To badanie opisuje zautomatyzowany proces produkcji [68Ga]Ga-3BP-3940 za pomocą syntezatora GAIA V2, do obrazowania PET białka aktywującego fibroblasty. Przedstawiono również wyniki badań kontroli jakości przeprowadzonych na trzech seriach testowych.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Automatyczne przygotowanie [68Ga]GA-3BP-3940 na module syntezy do obrazowania PET mikrośrodowiska guza
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Na module syntezy GAIA opracowano szybką, efektywną metodę automatycznego znakowania radioaktywnego galu-68 3BP-3940, sondy do obrazowania molekularnego ukierunkowanej na białko aktywujące fibroblasty do obrazowania mikrośrodowiska guza za pomocą pozytonowej tomografii emisyjnej. Warunki reakcji obejmowały bufor octanowy (stężenie końcowe: 0,1 M), metioninę jako środek przeciwradiolizujący (stężenie końcowe: 5,4 mg/ml) oraz 30 μg 3BP-3940, z ogrzewaniem przez 8 minut w temperaturze 98 °C. Końcowy etap oczyszczania na kartridżu C18 był konieczny do uzyskania znakowanego radioaktywnie produktu o wysokiej czystości. W przeciwieństwie do tego, wyprodukowany przez generator 68Ga był używany bezpośrednio, bez etapu zatężania na kartridżu kationowym. Wyprodukowanie trzech serii walidacyjnych potwierdziło wiarygodność metody, pozwalając na syntezę [68Ga]Ga-3BP-3940 w czasie 22,3 ± 0,6 min o wysokiej czystości radiochemicznej (RCP), oznaczonej zarówno metodą radio-HPLC (99,1% ± 0,1%), jak i radio-TLC (99,2% ± 0,1%). Średnia wydajność radiochemiczna, oparta na wartościach RCP mierzonych metodą radio-HPLC, wynosiła 74,4% ± 3,3%. Wykazano stabilność produktu znakowanego radioizotopem przez okres do 4 godzin po przygotowaniu. Protokół ten zapewnia niezawodną, szybką i wydajną metodologię przygotowania [68Ga]Ga-3BP-3940, którą można łatwo przenieść do warunków klinicznych.
Wprowadzenie
W ostatnich latach celowanie w mikrośrodowisko guza (TME) wzbudziło znaczne zainteresowanie w zastosowaniach diagnostycznych i terapeutycznych1. Obfitość typów komórek, cząsteczek sygnałowych i makrocząsteczek macierzy zewnątrzkomórkowej (ECM) w obrębie TME oferuje szeroki wachlarz potencjalnych celów molekularnych2. Wśród rezydentnych i naciekających komórek gospodarza, fibroblasty związane z nowotworem (CAFs) tworzą odrębną podgrupę fibroblastów w TME, fenotypowo różniącą się od fibroblastów prawidłowych. CAFs odgrywają kluczową rolę w progresji guza, przerzutowaniu, ucieczce immunologicznej i oporności na terapię dzię....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
UWAGA: Niniejszy protokół wiąże się z pracą z radioizotopami. Każda osoba przeprowadzająca tę procedurę musi przejść odpowiednie szkolenie z zakresu obchodzenia się z niezabezpieczonymi materiałami promieniotwórczymi i uzyskać zgodę inspektora ochrony radiologicznej w swojej instytucji. Automatyczny syntezator powinien zostać umieszczony w wyznaczonej osłoniętej celi gorącej. Wszelkie procedury manualne z wykorzystaniem materiałów promieniotwórczych powinny być również wykonywane w osłoniętej celi gorącej lub za odpowiednim ekranowaniem radiologicznym.
1. Przygotowanie odczynników
UWAGA: Odczynniki....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
Proces syntezy opracowany na module GAIA umożliwia szybkie znakowanie radioizotopem 68Ga związku 3BP-3940 w czasie 21-22 min. Protokół ten został zaprojektowany do pracy z generatorem 68Ge/68Ga GALLIAD klasy farmaceutycznej, który wytwarza 1,1 mL eluatu 68Ga w 0,1 M HCl. Objętość i molalność buforu reakcyjnego zostały precyzyjnie dostosowane do tej ilości kwasu, aby uzyskać pH reakcji w zakresie od 3,5 do 4, co jest niezbędne dla optymalnego znakowania radioaktywnego
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
W niniejszej pracy przedstawiono zgodny z GMP protokół automatycznego przygotowania do syntezy [68Ga]Ga-3BP-3940 przy użyciu modułu GAIA i generatora GALIAD. Metoda ta została zaadaptowana z protokołów stosowanych w naszym centrum do znakowania radioaktywnego galu-68 wektorów, takich jak ligandy PSMA44 i inne inhibitory FAP43,46 do klinicznego obrazowania PET, z niewielkimi modyfikacjami.
Proces produ.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Autorzy nie mają żadnych partnerstw komercyjnych ani źródeł finansowania, które skutkowałyby rzeczywistym lub domniemanym konfliktem interesów związanym z tą pracą.
Podziękowania
Autorzy dziękują Yasmine Soualy, Stéphane Renaud i Élodie Gaven za pomoc w przygotowaniu reakcji radioznakowania przedstawionych w tym manuskrypcie.
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Filtry 0,2 i mikro | VWR | 514-0515 | Do filtracji roztworów buforowych i przeciwutleniaczy oraz końcowego produktu znakowania radioaktywnego |
| Acetonitryl do HPLC | Sigma Aldrich | 34851-2.5L | Do kontroli czystości radiochemicznej HPLC |
| Octan amonu | Sigma Aldrich | 238074 | Do przygotowania jednej z faz ruchomych do kontroli TLC |
| Kolumna C18 do HPLC | VWR | EQV-3C18-1503 | Do kontroli czystości radiochemicznej metodą HPLC |
| Kalibrowany kalibrator dawki (CRC25) | Capintec-Do | pomiaru radioaktywności produktu końcowego i różnych składników modułu po syntezie | |
| Roztwór buforowy cytrynianu, pH 4 | 258585000 | Thermofisher Faza ruchoma do kontroli TLC | |
| Probówka Eppendorfa 5 ml Biopur | Sigma Aldrich | EP0030119479 | Do przygotowania roztworów buforowych i przeciwutleniaczy |
| Przedłużacz (30 cm) | Vygon | 1159.03 | Do podłączenia generatora do zestawu przewodów |
| Generator galu-68 | IRE Elit-Do | wytwarzania in situ [68Ga]chlorek galu | |
| Licznik gamma (Hidex AMG) | Hidex-Do | oceny okresu półtrwania i czystości radiochemicznej | |
| Stacja HPLC | Shimadzu | - | Do kontroli czystości radiochemicznej metodą HPLC |
| Płytki iTLC-SG | Agilent | SGI0001 | Do kontroli czystości radiochemicznej |
| L-metioniny | metodą | A1340 | Do przygotowania roztworu przeciwutleniacza |
| Adapter męski/męski | Vygon | 893.00 | Do podłączenia generatora do zestawu przewodów |
| Metanol | Sigma Aldrich | 320390-1L | Do przygotowania jednej z faz ruchomych do kontroli TLC |
| Igły (21G, Sterican) | B Braun | 4657543B | Do przenoszenia roztworu przed znakowaniem radioaktywnym |
| Papier pH | VWR | 85409.600 | Do badania pH produktu znakowanego radioizotopem |
| Pipeta 1000 µ L (Gilson PIPETMAN) | Fisher Scientific | 12346132-1000 | Do precyzyjnego pomiaru i przenoszenia cieczy |
| Pipeta 200 µ L (Gilson PIPETMAN) | Fisher Scientific | 12326132-200 | Do precyzyjnego pomiaru i przenoszenia cieczy |
| Końcówki do pipet, 100-1000 μ L | Charles River | D1000IW | Do precyzyjnego pomiaru i przenoszenia cieczy |
| Końcówki do pipet, 2-200 μ L | Charles River | D200IW | Do precyzyjnego pomiaru i transferu cieczy |
| Radiochromatograf | Elysia-Raytest-Do | kontroli czystości radiochemicznej TLC | |
| Radiosensor do HPLC | Elysia-Raytest-Do | kontroli czystości radiochemicznej HPLC | |
| Zestaw odczynników | ABX | RT-101 | Dostarcza etanol 60%, NaCl 0,9%, worek WFI, wkład C18, 0,2 i mikro; Filtr końcowy, igły napowietrzające, igła końcowa i fiolka na odpady |
| Pojemnik ekranowany | LemerPax | Do tłumienia promieniowania produktu znakowanego radioizotopowo | |
| Jednorazowa szpatułka z tworzywa sztucznego | Corning | 3005 | Do przygotowania odczynników |
| Octan sodu trójwodny EMPROVE | Sigma Aldrich | 1.28204 | Do przygotowania buforu reakcyjnego |
| Sterylnie zamknięte fiolki (typ szklany 1) | Curium | TC-ELU-5 | Do końcowego kondycjonowania roztworów buforowych, przeciwutleniaczy i znakowania radioaktywnego |
| Sterylny zestaw przewodów | ABX | RT-01-H | Do automatycznej syntezy [68Ga]Ga-3BP-3940 |
| Sterylna woda do nawadniania | B Braun | 0082479E | Do przygotowania jednej z faz ruchomych do kontroli TLC |
| Moduł syntezy (GAIA) | Elysia-Raytest | - | Do automatycznej syntezy strzykawki [68Ga]Ga-3BP-3940 |
| (1 ml, niska objętość martwa) | B Braun | 9166017V | Do peptydu w kondycjonowaniu buforu i dodawaniu metioniny w NaCl 0,9% |
| Strzykawki (10 ml) | Becton Dickinson | 309649 | Do metioniny w NaCl 0,9% i kondycjonujące |
| Strzykawki (3 ml) | Becton Dickinson | 309658 | Do kondycjonowania |
| metioniny i etanolu 60%Zbiorniki migracyjne TLC | Fisher Scientific | 50-212-281 | Do kontroli TLC czystości radiochemicznej |
| Kwas trifluorooctowy (odpowiedni do HPLC) | Sigma Aldrich | 302031-100ML | Do kontroli czystości radiochemicznej HPLC |
| Rurki do licznika gamma | - | Do przygotowania testów półtrwania i czystości radiochemicznej | |
| Kąpiel | ultradźwiękowa Selecta | 3000683 | Do sonikacji przygotowane roztwory |
| Cząsteczka wektorowa (3BP-3940) | MedChemExpress | HY-P10131 | Cząsteczka wektora do znakowania radioizotopowego |
| Fiolka do HPLC z wkładką szklaną | Sigma Aldrich | 29385-u i SU860066 | Do kontroli czystości radiochemicznej metodą HPLC |
| Mieszalnik wirowy | VWR | 444-5900P | Do mieszania przygotowanych roztworów |
| Woda do HPLC | Sigma Aldrich | 34877-2.5L-M | Do kontroli czystości radiochemicznej metodą HPLC |
| Woda do wstrzykiwań, kolby 10 ml | Aguettan | 34009 370 641 0 1 | Do roztworów preparat |
Bibliografia
- Xiao, Y., Yu, D. Tumor microenvironment as a therapeutic target in cancer. Pharmacol Ther. 221, 107753(2021).
- Zhang, L., et al. Targets of tumor microenvironment for potential drug development. MedComm Oncol. 3 (1), e68(2024).
- Fouillet, J., Torch....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
![Automatyczne przygotowanie [68Ga]GA-3BP-3940 na module syntezy do obrazowania PET mikrośrodowiska guza](/_next/image?url=https%3A%2F%2Fcloudfront.jove.com%2FCDNSource%2Fteasers%2F68356.jpg&w=3840&q=75)