Artykuł metodologiczny

Zastosowanie optogenetyki w połączeniu z zapisem fotometrii światłowodowej w regulacji obwodów neuronalnych – funkcji trzewnych za pomocą elektroakupunktury

DOI:

10.3791/68667

⸱

19 września 2025

 ,  ,  ,  , 
1Institute of Acupuncture and Moxibustion, China Academy of Chinese Medical Sciences, 2Northeast Asia Research Institute of Traditional Chinese Medicine, Changchun University of Chinese Medicine

* These authors contributed equally

W tym artykule

Podsumowanie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Celem tego eksperymentu jest ustanowienie nowatorskiego podejścia do jednoczesnej integracji optogenetyki, śródmózgowego rejestrowania sygnału wapnia i monitorowania motoryki żołądka, oferując nowy paradygmat monitorowania w czasie rzeczywistym związku między stymulacją somatyczną a interakcjami obwodu neuronalnego i funkcji trzewnych, który jest stosowany w badaniach nad akupunkturą.

Streszczenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Protokół ten opisuje technikę manipulacji optogenetycznej określonych typów neuronów i rejestrowania w czasie rzeczywistym wpływu elektroakupunktury w Zusanli (ST36) na jądrowe sygnały wapnia i ruchliwość żołądka u myszy w znieczuleniu in vivo. Badanie głównych mechanizmów leżących u podstaw skuteczności akupunktury było ograniczone przez ograniczenia technologiczne. Jednak postęp technologii obrazowania optogenetycznego i optycznego napędzał rozwój neuronauki. Zapis fotometrii światłowodowej, początkowo wykorzystujący genetycznie kodowane wskaźniki wapnia do wizualizacji zmian w dynamice wapnia wskazujących na aktywność neuronalną, wyróżnia się jako kluczowa technologia charakteryzowania korelacji między mózgiem a zachowaniem in vivo. Zastosowanie optogenetyki umożliwia genetyczne kodowanie neuronów, umożliwiając ich aktywację lub hamowanie w odpowiedzi na stymulację światłem. Ta zdolność ułatwia ustanowienie powiązań przyczynowo-skutkowych między funkcją obwodów nerwowych a wynikami behawioralnymi. Jednoczesna fotometria światłowodowa, zapis wapnia i stymulacja optogenetyczna zapewniają metodę rejestrowania i manipulowania aktywnością neuronalną w czasie rzeczywistym, służąc jako skuteczne podejście do badania centralnych mechanizmów akupunktury. Niemniej jednak nadal brakuje badań dokumentujących jednoczesne wykorzystanie fotometrii światłowodowej, zapisu wapnia, optogenetyki i monitorowania funkcji trzewnych w badaniach nad akupunkturą. Wyniki tego eksperymentu pokazują, że EA-ST36 może regulować motorykę żołądka związaną z obwodem PBNGlu-NTS Glu-DMV ChAT . Stymulacja optogenetyczna tego obwodu daje ten sam efekt. Po superpozycji tych dwóch, zmiany w sygnale wapniowym i motoryce żołądka osiągają maksimum. W ramach tego badania opracowano nowatorskie podejście do jednoczesnej integracji optogenetycznego, domózgowego zapisu sygnału wapnia i monitorowania motoryki żołądka, oferując nowy paradygmat monitorowania w czasie rzeczywistym związku między stymulacją somatyczną a interakcjami między obwodem neuronalnym a funkcjami trzewnymi.

Wprowadzenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

W ostatnich latach rozpowszechnienie biomolekularnych czujników fluorescencyjnych przyczyniło się do wykorzystania fotometrii światłowodowej w biologii molekularnej, ułatwiając rejestrację in vivo 1. Postęp ten umożliwia monitorowanie w czasie rzeczywistym zmian aktywności neuronalnej w mózgu. Integracja optogenetyki pozwala na manipulację neuronami, oferując zaletę natychmiastowego prowadzenia optogenetyki i zapisu światłowodowego poprzez proste włożenie światłowodu. W połączeniu z rejestracją funkcji trzewnych, metoda ta oferuje dobrą rozdzielczość czasową i celowanie na poziomie jąder, aby zaobserwować, jak akupunktura moduluje funkcje trzewne poprzez modyfikacje aktywności neuronalnej.

Liczne badania zilustrowały wyraźny regulacyjny wpływ akupunktury na funkcjonowanie przewodu pokarmowego 2,3,4, chociaż dokładne mechanizmy centralne pozostają nieuchwytne. Wiele starożytnych chińskich książek medycznych, takich jak HuangDiNeiJing, odnotowało również, że ST36 (po bocznej stronie za stawem kolanowym, około 2 mm poniżej kości strzałkowej5) jest często stosowany w leczeniu chorób przewodu pokarmowego. Ostatnie badania wykazały, że jądra biorące udział w procesach fizjologicznych żołądka (np. zachowaniażywieniowe6, zaprzestanie jedzenia7, tłumienieapetytu8) i procesach patologicznych (np. ból żołądka9, dysfunkcja żołądka10) obejmują jądro przypodwzgórzowe (PSTn), jądro szwu grzbietowego (DRN), jądro boczne przyramienne (LPB), jądro drogi samotnej (NTS) i grzbietowe jądro ruchowe błędnika (DMV). Badania wykazały, że elektroakupunktura w ST36 może zwiększyć liczbę komórek c-Fos + w DMV, zwiększając w ten sposób ekspresję c-Fos + w ogonowym podjądrze NTS11. Dodatkowo udokumentowano, że jądro przycentryczne (PBN) bierze udział w składzie paracentrycznego kompleksu jądrowego, może rzutować w dół do rdzenia przedłużonego NTS, co odgrywa ważną rolę w integracji trzewnych informacji sensorycznych, takich jak sygnały żołądkowo-jelitowe12,13. Powyższe informacje sugerują, że akupunktura może potencjalnie modulować motorykę żołądka, co może być związane z obwodem neuronalnym PBN Glu-NTSGlu-DMV ChAT. Neurony glutaminergiczne są głównie zaangażowane w LPB i NTS14, podczas gdy neurony cholinergiczne są głównie zaangażowane w DMV podczas fizjologicznych i patologicznych procesów żołądka15. Badanie regulacyjnego wpływu akupunktury na obwody neuronalne i funkcje trzewne może zapewnić lepsze zrozumienie mechanizmów akupunktury i dostarczyć teoretycznego wsparcia dla klinicznych interwencji akupunkturowych w chorobach trzewnych.

Jednak ze względu na ograniczenia techniczne, ograniczone badania zagłębiły się w mechanizmy obwodów neuronalnych elektroakupunktury w modulowaniu funkcji trzewnych. W związku z tym w niniejszym opracowaniu przedstawiono uproszczone wytyczne mające na celu wprowadzenie szczegółowego procesu wstrzykiwania wirusa. Warto zauważyć, że metodologia przedstawiona w tym artykule może być wykorzystana do wyjaśnienia mechanizmów obwodów związanych z regulacją różnych funkcji trzewnych przez akupunkturę.

Dlatego badanie to ma na celu zbadanie regulacyjnego wpływu akupunktury na motorykę żołądka, która może być związana z obwodem neuronalnym PBNGlu-NTS Glu-DMV ChAT poprzez połączenie optogenetyki z fotometrią światłowodową do rejestracji obrazowania wapnia. Celem jest opracowanie protokołu obrazowania wapnia i synchronizacji optogenetycznej, wprowadzając nowe ramy badawcze do badania funkcji trzewnych i obwodów neuronalnych.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Wszystkie procedury były zgodne z wytycznymi dotyczącymi opieki i użytkowania zwierząt laboratoryjnych ustanowionymi przez National Institutes of Health i uzyskały zgodę Komisji Etyki Opieki nad Zwierzętami i Użytkowania Instytutu Akupunktury i Moksowania Chińskiej Akademii Nauk Medycznych. Dorosłe samce myszy C57 o wadze 25 g wykorzystano do iniekcji wirusa i implantacji światłowodu. Protokół eksperymentu na zwierzętach ściśle przestrzegał wymagań krajowej normy "Wytyczne dotyczące etycznego przeglądu dobrostanu zwierząt laboratoryjnych" (GB/T 35892-2018) i został zatwierdzony przez Komisję Etyki instytucji.

UWAGA: Utrzymuj środowisko w czystości podczas procesu wstrzykiwania wirusa i implantacji światłowodu. Przez cały czas trwania operacji należy nosić maseczki. Po okresie wysokiej ekspresji wirusa (21-28 dni) przeprowadzono elektroakupunkturę w ST36 i manipulacje optogenetyczne w celu zarejestrowania motoryki żołądka. Zwierzęta trzymano w pomieszczeniu dla zwierząt Instytutu Akupunktury i Moxibustion, Chińskiej Akademii Nauk Medycznych, w kontrolowanych warunkach (temperatura: 22-24 °C, wilgotność: 50%-60%, 12 godzin cyklu jasno-ciemność), ze swobodnym dostępem do jedzenia i wody. Szczegółowe informacje na temat stosowanych odczynników i sprzętu można znaleźć w Tabeli materiałów.

1. Przygotowanie przedoperacyjne

  1. Zdezynfekuj narzędzie chirurgiczne, które zostało poddane sterylizacji w wysokiej temperaturze, i oczyść obszar operacyjny 70% etanolem.
  2. Znieczulenie: Podać myszowi wstrzyknięcie dootrzewnowe 1,25% tribromoetanolu (0,2 ml/10 g wagi). Oceń brak odruchu szczypania palca u nogi, aby zmierzyć głębokość znieczulenia.
  3. Zgolić włosy z głowy i umieścić myszy w stereotaktycznej ramce wyposażonej w paski do uszu i zębów. Nałóż maść erytromycyny na oczy myszy, aby zapobiec uszkodzeniom spowodowanym światłem chirurgicznym.
  4. Namocz skuwkę światłowodową (rozmiar skuwki: 1,25 mm biała skuwka, rodzaj włókna: 200/0,37, długość włókna: 5,5 mm, model igły z końcówką: V8475) w 75% etanolu na 30 minut, a następnie zmyć 70% etanolu solą fizjologiczną.
  5. Załadować mikroiniektor (1 μl) parafiną (800-900 nL). Rozpuść szklaną rurkę i podziel ją na dwie części. Naostrz jedną sekcję na końcówce za pomocą szlifierki igłowej, która będzie służyć jako igła iniekcyjna. W celu zapewnienia gazoszczelności mikrowtryskiwacza należy napełnić rurkę parafiną i podłączyć ją do mikrowtryskiwacza na końcówce za pomocą pistoletu do klejenia.

2. Chirurgia iniekcji wirusowej

  1. Naciąć skórę głowy wzdłuż linii środkowej od oczu do tyłu szyi, aby odsłonić czaszkę. Następnie wytnij mięśnie szyi, aby odsłonić kość potyliczną. Przetrzyj powierzchnię kościH2O2przez 30 s, a następnie wyczyść suchym bawełnianym wacikiem, aby usunąć powięź podskórną i tkanki łączne (ryc. 1A).
    UWAGA: Ten krok ma na celu ułatwienie pokrycia cementu dentystycznego na kości potylicznej, dzięki czemu światłowód jest bardziej stabilnie zamocowany.
  2. Wyrównaj czaszkę.
    1. Wyrównanie osi X: Zaznacz dwa punkty, które są oddalone o 3,5 mm od punktu Bregema w szwie koronalnym i połącz te dwa punkty, aby utworzyć linię. Punktem środkowym tej linii jest zero. Wartość bezwzględna różnicy osi Z na powierzchni kości w odległości 3,5 mm od początku układu współrzędnych powinna wynosić ≤ 0,03 mm.
    2. Poziomowanie osi Y: Zaznacz dwa punkty oddalone o 3.5 mm od punktu Lambda w szwie lambdoidalnym, ustaw punkt środkowy dwóch punktów i połącz ten punkt środkowy z punktem Lambda, aby utworzyć linię. Punkt środkowy tej linii to kolejne zero. Wartość bezwzględna różnicy osi Z między tym zerem a zerem, przy którym powierzchnia kości została dostosowana podczas osi X, powinna wynosić ≤ 0,03 mm.
  3. Zaznaczyć współrzędne stereotaktyczne wstrzyknięcia wirusa markerem. Dla PBN: -1,1 mm przednio-tylny (oś AP,Y), -5,45 mm przyśrodkowo-boczny (ML, oś X), -3,3 mm grzbietowo-brzuszny (DV, oś Z) (z bregma jako punktem zerowym); Dla NTS: -0,35 mm AP, 0,2 mm ML, -3,3 mm DV (z najwyższym punktem kości potylicznej jako punktem zerowym); Dla DMV: -0,35 mm AP, 0,0 mm (najwyższy punkt kości potylicznej), -3,5 mm DV (z najwyższym punktem kości potylicznej jako punktem zerowym) (ryc. 1B). Użyj szybkoobrotowego mikrowiertła (średnica wiertła 0,8 mm), aby przebić czaszkę w wyznaczonych miejscach, aby odsłonić powierzchnię mózgu. Następnie za pomocą cienkich kleszczy delikatnie nakłuj oponę twardą i usuń ją, nałóż sól fizjologiczną na wywiercony otwór, aby utrzymać wilgoć na powierzchni mózgu.
  4. Nałóż klej Single Bond Universal na powierzchnię czaszki (z wyłączeniem wywierconego obszaru) i wystawij go na działanie światła przez 30 sekund w celu utwardzenia. Ważne jest, aby zachować suchą powierzchnię czaszki przed nałożeniem uniwersalnego kleju z pojedynczym spoiwem, aby zapewnić silną przyczepność. Dodatkowo podczas aplikacji należy unikać stosowania kleju na mięśniach.
  5. Przymocować mikrowstrzykiwacz do ramienia mechanicznego aparatu stereotaktycznego. Wypełnić 250 nL wirusa (rAAV-CaMKIIα-CRE-WPRE-hGH polyA). Po zetknięciu końcówki igły z powierzchnią mózgu ustaw głębokość (Z) na 0. Opuścić igłę do miejsca docelowego w jądrze przyramiennym (PBN) i wstrzyknąć wirusa do regionu PBN z szybkością 35 nL/min. Po wstrzyknięciu należy przytrzymać igłę na miejscu przez 10 minut, a następnie wycofać ją z prędkością 6 mm/min. Następnie zanurzyć igłę w probówce Eppendorfa zawierającej sól fizjologiczną w celu oczyszczenia (Rysunek 1C,D).
    UWAGA: Dawki iniekcyjne wszystkich następujących wirusów wynoszą 250 nL; DMV wynosi 100 nL16,17.
  6. Zastosuj identyczny protokół do wstrzyknięcia rAAV-CaMKIIα-DIO-ChrimsonR-WPREs do jądra tractus solitarius (NTS) i rAAV-ChAT-GCamp6s-WPRE-hGH-polyA do grzbietowego jądra ruchowego błędnika (DMV) (Figura 1D). Wszystkie miana wirusów wynoszą ≥ 1 ×10 12 VG/ml.

3. Chirurgia implantów światłowodowych

  1. Zabezpiecz tuleję światłowodową za pomocą uchwytu optycznego i przymocuj ją do ramienia mechanicznego aparatu stereotaktycznego. Ustawić współrzędne implantacji odpowiadające pozycji około 100 μm powyżej miejsca wstrzyknięcia wirusa DMV (ryc. 1E, F).
  2. Zmieszaj 1-3 g cementu dentystycznego z 1 ml żywicy utwardzonej w temperaturze pokojowej, aż do uzyskania jednolitej konsystencji. Natychmiast nałóż mieszaninę wokół skuwki światłowodowej i na powierzchnię czaszki, pozostawiając odsłonięte 5 mm górnej części skuwki światłowodowej. Gdy cement zastygnie, odkręć uchwytu, podnieś i wyjmij uchwyt (Rysunek 1G).
  3. Użyj wchłanialnych szwów chirurgicznych (6-0) do zszycia tylnej potylicznej skóry głowy myszy. Wyjmij myszy z ramy stereotaktycznej i umieść je w ciepłym miejscu, aby zregenerować się po znieczuleniu. Gdy zwierzęta wykazywały nieskrępowane ruchy, przenoszono je do czystej i pojemnej klatki w celu zakwaterowania, z 4-5 myszami trzymanymi razem i umożliwiającymi swobodny dostęp do jedzenia i wody.
    UWAGA: Podczas eksperymentu zaobserwowano, że większa klatka jest korzystna dla normalnego ruchu myszy i ma kluczowe znaczenie dla utrzymania ich wagi. Zwiększona przestrzeń zmniejsza również prawdopodobieństwo przypadkowego kontaktu z wszczepionym włóknem, minimalizując w ten sposób potencjalne uszkodzenia. Myszy o wadze 25 g lub więcej wykazywały znaczące zmiany ciśnienia śródżołądkowego po akupunkturze.

4. Operacja wprowadzenia balonu

  1. W szczycie ekspresji wirusa (21-28 dni) pościć myszy przez 4-5 godzin. Następnie znieczulić myszy poprzez dootrzewnowe wstrzyknięcie 1,25% tribromoetanolu (0,1 ml / 10 g wagi). 15 minut później należy podać dootrzewnowe wstrzyknięcie 10% roztworu karbaminianu etylu (0,15 ml/10 g masy). Oceń głębokość znieczulenia, potwierdzając brak odruchu szczypania palców u stóp.
  2. Ogol włosy w okolicach brzucha i ST36. Włącz poduszkę grzewczą i ustaw ją tak, aby utrzymywała temperaturę 37 °C, przy czym zwierzę powinno być trzymane na poduszce grzewczej przez cały czas trwania zabiegu, aby zapewnić stałą temperaturę ciała.
  3. Podłącz balon lateksowy do strzykawki i wstrzyknij do niego powietrze, aby sprawdzić, czy balon lateksowy (BS4 73-2787) nie ma wycieku powietrza.
  4. Odsłoń żołądek i część dwunastnicy poniżej wyrostka mieczykowatego. Wykonaj małe nacięcie w dwunastnicy o długości około 0,3 cm, 0,5-1 cm dystalnie do odźwiernika.
  5. Włóż balon do żołądka wzdłuż kierunku jelitowego przez nacięcie dwunastnicy, z węzłem umieszczonym w zatoce odźwiernika.
  6. Wyjąć igłę ze strzykawki, napełnić 5 ml czystej wody, spuścić powietrze i połączyć drugi koniec balonu ze strzykawką. Pociągnij blokadę luer strzykawki do góry, aby usunąć gaz z balonu, a następnie opuść blokadę luer, aby wstrzyknąć czystą wodę do balonu. Podłączyć zespół do trójdrogowego kranu i przetwornika ciśnienia.

5. Synchroniczny zapis ciśnienia śródżołądkowego i obrazowanie wapnia

  1. Włącz model Neurolog Digitimer, CED Micro1401-4, Inper Studio, wielokanałowy system nagrywania światłowodów, oprogramowanie Inper Signal i oprogramowanie Spike 2. Ustaw oprogramowanie Inper, zapis sygnału wapnia tak, aby był wyzwalany przez oprogramowanie Spike2 i stymulator optogenetyczny, upewniając się, że stymulacja laserowa i akwizycja sygnału wapnia przez oprogramowanie Inper są zgodne z rejestracją ciśnienia wewnątrzżołądkowego przez oprogramowanie Spike2.
  2. Otwórz wszystkie trójdrożne zawory odcinające, które łączą się z balonem, obróć pokrętło ZERO na modelu digitimera Neurolog i obserwuj w oprogramowaniu Spike 2, czy linia bazowa jest ustawiona na punkt 0. Po wyrównaniu ciśnienia wewnątrz balonu z ciśnieniem atmosferycznym należy wstrzyknąć czystą wodę do balonu, aż ciśnienie wewnątrzżołądkowe wyświetli się 15-35 cm H2O. Gdy zarówno ciśnienie wewnątrzżołądkowe, jak i sygnały wapniowe osiągną stabilny stan, zapisz 60-sekundową linię bazową ciśnienia wewnątrzżołądkowego i sygnałów wapniowych w DMV (ryc. 2A).

6. Elektroakupunktura w ST36 i stymulacja laserowa

  1. Włóż igłę do akupunktury (0,25 mm × 25 mm) do lewego punktu akupunkturowego ST36 i podłącz ją do aparatu do elektroakupunktury (10 Hz, 1 mA). Podawaj elektroakupunkturę przez 60 sekund, rejestrując zmiany ciśnienia wewnątrzżołądkowego i sygnałów wapniowych.
  2. Po ustabilizowaniu się wyjściowego ciśnienia wewnątrzżołądkowego i sygnałów wapniowych, należy dostarczyć stymulację optogenetyczną (635 nm, 5 ms, 5 Hz, 30 mW) przez światłowód przez 60 s, monitorując zmiany ciśnienia wewnątrzżołądkowego i sygnałów wapniowych.
  3. Gdy linia bazowa ciśnienia wewnątrzżołądkowego i sygnałów wapniowych ponownie się ustabilizuje, połącz elektroakupunkturę w ST36 (10 Hz, 1 mA) ze stymulacją optogenetyczną (635 nm, 5 ms, 5 Hz) przez 60 s i rejestruj zmiany ciśnienia wewnątrzżołądkowego i sygnałów wapniowych.

7. Badanie histologiczne iniekcji wirusa i rozmieszczenia włókien

  1. Po wykonaniu wyżej wymienionych protokołów, należy przelać krew fizjologiczną na myszy i natychmiast utrwalić 4% paraformaldehydem przez serce. Zbierz mózgi myszy. Wykonaj odwodnienie gradientowe przy użyciu 20% i 30% roztworów sacharozy, a następnie po zatopieniu przekrój środkiem do szybkiego zamrażania. Porównaj wycinki mózgu z mapami mózgu myszy, aby zaobserwować, czy pozycje wstrzyknięcia wirusa i implantacji światłowodu były dokładne. Precyzyjne rozmieszczenie iniekcji wirusowych i implantów włóknistych potwierdziło ważność danych dotyczących ciśnienia wewnątrzżołądkowego i sygnału wapnia (ryc. 1H, I).

8. Analiza danych

  1. Analizuj dane sygnału wapnia za pomocą oprogramowania Inper Data Analysis i dane dotyczące motoryki żołądka za pomocą oprogramowania Spike2. Porównaj różnice między sygnałami wapnia lub amplitudami motoryki żołądka w czasie stymulacji (60 s) i przed stymulacją (60 s), aby zaobserwować regulacyjny wpływ różnych bodźców na motorykę żołądka i sygnały wapniowe. Wszystkie dane pokazane na rysunku 2 są oryginalnymi wykresami danych.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Wirusy wstrzyknięto do jądra przyramiennego (PBN), jądra tractus solitarius (NTS) i grzbietowego jądra ruchowego błędnika (DMV) myszy, z włóknem wszczepionym do DMV (ryc. 1A-G). W okresie szczytowej ekspresji wirusa zarejestrowano zmiany ciśnienia wewnątrzżołądkowego i sygnałów wapniowych w DMV po elektroakupunkturze w ST36 i stymulacji optogenetycznej. Celem pracy jest obserwacja regulacyjnego wpływu elektroakupunktury w ST36 i stymulacji optogenetycznej na motorykę żołądka...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Główne badania naukowe dotyczące akupunktury dotyczą regulacji narządów docelowych poprzez stymulację akupunkturową nerwów autonomicznych. Odkrycia zasugerowane przez Q. Ma sugerują, że wpływ akupunktury na modulację funkcji narządów zdalnych wynika z somatycznych odruchów autonomicznych, które aktywują szlaki współczulne i / lub przywspółczulne, zwłaszcza te związane z chorobami przewodu pokarmowego i ogólnoustrojowym stanem zapalnym18. Niemniej jednak istniejące badania koncentrowały się głównie...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Autorzy deklarują brak konfliktu interesów.

Podziękowania

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Badanie to zostało sfinansowane przez Narodową Fundację Nauk Przyrodniczych Chin (nr 82174518, 82474661), Fundusze Badań Podstawowych dla Centralnych Instytutów Badawczych Opieki Społecznej (ZZ-2023008) oraz Projekt Innowacji Naukowych i Technologicznych Chińskiej Akademii Chińskich Nauk Medycznych (CI2021A03402).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Virus
rAAV-CaMKIIα-CRE-WPRE-hGH polyA (AAV2/9)MózgVTAKot#PT-0020
rAAV-CaMKIIα-DIO-ChrimsonR-WPREs (AAV2/9)MózgVTANr kat.#PT-12637
rAAV-ChAT-GCamp6s-WPRE-hGH-polyA (AAV2/9)MózgVTAKot#PT-10973
Inny
1 μ Mikrowtryskiwacz LHamilton80135
Uniwersalny klej 3M EPSP z pojedynczym spoiwemOficjalny Świat Stomatologii41269
Igła do akupunkturyZhongYanTaiHe powiedział:0,25/13 sekund
CED Micro1401-4CED (Anglia)1401-4
Cement dentystyczny/żywica utwardzana w temperaturze pokojowejYAMAHACHI DENTALN/A
Cienkie kleszczeRWDF11028-13
Szklana rurkaŚwiatowe instrumenty precyzyjne504949
HANS-200AInstytut HANSHANS-200 powiedział:
Inper Signal (oprogramowanie)InperN/A
Inper Studio(Wenus)InperZobacz materiał B1502
Balon lateksowyAparatura HarwardaZobacz materiał BS4 73-2787 TGL
Wielokanałowy system nagrywania światłowodów (Vista Pro)InperCzynnik R5268
Model digitimera Neurolog Digitimer powiedział:NL900D
Tuleja światłowodowa InperZobacz materiał V8475
Spike 2 (oprogramowanie)CED (Anglia)N/A
Instrumenty stereotaktyczne (z kalkulatorem współrzędnych)David Kopf InstrumentyKOPF 942
TribromoetanolSigmaZobacz materiał T48402
tribromoetanolSigma Zobacz materiał T48402

Bibliografia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Li, S., et al. Perspective of calcium imaging technology applied to acupuncture research. Chin J Integr Med. 30 (1), 3-9 (2024).
  2. Xu, X., et al. Mechanism of electro-acupuncture in alleviating intestinal injury in septic mice via polyamine-related M2-macrophage polarization. Front Immunol. 15, e1373876(2024).
  3. Yaklai, K., Pattanakuhar, S., Chattipakorn, N., Chattipakorn, S. C. The role of acupuncture on the gut-brain-microbiota axis in irritable bowel syndrome. Am J Chin Med. 49 (2), 285-314 (2021).
  4. Wang, X. Y., Wang, H., Guan, Y. Y., Cai, R. L., Shen, G. M. Acupuncture for functional gastrointestinal disorders: a systematic review and meta-analysis. J Gastroenterol Hepatol. 36 (11), 3015-3026 (2021).
  5. China Association of Acupuncture and Moxibustion. Nomenclature and location of acupuncture points for laboratory animals Part 3: Mouse. World J Acupunct Moxibustion. 35 (2), 160-166 (2025).
  6. Chen, J., et al. A vagal-NTS neural pathway that stimulates feeding. Curr Biol. 30 (20), 3986-3998 (2020).
  7. Campos, C. A., Bowen, A. J., Schwartz, M. W., Palmiter, R. D. Parabrachial CGRP neurons control meal termination. Cell Metab. 23 (5), 811-820 (2016).
  8. Zhang, T., Perkins, M. H., Chang, H., Han, W., de Araujo, I. E. An inter-organ neural circuit for appetite suppression. Cell. 185 (14), 2478-2494 (2022).
  9. Zhang, F. C., et al. A vagus nerve dominant tetra-synaptic ascending pathway for gastric pain processing. Nat Commun. 15 (1), 9824(2024).
  10. Dong, W. Y., et al. Brain regulation of gastric dysfunction induced by stress. Nat Metab. 5 (9), 1494-1505 (2023).
  11. Iwa, M., Tateiwa, M., Sakita, M., Fujimiya, M., Takahashi, T. Anatomical evidence of regional specific effects of acupuncture on gastric motor function in rats. Auton Neurosci. 137 (1-2), 67-76 (2007).
  12. Browning, K. N., Travagli, R. A. Central nervous system control of gastrointestinal motility and secretion and modulation of gastrointestinal functions. Compr Physiol. 4 (4), 1339-1368 (2011).
  13. Sun, L., et al. Parabrachial nucleus circuit governs neuropathic pain-like behavior. Nat Commun. 11 (1), 21(2020).
  14. Simpson, E., et al. Lights, fiber, action! A primer on in vivo fiber photometry. Neuron. 112 (5), 718-739 (2024).
  15. Tao, J., et al. Highly selective brain-to-gut communication via genetically defined vagus neurons. Neuron. 109 (13), 2106-2115 (2021).
  16. Yao, L., Ye, Q., Liu, Y., et al. Electroacupuncture improves swallowing function in a post-stroke dysphagia mouse model by activating the motor cortex inputs to the nucleus tractus solitarii through the parabrachial nuclei. Nat Commun. 14 (1), 810(2023).
  17. Lyu, Q., Xue, W., Liu, R., et al. A brain-to-gut signal controls intestinal fat absorption. Nature. 634 (8035), 936-943 (2024).
  18. Ma, Q. Somatotopic organization of autonomic reflexes by acupuncture. Curr Opin Neurobiol. 76, e102602(2022).
  19. Liu, S., et al. A neuroanatomical basis for electroacupuncture to drive the vagal-adrenal axis. Nature. 598 (7882), 641-645 (2021).
  20. Liu, S., et al. Somatotopic organization and intensity dependence in driving distinct NPY-expressing sympathetic pathways by electroacupuncture. Neuron. 108 (3), 436-450 (2020).
  21. Luo, L. Architectures of neuronal circuits. Science. 373 (6559), eabg7285(2021).
  22. Yuan, Z., et al. A corticoamygdalar pathway controls reward devaluation and depression using dynamic inhibition code. Neuron. 111 (23), 3837-3853 (2023).
  23. Feng, J., et al. Monitoring norepinephrine release in vivo using next-generation GRABNE sensors. Neuron. 112 (12), 1930-1942 (2024).
  24. Smith, J., et al. Regulation of stress-induced sleep fragmentation by preoptic glutamatergic neurons. Curr Biol. 34 (1), 12-23 (2024).
  25. Li, Y., Liu, Z., Guo, Q., Luo, M. Long-term fiber photometry for neuroscience studies. Neurosci Bull. 35 (3), 425-433 (2019).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

stymulacja optogenetycznarejestracja sygna u wapniowegoregulacja obwod w neuronalnychmotoryka o dkafunkcja trzewnagenetycznie kodowane wska nikirejestracja w czasie rzeczywistymkorelacja m zg zachowanie

Powiązane artykuły