Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Projekt i walidacja biodrukarki do wytłaczania wolumetrycznego do biodruku rozpuszczalnego ekstraktu z błony podstawnej do badań translacyjnych

970 wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/67788

⸱

28 marca 2025

 ,  ,  , 
1Laboratory of Biological Structure Mechanics (LaBS), Department of Chemistry, Materials and Chemical Engineering "Giulio Natta", Politecnico di Milano

W tym artykule

Podsumowanie

Rozpuszczalne ekstrakty z błony podstawnej są najczęściej stosowanymi matrycami biologicznymi w badaniach nad rakiem, ale ich skomplikowane zachowanie reologiczne utrudnia ich biodrukowanie za pomocą dostępnych na rynku systemów biodruku. W pracy przedstawiono zindywidualizowaną strategię biodruku w celu uzyskania czystych konstruktów matrycowych o dobrej wierności kształtu zarówno w jednej, jak i wielu warstwach.

Streszczenie

W badaniach translacyjnych, modele 3D in vitro są niezbędne do pogłębiania wiedzy naukowej i rozwoju terapii. W tym celu rozpuszczalne ekstrakty z błony podstawnej (SBMes), pochodzące z komórek mięsaka myszy, odgrywają kluczową rolę w odtwarzaniu mechanicznych i biochemicznych cech mikrośrodowiska in vivo. Są one szczególnie cenne w różnych dziedzinach badań, od inżynierii tkankowej po testowanie leków. W szczególności stały się one fundamentalne w badaniach nad rakiem, ponieważ tradycyjne hodowle komórkowe 2D, szeroko stosowane w tej dziedzinie, mogą dostarczać mylących informacji, ponieważ nie rejestrują trójwymiarowej (3D) struktury i mikrośrodowiska guza.

W badaniach nad rakiem, skuteczne modele 3D in vitro są kluczowe dla lepszego zrozumienia ewolucji raka i przewidywania wyzwań, takich jak mechanizmy oporności na leki. Organoidy okazały się obiecującymi modelami 3D in vitro, oferującymi dokładniejsze odwzorowanie biologii guza. Rosną w SBM, ponieważ tworzą środowisko, w którym komórki mogą rosnąć i samoorganizować się w struktury 3D. Jednak SBMe wiąże się z poważnymi wyzwaniami, w tym niskimi właściwościami mechanicznymi i złożonym zachowaniem reologicznym, co uniemożliwia jego stosowanie w dostępnych na rynku systemach biodruku pneumatyczno-wytłaczanego.

Aby rozwiązać te ograniczenia, opracowaliśmy tani, kontrolowany objętościowo system biodruku oraz specjalny protokół do drukowania struktur za pomocą SBMe. System ten oparty jest na wytłaczarce wolumetrycznej i pokonuje ograniczenia tradycyjnych podejść napędzanych pneumatycznie. Po zmontowaniu i zaprogramowaniu za pomocą określonego kodu g, system może drukować biologicznie zarówno czysty, jak i rozcieńczony SBMe, aby uzyskać zarówno jedno-, jak i wielowarstwowe konstrukcje. Podejście to oferuje bardziej wiarygodną i skalowalną metodę tworzenia modeli 3D kultur komórkowych, torując drogę do bardziej efektywnych badań nad nowymi terapiami i testowaniem leków.

Wprowadzenie

W badaniach translacyjnych tworzenie modeli 3D in vitro, które ściśle odwzorowują środowisko in vivo, jest niezbędne do pogłębiania wiedzy naukowej i rozwoju terapeutycznego1. Kluczowym elementem w ich budowie jest zastosowanie analogów macierzy zewnątrzkomórkowej (ECM), takich jak rozpuszczalne ekstrakty z błony podstawnej (SBM), które lepiej odzwierciedlają złożoność naturalnych tkanek. SBM są szczególnie cenne w różnych dziedzinach badawczych, od inżynierii tkankowej po testowanie leków2,3. W szczególności stały się one fundamentalne w badaniach nad rakiem, ponieważ odtwarzają mechaniczne i biochemiczne cechy mikrośrodowiska guza, umożliwiając opracowanie modeli, które lepiej odzwierciedlają wzrost guza, przerzuty i reakcje na leczenie.

Rzeczywiście, pomimo znacznego postępu w ciągu ostatnich kilku dekad, wiele terapii nadal zawodzi, co prowadzi do częstych niepowodzeń leczenia w warunkach klinicznych. Niepowodzenie to jest często przypisywane mechanizmom oporności na leki spowodowanym wysokim poziomem heterogeniczności komórek4,5. Skuteczne modele in vitro, zdolne do dokładnego odtworzenia złożoności ludzkich nowotworów, mają kluczowe znaczenie dla lepszego zrozumienia ewolucji nowotworów i przewidywania tego zjawiska.

Tradycyjne hodowle komórkowe 2D były podstawą badań nad rakiem, ale mogą prowadzić do mylących informacji na temat skuteczności leków i zachowania guza, ponieważ nie są w stanie uchwycić struktury 3D i mikrośrodowiska rzeczywistych guzów6,7,8. W przeciwieństwie do tego, modele 3D in vitro okazały się obiecującą alternatywą, oferując dokładniejsze odwzorowanie mikrośrodowiska guza i zachowań biologicznych poprzez naśladowanie złożoności 3D9,10.

W badaniach nad rakiem, organoidy są powszechnie używane jako modele 3D do badania chorób i skuteczności leków, ponieważ dostarczają dokładniejszych i bardziej odpowiednich modeli ludzkich tkanek i organów. Zastosowanie SBMe, pochodzącego z komórek mięsaka myszy Engelbreth-Holm-Swarm, miało kluczowe znaczenie dla postępu w badaniach nad rakiem11,12. Zapewnia żelowy substrat, w którym komórki mogą rosnąć, namnażać się i samoorganizować w struktury organoidowe, zapewniając prawidłowy rozwój i wzrost13,14.

Jednak SBMe stawia wiele wyzwań ze względu na swoje unikalne i złożone cechy. Jako płyn nienewtonowski, SBMe wykazuje właściwości rozrzedzania przy ścinaniu, co oznacza, że jego lepkość maleje wraz ze wzrostem naprężeń ścinających, co sprawia, że jego obsługa i zastosowanie są niespójne pod wpływem zmiennych sił. Dodatkowo, jego tiksotropowe zachowanie zwiększa złożoność, ponieważ może odzyskać swoją lepkość z czasem, gdy naprężenia ścinające zostaną usunięte15,16. Właściwości te, w połączeniu z niską wytrzymałością mechaniczną (przy wartościach modułu przechowywania w zakresie od 10 Pa do 5 000 Pa w zależności od stężenia białka) i zachowaniem termowrażliwym, pogarszają te wyzwania, wymagając skrupulatnej kontroli podczas przygotowania i użytkowania, a także biodruku w czystej postaci.

Standardowe systemy biodruku sterowane pneumatycznie nie są w stanie prawidłowo kontrolować dozowania SBMe, ponieważ zastosowanie ciśnienia powoduje niekontrolowane zachowanie po jego wyrzuceniu ze strzykawki. Wpływa na to zjawisko podobne do efektu "zrywu" opisanego dla stopów polimerowych, w którym natężenie przepływu gwałtownie wzrasta powyżej pewnej wartości ciśnienia krytycznego17,18,19. Jak podaliśmy w naszym poprzednim work16, strategia dozowania z kontrolą objętości pozwala na odłączenie ekstruzji SBMe od ciśnienia wytwarzanego w dozowniku, które jest zależne od właściwości reologicznych matrycy, warunków pracy i geometrii dyszy. W ostatnich latach na rynku podjęto kilka prób wykorzystania tej samej zasady, z Matribotem firmy Corning na czele. Umożliwia obsługę i osadzanie SBMe i innych biotuszy wrażliwych na temperaturę dzięki kontrolowanym warunkom temperaturowym. Może to być jednak kosztowne, co ogranicza dostępność dla mniejszych laboratoriów.

W naszym poprzednim artykule przedstawiliśmy tanią, niestandardową alternatywę - wolumetryczny system biodruku16. Ta wersja została oparta na zmodyfikowanej drukarce 3D klasy podstawowej z niestandardowym ekstruderem wydrukowanym w 3D. Pomimo swojej skuteczności w biodruku, stwarzał pewne ograniczenia w powtarzalności druku. Wywodzi się z drukarki 3D klasy podstawowej, miał pewne problemy z ruchami Z i automatycznym naprowadzaniem. Aby sprostać tym potrzebom, opracowaliśmy zaawansowaną wersję naszego niestandardowego, taniego systemu dozowania wolumetrycznego oraz specjalny protokół do biodruku struktur za pomocą SBMe.

Tutaj udostępniamy protokoły budowy i użytkowania tego systemu. Składa się z niestandardowej wytłaczarki sterowanej objętościowo, opartej na naszym poprzednim badaniu16, obudowy biodrukarki i systemu sterowania. Produkcja i montaż wykonywane są dla każdego modułu. Po złożeniu i zaprogramowaniu za pomocą określonego pliku gcode, zgodnie z opisem protokołu obsługi matrycy, system jest w stanie drukować czyste lub rozcieńczone konstrukcje przy użyciu SBMe z dobrą wiernością kształtu zarówno w jednej, jak i wielu warstwach.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

1. Druk 3D i montaż wolumetrycznej biodrukarki

  1. Przygotowanie i wydruk 3D komponentów biodrukarki.
    1. Pobierz pliki projektowe *.STL z Pliku uzupełniającego 1.
    2. Wczytaj plik *.STL w odpowiednim oprogramowaniu do slicingu, aby określić orientację elementów na stole drukującym oraz wszystkie opcje wymagane dla drukarki 3D. Wydrukuj elementy, używając polilaktydu (PLA) z opcjami średniej jakości (rozmiar dyszy 0,4 mm, średnica filamentu 1,75 mm, temperatura ekstrudera 220 °C, temperatura stołu drukującego 50 °C, wysokość warstwy 0,2 mm, prędkość druku 300 mm/s).
      UWAGA: Opcje średniej jakości mogą się różnić w zależności od drukarki użytej do wykonania elementów.
    3. Odczep wydrukowane elementy ze stołu drukarki 3D. Usuń wydrukowane struktury wsporcze, jeśli występują, i wypoleruj powierzchnie w razie potrzeby.
  2. Montaż ekstrudera (Rycina 1).
    1. Włóż dwa liniowe łożyska kulkowe (LM4UU) w otwory pionowe bloku pchacza. Włóż również nakrętkę prowadnicy T8 w tylny otwór centralny i zabezpiecz ją czterema śrubami (M3x10).
    2. Przymocuj sztywną sprzęgkę wału do silnika krokowego, a następnie przykręć ją do obudowy silnika ekstrudera za pomocą czterech śrub (M3x6).
      UWAGA: Zorientuj silnik krokowy zgodnie z wycięciem w obudowie silnika ekstrudera, aby umożliwić właściwe rozmieszczenie gniazd dla kabli.
    3. Przymocuj silnik krokowy, zmontowany w kroku 1.2.2, do prowadnicy T8 (150 mm) za pomocą wcześniej wstawionej sztywnej sprzęgki wału. Upewnij się, że każdy blok jest odpowiednio zabezpieczony śrubami dociskowymi.
    4. Przymocuj jedno samopozycjonujące łożysko flanszowe (średnica wewnętrzna 8 mm) do dołu podstawy ekstrudera za pomocą dwóch śrub (M4x8).
    5. Włóż dwa łożyska kulkowe (4 x 9 x 4 mm) w odpowiednie otwory na górze podstawy ekstrudera oraz dwa pozostałe w otwory w sekcji dolnej.
    6. Wsuń zmontowaną część (krok 1.2.1) do podstawy ekstrudera przez wnękę w górnej części konstrukcji. Połącz cztery łożyska kulkowe (krok 1.2.5) za pomocą dwóch prętów 4 mm, po jednym na każdą stronę. Przełóż pręty przez dwa liniowe łożyska kulkowe w części zmontowanej w kroku 1.2.1.
      UWAGA: Można również najpierw włożyć pręty w dwa górne łożyska kulkowe, a następnie wsunąć je do podstawy ekstrudera, aż dotrą do dolnego łożyska kulkowego i zostaną zabezpieczone w wyznaczonych szczelinach.
    7. Włóż część zmontowaną w kroku 1.2.3 w otwór centralny podstawy ekstrudera. Obracaj prowadnicą, aby przejść przez nakrętkę prowadnicy i dotrzeć do samopozycjonującego łożyska flanszowego. Użyj śrub dociskowych w komponencie do zablokowania prowadnicy oraz dwóch śrub (M3x8), aby przymocować obudowę silnika ekstrudera do góry podstawy ekstrudera.
    8. Użyj dwóch innych śrub (M3x40) i nakrętek M3, aby przymocować uchwyt flanszy tulei strzykawki do dolnej części podstawy ekstrudera, blokując flanszę tulei strzykawki (kierunek wkładania od góry do dołu). Użyj dwóch innych śrub (M3x30) i nakrętek M3, aby przymocować uchwyt tłoka strzykawki do górnych otworów bloku pchacza (kierunek wkładania od dołu do góry), blokując flanszę tłoka.
    9. Włóż dwie śruby (M4x80) w dwie sprężyny i przełóż je przez otwory znajdujące się w dolnej części podstawy ekstrudera oraz w bloku strzykawki. Nakręć nakrętki, zostawiając miejsce na strzykawkę, aby uniknąć przesuwania się bloku strzykawki.
      UWAGA: Śruby muszą być wkładane od tyłu do przodu.
  3. Montaż osi X (Rycina 2).
    1. Włóż cztery liniowe łożyska kulkowe (LM8UU x 24 mm) do części X_Left_Block i X_Right_Block w otworach górnych i dolnych, po dwa do każdego. Przymocuj również dwa bloki paska na górze bloków X-prawego i X-lewego za pomocą śrub (M2x10), zostawiając miejsce na pasek.
    2. Włóż dwa łożyska kulkowe (5 x 16 x 5 mm) w otwory centralne X_Right_Block, po jednym po każdej stronie. Umieść bloczek (otwór 5 mm) w wewnętrznej wnęce X_Right_Block i połącz dwa łożyska kulkowe prętem 5 mm (długość 35 mm), przechodzącym przez bloczek.
      UWAGA: Do montażu użyj dłuższego pręta, aby ułatwić manipulację. Po ustawieniu elementów na miejscu przytnij pręt do żądanej długości.
    3. Przymocuj wyłącznik krańcowy do obudowy silnika X_motor_housing za pomocą dwóch śrub (M3x8). Włóż silnik NEMA 17 do obudowy silnika i użyj czterech śrub (M3x8), aby przymocować pokrywę X_block_1 do obudowy silnika i silnika.
    4. Przymocuj bloczek (otwór 5 mm) do silnika i zablokuj go śrubami dociskowymi, a następnie skręć część zmontowaną w kroku 1.3.3 z X_block_1 za pomocą czterech śrub (M5x8). Przymocuj również wyłącznik krańcowy do dołu X_Left_Block za pomocą dwóch śrub (M3x8).
      UWAGA: Średnica zewnętrzna bloczków w krokach 1.3.2 i 1.3.4 musi być taka sama.
    5. Włóż dwa liniowe łożyska kulkowe (LM8UU x 45 mm) w otwory na górze i na dole X_slider.
    6. Połącz części zmontowane w krokach 1.3.2 i 1.3.4 za pomocą dwóch prętów 8 mm (długość 200 mm) i przełóż je przez część zmontowaną w kroku 1.3.5.
      UWAGA: Przed montażem przytnij pręty do żądanej długości.
    7. Zablokuj jeden koniec paska w X_slider_belt_connection za pomocą bloku paska i dwóch śrub (M2x8). Poprowadź pasek wokół bloczka w części zmontowanej 1.3.4, następnie wokół bloczka w części zmontowanej 1.3.2 i przymocuj drugi koniec paska do X_slider_belt_connection za pomocą drugiego bloku paska i dwóch pozostałych śrub (M2x8). Upewnij się, że pasek jest odpowiednio napięty, aby uzyskać prawidłowy ruch.
      UWAGA: W tym kroku X_slider musi zostać przesunięty w stronę jednego z końców konstrukcji osi X, aby uniknąć kolizji.
    8. Przykręć X_slider_belt_connection do X_slider za pomocą jednej śruby (M6x20).
    9. Podłącz ekstruder do X_slider i przymocuj go czterema śrubami (M5x10).
  4. Montaż osi Y (Rycina 3).
    1. Przymocuj wspornik mocujący do górnej tylnej części biodrukarki za pomocą czterech śrub (M3x10) i czterech nakrętek.
      UWAGA: Pozycję wspornika mocującego można dostosować, aby uzyskać odpowiednie napięcie paska i umożliwić wstawienie silnika krokowego.
    2. Włóż silnik krokowy do wspornika mocującego i przykręć go czterema śrubami (M3x8). Następnie nałóż bloczek (otwór 5 mm) na wał korbowy i przymocuj go śrubami dociskowymi.
      UWAGA: Bloczek można przymocować do wału przed włożeniem silnika do wspornika mocującego, aby uniknąć kolizji między komponentami.
    3. Umieść dwa bloczki (średnica wewnętrzna 8 mm) na przednim pręcie 8 mm i zablokuj je na dwóch prętach (2,5 cm od końca). Powtórz tę operację dla pręta tylnego, dodając kolejny bloczek, 5 cm od prawego końca.
    4. Przymocuj 12 samopozycjonujących łożysk flanszowych (średnica 8 mm) do wewnętrznych górnych części biodrukarki.
    5. Połącz dwie górne przednie części biodrukarki i dwie górne tylne części biodrukarki (kierunek lewo/prawo), używając prętów zmontowanych w kroku 1.4.3, i zablokuj je w samopozycjonujących łożyskach flanszowych (średnica 8 mm). Zabezpiecz dwie zmontowane części we wszystkich połączeniach za pomocą śrub (M3x8).
      UWAGA: Podczas pozycjonowania tylnego pręta załóż zamknięty pasek, który łączy bloczek na silniku krokowym z wewnętrznym bloczkiem na pręcie.
      UWAGA: Zabezpiecz silnik krokowy, dokręcając nakrętki, aby zapewnić brak ruchu silnika i odpowiednie napięcie paska.
    6. Połącz dwie części zmontowane w kroku 1.4.5 za pomocą czterech prętów 8 mm. Przełóż pręty przez liniowe łożyska kulkowe znajdujące się w części zmontowanej 1.3 i zablokuj je w samopozycjonujących łożyskach flanszowych (średnica 8 mm). Zabezpiecz dwie zmontowane części we wszystkich połączeniach za pomocą śrub (M3x8).
    7. Przymocuj koniec otwartego paska do górnej części X_block_1 za pomocą bloku paska i powtórz tę operację dla X_block_2. Poprowadź pasek wokół tylnych bloczków po lewej stronie, następnie wokół przedniego bloczka i przymocuj drugi koniec paska ponownie do X_block_1 za pomocą kolejnego bloku paska. Powtórz tę operację dla drugiego paska.
      UWAGA: Paski muszą być odpowiednio napięte, aby uzyskać prawidłowy ruch i mieć taką samą długość, aby uniknąć wyginania lub kolizji podczas ruchów w osi Y.
  5. Montaż osi Z (Rycina 4).
    1. Skręć ze sobą dolne części obudowy biodrukarki (M4x8).
    2. Przymocuj jedno samopozycjonujące łożysko flanszowe (średnica 8 mm) do podłoża dna części zmontowanej w kroku 1.5.2.
    3. Przymocuj dwa flanszowe liniowe łożyska kulkowe (LMH8UU) do zewnętrznych otworów w Z_slider oraz jedną nakrętkę prowadnicy w otworze centralnym za pomocą śrub (M3x8).
    4. Przymocuj wyłącznik krańcowy do lewej strony Z_plane za pomocą dwóch śrub (M3x8).
    5. Przymocuj silnik krokowy do sztywnej sprzęgki wału. Przymocuj silnik krokowy do Z_block za pomocą czterech śrub (M3x20), a pręt gwintowany do sztywnej sprzęgki wału. Upewnij się, że każdy blok jest odpowiednio zabezpieczony śrubami dociskowymi.
    6. Połącz część zmontowaną w kroku 1.5.5 z podstawą biodrukarki za pomocą dwóch prętów 8 mm. Przełóż je przez część zmontowaną w kroku 1.5.3.
    7. Przymocuj Z_block do tylnego panelu za pomocą dwóch śrub (M5x8).
    8. Połącz Z_plane z Z_slider za pomocą czterech śrub (M3x25). Włóż je w otwory Z_plane od góry do dołu, umieść sprężynę pomiędzy Z_plane a Z_slider i zabezpiecz je nakrętkami. Dostosuj napięcie sprężyny, aby wypoziomować płaszczyznę.
    9. Przymocuj cztery regulowane stopki pod konstrukcją biodrukarki w odpowiedniej wnęce. Wypoziomuj biodrukarkę, regulując stopki.
    10. Połącz zmontowaną część z częścią zmontowaną w kroku 1.4.6 za pomocą ośmiu śrub (M4x12).
    11. Przymocuj dwa zawiasy z przodu konstrukcji w wyznaczonych miejscach oraz jeden magnes w odpowiednim miejscu po prawej stronie za pomocą śrub (M2x8). Przykręć całą konstrukcję do przeźroczystych arkuszy pleksi o grubości 2 mm, aby zamknąć otwory.
      UWAGA: Przykręć przedni panel z pleksi do zawiasów i wkręć kolejną śrubę w miejscu magnesu, aby uzyskać przednie drzwiczki.
  6. Montaż wyświetlacza (Rycina 5A).
    1. Przełóż przewody podłączone do wyświetlacza przez dolny otwór i przymocuj wyświetlacz do obudowy wyświetlacza za pomocą czterech śrub (M3x3).
      UWAGA: Ten etap musi zostać wykonany bez pokrywy pokrętła LCD. Pokrywa może zostać założona na zainstalowane pokrętło po przymocowaniu do obudowy wyświetlacza.
    2. Zamknij obudowę pokrywą za pomocą czterech śrub (M2x6).
    3. Włóż kartę SD do lewego gniazda.
    4. Przełóż przewody przez otwór na górze konstrukcji. Przykręć zmontowaną część na górze biodrukarki za pomocą dwóch śrub (M3x8).
      UWAGA: Wszystkie przewody (silników, wyłączników krańcowych i wyświetlacza) będą biec blisko ściany i wyjść przez dolny lewy otwór. Są one mocowane klipsami do kabli, aby uniknąć kolizji z częściami mechanicznymi.
  7. Montaż elektroniki (Rycina 5B)
    1. Przymocuj gniazdo do zewnętrznej części obudowy elektronicznej za pomocą dwóch śrub (M3x10).
    2. Przymocuj płytę główną do wewnętrznej części obudowy elektronicznej za pomocą czterech śrub (M3x10).
    3. Przymocuj dolną część zasilacza do wewnętrznej części obudowy elektronicznej za pomocą czterech śrub (M3x8).
    4. Przeciągnij przewody przez okrągły otwór w pokrywie i podłącz je do płyty głównej. Zamknij obudowę elektroniczną jej pokrywą za pomocą czterech śrub (M3x10).
      UWAGA: Jest możliwe podłączenie obudowy elektronicznej do konstrukcji biodrukarki lub pozostawienie jej na stole w przypadku ograniczonej przestrzeni roboczej.
      Rycina 6 przedstawia wszystkie połączenia kablowe elektroniki. Mogą one być nieco inne w zależności od użytej płyty głównej drukarki 3D.

2. Konfiguracja oprogramowania i proces generowania g-kodu

  1. Przygotowanie ustawień oprogramowania do slicingu
    1. Uruchom oprogramowanie do slicingu.
      UWAGA: Instrukcje mogą się różnić w zależności od używanego oprogramowania lub jego wersji.
    2. Zaloguj się do platformy.
    3. Przejdź do opcji Settings (Ustawienia). Wybierz drukarkę, a następnie opcję Dodaj drukarkę niepodłączoną do sieci. Wybierz niestandardową drukarkę FFF i w polu Printer name (Nazwa drukarki) wpisz nazwę drukarki. Kliknij Add (Dodaj).
      UWAGA: W przypadku pierwszej instalacji oprogramowania panel Add printer (Dodaj drukarkę) otworzy się automatycznie po zalogowaniu.
    4. W oknie Machine Settings (Ustawienia maszyny) zmień domyślne ustawienia x, y, z na 176, 120, 45 mm.
    5. Odznacz opcję Heated bed (Podgrzewany stół), jeśli nie jest ona odznaczona.
    6. Wprowadź do paneli Starting g-code (Kod g startowy) i Ending g-code (Kod g końcowy) linie tekstu podane w plikach o nazwach „JoVE_Starting_G-code.txt” i „JoVE_Ending_G-code.txt” w Supplemental File 2.
      1. Zmodyfikuj wartość 150 w linii „M92 E150” w pliku z kodem g startowym zgodnie z wartością przepływu, która ma zostać zastosowana. Oblicz odpowiednią wartość za pomocą następującego wzoru:
        Równanie pokazujące obliczanie wartości energii, E_value = 1.4Q + 40, stosowane w analizie energii.
        Gdzie Q to pożądany przepływ [µL/min].
        UWAGA: Wzór ten został opracowany eksperymentalnie dla opisanego systemu. Może on być inny w przypadku zmian w komponentach mechanicznych lub elektrycznych. Alternatywnym rozwiązaniem może być ustalenie wartości zgodnie z używanym systemem i stworzenie niestandardowego kodu MATLAB do generowania pożądanego pliku gcode.
    7. Zmień wartość Compatible material diameter (Średnica kompatybilnego materiału) w panelu Extruder 1 na 1,75, a następnie zamknij okno.
    8. Przejdź do sekcji Marketplace, wybierz wtyczkę Z Offset Setting i zainstaluj ją. Na koniec procesu uruchom ponownie oprogramowanie, aby sfinalizować instalację. Po ponownym otwarciu wybierz Settings | Printer | Manage Printers (Ustawienia | Drukarka | Zarządzaj drukarkami) na pasku narzędzi. W oknie Preferences (Preferencje) kliknij Settings i aktywuj wszystkie opcje, wybierając opcję Check all (Zaznacz wszystko), a następnie zamknij okno.
    9. Skonfiguruj ustawienia, klikając Print Settings (Ustawienia drukowania – trzeci przycisk) w menu stage, które zawiera panel configuration (konfiguracja). Wprowadź procent wypełnienia w aktualnym profilu drukowania w panelu configuration. Wybierz przycisk Custom (Niestandardowy), aby zmodyfikować aktualne ustawienia drukowania oraz profil Fine (Precyzyjny) w menu rozwijanym. Ustaw Print Speed (Prędkość drukowania) na 10 mm/s.
  2. Przygotowanie gcode
    1. Pobierz plik projektu *.STL o nazwie „JoVE_Square” z Supplemental File 2 do niniejszego artykułu.
    2. Wczytaj plik .STL do oprogramowania do slicingu.
    3. Ustaw element na płaskiej powierzchni i przesuń go do współrzędnych 65, 42,5, 0 (X, Y, Z) mm. Utwórz dwie kopie, klikając nazwę pliku .STL na liście obiektów i wybierając opcję multiply selected (pomnóż zaznaczone). Przesuń je do następujących współrzędnych: 16, 42,5, 0 mm oraz -33, 42,5, 0 mm (X, Y, Z).
      UWAGA: Automatyczne zdefiniowanie kolejności drukowania nie jest możliwe, chyba że zostanie ona zmodyfikowana ręcznie bezpośrednio w końcowym pliku gcode. Współrzędne są zdefiniowane dla płytki 6-studzienkowej.
    4. Przejdź do Print Settings w menu stage. W sekcji Walls (Ścianki) ustaw wartość 0 dla Wall line count (Liczba linii ścianek). W sekcji Top/Bottom (Góra/Dół) ustaw wartość 0 dla Top/Bottom thickness (Grubość góry/dołu). W panelu Infill (Wypełnienie) wprowadź następujące wartości: Infill Pattern: Grid, Infill line distance: 5 mm, Infill line directions: [0].
      UWAGA: W sekcji Print speed można zmniejszyć Travel Speed (Prędkość przejazdu), aby poprawić dokładność osi X.
    5. Wyłącz retraction (retrakcję) w sekcji Travel oraz chłodzenie wydruku w sekcji Cooling.
    6. W sekcji Build Plate Adhesion (Przyczepność do stołu) wybierz None (Brak) jako Build Plate Adhesion Type, a w sekcji Special Modes wybierz opcję One at a Time (Po jednym) jako Print Sequence (Kolejność drukowania).
    7. Kliknij przycisk Slice (Plasterkuj), aby wygenerować kod g.
    8. Otwórz plik g-code w aplikacji Notatnik i usuń linie „M104 S200”, „M105” oraz „M109 S200” w linii 12 po frazie „;Generated with Cura_SteamEngine 4.9.0”.
    9. Dodaj „G1 Z25” przed następującą linią „;MESH: JoVE_Square_rev.STL(6)” i podziel kolejną linię na dwie: (1) G0 F3600 X142.46 Y7.499 oraz (2) G1 Z0.3.
      UWAGA: Współrzędne X i Y są jedynie przykładami.
    10. Zmodyfikuj wartość Z na Z25 w każdej linii występującej po komentarzu „;TIME_ELAPSED” przy każdej instrukcji ostatniej warstwy każdego elementu.
      UWAGA: W przypadku drukowania tylko jednego elementu krok 2.3.10 nie jest wymagany.

3. Test pęcznienia/degradacji

  1. Kroki przygotowawcze
    1. Pobrać sterylną szklaną strzykawkę 1 mL (TLL terminal) oraz sterylną stożkową dyszę 25 G. Złożyć je i umieścić złożoną strzykawkę w lodówce.
    2. Umieścić końcówki do pipet oraz fiolkę z macierzą SBMe w lodówce na noc w dniu poprzedzającym eksperyment.
    3. Wydrukować trzy kratki z PLA (Φ = 20 mm) o okrągłych porach o rozmiarze 1 mm x 1 mm oraz bocznym filarze pionowym ułatwiającym chwytanie.
  2. Drukowanie konstruktów
    1. Wyjąć złożoną strzykawkę oraz fiolkę z macierzą SBMe z lodówki. Nabrać 500 µL macierzy SBMe i umieścić ją w inkubatorze na 15 min, aby umożliwić żelowanie.
    2. Wyjąć strzykawkę z inkubatora i umieścić ją w głowicy drukującej biodrukarki. Upewnić się, że tłok strzykawki styka się prawidłowo z blokiem pchającym.
    3. Zabezpieczyć tłok mocujący strzykawkę oraz kołnierz korpusu strzykawki za pomocą uchwytów tłoka strzykawki, a korpus strzykawki za pomocą zacisku strzykawki.
    4. Zkalibrować system, korzystając z ustawienia Auto-home w menu biodrukarki, aby automatycznie wykryć punkt zerowy osi.
    5. Przesunąć ekstruder za pomocą komendy Move Axes, aż końcówka igły dotknie kratki z PLA, aby ręcznie zdefiniować Z0.
    6. Rozpocząć drukowanie, wybierając w menu biodrukarki plik g-code do wydruku.
    7. Umieścić płytkę wielodołkową w inkubatorze na 2 min, aby umożliwić osiadanie SBMe po ekstruzji.
    8. Wyjąć płytkę wielodołkową i wlać 2 mL pożywki hodowlanej do trzech dołków zawierających biodrukowane kratki. Umieścić płytkę wielodołkową w inkubatorze.
    9. W każdym punkcie czasowym (t0, 1 h, 2 h, 3 h, 4 h, 1, 3, 7, 10 i 14 dni) wyjąć każdą kratkę z płytki, osuszyć ją czystym papierem w celu usunięcia nadmiaru pożywki i zważyć na wadze. Umieścić kratkę z powrotem w płytce, a następnie w inkubatorze, aby kontynuować eksperyment. Obliczyć stopień pęcznienia i tempo degradacji, korzystając z następujących wzorów:
      Równanie stopnia pęcznienia, \( W_t - W_{t0} / W_{t0} \), wzór do analizy chłonności polimeru.
      Gdzie Wt to masa konstruktów w każdym punkcie czasowym, a Wt0 masa osuszonych konstruktów.
      Równanie tempa degradacji, wzór do obliczania procentowej degradacji materiału, koncepcja matematyczna.
      Gdzie Wi to masa na koniec testu pęcznienia.

4. Biodruk konstrukcji SBMe

  1. Kroki przygotowawcze
    1. Wziąć sterylną szklaną strzykawkę 1 mL (z końcówką TLL) oraz sterylną stożkową igłę 25 G i złożyć je w komorze z laminarnym przepływem powietrza. Umieścić je w sterylnym pojemniku w lodówce.
    2. Włożyć końcówki do pipet oraz fiolkę z matrycą SBMe do lodówki na noc (4 °C w lodzie) w dniu poprzedzającym eksperyment.
    3. Dodać 20 µL błękitu trypanu do probówki wirówkowej 1,5 mL.
    4. Ustawić wirówkę na 345 × g, 4 °C i pozwolić jej się schłodzić (~3-4 h).
    5. Nalać 5 mL wody do probówki wirówkowej 15 mL w celu zrównoważenia wirówki.
    6. Podgrzać roztwór buforu fosforanowego (PBS) oraz pożywkę w kąpieli wodnej.
      UWAGA: Pożywka do hodowli komórkowej to kompletna pożywka Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM) uzupełniona o 10% płodowej surowicy bydlęcej (FBS), penicylinę-streptomycynę oraz L-glutaminę.
    7. Umieścić biodrukarkę w komorze z laminarnym przepływem powietrza. Sterylizować światłem UV przez 20 min.
      UWAGA: Aby zapewnić prawidłowe działanie biodrukarki, należy uruchomić funkcję Auto-home i zweryfikować prawidłowe ruchy każdej osi oraz działanie krańcówek.
  2. Przygotowanie bioatramentu
    1. Wyjąć z inkubatora kolbę zawierającą komercyjne komórki raka prostaty myszy i umieścić ją w komorze z laminarnym przepływem powietrza.
    2. Usunąć pożywkę do hodowli komórkowej z kolby.
      UWAGA: Objętości podane w tym protokole dotyczą kolb do hodowli komórkowej T25.
    3. Przemyć komórki raz 2 mL PBS, a następnie go odessać.
    4. Dodać 500 µL trypsyny i umieścić kolbę w inkubatorze na 5 min, aby umożliwić odczepienie komórek od powierzchni.
    5. Sprawdzić stopień trypsynizacji komórek i w razie potrzeby delikatnie postukać w dno kolby.
    6. Dodać do kolby 4,5 mL pożywki. Ostrożnie przemyć powierzchnię, aby upewnić się, że wszystkie odczepione komórki unoszą się w pożywce.
    7. Odessać pożywkę i przelać ją do probówki wirówkowej 15 mL.
    8. Pobrać alikwot 20 µL i zmieszać go z alikwotem błękitu trypanu. Następnie nanieść 10 µL tej mieszaniny do komory licznikowej, aby policzyć żywe komórki, korzystając z następującego wzoru:
      Wzór na obliczenie całkowitej liczby komórek, równanie, liczenie komórek, mikroskopia, analiza danych biologicznych.
      Gdzie f to czynnik rozcieńczenia dla zawiesiny błękitu trypanu (stosunek 1:1); V to objętość zawiesiny komórkowej [mL].
    9. Wirować pozostałą zawiesinę komórkową przez 5 min (345 × g, 4 °C).
    10. Usunąć supernatant i resuspendować w zimnej matrycy SBMe do pożądanej gęstości komórek (106 komórek/mL).
    11. Pobrać zimną strzykawką 800 µL zawiesiny matrycy zawierającej komórki.
    12. Usunąć pęcherzyki powietrza, które mogły zostać uwięzione w strzykawce, i umieścić ją w sterylnym pojemniku. Następnie włożyć do inkubatora na 15 min, aby umożliwić żelowanie.
  3. Proces biodrukowania
    1. Wyjąć strzykawkę z inkubatora i umieścić ją w głowicy drukującej biodrukarki. Upewnić się, że tłok strzykawki styka się prawidłowo z blokiem pchającym.
      UWAGA: Model i objętość muszą być zgodne ze strzykawką używaną w eksperymencie.
    2. Zabezpieczyć tłok i kołnierz korpusu strzykawki za pomocą uchwytów tłoka i korpusu strzykawki oraz zacisnąć korpus strzykawki zaciskiem.
    3. Użyć nakrętek M4 w dolnej części ekstrudera, aby wyregulować nacisk sprężyny i zablokować strzykawkę na miejscu.
      UWAGA: Kroki 4.3.1 do 4.3.4 przedstawiono na Rysunku 7.
    4. Kalibrować system za pomocą ustawienia Auto-home w menu biodrukarki, aby automatycznie wykryć punkt zerowy osi.
      UWAGA: Ten krok zawsze zapewnia prawidłowe ustawienia początkowe, niezależnie od rodzaju wspornika używanego do drukowania.
    5. Umieścić płytkę 6-dołkową na płaszczyźnie druku.
    6. Przesuwać ekstruder za pomocą polecenia Move Axes, aż końcówka igły dotknie dna dołka, aby ręcznie zdefiniować Z0.
    7. Wybrać plik g-code w opcjach menu biodrukarki i rozpocząć drukowanie. W każdym dołku zostanie wydrukowana kwadratowa siatka sześcio-warstwowa (bok 2,6 cm).
    8. Po procesie biodrukowania użyć mikroskopu odwróconego, aby upewnić się, że proces drukowania przebiegł pomyślnie, a następnie umieścić płytkę wielodołkową w inkubatorze na 2 min, aby SBMe ustabilizowało się po ekstruzji.
    9. Wlać 2 mL pożywki do hodowli komórkowej do każdego dołka.
      UWAGA: Objętość musi całkowicie pokrywać konstrukty.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

W niniejszym artykule przedstawiamy protokół biodrukowania konstruktów wykonanych z SBMe przy użyciu niskokosztowej, wykonanej na zamówienie drukarki wolumetrycznej. Dostarczamy szczegółowy opis oraz pliki *.STL do druku 3D w celu zbudowania systemu, a także demonstrujemy jego potencjalne zastosowanie w badaniach nad rakiem poprzez drukowanie struktur jednowarstwowych i wielowarstwowych. Każdy wydrukowany w 3D element został odpowiednio oczyszczony ze struktur wsporczych lub niepożądanych pozostałości druku przed montaże...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

W badaniach translacyjnych SBM są szczególnie cenne w różnych dziedzinach badań, od inżynierii tkankowej po testowanie leków 2,3. W szczególności stały się one fundamentalne w badaniach nad rakiem, ponieważ odtwarzają mechaniczne i biochemiczne cechy mikrośrodowiska guza, umożliwiając opracowanie modeli, które lepiej odzwierciedlają wzrost guza, przerzuty i reakcje na leczenie. SBMe jest najczęściej stosowaną matrycą biologiczną, szczególnie w przypadku organoidó...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Autorzy nie mają do zadeklarowania konfliktu interesów.

Podziękowania

Ta praca została częściowo sfinansowana przez Nagrodę Akceleratora nr A26815 zatytułowaną: "Ewolucja raka pojedynczej komórki w klinice" ufundowaną przez partnerstwo między Cancer Research UK i Fondazione AIRC (nr 22790) oraz przez Unię Europejską - Next Generation EU, Mission 4, Component 1, CUP D53D23003310006.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
12-płytka wielodołkowaDrukarka 3D FDM Sigma-AldrichCLS351143
FlashforgeAdventurer 5M Pro
Płyta głównaGEETECHGT2560 REV A+
6-płytka wielodołkowaGniazdo AC Sigma-AldrichM8687
HiLetgohttps://www.amazon.it/HiLetgo-Terminal-Socket
-Holder-Switch/dp/B0814PT3YG/ref=sr_1_1?__
mk_it_IT=%C3%85M%C3%85%C5%BD%C3%
95%C3%91& crid=2TRIBP34VJ61A
& dib=eyJ2IjoiMSJ9.zW6_VmeiudR
I4yMpjJqJm7OdeoctTKW2mrEzml
BAyJVa1hkM4PiJT3pLY0mXdxm1
AZQxa2_f5J4q4d5v3vUeqLkjJ6BM
kWHAoeEfbEQJNuZaQ3NjmUlqWy
_1AfQpnRp4VqJ2m3bkWsChztCa
Ok-ZdQJlobGxJaMKg7WbV352
Hyo.0tEw2GYoPQJ4SdNYXO1XM
Jrl2yXMvRey55Hj7GhISkk& dib_
tag=se& słowa kluczowe=AC+gniazdo+HiLetgo& nsdOpt
OutParam=true& qid=1734702097& sprefix=ac+
gniazdo+hiletgo%2Caps%2C173& sr=8-1		15 A 250 V
Nóżki regulowaneEXIN DEHCENhttps://www.amazon.it/gp/product/
B0CPLTSNQB/ref=ppx_yo_dt_b_
search_asin_title?ie=UTF8& psc=1		Wysokość 27-40 mm
Łożysko kulkowe 4 mmQUARKZMAN684ZZWymiary 4 x 9 x 4 mm
Łożysko kulkowe 5 mmXiKe625-2RSWymiary 5 x 16 x 5 mm
Pasek zamkniętyTurmberg3Dhttps://www.amazon.it/gp/product/
B09B2FJQBV/ref=ppx_yo_dt_b_
search_asin_title?ie=UTF8& psc=1		Szerokość 6 mm
Taśma otwartaFajoedahttps://www.amazon.it/gp/product/
B09QCTVPTH/ref=ppx_yo_dt_b_
search_asin_title?ie=UTF8& th=1		Szerokość 6 mm
Dysza do biodrukuFisher Scientific17780789Corning  Standardowe stożkowe dysze biodrukarskie
Bü rker Komora zliczania komórekGLASWARENFABRIK KARL HECHT
WirówkaEppendorf5702 R
Probówka wirówkowaSigma-AldrichCLS43147015 mL
Probówka wirówkowaSigma-AldrichEP00301200861,5 mL
WyświetlaczSigma-AldrichBR718905
DMEM Gibco Thermofisher11965092
FBSSigma-AldrichF7524
Liniowe łożysko kulkowe z kołnierzemMapa zaopatrzeniahttps://www.amazon.it/gp/product/
B07S6LZHM7/ref=ppx_yo_dt_b_
search_asin_title?ie=UTF8& psc=1		LMF8UU
Szklana strzykawkaFisher Scientific11520062Hamilton GasTight 1 mL (terminal TLL)
ZawiasyYASQZhttps://www.amazon.it/gp/product/
B09DNXGDGG/ref=ppx_yo_dt_b_
search_asin_title?ie=UTF8& psc=1
InkubatorFisher Scientific15481374Eppendorf  Galaxy 48 R CO2  Inkubator, 48 L, Mikroskop
odwróconyNikonEclipse Ti2-U
Przewody połączenioweIverntechhttps://www.amazon.it/Iverntech-XH2
-54-Terminale-Stampante-Stepper/dp/
B07Q12B6K5/ref=pd_ci_mcx_mh_
mcx_views_0_image?pd_rd_w=cb2r
J& identyfikator zawartości=amzn1.sym.57a351cf-
ba07-47e8-b302-aa2aa1a3f209%3
Aamzn1.symc.ca948091-a64d-450e-
86d7-c161ca33337b& pf_rd_p=57a3
51cf-ba07-47e8-b302-aa2aa1a3f209
& pf_rd_r=YHY9RFYZJK7PYAY2RXX
D& pd_rd_wg=7WkXB& pd_rd_r=8239
66cb-4977-48ce-b095-0DCEDF8C372F&
pd_rd_i=B07Q12B6K5& th=1
jednostka LCDParadisetronic.comhttps://www.amazon.it/Display-controller
-conduttori-adattatore-stampante/dp/B01
DUR4064/ref=sr_1_9?__mk_it_IT=%C3
%85M%C3%85%C5%BD%C3%95%C3
%91& crid=1OAHVIIRA16X3& dib=eyJ2Ij
oiMSJ9.07V2Jf7RzJjTUlIuFobUJFjUzG4
8633KkdcMXSEfnWLRX41d5vAF7xPBJ
maniVxDoXecfihZzzOXlP3v-e29cUjoGLf
GDyv5DoDVwp7ndohNTYvYzoi3gWkF-
Hsd2Sd2YbT7tjb1Dra1afqSn26CbFdEvJ84y
qyX7Gi3-7DHh8yMwdd6_7quiuW_mjsm
w1nu0YQG68GZ0XM7unOsvyddQ__R_
3dndxb3mOjgGjklEgu_KEbZJPOZDIdSo
oU3nrrKHj56hCfk9ACwYpB80QGCbTPK
0p-fE0g9h02WPmtHV38UU3m5AdZsTQ
HqvnVlJg703qGT-8ze8fQItw2rtbgl_J86H
RMReJOhVLQBkqNwxh57CQ.yNbeFmZ
ZBEUhadz2dQa8NxpZD9g4P6ighRU_97
yxgnw& dib_tag=se& słowa kluczowe=display%
2B3D%2Bprinter%2Bprusa%2Bi3& nsdO
ptOutParam=true& qid=1734714093& s=
przemysłowe& sprefix=wyświetlanie%2B3d%2B
drukarka%2Bprusa%2Bi3%2Cindustrial%
2C143& sr=1-9& th=1		jednostka LCD Old Prusa i3. Link do dostępnej na rynku alternatywy
Śruba pociągowa M8RS PRO280-408
Nakrętka pociągowej M8Comiokehttps://www.amazon.it/dp/B0C7QB13C4?
ref=ppx_yo2ov_dt_b_fed_asin_title& th=1		Nakrętka do M8
Nakrętka pociągowej T8Aipaidehttps://www.amazon.it/gp/product/B086QJCX1M/ref
=ppx_yo_dt_b_search_asin_title?ie=UTF8& psc=1		Nakrętka do T8 Śruba
pociągowa T8VBESTLIFEhttps://www.amazon.it/gp/product/B07CXRB52Y/ref
=ppx_yo_dt_b_search_asin_title?ie=UTF8& th=1		Długość 15 mm
L-glutammineSigma-AldrichG7513
Wyłącznik krańcowyCESFONJERhttps://www.amazon.it/gp/product/B07SPX492J/ref
=ppx_yo_dt_b_search_asin_title?ie=UTF8& psc=1
Liniowe łożysko kulkowe (LM4UU)A ABSOPROhttps://www.amazon.it/gp/product/B0CB3M5GHJ/ref
=ppx_yo_dt_b_search_asin_title?ie=UTF8& psc=1		Wymiary 4 x 8 x 12 mm
Liniowe łożysko kulkowe (LM8LUU)Fdithttps://www.amazon.it/LM8LUU-Linear
-Motion-cuscinetti-stampante/dp/B07N
58W3GZ/ref=sr_1_1_sspa?__mk_it_IT
=%C3%85M%C3%85%C5%BD%C3%
95%C3%91& crid=33VNCCCSIFJRP&
dib=eyJ2IjoiMSJ9._JJ2doXI33C2JagX
8x6E2Bz2ILo10852tBi1erWqGn363ku
zbcvknbMtsK6wm5jdR1P5XwC6Ovui
at3kGIJPpYFOG_FiIBYT8xLkkbiphhR
4ncR6R9tPPyeN--_3RxFgKMh5tMO_
jesAcu7Anp87Qb91ruM85CKqduV-y6
HQJtAvVSXmfG4yE4N7d4_dDVKsR7
UkEmDIznJE0HIhvvI2R6vX2tMN5yMc
_ZrUbUB0gPF6SgXHVJmKRizCRqL7J
64WRD-XnMSpVHY_LUVJ7gn9kJQ35
_zQw8vLD-_kRyvxwvE.4IVMdKzF1Ax
mQHQhWEi6LH12UI4CmMgi288_g3zG
CPY& dib_tag=se& słowa kluczowe=LM8LUU+
Fdit& nsdOptOutParam=prawda& qid=17347
04494& s=przemysłowy& sprefix=lm8luu+fdit+
%2Cindustrial%2C136& sr=1-1-spons& sp
_csd=d2lkZ2V0TmFtZT1zcF9hdGY& psc=1		Wymiary 8 x 15 x 45 mm
Liniowe łożysko kulkowe (LM8UU)ARCELIhttps://www.amazon.it/gp/product/
B07BV3YBP2/ref=ppx_yo_dt_b_
search_asin_title?ie=UTF8& psc=1		Wymiary 8 x 15 x 24 mm
MagnesyOCEUMAOAhttps://www.amazon.it/gp/product/
B0CB6C2RF4/ref=ppx_yo_dt_b_
search_asin_title?ie=UTF8& th=1		8 x 3 mm
MatrigelGibco ThermofisherLOT 0202003SBMe
Sterownik silnika Longrunerhttps://www.amazon.it/gp/product/
B071P41ZBW/ref=ppx_yo_dt_b_search
_asin_title?ie=UTF8& psc=1		Sterownik A4988
PBSMicroGem, VWRTL1006-500ML
Penicylina-StreptomycynaGibco Thermofisher15070063
Końcówki do pipetSigma-AldrichZ740058MARKA  końcówki filtracyjne, racked, TipBox (pojemność 50-1000 μ L)
Arkusze pleksiMVQPERhttps://www.amazon.it/MVQPER-trasparenti-
plexi-trasparente-decorazione/dp/B0CF
Q4BHQZ/ref=sr_1_14?dib=eyJ2IjoiMSJ9.bf7
Mp7I5m2qAR1Fp1V6DoYF2erUlNQUK_NuF
ZLz9A7uJKGa_RNeni6NiO4YQfAjVHBtZgdzI
356XVc3BIuKVpV8Pfg0rImqNXgxG-kfklAYrb
rXv4tV6RL1ShFwgLzfQh8R0sEoFJPcLF2f2E
EcGMlvEwOuCv6qRnS1MQ-VaA0sLPnM0ts
wdL4sLVxsonWcfSrHAUrgWh4fpVNMA4Kwh
0UaeQhfexFY0dNWhPYftXvvz9LLj1uMID2E
Gi_ScmYqY5LahbYOmKVVPPiPIgCVdLjaM8
yqNp2ZJGV9Fge2xa6OAHxmMeaQUqGkoQ
88x9GkX7EW1 uOwYO0dEUYSzHCdGONWo
eZLfSJOR3C6-knjzKrOQ0ziouJfo-ktbak7v3A
H53BtIOiXbT57cKqh-uc9wI_j_lHN-8okAe2yO
6upc61MoydZujuxnfLG7hwytqHQG2.ApKq8
MVs8Xihn_zcA39nML-2lpjnagGhXIx0clcJN_
E& dib_tag=se& Słowa kluczowe=Lastra+pleksi+
2+mm& nsdOptOutParam=prawda& qid=1734702823& sr=8-14		Grubość 2 mm, arkusz przezroczysty, 21 x 32,5 cm
Arkusze pleksiMVQPERhttps://www.amazon.it/MVQPER-trasparenti
-plexiglass-trasparente-decorazione/dp/B0C
FQ4BHQZ/ref=sr_1_14?dib=eyJ2IjoiMSJ9.b
f7Mp7I5m2qAR1Fp1V6DoYF2erUlNQUK_N
uFZLz9A7uJKGa_RNeni6NiO4YQfAjVHBtZ
gdzI356XVc3BIuKVpV8Pfg0rImqNXgxG-kfk
lAYrbrXv4tV6RL1ShFwgLzfQh8R0sEoFJPc
LF2f2EEcGMlvEwOuCv6qRnS1MQ-VaA0s
LPnM0tswdL4sLVxsonWcfSrHAUrgWh4fpV
NMA4Kwh0UaeQhfexFY0dNWhPYftXvvz9
LLj1uMID2EGi_ScmYqY5LahbYOmKVVPP
iPIgCVdLjaM8yqNp2ZJGV9Fge2xa6OAHx
mMeaQUqGkoQ88x9GkX7EWuOwYO0dE
UYSzHCdGONWoeZLfSJOR3C6-knjzKrO
Q0ziouJfo-ktbak7v3AH53BtIOiXbT57cKqh-
uc9wI_j_lHN-8okAe2yO6upc61MoydZujux
nfLG7hwytqHQG2.ApKq8MVs8Xihn_zcA3
9nML-2lpjnagGhXIx0clcJN_E& dib_tag=se
& słowa kluczowe=Lastra+pleksi+2+mm& nsd
OptOutParam=prawda& qid=1734702823& sr=8-15		2 przezroczyste arkusze, grubość 2 mm, 20 x 20 cm
Arkusze pleksiMVQPERhttps://www.amazon.it/MVQPER-trasparenti
-plexiglass-trasparente-decorazione/dp/B0C
FQ4BHQZ/ref=sr_1_14?dib=eyJ2IjoiMSJ9.
bf7Mp7I5m2qAR1Fp1V6DoYF2erUlNQUK_
NuFZLz9A7uJKGa_RNeni6NiO4YQfAjVHB
tZgdzI356XVc3BIuKVpV8Pfg0rImqNXgxG-
kfklAYrbrXv4tV6RL1ShFwgLzfQh8R0sEoFJ
PcLF2f2EEcGMlvEwOuCv6qRnS1MQ-VaA
0sLPnM0tswdL4sLVxsonWcfSrHAUrgWh
4fpVNMA4Kwh0UaeQhfexFY0dNWhPYft
Xvvz9LLj1uMID2EGi_ScmYqY5LahbYO
mKVVPPiPIgCVdLjaM8yqNp2ZJGV9Fge
2xa6OAH0dNWhPYftbr/ mKVVPPiPIgCVdLjaM8yqNp2ZJGV9Fgebr/ 2xa6OAH2xa6OAH0dNWhPYftbr/br/ mKVVPPiPIgCVdLjaM8yqNp2ZJGV9Fgebr/ 2xa6OAH0dNWhPYftbr/br/ mKVVPPiPIgCVdLjaM8yqNp2ZJGV9Fgebr/ 2xa6OAH0dNWhPYftbr/ mKVVPPiPIgCVdLjaM8yqNp2ZJGV9Fgebr/ 2xa6OAH0dNWhPYftbr/ mKVVPPiPIgCVdLjaM8yqNp2ZJGV9Fgebr/ 2xa6OAH0xmMeaQUqGkoQ88x9GkX7E
WuOwYO0dEUYSzHCdGONWoeZLfSJO
R3C6-knjzKrOQ0ziouJfo-ktbak7v3AH53B
tIOiXbT57cKqh-uc9wI_j_lHN-8okAe2yO6
upc61MoydZujuxnfLG7hwytqHQG2.ApKq
8MVs8Xihn_ zcA39nML-2lpjnagGhXIx0clcJ
N_E& dib_tag=se& Słowa kluczowe=Lastra+plexigl
Ass+2+MM& nsdOptOutParam=prawda& qid=1
734702823& sr=8-16		2 przezroczyste arkusze, grubość 2 mm, 20 x 30 cm
Filament z kwasem polimlekowym (PLA)FlashforgeBlack 100102
ZasilaczSQUADOhttps://www.amazon.it/SQUADO-Alimentatore
-stabilizzato-dissipatore-efficienza
/dp/B0DMTG6SJD/ref=sr_1_6?dib
=eyJ2IjoiMSJ9.1vVze6Zt6fhKCvFb
eAOSiRe57N6a1mlBnkLdHiEym4
ugHzueF6_FdOodb3sftCXb5raTg< br/> eerMMUbL5KcaI_SDa_2j7s2XohI
B01QMJDyq0xQ5Gp3KLIZozDHV
fGBdSrvwgyOl-BXSDy_ocZlj2TL5
e21p3K6qpvSaT5yo8WA5tngS93
Eqe8s8D6mjpnnPFrb9RpQpj29 9Y
nNRYgr_YF3NCt3mH0r0FocKcCa
LNpKtfGLCbnz_yB-360tp5SAi7A7
cgBf5I4NzQ5iQTTXAG727x0Hml
mG-eaFBSJv6M1LPooZiT2aT7dx
o_7tzyU6MQ9vAEozXkLTaTTMX
RA_svPp96sxp93NRLReI64xpFd
S3Zh1y_JPQijbMAIuvuYflhh6JlPB
W6-fpW6QXl9v5wNEs_YwjzP9Sf
RKxRmchzZhgsK-34XJeaEmjbRq
H3piM0Zx.MfPYUNvCEhDBqLDh
C-iqBEu-vjIVgsrQmOjeLuGo9YQ&
dib_tag=se& słowa kluczowe=power+sup
ply+AC+INPUT%3A+110-220V%2
C+DC+OUTPUT%3A+12V+15A& n
sdOptOutParam=true& qid=173471
4722& sr=8-6		Zasilacz Old Prusa i3 (WEJŚCIE AC: 110-220 V, WYJŚCIE DC: 12 V 15 A). Link do dostępnego na rynku
alternatywnego koła pasowego 5 mmVooGenzekhttps://www.amazon.it/gp/product/
B0B8H16KWX/ref=ppx_yo_dt_b_
search_asin_title?ie=UTF8& psc=1		Otwór 5 mm, Szerokość rozstawu pasa 6 mm
Koło pasowe 8 mmYxtaiihttps://www.amazon.it/gp/product/
B07X852RFN/ref=ppx_yo_dt_b_
search_asin_title?ie=UTF8& th=1		Otwór 8 mm, Szerokość odstępu między taśmami 6 mm
taśmoweQUARKZMANhttps://www.amazon.it/sspa/click?ie
=UTF8& spc=MTo0NDgyNTkwNzU
wNjM5NzM5OjE3MzQ3MTQ1OTE6
c3BfbXRmOjMwMDEyMjk4NTMzN
TYzMjo6MDo6& url=%2FQUARKZM
AN-connettore-Lunghezza-Comput
er-confezione%2Fdp%2FB0CQRM
DQNG%2Fref%3Dsr_1_15_sspa%
3F__mk_it_IT%3D%25C3%2585M
%25C3%2585%25C5%25BD%25
C3%25%25 595%25C3%2591%26crid%3
D3BZ8Q05YA50TX%26dib%3Dey
J2IjoiMSJ9.zoYnL2ViiarlDS_7165D
ldxu-TTbVbWUVAP3pCybFB-bjGl
wSgrpnkMhhsJj3NRo8Mvht8ev5H
vGQ-UUpPom12OcOcwyRVXLAR
UvMyTm8mpAdZSaOritwHRgwu2
JuW9UoS4jlCbA-gzP2FEAAH47K
fFOWN6FEhc5r0YGBcSIsA6_QV6
_LA1k_ifj3c2BFm2Fj8YjW-auz7Yiy
ULfZusvGX28S1K5kJdTa_YOwJY
YC0Y__s-CCchHKiZgDhFjtFogUz0
Tonob4HQZiO_hkrnm3ixpNj9rgE-
hvVq1FK1uD9M.kkP89x1SJ0SLxZ
sv3YomYEfmkhpvP4WQf2TtC76K
YAE%26dib_tag%3Dse%26keywords
%3DCavo%2Bflessibile%2Ba%2Bna
stro%2Bpiatto%2Bper% 2Bstampant
e%2B3D%2Ba%2B10%2Bpin%26n
sdOptOutParam%3Dtrue%26qid%
3D1734714591%26s%3Dindustrial
%26sprefix%3Dcavo%2Bflessibile
%2Ba%2Bnastro%2Bpiatto%2Bper
%2Bstampante%2B3d%2Ba%2B10
%2Bpin%252Cindustrial%252C170
%26sr%3D1-15-spons%26sp_csd%
3Dd2lkZ2V0TmFtZT1zcF9tdGY%26psc%3D1		2651 28AWG 10 pinów
Sztywne sprzęgłowałuGwolfhttps://www.amazon.it/gp/product/
B088R8CW5Z/ref=ppx_yo_dt_b_
search_asin_title?ie=UTF8& psc=1		Łącznik od 5 do 8 mm 
Pręty 4 mmKomponenty RS682-810Średnica 4 mm
Pręty 5 mmSourcingmapa14010200ux0214Średnica 5 mm
Pręty 8 mmKomponenty RS682-078Średnica 8 mm
281-984M2x6 - z płaskim
INCREWAYhttps://www.amazon.it/INCREWAY-
assortite-portatili-accessori-
riparazione/dp/B07KN37M5J/
ref=sr_1_20?__mk_it_IT=%C
3%85M%C3%85%C5%BD%
C3%95%C3%91& crid=12BH
MAWD8SK4Z& dib=eyJ2IjoiM
SJ9. SjXKoxV0NYqENPoUeS4
2-rj1Af398uiCLXDxFs0C9HfS
8vwEPmsfAMPwIMfllkAfWNY
TIEU4KXhJRgRHInNI3U_aow
0EPyfufQKlA4wHz1eOJBvYO
ND-5obbXfRPn7VXQ8kzBXXX. M
VfUHLAIFlJhTO8AXclkwgjB-z
pRvQ6oE5Fr_1sO7lFnzURtD1
YBf65O58M3hrDXf5r_8MIz1c
Asct-2P8AyWWBZAB1buYoyP
gnnOiBL5EBS7twJWqcDU86m
h1ywyufiUitm6kIwNuMx32D0h
0jkHna481aaYP_Q7kHgDxxrR
_ fFXj5gV2XqEesqGkxPCmHfF
WVMqvB_YBdEAuTeL08EP_p
TY50uT4UeWgdJuT58kB7Gv-
Y5fPMPRS_JEQdO-oJ9DlO9n
0OszkmYwrPh-AivwVN6xh4hN
2pseXannS_on9aiNv1lh3x-f2PZ
0R.jCyNdxQiJSAsGVm7ZPhDK
eFxQGBAu-M_42ZLTSSBiDg& d
ib_tag=se& słowa kluczowe=viti+M3x3&
nsdOptOutParam=true& qid=1734
711519& sprefix=viti+m3x3%2Cap
s%2C169& sr=8-20		M2x8 - z
płaskimINCREWAYhttps://www.amazon.it/INCREWAY
-assortite-portatili-accessori-ripara
zione/dp/B07KN37M5J/ref=sr_1_2
0?__mk_it_IT=%C3%85M%C3%85
%C5%BD%C3%95%C3%91& crid=
12BHMAWD8SK4Z& dib=eyJ2IjoiM
SJ9. SjXKoxV0NYqENPoUeS42-rj1
Af398uiCLXDxFs0C9HfS8vwEPms
fAMPwIMfllkAfWNYTIEU4KXhJRg
RHInNI3U_aow0EPyfufQKlA4wHz
1eOJBvYOND-5obbXfRPn7VXQ8
kzBXMVfUHLAIFlJhTO8AXclkwgjB
-zpRvQ6oE5Fr_1sO7lFnzURtD1YB
f65O58M3hrDXf5r_8MIz1cAsct-2P8
AyWWBZAB1buYoyPgnnOiBL5EBS
7twJWqcDU86mh1ywyufiUitm6kIwN
uMx32D0h0jkHna481aaYP_Q7kHg
DxxrR_fFXj5gV2XqEesqGkxPCmHf
FWVMqvB_YBdEAuTeL08EP_pTY50
uT4UeWgdJuT58kB7Gv-Y5fPMPRS
_JEQdO-oJ9DlO9n0OszkmYwrPh-
AivwVN6xh4hN2pseXannS_on9aiN
v1lh3x-f2PZ0R.jCyNdxQiJSAsGVm
7ZPhDKeFxQGBAu-M_42ZLTSSB
iDg& dib_tag=se& słowa kluczowe=viti+M3
x3& nsdOptOutParam=prawda& qid=17
34711519& sprefix=viti+m3x3%2Ca
ps%2C169& sr=8-20		M2x10 - z płaskim
INCREWAYhttps://www.amazon.it/INCREWAY-
assortite-portatili-accessori-riparazi
one/dp/B07KN37M5J/ref=sr_1_20?
__mk_it_IT=%C3%85M%C3%85%
C5%BD%C3%95%C3%91& crid=12
BHMAWD8SK4Z& dib=eyJ2IjoiMSJ
9.SjXKoxV0NYqENPoUeS42-rj1Af3
98uiCLXDxFs0C9HfS8vwEPmsfAM
PwIMfllkAfWNYTIEU4KXhJRgRHIn
NI3U_aow0EPyfufQKlA4wHz1eOJB
vYOND-5obbXfRPn7VXQ8kzBXMV< "br/> fUHLAIFlJhTO8AXclkwgjB-zpRvQ6
oE5Fr_1sO7lFnzURtD1YBf65O58
M3hrDXf5r_8MIz1cAsct-2P8AyWW
BZAB1buYoyPgnnOiBL5EBS7twJ
WqcDU86mh1ywyufiUitm6kIwNuM
x32D0h0jkHna481aaYP_Q7kHgDx
xrR_fFXj5gV2XqEesqGkxPCmHfF
WVMqvB_YBdEAuTeL08EP_pTY5
0uT4UeWgdJuT58kB7Gv-Y5fPMPRS
_JEQdO-oJ9DlO9n0OszkmYwrPh-Ai
vwVN6xh4hN2pseXannS_on9aiNv1l
h3x-f2PZ0R.jCyNdxQiJSAsGVm7Z
PhDKeFxQGBAu-M_42ZLTSSBiDg
& dib_tag=se& słowa kluczowe=viti+M3x3& n
sdOptOutParam=true& qid=1734711
519& sprefix=viti+m3x3%2Caps%2
C169& sr=8-20		M3x3 - z płaskim
RS-components281-978M3x6 - z płaskim
RS-components281-978M3x10 - z płaskim
RS-components281-978M3x20 - z
płaskimFaankitonhttps://www.amazon.it/Faankiton-600-
M3-Incassato-Cilindrica/dp/B0CFY6V
3HV/ref=sr_1_3_sspa?crid=29NMQZ
B1QM7EW& dib=eyJ2IjoiMSJ9..aiGS-
zo819G6hZmghT7TFDH1TL5lzRsjT
R5PBvqoHbKOBLipyX-kuevmqqPpW
m_7Ngng-Wa6aLoDuXMtoqexgeNpr
Qn2cISsCatqzhc8fxhJ0yIN4s3YEpD
KzIroWWVNzswptkWthnGkLXwHck
m4wqLr1sf0qyK9oYYlZdKo_Ypa9RQ
s3aYPNd_f-DWpT5rdsG1GL3rd3b9c
fLSqXxMd8QnnK3hDcg10Uz9otPwo
zJC2QAQFce__CkNwDfBp5Vvgmy1
DLX4a7PolnNePrJiObgjHMJLlfwizGx
fie28RAYQ.03Epc_ RrVWlBUqUbHU
TPDcoDUxaKBHep1CuTOhFj-fI& DIB
_tag=se& słowa kluczowe=m3x25%2Bviti& n
sdOptOutParam=true& qid=17347118
59& s=przemysłowy& przedrostek=M3x25%2Ci
ndustrial%2C185& sr=1-3-spons& sp_
csd=d2lkZ2V0TmFtZT1zcF9hdGY& th=1		M3x25 - z płaskim
Faankitonhttps://www.amazon.it/Faankiton-600
-M3-Incassato-Cilindrica/dp/B0CFY6
V3HV/ref=sr_1_3_sspa?crid=29NMQ
ZB1QM7EW& dib=eyJ2IjoiMSJ9..aiG
S-zo819G6hZmghT7TFDH1TL5lzRsj
TR5PBvqoHbKOBLipyX-kuevmqqPp
Wm_7Ngng-Wa6aLoDuXMtoqexgeN
prQn2cISsCatqzhc8fxhJ0yIN4s3YEp
DKzIroWWVNzswptkWthnGkLXwHc
km4wqLr1sf0qyK9oYYlZdKo_Ypa9R
Qs3aYPNd_f-DWpT5rdsG1GL3rd3b9
cfLSqXxMd8QnnK3hDcg10Uz9otPwo
zJC2QAQFce__CkNwDfBp5Vvgmy1D
LX4a7PolnNePrJiObgjHMJLlfwizGxfie
28RAYQ.03Epc_ RrVWlBUqUbHUTPD
coDUxaKBHep1CuTOhFj-fI& dib_tag=s
e& słowa kluczowe=m3x25%2Bviti& nsdOptO
utParam=true& qid=1734711859& s=ind
ustrial& prefiks=M3x25%2Cindustrial%2
C185& sr=1-3-spons& sp_csd=d2lkZ2V
0TmFtZT1zcF9hdGY& th=1		M3x30 - z
płaskimAERZETIXhttps://www.amazon.it/AERZETIX-
carbonio-fissaggio-cacciavite-mont
aggio/dp/B0BDYZZ8LQ/ref=sr_1_4
?__mk_it_IT=%C3%85M%C3%85
%C5%BD%C3%95%C3%91& crid=
217010XNB7ZXP& dib=eyJ2IjoiMSJ
9.e5QjA-q9hEvlleIzwY3ssA3x7vIBF
Hpcg73tKkBJu9QbDwMwlC5L9-9u
7my7ZG5hZij0WyaijakqAoX4rIZ3rv
EgvlPtN6bwKTBgqAK-3uu3GBy6K
EPQ2iIEUWx_U73nonJy5IzmTDH
Xijn-kRg1i/ COM99S5upSWbmmazg
8lctsyXlg_tmXHjHn63WsIo7WcBuL
rtVpPW8oMsZCndwh33pNQXBnk1
iStT81spopzrw3gScK1Wdz6RttH6j
YL611rNBdkd-PEP2CYhDKeSKHE
AqmABjHGLyG6p40k20npHqkg8g-
9Msl3fZZiS4rRxNFOHBjEdVTLBrn
PjRjxTspBfZSEKQnqsGm1WPlz8cS
khCs.ujWHAL4y-RNahay-1AJl34uN
hUj-f6mZ7X1_KZaACvU& dib_tag=s
e& słowa kluczowe=m3x50%2Bviti& nsdOp
tOutParam=prawda& qid=1734711964&
s=przemysłowy& prefiks=m3x50%2Bviti
%2Cindustrial%2C136& sr=1-4& th=1		M3x50 - z płaskim
JOCAHULFXhttps://www.amazon.it/Incassato-
Esagonale-Rondelle-Esagonali-
Inossidabile/dp/B0DF7P5CC2/ref=sr_
1_6?__mk_it_IT=%C3%85M%C3%8
5%C5%BD%C3%95%C3%91& crid=2
7B231M7SRJ3R& dib=eyJ2IjoiMSJ9..3
bij8nHLQAebjY8LHQS6V1GsAE07H
cFGUpHAh7jA1oQIxjoTJmxjNuwg0y
H14oz-YUvzD0eqVRASqAZTK2spiQ
saX0pug7rWgGfENeGhztno5lMcJDT
XQfe9H6ocLZANpAFv_p0dRbO6ggA
/ vZN0TfyiuR4focFMAjr6VFGVbprEQO
EaS1KRs8loF3FgL0rsmP81K806Gv5
zeSurK_sp8GEelqtm1G3J059zUdPaJ
z7zJQEFPSH0TXv3lml5u9lnvnAbM0j
ClF03nG5ZjB-6WUPfS41Os5DgzTpS
zUTR-YZc1HnRUxy6l5grDPFmDiNZn
0Ie9MrlkcPI2A8dubQZm3d8pYVpg6Y
2OqzifmZzNsQM.Zuh5Ko4bf20Bz46c
NFRHJvcyPfJyglpcvN1uM16-yOI& DIB
_tag=se& Słowa kluczowe=M4+Viti+Testa+SV
Asata& nsdOptOutParam=prawda& qid=17
34712054& s=przemysłowy& sprefix=m4+v
iti+testa+svasata%2Cindustrial%2C12
8& sr=1-6		M4x8 - z płaskim
JOCAHULFXhttps://www.amazon.it/Incassato-Esagonale
-Rondelle-Esagonali-Inossidabile/dp/B0DF
7P5CC2/ref=sr_1_6?__mk_it_IT=%C3%85
M%C3%85%C5%BD%C3%95%C3%91& c
rid=27B231M7SRJ3R& dib=eyJ2IjoiMSJ9..
3bij8nHLQAebjY8LHQS6V1GsAE07HcFG
UpHAh7jA1oQIxjoTJmxjNuwg0yH14oz-YU
vzD0eqVRASqAZTK2spiQsaX0pug7rWgG
fENeGhztno5lMcJDTXQfefe 9H6ocLZANpAF
v_p0dRbO6ggAvZN0TfyiuR4focFMAjr6VF
GVbprEQOEaS1KRs8loF3FgL0rsmP81K8
06Gv5zeSurK_sp8GEelqtm1G3J059zUdP
aJz7zJQEFPSH0TXv3lml5u9lnvnAbM0jCl
F03nG5ZjB-6WUPfS41Os5DgzTpSzUTR
- YZc1HnRUxy6l5grDPFmDiNZn0Ie9Mrlkc
PI2A8dubQZm3d8pYVpg6Y2OqzifmZzNs
QM. Zuh5Ko4bf20Bz46cNFRHJvcyPfJyglp
cvN1uM16-yOI& dib_tag=se& Słowa kluczowe=M4
+Viti+Testa+Svasata& nsdOptOutParam=tru
e& qid=1734712054& s=przemysłowy& sprefix=
m4+viti+testa+svasata%2Cindustrial%2C1
28& sr=1-6		M4x12 - z płaskim
Globstarhttps://www.amazon.it/testa-svasata-
impronta-Phillips-acciaio/dp/B083RH
5JYL/ref=sr_1_9?__mk_it_IT=%C3%
85M%C3%85%C5%BD%C3%95%C
3%91& crid=XEVGIE9R1K2F& dib=ey
J2IjoiMSJ9..sYNfljBDPU1N2px8nueT
zi6D61Z46HD98MSuIwqXNKrfkSOM
GYgywNTC8-dsYqNXiZEMS42kGB4
QdBtz_TVFLvgLCFQVl9W5n7Bo4fQS
_VKHh9VLmA_RjdF75wPsSbRPIdSA
nidi0pehfkRoBIrEtYVn-cUq4TXH0P1D
pGLc_4J88tU02ieLVee-YarMxZLKeLYt
kK6B2CmM6d_AE0K7UJofwnOCOLp
3R72KpMTltjkJutf0WxBFsNQhYG8Wz
0q1o_3uRs_aNM0wJtGeSohS3fABN8C
z-kYxdfOikF1zi4nE1wn8YUw8lfsCxeUI
ioUp4Lz0GaXhHkkXxC5jssOsuOyW_6
CeDYrx0AOAy1URHBY.4xc_PNzUrZe
FFz0FV9hV7uu_-Es6f3jhi6koImPVcgw
& dib_tag=se& słowa kluczowe=m4x70%2Bvi
ti%2Btesta%2Bsvasata& nsdOptOutPa
ram=prawda& qid=1734712182& s=Industri
AL& prefiks=m4x70%2Bviti%2Btesta%2
Bsvasata%2Cindustrial%2C134& sr=1-9& th=1		M4x70 - z płaskim
Aerzetixhttps://www.amazon.it/AERZETIX-cilin
drica-impronta-intaglio-montaggio/dp/B
0BLNJ9PTX/ref=sr_1_8?__mk_it_IT=%
C3%85M%C3%85%C5%BD%C3%95
%C3%91& crid=3AESCF6VKG6B6& di
b=eyJ2IjoiMSJ9..3HlweLtFpKk8huuM4
tfcAbDSl2biH6iWGO7PXpXKxzQnVM
cKVrvCI0CkZanzuaduqvaeCs8DLxlFs
c_s4-qvSDCE8dvXDhuO4nHPwIhPAl
BnL5G6tLMycq0ZS0ZN83GAj_VOUc
GVLq4fdcfeurabYdPzrWf3PpwM6_-y
OlEOLVvll/ zzBKgQWO7fiMSCFuGA6
X4j8xVlNzobgrSfsnDNqZpEgH289rp
AslvAA9D2YEmvJSm0CRqWecsKPJ
iB8yNhelz01McT-qy3s6utg4_Thec18s
iTwIY2bFdQ5XYhkTzBxAF86lr6VMXZ
3Ym26ZiedQE1_7ceB7jYcyQ5mOMR
fx0d8pYVpg6Y2OqzifmZzNsQM._rEh
uS8xCOyhS7xqQQe9H3kwn-ppl22Rf
VmzFpFpyW0& dib_tag=se& słowo kluczowe
s=m4x80%2Bviti%2Btesta%2Bsvasat
a& nsdOptOutParam=prawda& qid=17347
12214& s=przemysłowy& przedrostek=m4x80%
2Bviti%2Btesta%2Bsvasata%2Cindu
strial%2C141& sr=1-8& th=1		M4x80 - z płaskim
Globstarhttps://www.amazon.it/testa-svasata-
impronta-Phillips-acciaio/dp/B083RJ
S9NT/ref=sr_1_30?__mk_it_IT=%C3
%85M%C3%85%C5%BD%C3%95%
C3%91& crid=15MBBIPYCF06S& dib
=eyJ2IjoiMSJ9.wHpVBrZH8GsdSIko
N0T0-2663KN2Tr-H4orSaQtmYf64T
nTN15zshBEbfwlrPNyJaD4F1cXZvO
Evle2B5qQb_Un-tR8WzVwAxQFWe
SMPaYKjM5ZgpbhFaaS6Zj0BQntEIA
hyTnvnLg4IBEE9y-4jQ66ZIkmXcWFo
zXK-eTFnle6uFI4nXhbCXTWjM5MP_
sNolDP0O4HS7Bnxk_wanuwC9zEuH
ZeVNsejl6gwYR0IlJK5iu0V9Y-bgFcr1-
iTBhrARDKG7-0Nc5188TSaN9snT7K
6yO2J3ctfC24PTGnaZAFYKMvrNqz< br/> OAihVBKIW8xOhIx0ZRipPa9ggsMs
_pe1VgY2dCXtUrE_bo1dd4oGlUuw
.v5iiMZ2rMQlZlZs2WDyqM_mo1utvu
PD71Jyb-O7BY1Y& dib_tag=se& Klucz
słowa=M5x8+Viti+Testa+Svasata& ns
dOptOutParam=prawda& qid=17347123
79& s=przemysłowy& sprefix=m5x8+viti+
testa+svasata%2Cindustrial%2C201
& sr=1-30		M5x8 - z płaskim
Globstarhttps://www.amazon.it/testa-svasata-
impronta-Phillips-acciaio/dp/B083RH
M4BY/ref=sr_1_30?__mk_it_IT=%C3
%85M%C3%85%C5%BD%C3%95%
C3%91& crid=15MBBIPYCF06S& dib=
eyJ2IjoiMSJ9.wHpVBrZH8GsdSIkoN
0T0-2663KN2Tr-H4orSaQtmYf64Tn
TN15zshBEbfwlrPNyJaD4F1cXZvO
Evle2B5qQb_Un-tR8WzVwAxQFW
eSMPaYKjM5ZgpbhFaaS6Zj0BQnt
EIAhyTnvnLg4IBEEEE. 9y-4jQ66ZIkmX
cWFozXK-eTFnle6uFI4nXhbCXTW
jM5MP_sNolDP0O4HS7Bnxk_wan
uwC9zEuHZeVNsejl6gwYR0IlJK5iu
0V9Y-bgFcr1-iTBhrARDKG7-0Nc5
188TSaN9snT7K6yO2J3ctfC24PTG
naZAFYKMvrNqzOAihVBKIW8xOhI
x0ZRipPa9ggsMs_pe1VgY2dCXtUr
E_bo1dd4oGlUuw.v5iiMZ2rMQlZlZs
2WDyqM_mo1utvuPD71Jyb-O7BY
1Y& dib_tag=se& słowa kluczowe=m5x8%
2Bviti%2Btesta%2Bsvasata& nsdOpt
OutParam=true& qid=1734712379& s
=przemysłowy& prefiks=m5x8%2Bviti%2
Btesta%2Bsvasata%2Cindustrial%2
C201& sr=1-30& th=1		M5x10 - z płaskim
Globstarhttps://www.amazon.it/testa-svasata-
impronta-Phillips-acciaio/dp/B083RH
9SYZ/ref=sr_1_30?__mk_it_IT=%C3
%85M%C3%85%C5%BD%C3%95%
C3%91& crid=15MBBIPYCF06S& dib
=eyJ2IjoiMSJ9.wHpVBrZH8GsdSIko
N0T0-2663KN2Tr-H4orSaQtmYf64T
nTN15zshBEbfwlrPNyJaD4F1cXZv
OEvle2B5qQb_Un-tR8WzVwAxQF
WeSMPaYKjM5ZgpbhFaaS6Zj0BQ
ntEIAhyTnvnLg4IBEE 9y-4jQ66ZIkm
XcWFozXK-eTFnle6uFI4nXhbCXT
WjM5MP_sNolDP0O4HS7Bnxk_w
anuwC9zEuHZeVNsejl6gwYR0IlJK5
iu0V9Y-bgFcr1-iTBhrARDKG7-0Nc5
188TSaN9snT7K6yO2J3ctfC24PTG
naZAFYKMvrNqzOAihVBKIW8xOhIx
0ZRipPa9ggsMs_pe1VgY2dCXtUrE
_bo1dd4oGlUuw.v5iiMZ2rMQlZlZs2
WDyqM_mo1utvuPD71Jyb-O7BY1Y
& dib_tag=se& słowa kluczowe=m5x8%2Bvi
ti%2Btesta%2Bsvasata& nsdOptOutP
aram=prawda& qid=1734712379& s=Indus
próba& prefiks=m5x8%2Bviti%2Btesta%
2Bsvasata%2Cindustrial%2C201& sr=
1-30& th=1		M6x20 - Karta SD z płaską głowicą
SanDiskhttps://www.amazon.it/SanDisk-Ultra-
Scheda-memoria-classe/dp/B08GYG6
T12/ref=sr_1_8?crid=3ETH6HJL8VKD
A& dib=eyJ2IjoiMSJ9..5omqicizrizfHo8r
pPQ6sWJ_C0sfwUqPQv6VrziwK-SCX
4-aSgFGois1pfvTwB0SuDxdNjByo2zU
fBonWwUKAf3clazXEIGNl0GhojQmvj
Bt_6RS31QcAM5Y50BpAdndMXIHy9
iGTswgYEwnbt9uj56G_soC6OdPiTvr
W3M8jwtTxQDUl8UcHH. zeRMPq0T8sd
v4hskHGmipFItAzE1lyDiy0otrqUhz-ph
OggXBAM6gMyGf0qBtU1AFwfj81Shl
HS2qojCiRq_JLKyBkc_Y4P_V1YtsGc
MxnoG6YzYowwEYbX7uTFWJB-Wvc
B_ vYw-D5s0B-HDSYRSl-C60yhtqhrUw
grg9w6PN5U5s01vos4bauIgIN6lOez1
tz2OHwL5YL3QCHKxNnJV0IM42cH0
du8fIEIbUwYC5jRLqowx1UyaQKQ4W
WaGozdZ9l5qUoeQ7KU.iOPo2BYLK
STjqjB8BevaVgPa5QD7BuP9CieN6u
4_Qeo& dib_tag=se& słowa kluczowe=sd%
2Bcard%2Bsandisk& nsdOptOutParam
=true& qid=1734704871& sprefix=SD%
2Bcard%2Bsan%2Caps%2C141& sr=8-8& th=1		Karta SD SanDisk 32 GB Extreme PRO, UHS-I
Łożysko kołnierzowe wahliweBrateuanoiiKFL08Średnica wewnętrzna 8 mm
Oprogramowanie do krojeniaUltimaker Curahttps://ultimaker.com/it/software/
ultimaker-cura/?_source=1&
gclid=CjwKCAiAyJS7BhBiEiwAy
S9uNUjnbkNIYNUco6YaZYHcFT
2tqBac23MU4Qx3FaMXjl_UifJ_
k8as3BoCeVkQAvD_BwE		Ultimaker Cura 4.9.0
SpringsYIXISIhttps://www.amazon.it/sspa/click?ie
=UTF8& spc=MTo4NDAzNDQ1MzM
0OTUyODQzOjE3MzQ3MDQ4MD
c6c3BfYXRmOjMwMDM5MDQzMz
kzODAzMjo6MDo6& url=%2FYIXIS
I-Assortimento-Estensione-Compre
ssione-Dispositivi%2Fdp%2FB0DD
T3KTBF%2Fref%3Dsr_1_1_sspa%
3F__mk_it_IT%3D%25C3%2585M
%25C3%2585%25C5%25BD%25
C3%2595%25C3%2591%26crid%
3D1NT7CA1YJGWK4%26dib%3D
eyJ2IjoiMSJ9.IhFmevq0fXTGGwE
cGvfUxxLOudQqQcPjSGXlWklXO
HY2Ahr2XxWSg6MaNBgZ71N1pQ
h9Wkp5c2ary4Hm2xVi4dTH8Ny4
4- OhlcrTn0G8emvX66Zu7U0LGm
xGYKyKCGxzlhwYC4EnlmTSH_O
JnA5oG-BQzuxFBdCrce0txErCEm
S40xONaaYp2R5yMiPDw2PqsPP
jLmoSCYs4XctxEvAwn_5rp71t0U
QsZNku6-jDiiuh5klpC9DsnjipLFP
unRCbITWnw6wslENLdJtPDOGF
8vbO5WFf7PnUy4BZ7tUPt7I.B6j
eUKwx1_t0sPaxmSHYVbRd1MG
w-kosEYkHuKlPtpQ%26dib_tag%
3Dse%26keywords%3Dmolle%2B
YIXISI%26nsdOptOutParam%3Dtr
ue% 26qid%3D1734704807%26spr
efix%3Dmolle%2Byixisi%252Caps
%252C137%26sr%3D8-1-spons%2
6sp_csd%3Dd2lkZ2V0TmFtZT1zcF
9hdGY%26psc%3D1
Silnik krokowyTwotrees 123417HS4401Silnik krokowy bipolarny NEMA 17 42 Ncm 1,5 A
Silnik krokowySTEPPERONLINEUL1007AWG6Silnik krokowy bipolarny NEMA 17 42 Ncm 1,5 A
Wspornik mocujący silnik krokowyYOTINOhttps://www.amazon.it/gp/product/
B07D7XH97T/ref=ppx_yo_dt_b_
search_asin_title?ie=UTF8& psc=1
Nakrętka gwintowana M2RS-components281-984
Nakrętka gwintowana M3RS-components281-984
Nakrętka gwintowana M4RS-components281-984
Nakrętka gwintowana M5RS-components281-984
Nakrętka gwintowana M6RS-components281-984
TRAMP - linia komórkowaC1ATCCCRL-2730Nabłonkowa linia komórkowa wyizolowana z prostaty dorosłego samca myszy transgenicznej z gruczolakorakiem
Trypan niebieskiGibco Thermofisher15250061
TrypsynaGibco Thermofisher15400054Sterylny
Drukarka 3D 40443001 ze stali nierdzewnej taśma

Bibliografia

  1. Patel, T., et al. Multicellular tumor spheroids: A convenient in vitro model for translational cancer research. Life Sci. 358, 123184(2024).
  2. Tanaka, M., et al. Emerging translational research in neurological and psychiatric diseases: From in vitro to in vivo models. Int J Mol Sci. 24 (21), 15739(2023).
  3. De Maria Marchiano, R., et al. Translational research in the era of precision medicine: Where we are and where we Will Go. J Pers Med. 11 (3), 216(2021).
  4. Knowlton, S., et al. Bioprinting for cancer research. Trends Biotechnol. 33 (9), 504-513 (2015).
  5. McGranahan, N., et al. Biological and therapeutic impact of intratumor heterogeneity in cancer evolution. Cancer Cell. 27 (1), 15-26 (2015).
  6. Van Zundert, I., et al. From 2D to 3D cancer cell models-The enigmas of drug delivery research. Nanomaterials. 10 (11), 2236(2020).
  7. Hoarau-Véchot, J., et al. Halfway between 2D and animal models: Are 3D cultures the ideal tool to study cancer-microenvironment interactions. Int J Mol Sci. 19 (1), 181(2018).
  8. Yamada, K. M., et al. Modeling tissue morphogenesis and cancer in 3D. Cell. 130 (4), 601-610 (2007).
  9. Manduca, N., et al. 3D cancer models: One step closer to in vitro human studies. Front Immunol. 14, 1175503(2023).
  10. Wang, L., et al. The 3D revolution in cancer discovery. Cancer Discov. 14 (4), 625-629 (2024).
  11. Benton, G., et al. Multiple uses of basement membrane-like matrix (BME/Matrigel) in vitro and in vivo with cancer cells. Int J Cancer. 128 (8), 1751-1757 (2011).
  12. Benton, G., et al. Matrigel: From discovery and ECM mimicry to assays and models for cancer research. Adv Drug Deliv Rev. 79-80, 3-18 (2014).
  13. Rawal, P., et al. Prospects for 3D bioprinting of organoids. Bio-Design Manuf. 4 (3), 627-640 (2021).
  14. Hou, S., et al. Advanced development of primary pancreatic organoid tumor models for high-throughput phenotypic drug screening. SLAS Discov Adv Sci Drug Discov. 23 (6), 574-584 (2018).
  15. Kane, K. I. W., et al. Determination of the rheological properties of Matrigel for optimum seeding conditions in microfluidic cell cultures. AIP Adv. 8 (12), 125332(2018).
  16. De Stefano, P., et al. Bioprinting of Matrigel scaffolds for cancer research. Polymers. 13 (12), 2026(2021).
  17. Hatzikiriakos, S. G., et al. Role of slip and fracture in the oscillating flow of HDPE in a capillary. J Rheol. 36 (5), 845-884 (1992).
  18. Kalika, D. S., et al. Wall slip and extrudate distortion in linear low-density polyethylene. J Rheol. 31 (8), 815-834 (1987).
  19. Molenaar, J., et al. Modeling polymer melt-flow instabilities. J Rheol. 38 (1), 99-109 (1994).
  20. Valot, L., et al. Chemical insights into bioinks for 3D printing. Chem Soc Rev. 48 (15), 4049-4086 (2019).
  21. Sundaramurthi, D., et al. 3D bioprinting technology for regenerative medicine applications. Int J Bioprinting. 2 (2), 9-26 (2016).
  22. Maloney, E., et al. Immersion bioprinting of tumor organoids in multi-well plates for increasing chemotherapy screening throughput. Micromachines. 11 (2), 208(2020).
  23. Snyder, J. E., et al. Bioprinting cell-laden Matrigel for radioprotection study of liver by pro-drug conversion in a dual-tissue microfluidic chip. Biofabrication. 3 (3), 034112(2011).
  24. Patil, L. S., et al. Toward measuring the mechanical stresses exerted by branching embryonic airway epithelial explants in 3D matrices of Matrigel. Ann Biomed Eng. 50 (9), 1143-1157 (2022).
  25. Lai, V. K., et al. Swelling of collagen-hyaluronic acid co-gels: An in vitro residual stress model. Ann Biomed Eng. 44 (10), 2984-2993 (2016).
  26. Lam, N. T., et al. Fabrication of a Matrigel-collagen semi-interpenetrating scaffold for use in dynamic valve interstitial cell culture. Biomed Mater. 12 (4), 045013(2017).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Tagi

Wolumetryczny biodruktr jwymiarowa hodowla kom rekmodele organoid wwalidacja biodrukarkiywotno kom rekdrukowalno siatkibadania nad rakiemin ynieria tkankowa
Projekt i walidacja biodrukarki do wytłaczania wolumetrycznego do biodruku rozpuszczalnego ekstraktu z błony podstawnej do badań translacyjnych
Skontaktuj się z nami
Poleć bibliotece

Prywatność

Warunki Korzystania

Zasady

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Wszelkie prawa zastrzeżone.