Artykuł metodologiczny

Analiza ekspresji onkogenów ze zmianami pH w linii komórek przewodowych trzustki

DOI:

10.3791/67843

⸱

11 kwietnia 2025

 ,  ,  ,  ,  , 
1Translational Research Centre, Asian Healthcare Foundation, AIG Hospitals, 2Department of Biochemistry, Osmania University, 3Department of Medical Gastroenterology, Asian Institute of Gastroenterology (AIG) Hospitals

W tym artykule

Podsumowanie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

To badanie opisuje protokół badania wpływu zmienionego pH na ekspresję onkogenu za pomocą analizy sekwencyjnej RNA linii komórkowej przewodu trzustkowego.

Streszczenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Czwarta najczęstsza przyczyna zgonów związanych z rakiem, gruczolakorak przewodowy trzustki (PDAC), ma 12% pięcioletni wskaźnik przeżycia. Choroba ta ma złe rokowanie i charakteryzuje się sztywnym mikrośrodowiskiem zrębu, co stanowi namacalne wyzwanie w jej leczeniu. Pacjenci z przewlekłym zapaleniem trzustki mają 10-krotnie większe ryzyko rozwoju PDAC; u tych pacjentów pH przewodowe spada z pH 8,0 do pH 6,0 z powodu niedoboru wodorowęglanów i środowiska zapalnego. Naszym celem było zrozumienie roli kwaśnego środowiska obserwowanego w przewlekłym zapaleniu trzustki na ekspresję onkogenów w linii komórek przewodowych trzustki.

Dlatego 80% zlewających się ludzkich komórek nabłonka przewodowego trzustki inkubowano w pH od 6,0 do pH 7,2 przez 6 godzin. Całkowite RNA z komórek zostało przetworzone w celu wzbogacenia całkowitego mRNA w próbkach. Ekspresję genów oceniano za pomocą sekwencjonowania nowej generacji (NGS) kontrprób biologicznych. Analizę sekwencji RNA przeprowadzono za pomocą narzędzia internetowego i zidentyfikowano geny o zróżnicowanej ekspresji (FC < ± 2,0); było 90, 148 i 109 genów regulowanych w górę oraz 20, 14 i 23 geny regulowane w dół odpowiednio przy pH 6,0, 6,5 i 7,0. Cztery onkogeny były regulowane w górę przy pH 6,0, siedem było regulowanych w górę przy pH 6,5, a siedem było regulowanych w górę przy pH 7,0. Wspólnymi genami, które były regulowane w górę przy pH 6,0, pH 6,5 i pH 7,0, były kinaza białkowo-tyrozynowa specyficzna dla komórek limfocytów (LCK) [pH 6,0, FC: 2,93; pH 6,5, FC: 2,93; pH 7,0, FC: 3,32], protoonkogen FGR, kinaza tyrozynowa rodziny Src (FGR) [pH 6,0, FC: 4,17; pH 6,5, FC: 5,25; pH 7,0, FC: 5,09] i ArfGAP z domeną SH3, powtórzenie ankyryny i domena pH 3 (ASAP3) [pH 6,0, FC: 2,37; pH 6,5, FC: 3,84; pH 7,0, FC: 2,51]. Kwaśne środowisko wyzwala aktywację protoonkogenów, które mogą wywołać inicjację guza w przewlekłym zapaleniu trzustki.

Wprowadzenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Gruczolakorak przewodowy trzustki (PDAC) jest jednym z głównych nowotworów i zajmuje czwarte miejsce wśród nowotworów pod względem liczby powiązanych zgonów1. Wyższa śmiertelność jest widoczna wśród pacjentów z PDAC, a według ostatnich badań pięcioletni wskaźnik przeżycia wynosi tylko 12%. Pacjenci z udokumentowanym przewlekłym zapaleniem trzustki, chorobą prowadzącą do zapalenia trzustki2, są bardziej narażeni (około 15-16-krotnie) na rozwój PDAC3. Istnieją różne rodzaje CP o różnej etiologii, takie jak CP4. Wiadomo, że warunki występujące podczas CP prowadzą do powstawania zwapniałych kamieni, rozwoju komórek rakowych, a nawet cukrzycy. Częstość występowania PDAC jest wysoka u pacjentów z dziedzicznym przewlekłym zapaleniem trzustki5.

Niektóre warunki fizjologiczne w trzustce pacjentów z MPD mogą być korzystne dla inicjacji innych dolegliwości; obejmują one środowisko zapalne, aktywne enzymy trawienne i kwaśne pH soku trzustkowego6. Prowadzony jest szeroki zakres badań w obszarze zapalenia, ponieważ stan zapalny powoduje chaos w normalnym funkcjonowaniu narządu7,8,9. Jednak brak równowagi w regulacji pH jest kolejnym zjawiskiem, które może wywołać inicjację niekontrolowanego wzrostu komórek10. Sok trzustkowy zdrowych osób ma odczyn zasadowy, co pomaga zneutralizować kwaśną treść pokarmową wytwarzaną przez żołądek. Natomiast sok trzustkowy pozostaje kwaśny u pacjentów z CP z powodu niewystarczającego wydzielania wodorowęglanów. Niski poziom wodorowęglanów nie jest w stanie całkowicie zneutralizować soku, co skutkuje lekko kwaśnym środowiskiem w kanale11.

Wcześniejsze badania wskazują, że komórki nowotworowe przystosowują się do kwaśnego środowiska i rozwijają się w nim12. W takich przypadkach warunki, które występują podczas procesu przewlekłego zapalenia trzustki, sugerują korzystne środowisko dla proliferacji i przerzutów tych komórek13. W związku z tym nasze badania miały na celu ocenę zmian morfologicznych w ludzkich komórkach przewodowych trzustki oraz ocenę ekspresji onkogenów w warunkach lekko kwaśnych.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

1. Odrodzenie linii komórkowej

  1. Zaopatrz się w ludzką normalną linię komórek przewodowych trzustki (HPDEC / H6C7) i ożywij komórki w świeżej pożywce.
    1. Rozmrozić komórki w temperaturze 37 °C w łaźni wodnej.
    2. Świeżo przygotować kompletne podłoże i przefiltrować je za pomocą filtra strzykawkowego.
      UWAGA: Kompletna pożywka zawiera zmodyfikowaną pożywkę Eagle's (DMEM) firmy Dulbecco uzupełnioną 10% płodową surowicą bydlęcą (FBS).
    3. Dodać 6 ml kompletnej pożywki do świeżej stożkowej probówki o pojemności 15 ml, dodać rozmrożoną zawiesinę komórkową i dokładnie wymieszać.
    4. Odwirować zawiesinę o stężeniu 1 800 × g przez 6 minut. Wyrzucić supernatant, dodać 1 ml pożywki do osadu i delikatnie wymieszać.
      UWAGA: Pożywka hodowlana zawiera DMEM z 10% płodową surowicą bydlęcą (FBS) i 1% antybiotykami wstrzykiwaczymi/paciorkowcami.
    5. Dodawać komórki kroplami do kolby T-25 zawierającej 4 ml pożywki hodowlanej i inkubować w temperaturze 37 °C, 5% CO2 .

2. Zmiana pH pożywki hodowlanej

  1. Przygotować 100 ml 0,5 M roztworów podstawowych buforu fosforanu sodu o wartościach pH 6,0, 6,5 i 7,0, jak podano w Tabeli 1.
  2. Sprawdź pH za pomocą pH-metru i dostosuj je za pomocą 1 N HCl/1 M NaOH.
  3. Przefiltruj i wysterylizuj w okapie z laminarnym przepływem powietrza za pomocą filtra strzykawkowego 0,45 μm.
    UWAGA: Bufor może być przechowywany w temperaturze 4 °C do czasu dalszego użycia.
  4. Przygotować pożywkę hodowlaną o wartościach pH 6,0, 6,5 i 7,0, dodając 20 ml sterylnego 0,5 M buforu fosforanu sodu o odpowiednim pH do 80 ml pożywki hodowlanej.
  5. Dodać pożywkę o zmienionym pH do 85-90% zlewających się ludzkich komórek przewodowych trzustki i sprawdzić zmiany morfologiczne pod mikroskopem jasnego pola w odstępach 1 h przez 6 godzin.

3. Izolacja RNA

UWAGA: Do izolacji RNA z komórek muszą być używane sterylne rękawiczki, a powierzchnia musi być odkażona przy użyciu 100% etanolu.

  1. Usunąć pożywkę hodowlaną i przepłukać komórki solą fizjologiczną buforowaną fosforanami (PBS).
  2. Umieść płytkę na lodzie, dodaj PBS do studzienki, a następnie zeskrob komórki za pomocą skrobaka do komórek.
    UWAGA: Ilość dodanego PBS powinna wystarczyć do pokrycia komórek do skrobania. Nie ma potrzeby dodawania dużej ilości PBS.
  3. Zebrać zawiesinę do świeżej probówki i odwirować ją pod ciśnieniem 8 000 ×g przez 10 minut. Odrzucić supernatant.
  4. Dodaj bufor do lizy zawierający β-merkaptoetanol do granulek i pipetuj go w górę iw dół przez 5-10 minut na lodzie.
  5. Dodaj równą objętość 70% etanolu do lizatu i dokładnie wymieszaj. Nie wirować.
  6. Dodaj roztwór do kolumny z membraną krzemionkową, odwiruj przy >8 000 ×g przez 30 s i odrzuć przepływ.
  7. Dodać bufor do przemywania próbki i odwirowywać przy >8 000 ×g przez 30 s. Odwirować pustą probówkę przez 1 minutę w temperaturze >8 000 ×g.
  8. Do kolumny dodać 30-50 μl wody wolnej od nukleaz i pozostawić na 5 minut w temperaturze pokojowej. Odwirować kolumnę przy >8 000 ×g przez 5 min.
    UWAGA: Próbki RNA można przechowywać w temperaturze -20 °C do czasu dalszego wykorzystania.

4. Sekwencja RNA/Transkryptom

  1. Ocena integralności RNA
    1. Sprawdź integralność RNA w bioanalizatorze, pobierając 1 μl (25-500 ng) i mieszając go z 5 μl buforu barwnika.
    2. Wirować roztwór o stężeniu 500 ×g przez 1 minutę i krótko wirować.
    3. Przeprowadzić jednoetapową reakcję łańcuchową polimerazy (PCR) dla każdej próbki w temperaturze 72 °C przez 3 minuty, a następnie pobrać probówki i inkubować je na lodzie przez 2 minuty przed analizą za pomocą bioanalizatora.
  2. Całkowite RNA zubożone w rRNA
    1. Dodaj 5 μg całkowitego RNA, 50 μl buforu hybrydyzacyjnego i 1-3 μl mieszaniny sondy do świeżej probówki PCR.
    2. Wykonać następujące etapy: pierwszy etap, denaturacja w temperaturze 70 °C przez 10 minut; drugi etap, hybrydyzacja w temperaturze 37 °C przez 20 minut; i inkubacja w temperaturze 37 °C aż do użycia.
    3. Do świeżej probówki dodać 500 μl kulek magnetycznych i próbkę; umieścić mieszaninę na stojaku magnetycznym na 1 minutę, aż roztwór stanie się klarowny.
    4. Ostrożnie wyrzucić supernatant. Wyjmij probówkę, umyj kulki, dodając 500 μl wody wolnej od nukleaz i umieść mieszaninę z powrotem na stojaku magnetycznym na 1 minutę. Usunąć supernatant, gdy roztwór stanie się klarowny.
    5. Powtórz proces 5-7 razy. Dodać 200 μl buforu hybrydyzacyjnego i odpowiednio wymieszać. Probówki należy przechowywać w temperaturze 37 °C przez 5 minut.
    6. Dodać 100 μl sondy RNA do powyższej mieszaniny, delikatnie wymieszać i inkubować mieszaninę w temperaturze 37 °C przez 15 minut.
    7. Krótko obróć rurkę przed umieszczeniem jej na stojaku magnetycznym na 1 minutę.
    8. Zebrać klarowny supernatant zawierający RNA zubożone w rRNA w świeżej probówce.
  3. Fragmentacja RNA
    1. W świeżej probówce do PCR dodaj 8-10 μl całkowitego RNA zubożonego w rRNA (500 ng / g), 1 μl 10x buforu i 1 μl RNazy III.
    2. Wymieszaj roztwór, stukając i krótko obracając.
    3. Umieścić probówki w termocyklerze na 10 minut w temperaturze 37 °C.
    4. W świeżej probówce dodaj 5 μl kulek wiążących kwasy nukleinowe, a następnie dodaj 90 μl koncentratu roztworu wiążącego.
    5. Do powyższej mieszaniny dodać 30 μl fragmentów RNA i 150 μl 100% etanolu. Wymieszać próbkę pipetując 10x i inkubować przez 5 minut w temperaturze pokojowej.
    6. Umieść probówki na stojaku magnetycznym, aż roztwór stanie się klarowny. Usunąć i wyrzucić sklarowany osad.
    7. Przemyć kulki 150 μl etanolu, gdy probówki znajdują się na stojaku magnetycznym; pozostawić mieszaninę na 30 sekund, a następnie usunąć supernatant.
    8. Pozostaw probówki na stojaku magnetycznym na 1-2 minuty, aby pozostały etanol odparował.
    9. Dodać 12 μl wstępnie podgrzanej wody wolnej od nukleaz do kulek i wymieszać próbkę pipetując 10 razy.
    10. Inkubować próbkę przez 1 minutę w temperaturze pokojowej. Umieść probówki na stojaku magnetycznym i zbierz supernatant, gdy będzie czysty.
  4. Przygotowanie biblioteki i przygotowanie cDNA
    1. Dodać 3 μl rozdrobnionej próbki RNA do probówki PCR, a następnie dodać 5 μl mieszaniny hybrydyzacyjnej. Wymieszać próbkę przez kilka razy, pipetując kilka razy, a następnie krótko odwirować próbkę.
    2. Przechowywać probówki w termocyklerze przez 10 minut w temperaturze 65 °C, a następnie przez 5 minut w temperaturze 30 °C.
    3. Do powyższego roztworu dodać 10 μl buforu do ligacji i 2 μl mieszaniny enzymów ligacyjnych. Inkubować reakcję w termocyklerze przez 1 godzinę w temperaturze 30 °C.
    4. Dodać główną mieszankę odwrotnej transkryptazy do mieszaniny ligacyjnej i inkubować w temperaturze 70 °C przez 10 minut, a następnie inkubować na lodzie.
  5. Amplifikacja cDNA
    1. Dodać 6 μl cDNA (500 ng) do świeżej probówki PCR, a następnie dodać 46 μl mieszanki PCR z kodami kreskowymi z probówki zawierającej 46 μl enzymu polimerazy o wysokiej wierności i 1 μl 3-stopowych starterów kodów kreskowych.
    2. Ustawić warunki PCR w następujący sposób: pierwszy etap, utrzymywać w temperaturze 94 °C przez 2 minuty; drugi etap, cykle w temperaturze 94 °C przez 30 s i 50 °C przez 30 s; trzeci etap, 16 cykli w temperaturze 94 °C przez 30 s, 62 °C przez 30 s i 68 °C przez 30 s. Utrzymywać reakcję w temperaturze 68 °C przez 5 minut.
    3. Oczyść amplifikowany cDNA, powtarzając kroki od 4.3.5 do 4.3.10 i zastąp fragmentaryczną próbkę RNA produktem PCR otrzymanym w poprzednim kroku.
    4. Przeanalizuj oczyszczoną próbkę RNA na sekwenatorze (NGS) w celu wygenerowania danych w postaci plików FASTq.

5. Bioinformatyka

  1. Otwórz narzędzie Galaxy dostępne online, kopiując i wklejając link: https://usegalaxy.org do zakładki wyszukiwania w przeglądarce.
  2. Przy pierwszej wizycie na tej stronie zarejestruj się w celu uzyskania profilu, klikając opcję logowania lub rejestracji w prawym górnym rogu.
  3. Po utworzeniu konta zaloguj się na konto, podając nazwę publiczną/nazwę użytkownika i hasło.
  4. Prześlij pliki FASTq uzyskane po analizie sekwencyjnej RNA, klikając opcję przesyłania w panelu po lewej stronie.
  5. Wybierz narzędzie cutadapt z sekcji narzędzi na lewym panelu bocznym. To narzędzie przycina sekwencje o niskiej jakości.
    UWAGA: Ten plik może być teraz używany do mapowania.
  6. Kliknij przycisk narzędzia na lewym panelu bocznym i poszukaj narzędzia Gwiazda RNA. Wypełnij szczegóły w następujący sposób: Użyj pliku wyjściowego cutadapt, wybierz genom referencyjny jako ludzki genom referencyjny (hg38) i zmień długość sekwencji genomowej wokół połączeń z adnotacjami na 36. Wybierz dane wyjściowe jako liczbę genów i kliknij opcję narzędzia Uruchom w prawym górnym rogu.
    UWAGA: To narzędzie wygeneruje plik BAM.
  7. Wybierz narzędzie do zliczania cech z opcji narzędzia i prześlij pliki BAM uzyskane po analizie gwiazd RNA. Ustaw minimalną jakość odwzorowania na odczyt w opcjach filtrowania odczytu na 10 i kliknij opcję uruchom narzędzie w prawym górnym rogu.
  8. Otwórz plik wyjściowy featurecount z prawego panelu i skopiuj dane do arkusza kalkulacyjnego. Oblicz zmianę krotności względem kontrolki, dzieląc liczbę zliczeń odczytu uzyskanych w teście przez liczbę liczb odczytu uzyskanych w kontrolce za pomocą polecenia =log (zmiana składania, 2).
    UWAGA: Uważa się, że zmiana krotności <-2,0 wskazuje na regulację w dół, a zmiana składania > 2,0 jest uważana za regulację w górę.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Zmiany morfologiczne
Inkubacja ludzkich komórek przewodowych trzustki w środowisku kwaśnym zmieniła morfologię komórek. Zlewający się i ciasno upakowany wzór komórek spowodował rozproszenie komórek w kwaśnych warunkach, a śmierć komórki staje się widoczna z czasem. W porównaniu z normalnymi komórkami zawierającymi podłoże, komórki przewodowe skurczyły się i zmniejszyły. Drastyczną zmianę śmiertelności zaobserwowano po 6 godzinach inkubacji. Po 24 godzinach liczba komórek zmniejszyła się, a komórki wy...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Metoda ta została opracowana w celu określenia wpływu warunków kwaśnych na nienowotworowe ludzkie komórki nabłonka przewodowego trzustki w powtórzeniach biologicznych. Zmiana pH pożywki spowodowała, że komórki znalazły się w stanie stresu i zaobserwowano zmianę morfologii. Komórki hodowano w pH 6,0, 6,5 lub 7,0 przez 24 godziny i monitorowano co godzinę w celu optymalizacji okresu inkubacji do dalszych eksperymentów. Zaobserwowaliśmy zmianę morfologii po 4 godzinach inkubacji, a śmiertelność komórek wzrosła po 6 godzinac...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Autorzy nie mają do zadeklarowania konfliktu interesów.

Podziękowania

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Renuka Goudshelwar jest wdzięczna DBT za zapewnienie jej stypendium. Renuka Goudshelwar dziękuje za pomoc otrzymaną od Wydziału Biochemii Uniwersytetu Osmania (Hyderabad) oraz do dr V. V. Ravikanth za jego wskazówki podczas analizy danych NGS. Dr M. Sasikala dziękuje za pomoc finansową otrzymaną od ICMR, Ministerstwa Zdrowia, Rządu Indii (Grant no-94/2020/5582/Proteomics-Adhoc/BMS).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Probówki wirówkowe z podziałką 15 ml (Falcon) Tarsons 500031służy do przygotowania próbek 
Probówki wirówkowe z podziałką 50 ml (Falcon)Tarsons 500041służy do przygotowania próbek 
Agilent 2100 BioanalizatorAgilentAgilent G2938AInstrment do oceny jakości RNA 
Antybiotyk Roztwór przeciwgrzybiczy 100x płynHimediaA002-100 mlStosowany w celu zapobiegania zanieczyszczeniu 
Skrobak do komórek z obrotowym ostrzemHimedia TCP223Skrobanie i zbieranie komórek
Inkubator CO2  New BrunswickGalaxy 170 SSłuży do inkubacji kultury 
Dulbecco's Modified Eagle Medium (DMEM), wysoka zawartość glukozy HimediaAL007S-500 mLPożywka używana do hodowli komórek
Sól fizjologiczna buforowana fosforanem Dulbecco 1xHimediaTL1006-500mLmycie komórek
Galaxy (https://usegalaxy.org)Narzędzieonline do przetwarzania danych NSG 
HI FBS (pochodzenie: Australia)Gibco10100-147Służy do wzrostu komórek 
Ludzka linia komórek nabłonka przewodowego trzustki (HPDEC / H6C7)Addex Bio T0018001Linia komórek przewodowych trzustki
Zestaw jonów Total RNA-Seq v2przygotowania próbek RNAThermo fisher scientific4475936
Laminarny przepływ
Na2HPO4 DiabasicSigma AldrichS3264-250GFosforan sodu Przygotowanie buforu 
NaH2PO4 MonobasicSigma AldrichS3139-250GPreparat buforowy fosforanu sodu 
Sekwencer 3376672 NovaSeq 6000Illumina 
Nunclon Delta Surface (płytka 6-dołkowa)Thermo Scientific140675Hodowla komórek 
Wirówka stołowa z chłodzeniemThermo Scientific Sorvall ST 8RSłuży do wirowania
RiboMinus Eukaryote System v2Thermo fisher scientificA15026zestaw do dezuplikacji rRNA 
Zestaw Rneasy Mini Qiagen74104Zestaw do izolacji całkowitego RNA z komórek 
TermocyklerEppendorfE950040025reakcji PCR 
Kąpiel wodna Equitron#8406MRozmrażanie próbki
Zestaw do powietrza

Bibliografia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Franck, C., et al. Advanced pancreatic ductal adenocarcinoma: Moving forward. Cancers (Basel). 12 (7), 1955(2020).
  2. Kong, X., Sun, T., Kong, F., Du, Y., Li, Z. Chronic pancreatitis and pancreatic cancer. Gastrointest Tumors. 1 (3), 123-134 (2014).
  3. Jura, N., Archer, H., Bar-Sagi, D. Chronic pancreatitis, pancreatic adenocarcinoma and the black box in-between. Cell Res. 15 (1), 72-77 (2005).
  4. Kloppel, G. Chronic pancreatitis, pseudotumors and other tumor-like lesions. Mod Pathol. 20 (Suppl 1), S113-S131 (2007).
  5. Schneider, A., Whitcomb, D. C. Hereditary pancreatitis: a model for inflammatory diseases of the pancreas. Best Pract Res Clin Gastroenterol. 16 (3), 347-363 (2002).
  6. Boedtkjer, E., Pedersen, S. F. The acidic tumor microenvironment as a driver of cancer. Annu Rev Physiol. 82, 103-126 (2020).
  7. Coussens, L. M., Werb, Z. Inflammation and cancer. Nature. 420 (6917), 860-867 (2002).
  8. Balkwill, F., Mantovani, A. Inflammation and cancer: back to Virchow. Lancet. 357 (9255), 539-345 (2001).
  9. Clevers, H. At the crossroads of inflammation and cancer. Cell. 118 (6), 671-674 (2004).
  10. Kato,, et al. Acidic extracellular microenvironment and cancer. Cancer Cell Int. 13 (1), 89(2013).
  11. Hegyi, P., Maléth, J., Venglovecz, V., Rakonczay, Z. Jr Pancreatic ductal bicarbonate secretion: challenge of the acinar acid load. Front Physiol. 2, 36(2011).
  12. Ibrahim-Hashim, A., Estrella, V. Acidosis and cancer: from mechanism to neutralization. Cancer Metastasis Rev. 38 (1-2), 149-155 (2019).
  13. Vakkila, J., Lotze, M. T. Inflammation and necrosis promote tumour growth. Nat Rev Immunol. 4 (8), 641-648 (2004).
  14. Zepecki, J. P., et al. Regulation of human glioma cell migration, tumor growth, and stemness gene expression using a Lck targeted inhibitor. Oncogene. 38 (10), 1734-1750 (2019).
  15. Kim, R. K., et al. Role of lymphocyte-specific protein tyrosine kinase (LCK) in the expansion of glioma-initiating cells by fractionated radiation. Biochem Biophys Res Commun. 402 (4), 631-636 (2010).
  16. Hu, Y., et al. Requirement of Src kinases Lyn, Hck and Fgr for BCR-ABL1-induced B-lymphoblastic leukemia but not chronic myeloid leukemia. Nat Genet. 36 (5), 453-461 (2004).
  17. Sharp, N. A., Luscombe, M. J., Clemens, M. J. Regulation of c-fgr proto-oncogene expression in Burkitt's lymphoma cells: effect of interferon treatment and relationship to EBV status and c-myc mRNA levels. Oncogene. 4 (8), 1043-1046 (1989).
  18. Hui, A. B., Lo, K. W., Yin, X. L., Poon, W. S., Ng, H. K. Detection of multiple gene amplifications in glioblastoma multiforme using array-based comparative genomic hybridization. Lab Invest. 81 (5), 717-723 (2001).
  19. Fang, Z. Y., et al. Proteomic identification and functional characterization of a novel ARF6 GTPase-activating protein, ACAP4. Mol Cell Proteomics. 5 (8), 1437-1449 (2006).
  20. Okabe, H., et al. Isolation of development and differentiation enhancing factor-like 1 (DDEFL1) as a drug target for hepatocellular carcinomas. Int J Oncol. 24 (1), 43-48 (2004).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

kom rki przewodowe trzustkikwa ne mikro rodowiskozmiana pHprzewlek e zapalenie trzustkisekwencjonowanie RNAanaliza ekspresji gen wproliferacja kom rekr nicowa ekspresja gen whodowla kom rkowa

Powiązane artykuły