę na małe kawałki i homogenizuj w buforze do lizy.
  2. Rozcieńczanie próbki i odwirowywanie
    1. Rozcieńczyć tkankę w buforze do lizy w stosunku 1:10. Homogenizować mieszaninę i odwirowywać w temperaturze 4 °C, 12 000 x g przez 5 minut. Zebrać supernatant do analizy.
      UWAGA: Przygotować roztwory wzorca wapnia (0-1,0 mM) przy użyciu 5 mM roztworu wzorcowego wapnia (patrz Tabela materiałów).
  3. Ustawianie płytki i inkubacja
    1. Dodać 50 μl próbek wzorcowych lub testowych do każdego dołka na 96-dołkowej płytce. Dodać 150 μl roztworu roboczego do oznaczania, dokładnie wymieszać i inkubować płytkę w ciemności w temperaturze pokojowej przez 10 minut. Zmierzyć absorbancję przy długości fali 575 nm i skonstruować krzywą wzorcową.
  4. Obliczanie zawartości wapnia
    1. Obliczyć zawartość wapnia przy użyciu krzywej wzorcowej, uwzględniając współczynnik rozcieńczenia, objętość próbki i masę atomową wapnia.

6. Test immunoenzymatyczny (ELISA) dla cytokin zapalnych (IL-6, TNF-α, IL-1β)

UWAGA: IL-6, IL-1β i TNF-α są kluczowymi cytokinami prozapalnymi, które wskazują na obecność i nasilenie reakcji zapalnej. Pomiar tych cytokin jest niezbędny do zrozumienia procesu zapalnego i oceny skuteczności leczenia przeciwzapalnego.

  1. Pobieranie próbek
    1. Zbierz surowicę z aorty brzusznej szczura. Pozostaw do koagulacji w temperaturze pokojowej przez 2 godziny. Odwirować próbkę o masie 3 000 x g przez 10 minut w temperaturze 4 °C i zebrać supernatant.
  2. Przygotowanie mikropłytek do badania
    1. Przygotować 96-dołkową płytkę z dołkami przeznaczonymi na wzorce i próbki do badań. Dodać 50 μl wzorców (patrz tabela materiałów) w różnych stężeniach do odpowiednich studzienek.
  3. Przygotowanie próbki
    1. Dodać 40 μl rozcieńczalnika do próbek do każdego dołka przeznaczonego na próbki do badań. Dodać 10 μl próbki do tych samych studzienek, co daje 5-krotne rozcieńczenie.
  4. Inkubacja z odczynnikami znakowanymi enzymami
    1. Dodać 100 μl znakowanych enzymatycznie odczynników specyficznych dla IL-6, TNF-α lub IL-1β do wszystkich studzienek z wyjątkiem ślepej próby. Inkubować płytkę w temperaturze 37 °C przez 60 minut.
  5. mycie
    1. Wylej płyn ze wszystkich studzienek z wyjątkiem ślepej próby. Umyj studzienki 1x roztworem płuczącym (przygotowanym jako 20-krotne rozcieńczenie w wodzie destylowanej). Powtórz ten krok mycia pięć razy i wysusz studzienki.
  6. Wywoływanie i kończenie koloru
    1. Dodać 50 μl roztworów substratów A i B (z dostępnego w handlu zestawu, patrz Tabela materiałów) do każdej studzienki. Delikatnie wymieszać i inkubować płytkę w temperaturze 37 °C w ciemności przez 15 minut. Dodać 50 μl roztworu zatrzymującego do każdej studzienki, aby zakończyć reakcję.
  7. Pomiar absorbancji i analiza danych
    1. Ustaw wartość pustą na zero. Zmierzyć absorbancję przy długości fali 450 nm za pomocą czytnika mikropłytek. Wygeneruj krzywą wzorcową na podstawie wartości OD i stężeń wzorcowych. Obliczyć stężenia próbki za pomocą interpolacji i dostosować do współczynnika rozcieńczenia.

7. Test profilu lipidowego

UWAGA: Test profilu lipidowego wykrywa nieprawidłowe poziomy lipidów, gdzie podwyższony lub niezrównoważony poziom lipidów może przyspieszyć ryzyko zwapnienia naczyń krwionośnych.

  1. Cholesterol całkowity i trójglicerydy (TC i TG)
    1. Zebrać surowicę i przygotować 96-dołkową płytkę z wyznaczonymi dołkami do ślepej próby, kalibracji i oczekujących próbek testowych. Do każdego dołka dodać 2,5 μl surowicy, wzorca kalibracyjnego lub roztworu próby ślepej.
    2. Dodać 250 μl roztworu roboczego do każdej studzienki. Delikatnie wymieszać i inkubować płytkę w temperaturze 37 °C przez 10 minut. Zmierzyć absorbancję przy długości fali 500 nm za pomocą czytnika mikropłytek.
  2. Lipoproteiny o niskiej gęstości i lipoproteiny o dużej gęstości (LDL-C i HDL-C)
    1. Zebrać surowicę i przygotować 96-dołkową płytkę z dołkami przeznaczonymi do ślepej próby, kalibracji i oczekujących próbek testowych. Dodać 2,5 μl surowicy, wzorca kalibracyjnego lub roztworu ślepej próby do odpowiednich studzienek.
    2. Dodać odpowiedni odczynnik (odczynnik pierwszy dla 180 μl lub odczynnik drugi dla 60 μl, patrz tabela materiałów) do każdego dołka, jak określono w instrukcjach zestawu do oznaczania. Inkubować w temperaturze (37 °C) i przez czas (odczynnik pierwszy przez 5 minut lub odczynnik drugi przez 10 minut) zalecane dla każdego odczynnika.
    3. Zmierzyć absorbancję przy określonej długości fali (600 nm) wskazanej dla LDL-C lub HDL-C za pomocą czytnika mikropłytek.

8. Western blotting

UWAGA: Western blot (WB) jest kluczowy w ocenie poziomów ekspresji kluczowych białek, umożliwiając wykrywanie zarówno form całkowitych, jak i fosforylowanych.

  1. Przygotowanie tkanek
    1. Zważ 0,05 g chusteczki i dokładnie spłucz PBS, aby usunąć nadmiar zanieczyszczeń. Dodać 500 μl buforu do lizy zawierającego 1x inhibitory fosfatazy i proteazy. Inkubować tkankę w temperaturze 4 °C przez 10 minut i homogenizować ją za pomocą młynka do tkanek.
  2. Ekstrakcja białek
    1. Pozostawić homogenizowaną próbkę na 1 minutę, następnie odwirować w temperaturze 4 °C i 12 000 x g przez 15 minut. Zebrać supernatant do analizy białka. Oznaczyć stężenie białka metodą BCA postępując zgodnie z instrukcjami producenta (patrz Tabela Materiałów). Użyj krzywej wzorcowej, aby obliczyć stężenie.
      UWAGA: Przed użyciem należy wstępnie schłodzić wirówkę do temperatury 4 °C. Zmierzyć stężenie białka przy 562 nm.
  3. Przygotowanie próbki
    1. Wymieszać próbkę białka z 5-krotnym buforem ładującym zawierającym β-merkaptoetanol i SDS w stosunku 4:1. Podgrzewać mieszaninę w temperaturze 100 °C przez 5 minut, aby dokonać denaturacji białek.
      UWAGA: Jeśli wymagany jest 1x bufor ładujący, rozcieńczyć 5x bufor buforem do lizy.
  4. Preparat żelu SDS-PAGE
    1. Przygotuj 12% żel SDS-PAGE i umieść go w aparacie do elektroforezy. Dodaj 1x bufor do elektroforezy do połowy zgodnie z instrukcją (patrz Tabela uzupełniająca 2).
  5. Elektroforezy
    1. Pobrać próbki białka z temperatury -20 °C. Załadować 60 μg białka do studzienki i uruchomić żel.
    2. Ustaw prąd na 50 mA na 20 minut dla żelu do układania w stos, a następnie zwiększ do 100 mA na 60 minut dla żelu separującego, aż czoło barwnika dotrze do dna.
  6. Przenoszenie membrany
    1. Aktywować membranę PVDF w metanolu na 5 minut.
    2. Zamontuj kanapkę transferową w następującej kolejności: bibuła filtracyjna → żel SDS-PAGE → membrana PVDF → bibuła filtracyjna. Przenoszenie białek przy ciśnieniu 300 mA przez 60 min.
      UWAGA: Upewnij się, że między żelem SDS-PAGE a membraną PVDF nie są uwięzione pęcherzyki powietrza.
  7. Blokowanie
    1. Inkubować membranę PVDF w 5% BSA (przygotowanym w 1x TBST) w temperaturze pokojowej, delikatnie wstrząsając przez 60 min. Przemyć membranę 1x TBST trzy razy przez 5 min każdy.
  8. Inkubacja przeciwciał pierwotnych
    1. Inkubować błonę w 5 ml odpowiedniego przeciwciała pierwszorzędowego (np. p-JAK2, JAK2, p-STAT3, STAT3, p-NF-κB p65, NF-κB p65, IκBα) rozcieńczonego w buforze blokującym w temperaturze pokojowej przez 2,5 godziny.
  9. Inkubacja przeciwciał wtórnych
    1. Przemyć membranę 1x TBST trzy razy po 5 minut po inkubacji przeciwciał pierwotnych. Inkubować z odpowiednim przeciwciałem drugorzędowym w temperaturze pokojowej przez 1 godzinę. Ponownie umyj membranę 1x TBST trzy razy przez 5 minut każdy.
  10. wykrywanie
    1. Wizualizacja prążków białkowych za pomocą detekcji chemiluminescencyjnej ECL24 (patrz tabela materiałów).
  11. Analiza densytometryczna
    1. Określ ilościowo prążki białkowe za pomocą oprogramowania ImageJ. Postępuj zgodnie z tym przepływem pracy w ImageJ: Image → 8-bit → Process → Subtract Background. Analizuj → ustaw pomiary → analizuj → ustaloną skalę. Edytuj → odwróć → analizuj → mierz wyniki →. Plik → Zapisz jako → IntDen.
    2. Generuj wykresy statystyczne za pomocą oprogramowania do tworzenia wykresów i analiz statystycznych.
      UWAGA: Upewnij się, że wyniki są spójne we wszystkich powtórzeniach, aby zweryfikować wyniki.

9. Analiza statystyczna

  1. Zbieraj i organizuj dane za pomocą GraphPad Prism 9.0.
  2. Obliczaj i wykreślaj słupki błędów przy użyciu średniej ± SD z surowych danych.
  3. Wykonaj analizę statystyczną przy użyciu jednoczynnikowej analizy ANOVA, a następnie testu post-hoc Tukeya w celu wielokrotnych porównań.
  4. Określ istotność statystyczną przy P < 0,05, przy czym mniejsze wartości P wskazują na większe różnice w wynikach.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Analiza farmakologiczna sieci

Korzystając z baz danych takich jak HERB, TCMSP, Pubmed, SwissTargetPrediction, CTD, PharmMapper, SEA i STITCH, zidentyfikowano 388 potencjalnych genów docelowych dla salidrozydu. Ponadto 2871 potencjalnych genów docelowych związanych z VC pobrano z baz danych, takich jak GeneCards, OMIM, PharmGkb i DrugBank. Analiza przecięć za pomocą diagramów VENN ujawniła 208 nakładających się celów, uważanych za kluczowe cele interwencji salidrozydu ...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

VC charakteryzuje się zmianami zwyrodnieniowymi w komórkach i tkankach naczyniowych, z patologicznymi złogami mineralnymi w naczyniach krwionośnych prowadzącymi do usztywnienia ścian naczyń lub tworzenia się blaszek miażdżycowych, co może prowadzić do obturacyjnych chorób naczyniowych25. Badania pokazują, że około 85% blaszek VC może przekształcić się w zakrzepicę, która może wywołać ostre epizody sercowo-naczyniowe. Ponadto VC jest kluczowym wskaźnikiem potencjalnych ostrych zdarzeń sercowo-naczy...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Upewnij się, że wszyscy autorzy ujawnili wszelkie konflikty interesów.

Podziękowania

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ta praca była wspierana finansowo przez Departament Nauki i Technologii Prowincji Jilin (YDZJ202301ZYTS460) oraz Prowincjonalny Departament Edukacji Projektu (JJKH20230991KJ).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
30% (29:1) roztwór akrylamidu/bisPekin Solarbio Science & Technology Co., Ltd, ChinyA1010
4% roztwór utrwalający paraformaldehydBeyotime Biotech Inc (Beyotime), ChinyP0099
5 * bufor ładującyBeijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd, ChinyP1040
Zestaw do oznaczania fosfatazy alkalicznejBeyotime Biotech Inc (Beyotime), ChinyP0321S
Oprogramowanie AlphaViewProteinsimple Inc.USAAlphaView SA
Zestaw do oznaczania białek BCABeyotime Biotech Inc (Beyotime), ChinyP0012
Roztwór do niebieszczeniaPekin Solarbio Science & Technology Co., Ltd, ChinyG1866
Zestaw do kolorymetrycznego wapniaBeyotime Biotech Inc (Beyotime), ChinyS1063S
Zestaw do barwienia włókien kolagenowych i elastycznych włókien (metoda EVG-Verh eff)Beijing Solarbio Science & Technology Co., Ltd, ChinyG1597
Maszyna do odwadnianiaDiapath Biosciences  Ltd, WłochyDonatello
Maszyna do zatapianiaWuhan Junjie Electronics Co., Ltd, ChinyJB-P5
Przyrząd znakowany enzymatem Biotek Co., Ltd,USAEpoka
Absolutny etanolGHTECH  Co., Ltd, Chiny64-17-5
Kozia IgG Przeciw Myszom (H+L) HRPBioworld technology, co, Ltd., ChinyBS20242-Y
GraphPad Prism SoftwareGraphPad Software.,USAGraphPad Prism 9.0
Zestaw do barwienia hematoksyliny-eozynyPekin Solarbio Science & Technology Co., Ltd, ChinyG1120
Zestaw do oznaczania cholesterolu lipoprotein o wysokiej gęstościNanjing Jiancheng Bioengineering Research Institute Co., Ltd, ChinyA112
Koza anty-króliczo IgG (H + L) z oznaczeniem HRPGuangzhou saiguo biotech Co., LTDA0208
Image JSoftware National Institutes of Health (NIH), USAObraz J 
Iκ B Alfa Przeciwciało poliklonalneProteintech Group, Inc.A, USA10268-1-AP
JAK2Powinowactwo przeciwciał Biosciences Co., Ltd, ChinyAF6022
Zestaw do oznaczania cholesterolu lipoprotein o niskiej gęstościNanjing Jiancheng Bioengineering Research Institute Co., Ltd, ChinyA113
NF-κ B p65 PrzeciwciałoProteintech Group, Inc.A, USA10745-1-AP
Patologiczny mikrotomLeica Biosystems, USARM2016
Tabele koktajlowe inhibitorów fosfatazyF. Hoffmann-La Roche, Ltd, Szwajcaria04906845001
Phospho-JAK2 (Tyr931)Powinowactwo przeciwciał Biosciences Co., Ltd, ChinyAF3024
Phospho-NF-κ B p65 (Ser276)Powinowactwo przeciwciał Biosciences Co., Ltd, ChinyAF2006
Phospho-STAT3 (S727)Przeciwciało Abways  Nauka & Technology Co., Ltd, ChinyCY5291
Koktajl inhibitora proteazy F. Hoffmann-La Roche, Ltd, Szwajcaria11873580001
membrana PVDFF. Hoffmann-La Roche, Ltd, Szwajcaria3010040001
Szczur IL-1β Zestaw ELISABeyotime Biotech Inc (Beyotime), ChinyPI303
Szczur IL-6 Zestaw ELISABeyotime Biotech Inc (Beyotime), ChinyPI328
Szczur TNF-α Zestaw ELISABeyotime Biotech Inc (Beyotime), ChinyPT516
RIPA Bufor do lizyBeyotime Biotech Inc (Beyotime), ChinyP0013B
SalisorosideShanghai yuanye Bio-Technology Co., Ltd, ChinyS25475
SDSGuangzhou saiguo biotech Co., LTD, Chiny3250KG001
Węglan soduChina National Pharmaceutical Group Co., Ltd. , Chiny1001921933
Wodorowęglan soduChina National Pharmaceutical Group Co., Ltd. , Chiny10018960
Tiosiarczan soduChina National Pharmaceutical Group Co., Ltd. , Chiny20042518
STAT3 AntibodyProteintech Group, Inc.A,USA10253-2-AP
TBST (10 razy;)Beyotime Biotech Inc (Beyotime), ChinyST673
Zestaw do oznaczania cholesterolu całkowitegoNanjing Jiancheng Bioengineering Research Institute Co., Ltd, ChinyA111
Nanjing Jiancheng Bioengineering Research Institute Co., Ltd, ChinyA110
Tris BaseGuangzhou saiguo biotech Co., LTD1115GR500
Pionowy optyczny mikroskopNikon Corporation,JaponiaEclipse E100
Von Kossa Rozwiązanie  Wuhan servicebio technology CO., LTD, ChinyG1043
Western Blotting Luminol ReagentSanta Cruz Biotechnology, Inc., USASC-2048
β-Przeciwciało aktynowe  Technologia sygnalizacji komórkowej, Inc., USAE4967
Zestaw do oznaczania trójglicerydów

Bibliografia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Sutton, N. R., et al. Molecular mechanisms of vascular health: Insights from vascular aging and calcification. Arterioscler Thromb Vasc Biol. 43 (1), 15-29 (2023).
  2. Henein, M. Y., Owen, A. Statins moderate coronary stenoses but not coronary calcification: Results from meta-analyses. Int J Cardiol. 153 (1), 31-35 (2011).
  3. Ajufo, E., et al. Value of coronary artery calcium scanning in association with the net benefit of aspirin in primary prevention of atherosclerotic cardiovascular disease. JAMA Cardiol. 6 (2), 179-187 (2021).
  4. Vossen, L. M., Kroon, A. A., Schurgers, L. J., De Leeuw, P. W. Pharmacological and nutritional modulation of vascular calcification. Nutrients. 12 (1), 100(2019).
  5. Kereiakes, D. J., et al. Principles of intravascular lithotripsy for calcific plaque modification. JACC Cardiovasc Interv. 14 (12), 1275-1292 (2021).
  6. Demer, L. L., Watson, K. E., Boström, K. Mechanism of calcification in atherosclerosis. Trends Cardiovasc Med. 4 (1), 45-49 (1994).
  7. Chen, F., et al. Network pharmacology analysis combined with experimental validation to explore the therapeutic mechanism of salidroside on intestine ischemia-reperfusion. Biosci Rep. 43 (8), BSR20230539(2023).
  8. Rong, L., et al. Salidroside induces apoptosis and protective autophagy in human gastric cancer ags cells through the pi3k/akt/MTOR pathway. Biomed Pharmacother. 122, 109726(2020).
  9. Zhang, P., et al. Network pharmacology: Towards the artificial intelligence-based precision traditional Chinese medicine. Brief Bioinform. 25 (1), bbad518(2023).
  10. Jiao, X., et al. A comprehensive application: Molecular docking and network pharmacology for the prediction of bioactive constituents and elucidation of mechanisms of action in component-based Chinese medicine. Comput Biol Chem. 90, 107402(2021).
  11. Li, S., Zhang, B. Traditional Chinese medicine network pharmacology: Theory, methodology and application. Chin J Nat Med. 11 (2), 110-120 (2013).
  12. Wang, X., Hu, Y., Zhou, X., Li, S. Editorial: Network pharmacology and traditional medicine: Setting the new standards by combining in silico and experimental work. Front Pharmacol. 13, 1002537(2022).
  13. Huang, Z., Yang, Y., Fan, X., Ma, W. Network pharmacology-based investigation and experimental validation of the mechanism of scutellarin in the treatment of acute myeloid leukemia. Front Pharmacol. 13, 952677(2022).
  14. Zhang, R., Zhu, X., Bai, H., Ning, K. Network pharmacology databases for traditional Chinese medicine: Review and assessment. Front Pharmacol. 10, 123(2019).
  15. Wang, C., Liu, X., Guo, S. Network pharmacology-based strategy to investigate the effect and mechanism of alpha-solanine against glioma. BMC Complement Med Ther. 23 (1), 371(2023).
  16. Li, X., et al. Network pharmacology prediction and molecular docking-based strategy to explore the potential mechanism of Huang Lian jiedu decoction against sepsis. Comput Biol Med. 144, 105389(2022).
  17. Holmes, R. S., et al. Recommended nomenclature for five mammalian carboxylesterase gene families: Human, mouse, and rat genes and proteins. Mamm Genome. 21 (9-10), 427-441 (2010).
  18. Geng, J., Zhou, G., Guo, S., Ma, C., Ma, J. Underlying mechanism of traditional herbal formula Chuang-ling-ye in the treatment of diabetic foot ulcer through network pharmacology and molecular docking. Curr Pharm Des. 30 (6), 448-467 (2024).
  19. Chen, X., et al. Puerarin inhibits emt induced by oxaliplatin via targeting carbonic anhydrase xii. Front Pharmacol. 13, 969422(2022).
  20. Herrmann, J., Babic, M., Tolle, M., Van Der Giet, M., Schuchardt, M. Research models for studying vascular calcification. Int J Mol Sci. 21 (6), 2204(2020).
  21. Zhou, H., X, W., Yuan, Y., Qi, X. Comparison of methods for establishing a rat model of atherosclerosis using three doses of vitamin D3 and atherogenic diet. Chin J Arterioscler. 20 (11), 995-998 (2012).
  22. Zhang, Y., et al. Il-18 mediates vascular calcification induced by high-fat diet in rats with chronic renal failure. Front Cardiovasc Med. 8, 724233(2021).
  23. Kazlouskaya, V., et al. The utility of elastic verhoeff-van gieson staining in dermatopathology. J Cutan Pathol. 40 (2), 211-225 (2013).
  24. Tang, X., et al. Underlying mechanism and active ingredients of tianma gouteng acting on cerebral infarction as determined via network pharmacology analysis combined with experimental validation. Front Pharmacol. 12, 760503(2021).
  25. Lee, S. J., Lee, I. K., Jeon, J. H. Vascular calcification-new insights into its mechanism. Int J Mol Sci. 21 (8), 2685(2020).
  26. Magdic, J., et al. Intracranial vertebrobasilar calcification in patients with ischemic stroke is a predictor of recurrent stroke, vascular disease, and death: A case-control study. Int J Environ Res Public Health. 17 (6), 2013(2013).
  27. Zhou, L., et al. Salidroside-pretreated mesenchymal stem cells contribute to neuroprotection in cerebral ischemic injury in vitro and in vivo. J Mol Histol. 52 (6), 1145-1154 (2021).
  28. Hutcheson, J. D., Goettsch, C. Cardiovascular calcification heterogeneity in chronic kidney disease. Circ Res. 132 (8), 993-1012 (2023).
  29. Zhang, X., et al. Salidroside: A review of its recent advances in synthetic pathways and pharmacological properties. Chem Biol Interact. 339, 109268(2021).
  30. Zhang, P., Li, Y., Guo, R., Zang, W. Salidroside protects against advanced glycation end products-induced vascular endothelial dysfunction. Med Sci Monit. 24, 2420-2428 (2018).
  31. Li, Y., et al. Salidroside promotes angiogenesis after cerebral ischemia in mice through shh signaling pathway. Biomed Pharmacother. 174, 116625(2024).
  32. Gao, X. F., Shi, H. M., Sun, T., Ao, H. Effects of radix et rhizoma Rhodiolae kirilowii on expressions of von Willebrand factor, hypoxia-inducible factor 1 and vascular endothelial growth factor in myocardium of rats with acute myocardial infarction. Zhong Xi Yi Jie He Xue Bao. 7 (5), 434-440 (2009).
  33. Li, X., Liu, C., Li, Y., Xiong, W., Zuo, D. Inflammation promotes erythropoietin induced vascular calcification by activating p38 pathway. Bioengineered. 13 (3), 5277-5291 (2022).
  34. Bessueille, L., Magne, D. Inflammation: A culprit for vascular calcification in atherosclerosis and diabetes. Cell Mol Life Sci. 72 (13), 2475-2489 (2015).
  35. Li, R., et al. Salidroside prevents tumor necrosis factor-alpha-induced vascular inflammation by blocking mitogen-activated protein kinase and nf-kappa B signaling activation. Exp Ther Med. 18 (5), 4137-4143 (2019).
  36. Xing, S. S., et al. Salidroside attenuates endothelial cellular senescence via decreasing the expression of inflammatory cytokines and increasing the expression of sirt3. Mech Ageing Dev. 175, 1-6 (2018).
  37. Hopkins, A. L. Network pharmacology. Nat Biotechnol. 25 (10), 1110-1111 (2007).
  38. Xin, P., et al. The role of jak/stat signaling pathway and its inhibitors in diseases. Int Immunopharmacol. 80, 106210(2020).
  39. Fu, X., et al. Glycosides from buyang huanwu decoction inhibit atherosclerotic inflammation via jak/stat signaling pathway. Phytomedicine. 105, 154385(2022).
  40. Macri, F., et al. High phosphate-induced jak-stat signalling sustains vascular smooth muscle cell inflammation and limits calcification. Biomolecules. 14 (1), 107328(2023).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

Terapia salidrozydemszlak JAK2 STAT3sie oddzia ywa bia kowychmetabolizm lipid wodpowied zapalnaWestern Blotprofil lipidowy surowicy
Film wkrótce dostępny

Powiązane artykuły