Artykuł metodologiczny

Szybka identyfikacja Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis i Ureaplasma urealyticum za pomocą testu amplifikacji RNA w przepływie bocznym

697 wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/68413

⸱

20 czerwca 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1The First People's Hospital of Foshan

W tym artykule

Podsumowanie

Tutaj prezentujemy protokół demonstrujący test amplifikacji RNA z przepływem bocznym i oceniamy skuteczność w szybkim wykrywaniu Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis i Ureaplasmaurealyticum.

Streszczenie

Neisseria gonorrhoeae (NG), Chlamydia trachomatis (CT) i Ureaplasma urealyticum (UU) są powszechnymi patogenami związanymi z chorobami przenoszonymi drogą płciową (STD). NG jest czynnikiem wywołującym rzeżączkę, która może powodować różne zaburzenia układu moczowo-płciowego, w tym zapalenie najądrza, zapalenie gruczołu krokowego, zapalenie szyjki macicy i niepłodność. CT jest mikroorganizmem odpowiedzialnym za nierzeżączkowe zapalenie cewki moczowej i zapalenie miednicy mniejszej. UU jest związane z nierzeżączkowym zapaleniem cewki moczowej, zapaleniem szyjki macicy, zapaleniem gruczołu krokowego i niepłodnością. Obecne technologie molekularne do analizy NG, CT i UU są często złożone i czasochłonne. Szybkie testy molekularne pod kątem tych patogenów mogą ułatwić wczesną diagnostykę chorób przenoszonych drogą płciową. Test amplifikacji RNA w przepływie bocznym (RGT) to metoda, która nie wymaga ekstrakcji kwasów nukleinowych. W tym procesie próbki są poddawane lizie w celu uwolnienia fragmentów kwasu nukleinowego, które są następnie amplifikowane poprzez odwrotną transkrypcję i transkrypcję. Amplifikowany produkt RNA jest rozpoznawany i wychwytywany przez określone sondy, tworząc kompleks sondy i złotej sondy do wykrywania RNA, który można unieruchomić na membranie nitrocelulozowej poprzez przepływ boczny w celu wytworzenia widocznych pasm. Cała procedura trwa mniej niż 1 h. Celem tego badania była ocena skuteczności RGT w szybkim wykrywaniu NG, CT i UU. Łącznie uwzględniono 1 416 próbek. Konsystencja NG, CT i UU analizowanych za pomocą RGT w porównaniu z metodą sondowania fluorescencyjnego reakcji łańcuchowej polimerazy (PCR) wynosiła odpowiednio 99,03% (307/310), 99,38% (159/160) i 99,02% (303/306). Spójność NG, CT i UU podczas analizy za pomocą RGT w porównaniu z sekwencjonowaniem genów wynosiła odpowiednio 99,17% (238/240), 98,95% (188/190) i 98,30% (173/176). W porównaniu z metodą hodowli izolacji patogenów, wskaźniki wykrywalności dla testów NG, CT i UU wynosiły 100,00% (9/9, 17/17, 8/8). Wysoka czułość i swoistość, łatwość użycia i zmniejszone wymagania czasowe sprawiają, że test ten jest idealny do szybkiego i dokładnego wykrywania NG, CT i UU.

Wprowadzenie

Infekcje przenoszone drogą płciową (STI) stanowią poważne globalne wyzwanie dla zdrowia publicznego, prowadząc do poważnych zaburzeń i śmiertelności narządów płciowych i reprodukcyjnych1. Neisseria gonorrhoeae (NG) jest czynnikiem wywołującym rzeżączkę, z około 87 milionami nowych przypadków zgłaszanych rocznie na całym świecie2. Patogen ten przede wszystkim wywołuje stan zapalny poprzez inwazję nabłonka walcowatego dróg moczowo-płciowych3. Chlamydia trachomatis (CT), inny mikroorganizm, jest odpowiedzialny za nierzeżączkowe zapalenie cewki moczowej i infekcje miednicy, odpowiadając za około 130 milionów nowych przypadków każdego roku4. Ureaplasma urealyticum (UU), najprostsza i najmniejsza samoreplikująca się komórka, łatwo atakuje uszkodzoną tkankę szyjki macicy i jest związana z nierzeżączkowym zapaleniem cewki moczowej, zapaleniem szyjki macicy, zapaleniem gruczołu krokowego i niepłodnością5. Wszystkie te infekcje są często bezobjawowe zarówno u kobiet, jak i mężczyzn, ale mogą prowadzić do poważnych powikłań, jeśli nie są szybko leczone. Infekcje matki mogą prowadzić do poważnych niekorzystnych skutków ciąży, w tym urodzenia martwego dziecka, poronienia, przedwczesnego porodu i bezpośredniego zakażenia płodu6. Dlatego opracowanie szybkiej, czułej, specyficznej i przyjaznej dla użytkownika metody wykrywania patogenów ma ogromne znaczenie.

Szybkie i dokładne wykrywanie patogenów ma kluczowe znaczenie dla skutecznej diagnozy i leczenia choroby. Tradycyjne metody hodowli, które wymagają izolacji, hodowli i identyfikacji patogenów, mają istotne wady, w tym są czasochłonne i mają niską czułość. Chociaż sekwencjonowanie genów może pochwalić się wysoką dokładnością, wymaga złożonego środowiska i sprzętu, co czyni je kosztownymi, a także czasochłonnymi. Konwencjonalne technologie molekularne do analizy NG, CT i UU są powszechnie akceptowane; Jednak metody te są często skomplikowane i czasochłonne, wymagają zaawansowanego oprzyrządowania, przeszkolonych techników i wydłużonego czasu przetwarzania. W związku z tym istnieje pilna potrzeba opracowania prostej i niezawodnej metody diagnostyki molekularnej, która pozwoliłaby przezwyciężyć ograniczenia konwencjonalnych metod. Test przepływu bocznego amplifikacji RNA (RGT) oferuje szybką, czułą i specyficzną alternatywę bez konieczności stosowania skomplikowanych procedur7,8. W tej metodzie próbki są bezpośrednio poddawane lizie w celu uwolnienia fragmentów kwasu nukleinowego bez ekstrakcji kwasów nukleinowych, a fragmenty te są amplifikowane poprzez odwrotną transkrypcję i transkrypcję. Amplifikowany produkt RNA jest następnie rozpoznawany i wychwytywany przez określone sondy, tworząc kompleks sondy i złotej sondy do wykrywania RNA, który można unieruchomić na membranie nitrocelulozowej poprzez przepływ boczny w celu wytworzenia widocznych pasm9. Cały proces trwa mniej niż 1 godzinę, dzięki czemu doskonale nadaje się do awaryjnych testów laboratoryjnych.

W tym badaniu zrekrutowaliśmy 1 416 próbek, aby ocenić użycie RGT do wykrywania NG, CT i UU. Próbki analizowano przy użyciu metod RGT, sondowania fluorescencyjnego PCR, sekwencjonowania genów i hodowli izolacji patogenów. Wyniki wskazały, że metoda RGT jest dokładna i spójna z konwencjonalnymi metodami diagnostycznymi. Podsumowując, wysoka czułość i swoistość, łatwość użycia i zmniejszone wymagania czasowe sprawiają, że test ten jest idealny do szybkiego i dokładnego wykrywania NG, CT i UU, co sugeruje jego obiecujące zastosowanie we wstępnej diagnostyce medycznej chorób przenoszonych drogą płciową.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

To badanie zostało przeprowadzone zgodnie z wytycznymi etycznymi i zgodą udzieloną przez Institutional Review Board of the First People's Hospital of Foshan, Guangdong Province, China (Dokument Oceny Etycznej No. LR (2025) 136). Łącznie 1416 próbek wymazów z narządów płciowych (716 od kobiet, 700 od mężczyzn) pobrano prospektywnie od osób klinicznie podejrzanych o choroby przenoszone drogą płciową, które nie przeszły antybiotykoterapii w ciągu ostatnich 14 dni (Tabela uzupełniająca 1). Dla każdego uczestnika sparowane wymazy uzyskano jednocześnie i analizowano równolegle: jeden metodą testową (RGT), a drugi metodą referencyjną (odpowiednio sondowanie fluorescencyjne PCR, sekwencjonowanie genów i hodowla izolująca patogeny). Zgodność między metodami określono ilościowo za pomocą współczynnika Kappa Cohena (κ), przy czym interpretacja została oparta na kryteriach Landisa i Kocha.

UWAGA: Protokół testu dla CT i UU przebiega identycznie jak te opisane dla NG, z modyfikacjami ograniczonymi do odczynników specyficznych dla patogenu. Szczegółowe formuły odczynników znajdują się w kroku 2.1 (Tabela uzupełniająca 2, Tabela uzupełniająca 3 i Tabela uzupełniająca 4).

1. Pobieranie próbek

  1. Odpowiedni typ próbki: Zbierz wymazy z narządów płciowych (wymaz z szyjki macicy dla kobiet, wymaz z cewki moczowej dla mężczyzn).
  2. Pobieranie próbek
    1. Włóż wymaz z narządów płciowych do męskiego ujścia cewki moczowej na 2-3 cm lub do żeńskiego otworu szyjki macicy na około 1-2 cm.
    2. Obróć raz i przytrzymaj przez 10 sekund.
    3. Wyjmij wacik i włóż go do probówki zawierającej 1 ml soli fizjologicznej.
    4. Oderwij i wyrzuć końcówkę wacika, a następnie dokręć nakrętkę probówki.
    5. Zapisz czas pobierania i niezwłocznie przeprowadź test.
  3. Przechowywanie i transport próbek
    1. Próbki należy transportować w temperaturze pokojowej (RT) w ciągu 4 godzin lub w temperaturze 2–8 °C z okładem z lodu w ciągu 24 godzin.
    2. Pozostałe granulki komórkowe przetworzonych próbek należy przechowywać w temperaturze -20 °C przez 3 miesiące lub w temperaturze -80 °C przez okres do 6 miesięcy, jeśli testy nie mogą być przeprowadzone w odpowiednim czasie.

2. Przygotowanie

  1. Odczynniki
    1. Odczynniki do oznaczania kwasów nukleinowych NG znajdują się w tabeli uzupełniającej 2.
    2. Aby zapoznać się z odczynnikami do oznaczania kwasów nukleinowych CT, patrz Tabela uzupełniająca 3.
    3. Aby zapoznać się z odczynnikami do oznaczania kwasów nukleinowych UU, patrz tabela uzupełniająca 4.
    4. Przechowywanie: Wszystkie odczynniki należy przechowywać w temperaturze od -40 °C do -15 °C, a karty detekcyjne w temperaturze od 2 °C do 30 °C.
      UWAGA: Bufor wzmacniający i roztwór detekcyjny powinny być zrównoważone do RT przed użyciem, w oparciu o dzienne wymagania dotyczące wykrywania. Po osiągnięciu temperatury pokojowej należy je przechowywać w temperaturze 4 °C i można je wykorzystać do następnego wykrycia. Unikaj wielokrotnego zamrażania i rozmrażania. Enzym amplifikacyjny powinien być przechowywany w temperaturze -20 °C, z wyjątkiem okresu trwania procesu doświadczalnego. Wzrost temperatury przechowywania może prowadzić do spadku lub utraty aktywności enzymów.
  2. Wymagania dotyczące środowiska eksperymentalnego
    1. Przeprowadź eksperyment w czterech fizycznie oddzielonych strefach:
      1. Obszar przygotowania odczynnika: Utrzymywać temperaturę 22 ± 1°C przy dodatnim ciśnieniu powietrza (wysokowydajny przepływ powietrza ≥ filtrem cząstek stałych (HEPA) 0,3 m/s). Wstępnie zakonserwowane odczynniki należy przechowywać w szafkach sterylizowanych promieniami UV.
      2. Obszar przygotowania próbki: Całą obsługę próbki należy wykonywać w komorze bezpieczeństwa biologicznego klasy II wstępnie poddanej działaniu 70% etanolu.
      3. Obszar wzmocnienia: Obsługuj termocyklery na stołach antywibracyjnych.
      4. Obszar analizy produktu: Użyj ławki sterylizowanej promieniami UV (30 minut ekspozycji przed/po użyciu).
    2. Reguluj personel i przepływ powietrza w każdej sekcji, aby zapobiec zanieczyszczeniu krzyżowemu w następujący sposób:
      1. Utrzymuj jednokierunkowy przepływ powietrza ze stref przygotowania odczynnika do analizy produktu.
      2. Zapewnić podciśnienie w obszarze przygotowania próbki (-5 Pa w stosunku do sąsiednich stref).
      3. Ogranicz przemieszczanie się personelu; odkaż rękawice 75% etanolem przed przejściem do strefy.
      4. Zamontuj drzwi śluzy powietrznej z systemami blokującymi (minimum 30 s opóźnienia między otwarciami).
    3. Używaj materiałów eksploatacyjnych specyficznych dla danej strefy (np. probówek wirówek, końcówek do pipet itp.) i wyrzucaj materiały eksploatacyjne po jednorazowym użyciu.
    4. Utrzymuj czystość i kontrolę jakości:
      1. Codziennie czyść ławki 10% podchlorynem sodu, a następnie 75% etanolem lub wodą destylowaną.
      2. Walidacja sterylności materiałów eksploatacyjnych za pomocą testów endotoksyn (test lizatu amebocytów Limulus, <0,25 EU/ml).
      3. Monitoruj jakość powietrza co tydzień za pomocą płytek osadowych (agar tryptyczny sojowy [TSA], ≤5 jednostka tworząca kolonie (CFU)/płytka po 4 godzinach ekspozycji).
  3. Kwalifikacje personelu
    1. Posiadać certyfikaty lub kwalifikacje związane z technologią PCR, aby zapewnić dokładność i wiarygodność tego eksperymentu.

3. Lizuj komórki w celu ekstrakcji RNA

  1. Przetwarzanie próbek
    1. Obracaj probówkę do pobierania próbek z prędkością 2,600 razy/min przez 10 sekund, aby usunąć komórki z główki wacika do roztworu.
    2. Przenieść 1 ml roztworu do probówki mikrowirówkowej o pojemności 1,5 ml za pomocą skalibrowanej pipety ustawionej na 1000 μl.
    3. Wirować w temperaturze 12 000 × g przez 2 minuty w temperaturze 25 °C.
    4. Odessać 950 μl supernatantu bez naruszania osadu. Zawiesić granulki w 25 μl pozostałego roztworu, pipetując 10 razy w górę i w dół za pomocą pipety kalibrowanej o pojemności 200 μl, ustawionej na 50 μl.
  2. Liza próbek i materiałów do kontroli jakości
    1. Wstępnie zrównoważyć bufor do lizy komórek i kontrolę ujemną w temperaturze 25 °C przez 15 minut.
    2. Odwirować materiały do kontroli jakości w temperaturze 1000 × g przez 10 s w temperaturze 25 °C, aby upewnić się, że wszystkie proszki osiądą na dnie probówki.
    3. Dodać 30 μl buforu do lizy do materiałów kontroli jakości i 20 μl do próbek.
    4. Inkubować przez 10 minut w temperaturze 25 °C.
      UWAGA: Podczas korzystania z buforu do lizy komórek konieczne jest jego dokładne wymieszanie. Wymieszać pipetując 15 razy (końcówka 200 μl) i dodać zarówno cząstki, jak i ciecz do osadu. Przeprowadzić kontrolę pozytywną w komorze bezpieczeństwa biologicznego klasy II poddanej działaniu promieniowania UV, a następnie odkazić podchlorynem sodu o stężeniu 10%.

4. Amplifikacja izotermiczna RNA

  1. Wstępna równowaga bufora wzmacniającego
    1. Rozmrozić bufor wzmacniający i zrównoważyć w temperaturze 25 °C ± 1 °C przez 15 minut.
  2. Konfiguracja sterowania
    1. Uwzględnij zarówno kontrolę pozytywną, jak i negatywną w każdej serii doświadczalnej.
  3. Etykietowanie tub
    1. Oznacz lampy wzmacniające zgodnie z liczbą próbek.
  4. Montaż reakcyjny
    1. Odpipetować 17 μl buforu amplifikacyjnego do każdej probówki za pomocą skalibrowanej pipety o pojemności 20 μl. Dodać 2 μl próbki lub lizatu kontrolnego bezpośrednio do kropli buforowej.
      UWAGA: Upewnij się, że lizat dostaje się do buforu bez kontaktu ze ścianką probówki (w razie potrzeby krótko odwirować przy 500 × g przez 5 s). Natychmiast zakryj probówki, aby zapobiec zanieczyszczeniu aerozolem.
  5. Aktywacja termiczna
    1. Inkubować probówki w podgrzanym termocyklerze w następującym programie:
      Krok 1: 95 °C przez 2 minuty (denaturacja)
      Krok 2: 42 °C przez 2 minuty (wyżarzanie podkładu).
  6. Amplifikacja enzymatyczna
    1. Dodać 1 μl enzymu amplifikacyjnego do każdej probówki i wymieszać, przesuwając probówkę 5 razy, a następnie krótko odwirować (500 × g przez 5 s). Natychmiast przenieść probówki do drugiego nagrzanego termocyklera w temperaturze 42 °C na 45 minut.
      UWAGA: Aby uniknąć wahań temperatury, należy używać oddzielnych inkubatorów, jednego ustawionego na 95 °C, a drugiego na 42 °C. W przypadku serii wielopróbkowych należy utrzymywać pozostałe probówki amplifikacyjne w temperaturze 42 °C, dodając enzym amplifikacyjny do ostatniej probówki amplifikacyjnej.

5. Test przepływu bocznego

  1. Wstępna równowaga roztworu detekcyjnego
    1. Przenieść roztwór detekcyjny do inkubatora w temperaturze 42 °C na 10 minut.
  2. homogenizacja
    1. Wirować roztwór detekcyjny z prędkością 2,600 razy/min przez 15 s, aż kolor będzie jednolity.
  3. Utrzymanie temperatury
    1. Roztwór detekcyjny należy przechowywać w temperaturze 25 °C ± 2 °C przez ≤30 minut przed użyciem.
  4. Inicjacja reakcji
    1. Dodać 30 μl roztworu detekcyjnego do każdej probówki wzmacniającej za pomocą skalibrowanej pipety o pojemności 20-200 μl.
      UWAGA: Końcówka pipety musi stykać się ze ścianką rurki pod kątem 45° podczas dozowania, aby zapobiec tworzeniu się pęcherzyków.
  5. krzyżowanie
    1. Wymieszać roztwór, pipetując pipetowanie w górę i w dół 5 razy, a następnie inkubować w podgrzewanym inkubatorze w temperaturze 53 °C przez 10 minut.
  6. Przygotowanie przyrządu do oznaczania
    1. Wyjmij karty detekcyjne z woreczków foliowych.
      UWAGA: Unikaj dotykania sample strefa aplikacji.
  7. Przykładowa aplikacja
    1. Przenieś całą mieszaninę do portu próbki na karcie detekcyjnej za pomocą pipety o pojemności 20-200 μl.
    2. Natychmiast umieścić kartę detekcji w inkubatorze o temperaturze 42 °C na 15 minut.

6. Analiza wyników

  1. Kontrolowane środowisko do odczytu
    1. Podczas interpretacji wizualnej należy utrzymywać karty detekcji w podgrzewanym inkubatorze w temperaturze 53 °C, aby ustabilizować intensywność sygnału.
  2. Protokół interpretacji wizualnej
    1. Odczytaj wyniki testu bezpośrednio poprzez oględziny pasków na kartach detekcji w ciągu 10-20 min.
      UWAGA: Wynik staje się nieważny po 20 minutach.
  3. Matryca interpretacji wyników RGT znajduje się w tabeli uzupełniającej 5.
    UWAGA: Wizualna interpretacja wyniku jest pokazana w Rysunek 1.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Zgodność metod RGT i PCR z sondami fluorescencyjnymi
W sumie przeanalizowano 310 próbek pod kątem obecności NG, w tym 161 próbek od kobiet i 149 od mężczyzn. Współczynnik zgodności wyników dodatnich wyniósł 98,78% (95% CI: 93,39%-99,97%), natomiast współczynnik zgodności wyników ujemnych wyniósł 99,12% (95% CI: 96,87%-99,89%). Ogólny współczynnik zgodności wyniósł 99,03% (95% CI: 97,20%-99,80%). Wartość spójności Kappa wyniosła 0,975 (95% CI: 0,947-1,003,

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

W tym badaniu RGT wykorzystano do wykrywania patogenów przenoszonych drogą płciową, w tym NG, CT i UU. Test RGT przeprowadzony zgodnie z rygorystycznymi protokołami operacyjnymi wykazał silną zgodność z uznanymi metodami diagnostycznymi, takimi jak sondowanie fluorescencyjne PCR, sekwencjonowanie genów i techniki izolacji patogenów. Czułość i swoistość testu RGT były porównywalne lub przewyższały czułość i swoistość wcześniej zgłaszanych metodologii, o czym świadczą analizy porównawcze z ustalonymi wartościami odniesieni...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Autorzy nie mają do ujawnienia żadnych konfliktów interesów.

Podziękowania

Dziękujemy Wuhan Zhongzhi Bio-technologies Inc. za odczynniki i wskazówki techniczne oferowane w tym badaniu.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
10% (w/v)  podchloryn soduPreparat w laboratorium.Przygotowanie w laboratorium.Rozcieńczony roztwór wybielacza do odkażania i inaktywacji patogenów na sprzęcie lub powierzchniach.
75% (v/v) etanolAnte Food Co., Ltd (Anhui, Chiny)http://www.antegroup.com/product_detail_cn/id/81.htmlWodny roztwór etanolu stosowany do dezynfekcji powierzchni
Pipeta o regulowanej objętości (0,5 cala); 10 μ L)DLAB Scientific Co., Sp. z o.o.7010101004Jednokanałowa mikropipeta do precyzyjnej obsługi objętości w skali mikrolitrów.
Pipeta o regulowanej objętości (100– 1000 μ L)DLAB Scientific Co., Sp. z o.o.7010101014Pipeta jednokanałowa skalibrowana do obsługi dużych objętości cieczy.
Pipeta o regulowanej objętości (10– 100 μ L)DLAB Scientific Co., Sp. z o.o.7010101008Pipeta jednokanałowa zoptymalizowana pod kątem objętości pośrednich, powszechnie stosowana w protokołach biologii molekularnej.
Pipeta o regulowanej objętości (20– 200 μ L)DLAB Scientific Co., Sp. z o.o.7010101009Pipeta jednokanałowa do transferów o średniej objętości, odpowiednia do precyzyjnego dozowania odczynników.
Szafa bezpieczeństwa biologicznego (HF Safe-1200)HealForce Bio-Meditech Holdings Limited (Hongkong, Chiny)HF Safe-1200Szafa bezpieczeństwa biologicznego klasy II zapewniająca ochronę personelu, próbki i środowiska podczas pracy z drobnoustrojami chorobotwórczymi lub kulturami komórkowymi.
Probówki wirówkoweHaozhi Medical Devices Co., Ltd. (Guangzhou, Chiny)Guangzhou Yuexiu Zgłoszenie urządzenia medycznego nr 20210414Do ekstrakcji kwasów nukleinowych, granulowania komórek i innych procedur laboratoryjnych.
Test kwasów nukleinowych Chamydia trachomatis (CT) (test amplifikacji RNA - przepływ boczny)Wuhan Zhongzhi Biotechnologies INC. (Wuhan, Chiny)A.10.309-STD-RG-002Do jakościowego wykrywania RNA kwasu nukleinowego Chamydia trachomatis w próbkach wymazów z narządów płciowych i dróg moczowych.
Inkubator CO2Thermo Fisher Scientific (Asheville, USA) LLCSN:Stosowany do hodowli komórkowych, zapewniający stabilne środowisko o kontrolowanej temperaturze (37° C), wilgotność i stężenie CO2 (zwykle 5%), aby zapewnić optymalny wzrost komórek.
Tabliczka hodowlana Corning Incorporated (Corning, USA)50 mm i ostry; 9 mmDo przylegającej hodowli komórkowej i ekspansji.
Zestaw do wykrywania kwasu nukleinowego do Chamydia trachomatis (CT) (sondowanie fluorescencyjne PCR)Fosun Diagnostics (Szanghaj, Chiny) Co., LtdChiński certyfikat rejestracji wyrobu medycznego nr 20143402234Do jakościowego wykrywania kwasu nukleinowego Chamydia trachomatis w próbkach wymazów z narządów płciowych i dróg moczowych.
Zestaw do wykrywania kwasu nukleinowego do Neisseria gonorrhoeae (NG) (sondowanie fluorescencyjne PCR)Fosun Diagnostics (Shanghai, Chiny) Co., LtdChiński certyfikat rejestracji wyrobu medycznego nr 20173401080Do jakościowego wykrywania kwasu nukleinowego Neisseria gonorrhoeae w próbkach wymazów z narządów płciowych i dróg moczowych.
Zestaw do wykrywania kwasu nukleinowego do Ureaplasma Urealyticum (UU) (sondowanie fluorescencyjne PCR)Fosun Diagnostics (Shanghai, Chiny) Co., LtdChiński certyfikat rejestracji wyrobu medycznego nr 20173400536Do jakościowego wykrywania kwasu nukleinowego Ureaplasma Urealyticum w próbkach wymazów z narządów płciowych i dróg moczowych.
DMEM mediumThermo Fisher Scientific Inc. (Waltham, USA) 11965092Do hodowli Chlamydia trachomatis.
Końcówki do pipet z filtrem (10 μ L)Guangzhou Surbiopure Biotechnology Co., Ltd (Guangzhou, Chiny)TF-10-BXLDo precyzyjnego pipetowania w eksperymentach.
Końcówki do pipet z filtrem (200 μ L)Guangzhou Surbiopure Biotechnology Co., Ltd (Guangzhou, Chiny)TF-200-BXLDo precyzyjnego pipetowania w eksperymentach.
Wymaz z narządów płciowychHaozhi Medical Devices Co., Ltd. (Guangzhou, Chiny)Hz112Sterylne waciki z bawełnianą końcówką do pobierania próbek klinicznych z powierzchni błony śluzowej narządów płciowych.
Gibco Płodowa surowica bydlęca (FBS)Thermo Fisher Scientific Inc. (Waltham, USA)10270106Do hodowli Chlamydia trachomatis.
Szkiełka szklaneHaozhi Medical Devices Co., Ltd. (Guangzhou, Chiny)Guangzhou Yuexiu Medical Device Filing No. 20210414Standardowe szkiełka szklane z powłoką zapobiegającą blaknięciu do przygotowywania rozmazów komórkowych lub skrawków tkanek, kompatybilne z protokołami barwienia Grama.
Zestaw do syntezy cDNA Goldenstar RT6 Ver2Beijing Tsingke Biotech Co., Ltd (Pekin, Chiny)TSK302SDo syntezy pierwszej nici cDNA w pierwszym etapie dwuetapowego RT-PCR. Zawiera wszystkie odczynniki potrzebne do syntezy cDNA z RNA.
Zestaw do barwienia Gram BasoDiagnostics, Inc. (Zhuhai, Chiny)BA4012Zestaw do barwienia zawierający fiolet krystaliczny, jod, odbarwiacz i safraninę do różnicowania Neisseria Gonorrhoeae. 
IBM SPSS Statistics (V25.0)International Business Machines Corporation (Nowy Jork, USA)Wersja 25.0Do analizy danych.
Sterylizator na podczerwieńHuaxixinrui (Qingdao) Instrumenty analityczne Co., Ltd.MJ-200WDo natychmiastowej dekontaminacji pętli inokulacyjnych lub kleszczy, minimalizując zanieczyszczenie krzyżowe w komorach bezpieczeństwa biologicznego.
Pętla inokulacyjnaBKMAM Biotechnology Co., Ltd. (Hunan, Chiny) 110306002Do przenoszenia próbek drobnoustrojów, smug lub inokulacji.
Mikroskop odwrócony (IX-51)Olympus Corporation (Tokio, Japonia)Kod aktywów laboratorium:  71807101Do obserwacji przylegających komórek lub dynamiki żywych komórek w szalkach hodowlanych.
Zautomatyzowany system mikrobiologicznej spektrometrii mas MALDI BiotyperBruker Daltonics GmbH & Co. KG (Brema, Niemcy)Krajowa Rejestracja Importu Wyrobu Medycznego nr 20182222017System oparty na spektrometrii mas MALDI-TOF do szybkiej identyfikacji drobnoustrojów poprzez profilowanie białek, umożliwiający identyfikację gatunków bakterii i grzybów w klinicznych laboratoriach mikrobiologicznych.
Linie komórkowe McCoyaZachowane w laboratorium.Zachowane w laboratorium.Dla hodowli Chlamydia trachomatis.
Inkubator termostatyczny z mikropłytkami Leopard70-4 (pojemność 4 płytek)Leaptec Scientific Instruments (Beijing) Co., Ltd.Leopard70-4Inkubator do mikropłytek mieszczący do 4 standardowych mikropłytek, o zakresie temperatur otoczenia do 70 stopni Celsjusza. C,  stosowany do etapów inkubacji.
Mikroskop (OLYMPUS CX43)Olympus Corporation (Tokio, Japonia)https://lifescience.evidentscientific.com.cn/zh/microscopes/upright/cx43-33/Do obserwacji próbek klinicznych (np. morfologia komórek, barwione próbki).
Mini metalowa wanna MiniG-R100Leaptec Scientific Instruments (Pekin) Co., Ltd.MiniG-R100Do szybkiej regulacji temperatury podczas eksperymentu, takiej jak podgrzewanie, inkubacja lub kończenie reakcji w próbkach o małej objętości.
Test kwasów nukleinowych Neisseria gonorrhoeae (test amplifikacji RNA - przepływ boczny)Wuhan Zhongzhi Biotechnologies INC. (Wuhan, Chiny)A.10.309-STD-RG-001Do jakościowego wykrywania RNA kwasu nukleinowego Neisseria gonorrhoeae w próbkach wymazów z narządów płciowych i dróg moczowych.
Odczynnik do ekstrakcji kwasów nukleinowychWuhan Zhongzhi Biotechnologies INC. (Wuhan, Chiny)A.10.105-SC-001Do ekstrakcji, wzbogacania i oczyszczania kwasów nukleinowych.
Pożywka do transportu próbekQIAGEN N.V. (Venlo, Holandia)5128-1220Pożywka ta została specjalnie opracowana do pobierania, konserwacji i transportu próbek klinicznych, zapewniając żywotność Chlamydia trachomatis  oraz  Neisseria gonorrhoeae  do późniejszych badań diagnostycznych.
Wirówka termostatycznaBeckman Coulter, Inc. (Brea, USA)SN: MRZ21L037Do granulowania komórek, mikroorganizmów lub kwasów nukleinowych.
TM średniSzanghaj Yihua Nauki medyczne i Technology Co., Ltd (Szanghaj, Chiny)Shanghai Pu Medical Device Filing No. 20140081TM podłoże może być używane do izolacji, hodowli i identyfikacji Neisseria gonorrhoeae z próbek klinicznych, aby pomóc w diagnozowaniu rzeżączki.
Trypsyna-EDTA (0,25%)Thermo Fisher Scientific Inc. (Waltham, USA)25200072Do delikatnej dysocjacji przylegających komórek podczas subkulturacji lub procedur eksperymentalnych.
Test kwasów nukleinowych Ureaplasma urealyticum (test amplifikacji RNA z przepływem bocznym)Wuhan Zhongzhi Biotechnologies INC. (Wuhan, Chiny)A.10.309-STD-RG-003Do jakościowego wykrywania RNA kwasu nukleinowego Ureaplasma Urealyticum w próbkach wymazów z narządów płciowych i dróg moczowych.
Ureaplasma urealyticum i Mycoplasma hominis Selektywna izolacja Kultura, Identyfikacja i zestaw wrażliwości na lekiHebei Zhongaisheng Biotechnology Co., Ltd. (Hebei, Chiny)Hebei Rejestracja wyrobu medycznego nr 20152400168Do selektywnej izolacji, hodowli, identyfikacji i oznaczania wrażliwości na leki Ureaplasma urealyticum i Mycoplasma hominis.
Mieszalnik wirowyXinkang Medical Instrument Co. Ltd (Jiangsu, Chiny)XK80-AUrządzenie laboratoryjne do homogenizacji próbek cieczy przez szybkie mieszanie.
300504406

Bibliografia

  1. Hufstetler, K., Llata, E., Miele, K., Quilter, L. A. S. Clinical updates in sexually transmitted infections, 2024. J Womens Health (Larchmt). 33 (6), 827-837 (2024).
  2. Sunkavalli, A., McClure, R., Genco, C. Molecular regulatory mechanisms drive emergent pathogenetic properties of Neisseria gonorrhoeae. Microorganisms. 10 (5), 922(2022).
  3. Quillin, S. J., Seifert, H. S. Neisseria gonorrhoeae host adaptation and pathogenesis. Nat Rev Microbiol. 16 (4), 226-240 (2018).
  4. Rowley, J., et al. Chlamydia, gonorrhoea, trichomoniasis, and syphilis: global prevalence and incidence estimates, 2016. Bull World Health Organ. 97 (8), 548-562 (2016).
  5. Rittenschober-Boehm, J., et al. Intrauterine detection of Ureaplasma species after vaginal colonization in pregnancy and neonatal outcome. Neonatology. 121 (2), 187-194 (2024).
  6. Liu, T., et al. Analysis of Ureaplasma urealyticum, Chlamydia trachomatis, Mycoplasma genitalium and Neisseria gonorrhoeae infections among obstetrics and gynecological outpatients in southwest China: a retrospective study. BMC Infect Dis. 22 (1), 283(2022).
  7. Song, J., Zhang, L., Zeng, L., Xu, X. Visualized lateral flow assay for dual viral RNA fragment detection. Anal Chem. 95 (30), 11187-11192 (2023).
  8. Dighe, K., Moitra, P., Alafeef, M., Gunaseelan, N., Pan, D. A rapid RNA extraction-free lateral flow assay for molecular point-of-care detection of SARS-CoV-2 augmented by chemical probes. Biosens Bioelectron. 200, 113900(2002).
  9. Liu, C. C., Yeung, C. Y., Chen, P. H., Yeh, M. K., Hou, S. Y. Salmonella detection using 16S ribosomal DNA/RNA probe-gold nanoparticles and lateral flow immunoassay. Food Chem. 141 (3), 2526-2532 (2013).
  10. Pereyre, S., Caméléna, F., Hénin, N., Berçot, B., Bébéar, C. Clinical performance of four multiplex real-time PCR kits detecting urogenital and sexually transmitted pathogens. Clin Microbiol Infect. 28 (5), 733.e7-733.e13 (2022).
  11. Morris, S. R., Bristow, C. C., Wierzbicki, M. R., et al. Performance of a single-use, rapid, point-of-care PCR device for the detection of Neisseria gonorrhoeae, Chlamydia trachomatis, and Trichomonas vaginalis: a cross-sectional study. Lancet Infect Dis. 21 (5), 668-676 (2021).
  12. Pflüger, L. S., Nörz, D., Grunwald, M., et al. Analytical and clinical validation of a multiplex PCR assay for detection of Neisseria gonorrhoeae and Chlamydia trachomatis including simultaneous LGV serotyping on an automated high-throughput PCR system. Microbiol Spectr. 12 (3), e0275623(2024).
  13. Huang, Y., et al. Droplet digital PCR (ddPCR) for the detection and quantification of Ureaplasma spp. BMC Infect Dis. 21 (1), 804(2021).
  14. Ma, Y., et al. Comparison of analytical sensitivity of DNA-based and RNA-based nucleic acid amplification tests for reproductive tract infection pathogens: implications for clinical applications. Microbiol Spectr. 11 (5), e0149723(2023).
  15. Van Der Pol, B., et al. Multicenter comparison of nucleic acid amplification tests for the diagnosis of rectal and oropharyngeal Chlamydia trachomatis and Neisseria gonorrhoeae infections. J Clin Microbiol. 60 (1), e0136321(2022).
  16. Luo, H., et al. An isothermal CRISPR-based diagnostic assay for Neisseria gonorrhoeae and Chlamydia trachomatis detection. Microbiol Spectr. 11 (6), e0046423(2023).
  17. Tu, Q., et al. Point-of-care detection of Neisseria gonorrhoeae based on RPA-CRISPR/Cas12a. AMB Express. 13 (1), 50(2023).
  18. Caruso, G., Giammanco, A., Virruso, R., Fasciana, T. Current and future trends in the laboratory diagnosis of sexually transmitted infections. Int J Environ Res Public Health. 18 (3), 1038(2021).
  19. Yang, J. L., et al. Comparison of an rRNA-based and DNA-based nucleic acid amplification test for the detection of Chlamydia trachomatis in trachoma. Br J Ophthalmol. 91 (3), 293-295 (2007).
  20. Luo, Z. G., Li, R. P., Wang, Y. B., Shang, X. J., Zhu, J. Y. Real-time fluorescence constant-temperature simultaneous amplification and testing of nucleic acid for detection of Mycoplasma genitalium infection in the genitourinary tract. Zhonghua Nan Ke Xue. 25 (6), Chinese 535-538 (2019).
  21. Zhang, T., et al. Light-up RNA aptamer signaling-CRISPR-Cas13a-based mix-and-read assays for profiling viable pathogenic bacteria. Biosens Bioelectron. 176, 112906(2021).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

Szybka diagnostyka molekularnachoroby przenoszone drog p ciowdetekcja patogen wodwrotna transkrypcjasekwencjonowanie gen w
Film wkrótce dostępny

Powiązane artykuły