Badanie to szczegółowo opisuje metodę fiksacji szczurów odpowiednią do fotografowania akupunktury i termografii w podczerwieni. Ponadto wykazuje, że elektroakupunktura w uwrażliwionych punktach akupunkturowych hamuje miejscowy ból zapalny.
Artykuł metodologiczny
* These authors contributed equally
Badanie to szczegółowo opisuje metodę fiksacji szczurów odpowiednią do fotografowania akupunktury i termografii w podczerwieni. Ponadto wykazuje, że elektroakupunktura w uwrażliwionych punktach akupunkturowych hamuje miejscowy ból zapalny.
Choroba zwyrodnieniowa stawu kolanowego (KOA), główna przyczyna bólu mięśniowo-szkieletowego i niepełnosprawności funkcjonalnej na całym świecie, pozostaje trudna do leczenia ze względu na ograniczoną skuteczność obecnych interwencji farmakologicznych i chirurgicznych w osiąganiu trwałej ulgi w bólu. Chociaż akupunktura okazała się klinicznie obiecująca w łagodzeniu bólu związanego z KOA, jej mechanizmy leżące u jej podstaw wymagają dalszego wyjaśnienia. Zastosowanie akupunktury do uczulonych punktów akupunkturowych może znacznie zwiększyć skuteczność terapii. Protokół ten ustanawia szczurzy model KOA poprzez dostawowe wstrzyknięcie monojodooctanu sodu (MIA) i systematycznie opisuje protokół akupunktury ukierunkowany na uwrażliwione punkty akupunkturowe, w tym metody ograniczania, lokalizację punktów akupunkturowych i parametry akupunktury. Skuteczność terapeutyczną kompleksowo oceniano poprzez ocenę zachowania bólu, analizę termograficzną stawu kolanowego w podczerwieni, wykrywanie cytokin zapalnych w surowicy oraz badanie histopatologiczne tkanki chrzęstnej. Wyniki wskazują, że akupunktura w uczulonych punktach akupunkturowych znacznie łagodzi fenotypy bólu u szczurów modelowych indukowanych MIA poprzez hamowanie uwalniania mediatorów prozapalnych, blokowanie transmisji sygnału nocyceptywnego, poprawę mikrokrążenia krwi, regulację lokalnej temperatury stawów i opóźnianie zwyrodnienia stawów.
Choroba zwyrodnieniowa stawu kolanowego (KOA), powszechna choroba zwyrodnieniowa stawów, charakteryzuje się przewlekłym stanem zapalnym i patologią całego stawu, w tym erozją chrząstki, przebudową kości podchrzęstnej, rozwojem osteofitów i zapaleniem błony maziowej 1,2. Klinicznie pacjenci zazwyczaj odczuwają ból, osłabienie mięśni, niestabilność stawów, przejściową poranną sztywność i postępujące ograniczenia funkcjonalne. KOA nakłada znaczne globalne obciążenie chorobami, dotykając około 365 milionów osób z niepełnosprawnością funkcjonalną, a modele epidemiologiczne przewidują wzrost liczby przypadków o 74,9% w stosunku do poziomów wyjściowych z 2020 r. do połowy stulecia2050 r. 3. Warto zauważyć, że chociaż ból służy jako główny czynnik motywujący do leczenia4, jednocześnie zaostrza niepełnosprawność funkcjonalną, głęboko zagrażając wielu dziedzinom jakości życia poprzez upośledzenie mobilności i zmniejszoną zdolność do codziennej aktywności. W związku z tym strategie terapeutyczne mają na celu złagodzenie bólu, przywrócenie funkcji i opóźnienie postępu choroby5. Obecna farmakoterapia pierwszego rzutu obejmuje leki przeciwbólowe, niesteroidowe leki przeciwzapalne, chondroitynę i siarczan glukozaminy oraz dostawowe kortykosteroidy w celu zmniejszenia bólu i stanu zapalnego6. Długotrwałe stosowanie tych środków jest jednak ograniczone ze względu na znaczne ryzyko jatrogenne, w szczególności powikłania żołądkowo-jelitowe i zdarzenia niepożądane ze strony układu krążenia7, co podkreśla krytyczną potrzebę bezpieczniejszych i bardziej zrównoważonych alternatyw terapeutycznych.
Akupunktura i elektroakupunktura są szeroko stosowane w leczeniu choroby zwyrodnieniowej stawów, wykazując skuteczność w łagodzeniu bólu kolana i poprawie funkcjonalności stawów 8,9, a Światowa Organizacja Zdrowia (WHO) uznała zapalenie stawów za priorytetowy warunek terapii akupunkturowej. Zarówno jako cele stymulacji, jak i efektory, punkty akupunkturowe pozostają kluczowe w badaniach nad akupunkturą, gdzie ich wygląd morfologiczny, wymiary przestrzenne i reaktywność funkcjonalna ulegają dynamicznym zmianom podczas stanów chorobowych, zjawisko określane jako "uczulenie na punkty akupunkturowe"10,11. Co najważniejsze, ten proces uczulania moduluje obszar pola recepcyjnego i reakcję terapeutyczną punktów akupunkturowych, określając w ten sposób skuteczność leczenia. Poprzednie badania przedkliniczne 12,13 wykazały uczulenie w Yanglingquan (GB34, zlokalizowany w przednim zagłębieniu i poniżej głowy kości strzałkowej, w pobliżu bocznej strony kończyny tylnej) i Zusanli (ST36, położony po przedniej stronie nogi, boczna granica więzadła rzepki jest obniżona do przedniego punktu środkowego, 3/16 stawu skokowego) w modelach zwierzęcych KOA. Laserowe obrazowanie plamkowe wykazało podwyższoną miejscową perfuzję krwi w tych punktach akupunkturowych, podczas gdy obrazowanie fotoakustyczne paradoksalnie nie wykazało istotnych zmian strukturalnych w mikrokrążeniu, co sugeruje, że zmiany mikrokrążenia podczas uczulenia na akupunkturów w KOA są przede wszystkim funkcjonalne, a nie strukturalne. Badania nad mechanizmami leżącymi u podstaw tego zjawiska wymagają wykorzystania modeli szczurzych; Jednak słabe przestrzeganie procedur u zwierząt powoduje znaczne nakłady czasu. Aby rozwiązać te problemy, opracowano aparat do unieruchamiania szczurów, specjalnie zaprojektowany, aby ułatwić dostęp do punktów akupunkturowych kończyn dolnych i zwiększyć skuteczność zabiegów elektroakupunktury.
Termografia w podczerwieni, jako funkcjonalna metoda obrazowania, wykorzystuje bezdotykowe czujniki podczerwieni do wykrywania promieniowania cieplnego z predefiniowanych obszarów zainteresowania, z danymi przetworzonymi komputerowo generującymi pseudokolorowe termogramy do analizy ilościowej14,15. Technika ta umożliwia nieinwazyjne monitorowanie zmian hemodynamicznych skóry poprzez pomiar zmian temperatury związanych z wahaniami przepływu krwi w tkankach skórnych, naczyniowych i mięśniowych16, ułatwiając w ten sposób wizualną ocenę funkcjonalnych zmian mikrokrążenia w punktach akupunkturowych. W tym badaniu uwrażliwienie na ból w punktach akupunkturowych GB34 i ST36 zostało najpierw zweryfikowane za pomocą algometru elektronicznego, a następnie połączone zastosowanie szybkiego barwienia zielenią safraniny O, analiza IL-1β i TNF-α, obrazowanie termograficzne w podczerwieni i oceny behawioralne związane z bólem w celu zbadania przeciwbólowych skutków stymulacji elektroakupunkturą w punktach akupunkturowych GB34 i ST36 u szczurów z chorobą zwyrodnieniową stawu kolanowego wywołaną jodooctanem sodu (MIA).
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wszystkie protokoły eksperymentalne zostały zatwierdzone i rygorystycznie nadzorowane przez Komitet Etyki Zwierząt Uniwersytetu Medycyny Chińskiej w Pekinie (ID: bucm-2024091102-3197), a wszystkie procedury były ściśle przestrzegane zgodnie z Przewodnikiem National Institutes of Health (NIH) dotyczącym opieki i wykorzystania zwierząt laboratoryjnych. W badaniu wykorzystano trzydzieści samców szczurów rasy Sprague-Dawley (zakres wagowy: 210-250 g). Stosowane odczynniki i sprzęt są wymienione w Tabeli Materiałów.
1. Zwierzęta doświadczalne i grupy doświadczalne
2. Opracowanie modelu KOA indukowanego monojooctanem
3. Procedura mocowania szczurów
4. Zabieg elektroakupunktury
5. Test mechanicznego progu wycofania (MWT)
6. Test opóźnienia wycofania łapy (PWL)
7. Obrazowanie termowizyjne w podczerwieni
UWAGA: Wypiluj kończyny tylne dzień przed termografią, aby wyeliminować wpływ włosów na pomiar temperatury.
8. Test immunoenzymatyczny (ELISA)
9. Safranina szybko zabarwia się na zielono
UWAGA: Po pobraniu krwi z aorty brzusznej należy wyciąć prawy staw kolanowy za pomocą nożyczek chirurgicznych, zachowując 1 mm segmenty kostno-stawowe zarówno bliższej części kości udowej, jak i dystalnej kości piszczelowej. Ostrożnie oczyścić okołostawowe tkanki miękkie.
10. Analiza statystyczna
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Podczas całego eksperymentu nie padło żadne zwierzę. Wyniki czasu trwania procedury operacyjnej i liczby odczepień igieł dla każdego szczura zarówno w grupie NF, jak i EA wykazały, że grupa EA, po ograniczeniu nylonowymi opaskami kablowymi, doświadczyła skróconego czasu operacji i mniejszej liczby odczepień igieł (P < 0,001; Rysunek 1H,I). Analiza progów bólu w punktach akupunkturowych nie wykazała statystycznie istotnych różnic we wrażliwości bólu mechanicznego ...
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
MIA, inhibitor metabolizmu, selektywnie zakłóca komórkową glikolizę tlenową, indukując w ten sposób apoptozę chondrocytów 17,18,19. Dostawowe podanie MIA powoduje zubożenie chondrocytów, a następnie zwyrodnienie chrząstki stawowej, charakteryzujące się nieprawidłowościami morfologicznymi i zmianami histopatologicznymi, które bardzo przypominają patologię choroby zwyrodnieniowej stawówu człowieka 20. W zwi...
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wszyscy autorzy zadeklarowali brak potencjalnego konfliktu interesów.
Badania te były wspierane przez Narodowy Kluczowy Program Badawczo-Rozwojowy Chin (grant 2023YFC3502700) oraz Fundusze Badań Podstawowych dla Uniwersytetów Centralnych (2025-JYB-XJSJJ014)
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Pipetor o regulowanej objętości 0-10ul | Serwis bio | IC012395160823 | |
| Pipeta o regulowanej objętości 0-200ul | Serwis bio | IC021029160323 | |
| Probówki Eppendorf 1,5 ml | Serwis bio | EP-150-M | |
| Końcówka do mikropipet 10ul | Serwis bio | Zobacz materiał TP-10 TGL | |
| Strzykawka 1ml | Szanghaj Zhiyu Sprzęt medyczny Co., LTD | Zobacz materiał ZSQ-1 | |
| Końcówka do mikropipet 200ul | Serwis bio | TP-200 | |
| Igła o rozmiarze 22 | Kruuse powiedział: | 112416c | |
| Probówki Eppendorfa o pojemności 2 ml | Serwis bio | EP-150-M | |
| 5 ml czerwonej probówki z krwią | Shanghai Xinle Biotechnology Co., LTD | CXG-5R | |
| 75% alkoholu | Technologia dezynfekcji Shandong Anjie Gaoke Co., LTD | 75-500ml | |
| Szkiełko przylegające | Badanie CITOTEST | 188105 | |
| Automatyczna myjka do płyt | Rayto powiedział: | Przekaźnik RT-3100C | |
| Igła do pobierania krwi | Jiangxi Ruibang Industrial Group Co., LTD | CXZ-07 | |
| Safranina w tkance kostnej i stały zielony roztwór barwiący | Shanghai Yuan Ye Biotechnology Co., Ltd. | Czynnik R32730 | |
| Szkło nakrywkowe | Citotest Labware Manufacturing Co., Ltd | 10212432C | |
| Odwadniacz | DIAPATA | Donatello | |
| Waga elektroniczna | METTLER-TOLEDO | ME203E/02 | |
| Elektrotermiczny piec do suszenia strumieniowego | Zakład obowalniczy | ŻEL-70 | |
| Maszyna do zatapiania | Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd | JB-P5 | |
| Przyjazny dla środowiska przezroczysty płyn do odparafinowania | Serwis bio | G1128-1L | |
| Detektor etykiet enzymatycznych | BioTeK | Epoka | |
| Etanol | SCRC (Organizacja Współpracy Gospodarczej) | 100092683 | |
| Kwas etylenodiaminotetraoctowy | Macklin powiedział: | 60-00-4 | |
| Wacik beztłuszczowy | Caoxian Hualu Materiał sanitarny Co., Ltd | TZMQ-500 powiedział: | |
| Wirówka z chłodzeniem o dużej prędkości | Smok | D3024R | |
| Szybkoobrotowa szlifierka do tkanek | Serwis bio | KZ-III-F | |
| Analgezjometr z gorącą płytą | Podstawa Kew | KW-CT-1 | |
| System obrazowania | Nikon | NIKON DS-U3 | |
| Kamera termowizyjna na podczerwień | Testo AG | Testo 865 | |
| Jodofor | Technologia dezynfekcji Shandong Anjie Gaoke Co., LTD | DF-500 powiedział: | |
| Miękki IR | Testo AG | ||
| Izofluran | RWD nauki przyrodnicze | Przekaźnik Przemysłowy R510-22-10 | |
| Rękawiczki lateksowe | Pekin Ruijing Latex Products Co., Ltd | Złącze RJJC-S | |
| Mechaniczne urządzenie do testowania szturchania łap | Podstawa Kew | KW-RB | |
| MIA | Sigma | 206-165-7 | |
| Neutralna guma | SCRC (Organizacja Współpracy Gospodarczej) | 10004160 | |
| Normalny butanol | SCRC (Organizacja Współpracy Gospodarczej) | 100052190 | |
| Normalny roztwór soli fizjologicznej | SZYMON | SLYS-500ml | |
| Parafina w płynie | Macklin powiedział: | 8012-95-1 | |
| Utrwalacz paraformaldehydu (neutralny) | Serwis bio | G1101 powiedział: | |
| Krajalnica patologii | Szanghaj Leica Instrument Co., Ltd | Zobacz materiał RM2016 | |
| Szczur IL-1 beta Zestaw ELISA GER0002-96T | Serwis bio | AC30253754 | |
| Szczur TNF-alfa Zestaw ELISA GER0004-96t | Serwis bio | AC40253711 | |
| Szczury SD | Pekin Sibefei Biotechnology Co., Ltd | SCXK (jing) 2024-0001 | |
| Maszyna do znieczulania małych zwierząt | YuYAN | ABM | |
| Maska chirurgiczna | zwycięzca | WJKZ-1 | |
| Rozsiewacz tkanek | Zhejiang Kehua Instrument Co., Ltd | KD-P | |
| System polerowania wodą ultraczystą | Aiken water El | AK-RO-C2 | |
| Pionowy mikroskop optyczny | Nikon | NIKON ECLIPSE E100 | |
| Uretanowe | Macklin powiedział: | 2621-79-6 | |
| Mieszalnik wirowy | Serwis bio | Samolot MV-100 | |
| Ksylen | SCRC (Organizacja Współpracy Gospodarczej) | 10023418 |
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE
Poproś o pozwolenie