Protokół ten zapewnia szczegółową, krok po kroku procedurę indukcji rozwarstwienia aorty piersiowej u myszy. W szczególności obejmuje dokładne obliczenie wymaganych dawek β-aminopropionitrylu i angiotensyny II, procedurę napełniania pompy osmotycznej oraz technikę implantacji pompy osmotycznej.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Mysi model rozwarstwienia aorty piersiowej wywołanego doustną infuzją β-aminopropionitrylu i podskórnej angiotensyny II
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Rozwarstwienie aorty piersiowej (TAD) jest wysoce śmiertelną chorobą sercowo-naczyniową, która nie jest skutecznie leczona. Replikacja zwierzęcych modeli patofizjologii TAD jest niezbędna do badania wewnętrznych mechanizmów TAD. Szeroko stosowany model TAD indukowany przez β-aminopropionitryl (BAPN, nieodwracalny i aktywny doustnie inhibitor oksydazy lizylowej) u myszy ma ograniczenie polegające na niespójnym wskaźniku sukcesu. Protokół ten szczegółowo opisuje zgłoszony zmodyfikowany mysi model TAD indukowany doustnym BAPN w połączeniu z podskórnym wlewem angiotensyny II (Ang II). Po czterech tygodniach podawania BAPN, a następnie 24 godzinach infuzji Ang II, niezawodnie indukowano model mysi o charakterystyce podobnej do ludzkiego TAD, a wskaźnik powodzenia budowy modelu TAD uległ znacznej poprawie. Doustny BAPN hamuje sieciowanie elastyny i kolagenu, co prowadzi do zniszczenia struktury ściany aorty i do pewnego stopnia indukuje rozszerzenie i rozwarstwienie aorty. Późniejsza indukcja Ang II dodatkowo nasila zwyrodnienie ściany aorty, sprzyjając w ten sposób występowaniu TAD. W związku z tym połączenie BAPN i Ang II stanowi wyrafinowane podejście do konstruowania mysiego modelu TAD, oferując cenne narzędzie do badania patogenezy i potencjalnych podejść terapeutycznych dla TAD.
Wprowadzenie
Rozwarstwienie aorty piersiowej (TAD) jest poważną chorobą aorty spowodowaną pęknięciem błony wewnętrznej z powodu krwawienia w ścianie aorty piersiowej, co skutkuje oddzieleniem warstw ściany aorty, przedostaniem się krwi do środka ściany aorty, tworząc fałszywe światło i powodując ucisk na prawdziwe światło 1,2,3. Badania epidemiologiczne sugerują, że częstość występowania TAD wynosi od 7 do 9 przypadków na 100 000 osób rocznie4. Obecnie uważa się, że patogeneza TAD jest spowodowana nieprawidłową budową i hemodynamiką ośrodka aortalnego, a czynniki t....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
Protokoły na zwierzętach zostały zatwierdzone przez Instytucjonalny Komitet ds. Opieki nad Zwierzętami i Ich Użytkowania Uniwersytetu Medycznego w Tiencinie (numer zatwierdzenia TMUaMEC 2022036). W badaniu wykorzystano trzytygodniowe samce myszy C57BL/6J. Szczegółowe informacje na temat stosowanych odczynników i sprzętu są wymienione w Tabeli materiałów.
1. Utrzymanie i grupowanie zwierząt
- Wychowuj myszy na standardowej karmie konserwacyjnej. Do tego badania wykorzystano trzytygodniowe myszy.
- Losowo przypisz myszy do grupy kontrolnej (kontrola), grupy doustnej BAPN (BAPN), grupy doustnego BAPN i grupy ....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
W badaniu wzięło udział łącznie 70 samców myszy C57BL/6J w wieku 3 tygodni, które randomly przypisano do czterech grup: kontrolnej (n = 10), BAPN (n = 20), BAPN + sól fizjologiczna (n = 20) oraz BAPN + Ang II (n = 20). W grupie BAPN u 11 z 20 myszy rozwinęła się rozwarstwienie aorty piersiowej (TAD) 28 dni po podaniu BAPN, przy czym 4 myszy padły w wyniku pęknięcia aorty. W grupie BAPN + sól fizjologiczna TAD rozwinęło się u 12 z 20 myszy, z 4 zgonami spowodowanymi pęknięciem. Co istotne,.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Ze względu na ograniczoną wiedzę na temat zagrażającego życiu rozwarstwienia aorty piersiowej (TAD), stworzenie stabilnych modeli zwierzęcych jest niezbędne do zbadania mechanizmów molekularnych leżących u podstaw wystąpienia i progresji TAD. β-aminopropionitryl (BAPN), inhibitor oksydazy lizylowej, jest szeroko stosowany w modelach TAD u gryzoni, ponieważ zaburza sieciowanie kolagenu i elastyny, osłabiając w ten sposób ścianę aorty i zwiększając jej podatność na naprężenia mechaniczne13. Jednak s.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Autorzy tego manuskryptu nie mają żadnych konfliktów interesów, o których mogliby zadeklarować.
Podziękowania
Prace te były wspierane przez grant z Narodowej Fundacji Nauk Przyrodniczych Chin (82370299) oraz Projekt Budowlany Kluczowej Dyscypliny Medycznej (Specjalizacji) w Tianjin (TJYXZDXK-060B).
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Sól fumaranu 3-aminopropionitrylu | Sigma-Aldrich | A3134 (wersja angielska) | |
| Waga analityczna | Radwag powiedział: | AS 220.R2 | |
| Maszyna anestezjologiczna | Szanghaj Renyi Biological Technology Co., Ltd. | Język MSS-3 | |
| Angiotensyna II | MCE (Certyfikat MCE) | HY-13948 (wersja angielska) | |
| C57BL/6J Samce myszy | GemPharmatech | N000013 | |
| Dieta chow | Sibeifu Beijing Biotechnology Co., Ltd | SPF-F02-002 (Certyfikat SPF-F02-002) | |
| Elektrotermiczny zbiornik na wodę o stałej temperaturze | Yiheng Technical Co., Sp. z o.o. | DK-8D | |
| Zestaw do barwienia EVG | Solarbio (Słoneczna Biologia) | Klasa G1590 | |
| Pryzmat GraphPad | Podkładka graficzna | Wersja 10.0.2 | |
| H& Zestaw do barwienia E | Serwis bio | Zobacz materiał G1076 | |
| Hemostat | Shinva Medical Instrument Co., Ltd. | ZH240RN | |
| Izofluran | RWD | Przekaźnik Przemysłowy R510-22-10 | |
| Mikroprobówka | Axygen Scientific, Inc. | MCT-150-C | |
| Kleszcz igłowy | Shinva Medical Instrument Co., Ltd. | ZM234R/RN/RB | |
| Pompa osmotyczna | Alzet | Zobacz materiał 1003D | |
| Paraformaldehyd | Serwis bio | G1101 powiedział: | |
| PBS, 1x | Serwis bio | Zobacz materiał G4202 | |
| Słony | Serwis bio | Telefon G4702 | |
| Skalpel | Shinva Medical Instrument Co., Ltd. | ZB084R/RN | |
| Nożyczek | Shinva Medical Instrument Co., Ltd. | ZC480RN/RB/RNj/RNh | |
| Mikroskop stereoskopowy | Księga Leica | Zobacz materiał EZ4 | |
| Szew | Jinhuan Zaopatrzenie Medyczne Co., Ltd. | Zobacz materiał F604 | |
| Pęseta | Shinva Medical Instrument Co., Ltd. | ZO022RB |
Bibliografia
- Erbel, R., et al. 2014 ESC guidelines on the diagnosis and treatment of aortic diseases:Document covering acute and chronic aortic diseases of the thoracic and abdominal aorta of the adult. Eur Heart J. 35 (41), 2873-2926 (2014).
- Bossone, E., Eagle, K. A.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
