Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł badawczy

Przeciwnowotworowe działanie kluczowych składników Pileostegia tomentella poprzez klasyczną apoptozę za pośrednictwem ROS w komórkach niedrobnokomórkowego raka płuc

449 wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/69008

⸱

19 września 2025

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1International Zhuang Medicine Hospital affiliated to Guangxi University of Traditional Chinese Medicine, 2School of Zhuang Medicine, Guangxi University of Chinese Medicine, 3Guangxi Zhuang Autonomous Region Institute of Ethnic Medicine, 4Graduate School of Guangxi University of Traditional Chinese Medicine

* These authors contributed equally

W tym artykule

Podsumowanie

Protokół ten przedstawia metodę oceny apoptozy za pośrednictwem reaktywnych form tlenu (ROS) indukowanej przez związki naturalne w komórkach niedrobnokomórkowego raka płuca (NSCLC).

Streszczenie

W badaniu tym zbadano potencjał przeciwnowotworowy Pileostegia tomentella, ze szczególnym naciskiem na jego zdolność do indukowania klasycznej apoptozy w komórkach niedrobnokomórkowego raka płuca (NSCLC) H1299 poprzez szlaki, w których pośredniczą reaktywne formy tlenu (ROS). Stosując metodę izolacji sterowanej bioaktywnością, zidentyfikowano dwa związki czynne, umbelliferon (UMB) i epi-Vogelozyd, jako główne składniki cytotoksyczne. Oba związki wykazywały znaczący wpływ hamujący na żywotność komórek i skutecznie wywoływały apoptozę śmierci komórek w komórkach H1299. Badania mechanistyczne wykazały, że leczenie UMB i epi-Vogelozydem doprowadziło do znacznego wzrostu wewnątrzkomórkowych poziomów ROS, co sugeruje, że stres oksydacyjny jest kluczowym mediatorem. Analiza Western blot wykazała zwiększony poziom rozszczepionej kaspazy-3 i zmniejszoną ekspresję białka antyapoptotycznego Bcl-2, co wskazuje na aktywację wewnętrznego mitochondrialnego szlaku apoptozy. Ponadto profilowanie transkryptomiczne wykazało rozległe zmiany w ekspresji genów, co dodatkowo wspiera zakłócenie homeostazy komórkowej. Wyniki te sugerują, że Pileostegia tomentella i jej aktywne składniki są obiecujące jako potencjalne środki terapeutyczne w leczeniu raka płuc.

Wprowadzenie

Rak stanowi ogromne globalne wyzwanie dla zdrowia publicznego, charakteryzujące się znaczną roczną śmiertelnością. Niedrobnokomórkowy rak płuca (NSCLC) jest główną globalną przyczyną zgonów związanych z rakiem, stanowiąc około 85% przypadków zachorowań na raka płuca1. Karcynogeneza, z natury złożona interakcja procesów molekularnych i komórkowych, jest pod krytycznym wpływem zakłóceń homeostazy reaktywnych form tlenu (ROS). ROS, które obejmują niestabilne utleniacze, takie jak aniony ponadtlenkowe, rodniki hydroksylowe i nadtlenek wodoru, są produktami ubocznymi normalnego metabolizmu komórkowego i pełnią podstawowe funkcje w sygnalizacji, proliferacji, różnicowaniu i apoptozie2. Brak równowagi w stężeniach ROS może przyspieszyć stres oksydacyjny, potencjalnie aktywując zaprogramowane szlaki śmierci komórki, w szczególności autofagię i apoptozę, utrudniając w ten sposób proliferację i przeżycie komórek rakowych3. W związku z tym ROS odgrywają podwójną rolę w onkologii, działając zarówno jako promotory, jak i supresory progresji nowotworu. W ciągu ostatniej dekady strategie terapeutyczne niedrobnokomórkowego raka płuca znacznie się rozwinęły, wraz z opracowaniem nowych leków przeciwnowotworowych zaprojektowanych w celu wykorzystania tej dychotomicznej natury ROS, co stanowi szczególnie dynamiczny obszar badań4.

Wiadomo, że liczne chemicznie syntetyzowane środki przeciwnowotworowe, takie jak adriamycyna (doksorubicyna), cisplatyna i cyklofosfamid, indukują apoptozę w komórkach rakowych poprzez promowanie produkcji ROS5. Pomimo postępów w terapiach celowanych i przeciwciałach immunoterapeutycznych, chemioterapia oparta na platynie nadal stanowi podstawę leczenia pacjentów z niedrobnokomórkowym rakiem płuca. Niemniej jednak pojawienie się oporności i niepożądanych skutków ubocznych chemioterapii wymaga opracowania nowych leków przeciw niedrobnorakowemu rakowi płuca. W związku z tym badanie naturalnych źródeł związków przeciwnowotworowych jest coraz częściej doceniane ze względu na ich znaczenie i potencjał. Ostatnie badania wykazały, że niektóre ekstrakty roślinne i ich aktywne składniki wykazują silne właściwości przeciwnowotworowe, charakteryzujące się niską toksycznością, wysoką specyficznością i zdolnością do celowania w wiele szlaków6. Warto zauważyć, że niektóre z tych naturalnych związków mogą modulować poziomy ROS i sygnalizację7, indukując w ten sposób autofagię lub apoptozę w komórkach rakowych i wywierając efekty terapeutyczne 8,9.

Pileostegia tomentella Ręka. Zucc, wieloletnie zioło z rodzaju Clematis z rodziny Buttercupaceae, występuje głównie w regionach takich jak Japonia, Korea Północna i Chiny. Różne składniki rośliny, w tym korzenie, łodygi, liście i kwiaty, są znane ze swoich właściwości leczniczych, oferując korzyści, takie jak usuwanie ciepła, detoksykacja, redukcja obrzęków, łagodzenie bólu oraz działanie przeciwbakteryjne i przeciwzapalne. Ostatnie badania rzuciły światło na działanie przeciwnowotworowe ekstraktów lub składników aktywnych Hoshi Hairy Vine, wykazując działanie hamujące rozwój nowotworów w przypadku wielu nowotworów, w tym glejaka, raka piersi, okrężnicy i szyjki macicy10. Jednak specyficzne mechanizmy przeciwnowotworowe Pileostegia tomentella, w szczególności jej potencjalna rola w modulowaniu ROS w celu indukowania autofagii lub apoptozy w komórkach rakowych, pozostają w dużej mierze niezbadane.

Pomimo rosnącego zainteresowania naturalnymi związkami w terapii nowotworów, mechanizmy proapoptotyczne kluczowych składników Pileostegia tomentella w raku płuc pozostają niezbadane. Badanie to jest pionierską identyfikacją i mechanistyczną sekcją baldaszkowronu i epi-Vogelozydu jako selektywnych induktorów apoptozy zależnych od ROS w NSCLC.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

Odczynniki i sprzęt używany w tym badaniu są wymienione w Tabeli Materiałów.

1. Skład chemiczny Pileostegia tomentella i przewidywanie celu NSCLC

Składniki chemiczne Pileostegia tomentella analizowano za pomocą wysokosprawnej chromatografii cieczowej połączonej z liniową spektrometrią mas pułapki jonowej i Orbitrapa (HPLC-LTQ/MS). Ekstrakty rozpuszczono w odpowiednich rozpuszczalnikach i przefiltrowano przed wstrzyknięciem. Separację chromatograficzną uzyskano przy użyciu kolumny z odwróconymi fazami w programie elucji gradientowej dostosowanym do klas związków. Dane ze spektrometrii mas zebrano w trybie jonizacji dodatniej elektrorozpylania w zakresie mas 100-1500 m/z. Struktury molekularne zidentyfikowanych związków zostały narysowane za pomocą ogólnego oprogramowania do rysowania chemicznego i zapisane w formacie SDF. Te pliki strukturalne zostały przesłane do internetowego narzędzia do przewidywania celów w celu zidentyfikowania potencjalnych celów biologicznych, a 20 najlepszych celów wybrano do dalszej walidacji. Cele związane z NSCLC pobrano z publicznie dostępnej bazy danych genów. Nakładające się cele z obu zestawów danych zostały zidentyfikowane jako potencjalne cele terapeutyczne Pileostegia tomentella.

2. Budowa sieci komponent-cel

Dane dotyczące interakcji białko-białko dla przewidywanych celów uzyskano z ogólnodostępnej bazy danych interakcji białkowych. Dane dotyczące interakcji zostały zaimportowane do ogólnego oprogramowania do wizualizacji sieci w celu skonstruowania sieci interakcji związek-cel. Właściwości topologiczne sieci, w tym centralność stopnia, międzyść i bliskość, zostały przeanalizowane przy użyciu wbudowanych narzędzi analitycznych w celu zidentyfikowania kluczowych węzłów regulacyjnych.

3. Analiza wzbogacania szlaku KEGG

Funkcjonalne wzbogacanie przewidywanych białek docelowych przeprowadzono za pomocą analizy szlaku KEGG za pomocą publicznie dostępnych narzędzi do wzbogacania i oprogramowania statystycznego. Ścieżki ze skorygowanymi wartościami p mniejszymi niż 0,05 uznano za istotne. Istotne szlaki zintegrowano z danymi złożonymi-docelowymi w celu zbudowania sieci interakcji "złożony-docel-ścieżka" przy użyciu ogólnego oprogramowania do wizualizacji sieci. Analiza topologii sieci uwypukliła kluczowe biologiczne węzły regulacyjne, ilustrując wieloskładnikowe i wielocelowe mechanizmy Pileostegia tomentella.

4. Ekstrakcja składników Pileostegia tomentella

Wysuszone łodygi winorośli Corydalis spinosa zostały zmielone na drobny proszek. Sproszkowany materiał ekstrahowano 70% etanolem pod wpływem ultradźwięków w temperaturze pokojowej przez określony czas. Surowy ekstrakt przefiltrowano i zagęszczono pod zmniejszonym ciśnieniem. Podział ciecz-ciecz przeprowadzono przy użyciu rozpuszczalników o rosnącej polarności, w tym eteru naftowego, octanu etylu i n-butanolu. Frakcja octanu etylu, która wykazała najwyższą aktywność biologiczną w badaniach wstępnych, została zebrana, zagęszczona, liofilizowana i przechowywana w temperaturze -20 °C do czasu dalszego wykorzystania.

5. Linia komórkowa i warunki leczenia

Ludzka linia komórkowa raka płuc H1299 była hodowana w pożywce RPMI 1640 uzupełnionej 10% płodową surowicą bydlęcą w temperaturze 37 °C w wilgotnej atmosferze zawierającej 5% CO2 . Komórki wysiano w odpowiedniej gęstości i pozostawiono do przylegania na noc przed zabiegiem. Komórki poddano działaniu różnych stężeń (500 μg/ml, 750 μg/ml i 1000 μg/ml) dwóch badanych związków, UMB i epi-Vogelozydu, wymienionych w tabeli 1. Po 24 godzinach inkubacji w standardowych warunkach hodowli komórki pobrano do kolejnych analiz w celu oceny skutków biologicznych związków.

6. Test MTT na żywotność komórek

Działanie cytotoksyczne związków oceniano za pomocą kolorymetrycznego testu MTT. Komórki H1299 wysiewano na 96-dołkowe płytki o określonej gęstości i pozostawiono do przylegania przez noc. Komórki następnie traktowano związkami testowymi przez 72 godziny w standardowych warunkach hodowli. Po poddaniu działaniu substancji do każdej studzienki dodano roztwór MTT i poddano inkubacji, aby umożliwić żywotnym komórkom przekształcenie MTT w nierozpuszczalne fioletowe kryształy formazanu. Po inkubacji pożywkę usunięto, a kryształy formazanu rozpuszczono w dimetylosulfotlenku (DMSO). Absorbancję mierzono przy długości fali 570 nm za pomocą czytnika mikropłytek. Wartości absorbancji odpowiadają żywotności komórek, zapewniając ilościową ocenę cytotoksyczności związku.

7. Ocena integralności membrany poprzez uwalnianie LDH

Integralność błony komórkowej oceniano, mierząc uwalnianie dehydrogenazy mleczanowej (LDH) jako wskaźnika cytotoksyczności. Komórki H1299 traktowano związkami testowymi przez 24 godziny, 48 godzin lub 72 godziny. W każdym punkcie czasowym pobrano supernatanty hodowlane i poddano je testowi aktywności LDH zgodnie z protokołem producenta. Ponieważ LDH jest uwalniany tylko z komórek z uszkodzonymi błonami, zmierzone wartości absorbancji odzwierciedlają zakres uszkodzenia błony wywołanego przez związki w czasie.

8. Analiza apoptozy metodą cytometrii przepływowej

Indukcję apoptozy oceniano za pomocą cytometrii przepływowej z użyciem barwienia aneksyną V i 7-aminoaktynomycyną D (7-AAD). Po poddaniu działaniu badanych związków, komórki H1299 zebrano przez odwirowanie, przemyto zimną solą fizjologiczną buforowaną fosforanami i ponownie zawieszono w buforze wiążącym. Komórki następnie inkubowano z aneksyną V sprzężoną z barwnikiem fluorescencyjnym i 7-AAD zgodnie z protokołem barwienia. Próbki natychmiast poddano analizie za pomocą cytometrii przepływowej. Metoda ta pozwoliła na różnicowanie między komórkami żywotnymi (niebarwione), wczesnymi komórkami apoptozy (aneksyna V dodatnia, 7-AAD ujemna) i późnymi komórkami apoptozy lub nekrotyki (dodatnimi dla obu barwień).

9. Wewnątrzkomórkowa kwantyfikacja ROS

Poziomy wewnątrzkomórkowych reaktywnych form tlenu (ROS) mierzono za pomocą testu opartego na fluorescencji. Komórki H1299 wysiewano na 12-dołkowych płytkach o gęstości 1 × 105 komórek na dołek i hodowano do osiągnięcia około 80% konfluencji. Komórki były następnie traktowane wyznaczonymi związkami przez 72 godziny. Po poddaniu działaniu substancji, komórki inkubowano z 1 μM czułej na ROS sondy fluorescencyjnej 2',7'-dichlorodihydrofluoresceiny dioctanu (DCFH-DA) w temperaturze 37 °C przez 30 minut w ciemności. Po inkubacji pobrano komórki, a intensywność fluorescencji mierzono przy długości fali emisji 525 nm za pomocą czytnika mikropłytek fluorescencyjnych. Intensywność fluorescencji odpowiada wewnątrzkomórkowym poziomom ROS.

10. Ilościowy PCR w czasie rzeczywistym (RT-qPCR)

Komórki H1299 wysiewano na płytkach 6-dołkowych o gęstości 2 × 105 komórek na dołek i hodowano do osiągnięcia około 80% konfluencji. Komórki były następnie traktowane wyznaczonymi związkami przez 72 godziny. Całkowite RNA wyekstrahowano przy użyciu szeroko stosowanej metody fenolowo-chloroformowej. Syntezę komplementarnego DNA (cDNA) przeprowadzono przy użyciu zestawu do odwrotnej transkrypcji zgodnie z instrukcjami producenta. Ilościowy PCR w czasie rzeczywistym (qRT-PCR) przeprowadzono przy użyciu systemu PCR w czasie rzeczywistym ze specyficznymi starterami (wymienionymi w tabeli 2). Względne poziomy ekspresji genów obliczono przy użyciu porównawczej metody Ct, przy czym geny porządkowe wykorzystano jako kontrolę wewnętrzną.

11. Immunoblotting dla ekspresji białek

Analizę Western blot przeprowadzono na komórkach H1299 hodowanych i traktowanych. Białko całkowite ekstrahowano przy użyciu odpowiedniego buforu do lizy, a lizaty klarowano przez odwirowanie w temperaturze 10 000 × g przez 15 minut w temperaturze 4 °C. Stężenia białek oznaczono za pomocą testu spektrofotometrycznego. Równe ilości białka z każdej próbki oddzielono za pomocą SDS-PAGE i przeniesiono na membranę z polifluorku winylidenu (PVDF). Błony blokowano 5% beztłuszczowym mlekiem w proszku przez 2 godziny w temperaturze pokojowej, a następnie inkubowano przez noc w temperaturze 4 °C z pierwszorzędowymi przeciwciałami specyficznymi dla Bcl-2, kaspazy-3, PARP1, BAX, GAPDH i tubuliny w zoptymalizowanych rozcieńczeniach. Po umyciu błony inkubowano z odpowiednimi przeciwciałami drugorzędowymi przez 2 godziny w temperaturze pokojowej. Pasma białkowe zostały zwizualizowane i zobrazowane przy użyciu substratu chemiluminescencyjnego. Analizę densytometryczną przeprowadzono za pomocą oprogramowania do analizy obrazu, a natężenia pasma znormalizowano do GAPDH i tubuliny jako kontroli obciążenia.

12. Mikroskopia immunofluorescencyjna kaspazy-3

Ekspresję i subkomórkową lokalizację kaspazy-3, kluczowego białka apoptotycznego, oceniano za pomocą barwienia immunofluorescencyjnego. Po leczeniu komórki H1299 utrwalono paraformaldehydem, przesiąknięto łagodnym roztworem detergentu i inkubowano z pierwszorzędowym przeciwciałem przeciwko kaspazie-3. Następnie zastosowano znakowane fluorescencyjnie przeciwciało drugorzędowe w celu wykrycia sygnału przeciwciała pierwszorzędowego. Jądra komórkowe podbarwiono przeciwwagowo za pomocą barwnika fluorescencyjnego wiążącego DNA. Barwione komórki uwidoczniono pod mikroskopem fluorescencyjnym. Intensywność i dystrybucja komórkowa sygnału fluorescencji dostarczyły jakościowych i przestrzennych informacji na temat aktywacji kaspazy-3, wspierając jej udział w odpowiedzi apoptotycznej indukowanej przez związek.

13. Sekwencjonowanie transkryptomiczne

Aby sprofilować komórkową odpowiedź transkrypcyjną na badane związki, całkowity RNA wyekstrahowano z komórek H1299 poddanych działaniu środka i oceniono pod kątem integralności przy użyciu standardowych metod kontroli jakości. Biblioteki sekwencjonowania zostały przygotowane zgodnie z ustalonymi protokołami i poddane sekwencjonowaniu o wysokiej przepustowości przy użyciu platformy sekwencjonowania nowej generacji. Surowe dane sekwencjonowania zostały przetworzone za pomocą konwencjonalnego procesu bioinformatycznego, który obejmował filtrowanie kontroli jakości, dostosowanie do genomu referencyjnego i ilościowe określenie obfitości transkryptów. Przeprowadzono różnicową analizę ekspresji genów w celu zidentyfikowania genów ze statystycznie istotnymi zmianami ekspresji po leczeniu. Przeprowadzono analizy wzbogacania i szlaków genów o zróżnicowanej ekspresji, aby wyjaśnić kluczowe procesy biologiczne, na które wpływają te związki, zapewniając tym samym kompleksowy przegląd transkryptomiczny ich skutków molekularnych.

14. Analiza statystyczna

Wszystkie dane są wyrażone jako średnia ± odchylenie standardowe (SD) z co najmniej trzech niezależnych doświadczeń. Istotność statystyczną między grupami określono przy użyciu standardowych metod, w tym testu t-Studenta lub jednoczynnikowej ANOVA, w stosownych przypadkach. Różnice uznano za statystycznie istotne dla wartości P mniejszych niż 0,05.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Badania przesiewowe kluczowych składników Pileostegia tomentella przeciwko rakowi płuc
Przegląd projektu eksperymentalnego przedstawiono na rysunku 1. HPLC-LTQ/Orbitrap MS wykorzystano do scharakteryzowania siedmiu głównych składników bioaktywnych obecnych w Pileostegia tomentella (Tabela 3). Następnie przeprowadzono przewidywanie celu in silico na tych związkach przy użyciu bazy danych SwissTargetPredic...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

Niedrobnokomórkowy rak płuca (NSCLC) pozostaje palącym globalnym problemem zdrowotnym, charakteryzującym się agresywną biologią, szybkim postępem klinicznym i wysokim potencjałem przerzutowym, co często prowadzi do złych wyników leczenia12. Chociaż standardowe interwencje, takie jak resekcja chirurgiczna, radioterapia i chemioterapia, oferują korzyści terapeutyczne we wczesnym stadium choroby, ich skuteczność zmniejsza się w zaawansowanych stadiach ze względu na pojawienie się oporności na leki i ...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Autorzy nie mają do zadeklarowania konfliktu interesów.

Podziękowania

Prace te były wspierane przez Projekt Budowy Kluczowej Dyscypliny Wysokiego Poziomu Tradycyjnej Medycyny Chińskiej - Apteka Mniejszości Etnicznych (Apteka Zhuang) z Państwowej Administracji Tradycyjnej Medycyny Chińskiej (nr zyyzdxk-2023165); Program Kultywowania Talentów "Projekt Młodzieżowy" Międzynarodowego Szpitala Medycznego Guangxi Zhuang (nr 2022001); Multidyscyplinarny Zespół Innowacji Projektu w Medycynie Chińskiej Guangxi (nr GZKJ2309); Program Zespołu ds. Innowacji Wysokiego Szczebla Kultywacji Talentów Uniwersytetu Tradycyjnej Medycyny Chińskiej w Guangxi (nr 2022A008); Kluczowy projekt badawczo-rozwojowy Departamentu Nauki i Technologii Guangxi (nr Gui Ke AB21196057); trzyletni plan działania na rzecz budowy zespołu talentów wysokiego szczebla w Międzynarodowym Szpitalu Medycznym Zhuang w Guangxi (nr GZCX20231203, GZCX20231202 r.); trzecia partia Programu Kultywacji Zespołu Talentów Wysokiego Szczebla "Projekt Qihuang" Uniwersytetu Tradycyjnej Medycyny Chińskiej w Guangxi (nr 202414).

WKŁAD AUTORA:

Wen Zhong, Leimin Jiang i Bing Qing w równym stopniu przyczynili się do powstania tej pracy i są współautorami. Byli oni przede wszystkim odpowiedzialni za projektowanie eksperymentów, pozyskiwanie danych i interpretację wyników. Xiumei Ma przeprowadził analizę danych i przyczynił się do przygotowania manuskryptu. Shi Xianyi, Deng Qingmei i Zhou Guangyun brali udział w projektowaniu badań, gromadzeniu danych i badaniach literatury. Jiangcun Wei, autor korespondencyjny, nadzorował analizę i interpretację danych oraz odegrał wiodącą rolę w redagowaniu i poprawianiu manuskryptu.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Załącznik V– Zestaw do wykrywania apoptozy PE / 7-AADBD Nauki biologiczne556547Wykrywanie apoptozy na podstawie cytometrii przepływowej
Przeciwciało: BAXKsięga Abcamab32503 powiedział:Western blot dla białka proapoptotycznego
Przeciwciało: Bcl-2Księga Abcamab182858 powiedział:Western blot/immunofluorescencja
Przeciwciało: Rozszczepiona kaspaza-3Księga Abcamab32042 powiedział:Western blot / IF
Przeciwciało: GAPDHKsięga Abcamab8245 powiedział:Kontrola wewnętrzna w Western blot
Przeciwciało: PARP1Księga Abcamab32064 powiedział:Western blot dla markera apoptozy
Przeciwciało: TubulinaKsięga Abcamab78078 powiedział:Kontrola wewnętrzna w Western blot
Rysowanie chemicznePerkinElmer InformatykaCCG821391Rysunek struktury małych cząsteczek
System obrazowania chemiluminescencyjnegoTanon Nauka & TechnologiaTanon 5200Do wizualizacji prążków białkowych
Cytoscape (Cytokrajobraz)Cytoscape.orghttps://cytoscape.orgBudowa i analiza sieci
Plama jądrowa DAPISigma Zobacz materiał D9542Niebieska przeciwplama jądrowa dla IF
DAWIDNIHhttps://david.ncifcrf.govAdnotacja funkcjonalna i wzbogacanie ścieżek KEGG
DMSOSigma 
MFCD00002089		Służy do rozpuszczania kryształów formazanu
Etanol (do ekstrakcji)SigmaMFCD00003568Rozpuszczalnik do ekstrakcji wspomaganej ultradźwiękami
Octan etyluSigmaMFCD00009171Służy do frakcjonowania bioaktywnego
Przeciwciało drugorzędowe sprzężone z FITCKsięga Abcamab6785 powiedział:Stosowany w immunofluorescencji
Cytometr przepływowyThermo ScientificA29001Służy do wykrywania apoptozy i ROS
Mikroskop fluorescencyjnyKorporacja OlympusBX53FDo obrazowania preparatów immunofluorescencyjnych
LiofilizatorKorporacja Labconco7670520Do liofilizacji i konserwacji próbek
Karty genetyczneInstytut Weizmannahttps://www.genecards.orgBaza danych genów pod kątem znaczenia choroby
Spektrometria mas HPLC-LTQ-OrbitrapThermo ScientificIQLAAEGAAVFACZMAIKIdentyfikacja związków chemicznych przez państwa członkowskie
Platforma sekwencjonowania Illumina NovaSeqIllumina Inc.20012850Używany do sekwencjonowania RNA
Zestaw do oznaczania cytotoksyczności LDHBeyotimeZobacz materiał C0016Do pomiaru uwalniania LDH jako wskaźnika cytotoksyczności
Czytnik mikropłytekThermo ScientificVL0000D0Do pomiarów absorbancji w testach MTT i LDH
Zestaw do oznaczania żywotności komórek MTTBeyotime Silnik C0009SSłuży do testu MTT w celu oceny żywotności komórek
Maszyna qPCRThermo Scientific4485701Do analizy ekspresji genów
Oprogramowanie RFundacja Rhttps://www.r-project.orgObliczenia statystyczne i wykreślanie ścieżek
Zestaw do odwrotnej transkrypcji (RT Kit)WazymePrzekaźnik MR201Do syntezy cDNA
Zestaw do przygotowania biblioteki sekwencyjnej RNA-seqIllumina Inc.20020594Przygotowanie biblioteki do sekwencjonowania
SwissTargetPredictionInstytut Szwajcarskihttp://www.swisstargetprediction.chNarzędzie do przewidywania celów złożonych
SYBR Zielona mieszanka qPCRWazymePytanie Q311-02Do ilościowego PCR
Odczynnik TRIzol (ekstrakcja RNA)Sigma Zobacz materiał T3934 TGLDo ekstrakcji całkowitego RNA
UltradźwiękowaBransonM1800-CPXHDo ekstrakcji wspomaganej ultradźwiękami
Aparat Western BlotThermo ScientificNr kat. A56727Elektroforeza żelowa i transfer białek

Bibliografia

  1. Fan, D., Yu, S., Yang, Y., Qu, S. Pyoluteorin induces apoptosis and autophagy in NSCLC cells. Biol Pharm Bull. 44 (7), 976-983 (2021).
  2. Cui, Q., et al. Modulating ROS to overcome multidrug resistance in cancer. Drug Resist Updat. 41, 1-25 (2018).
  3. Wang, Y., et al. The double-edged roles of ROS in cancer prevention and therapy. Theranostics. 11 (10), 4839-4857 (2021).
  4. Sahoo, B. M., Banik, B. K., Borah, P., Jain, A. Reactive oxygen species (ROS): Key components in cancer therapies. Anticancer Agents Med Chem. 22 (2), 215-222 (2022).
  5. Perillo, B., et al. Ros in cancer therapy: The bright side of the moon. Exp Mol Med. 52 (2), 192-203 (2020).
  6. Luo, H., et al. Naturally occurring anticancer compounds: Shining from Chinese herbal medicine. Chin Med. 14, 48(2019).
  7. Han, X., et al. Quercetin hinders microglial activation to alleviate neurotoxicity via the interplay between NLRP3 inflammasome and mitophagy. Redox Biol. 44, 102010(2021).
  8. Lv, C., et al. Ainsliadimer a induces ROS-mediated apoptosis in colorectal cancer cells via directly targeting peroxiredoxin 1 and 2. Cell Chem Biol. 30 (3), 295-307.e5 (2023).
  9. Jiaqi, L., et al. Andrographolide promoted ferroptosis to repress the development of non-small cell lung cancer through activation of the mitochondrial dysfunction. Phytomedicine. 109, 154601(2023).
  10. Liu, Y., et al. Total coumarins of Pileostegia tomentella induces cell death in SCLC by reprogramming metabolic patterns, possibly through attenuating β-catenin/AMPK/sirt1. Chin Med. 18 (1), 1(2023).
  11. Daina, A., Michielin, O., Zoete, V. Swisstargetprediction: Updated data and new features for efficient prediction of protein targets of small molecules. Nucleic Acids Res. 47 (W1), W357-W364 (2019).
  12. Catania, C., et al. New options and open issues in the management of unresectable stage III and in early-stage NSCLC: A report from an expert panel of Italian medical and radiation oncologists - interaction group. Crit Rev Oncol Hematol. 190, 104108(2023).
  13. Guo, H., et al. Biomarker-targeted therapies in non-small cell lung cancer: Current status and perspectives. Cells. 11 (20), 3200(2022).
  14. Mcnamee, N., Da Silva, I. P., Nagrial, A., Gao, B. Small-cell lung cancer update on targeted and immunotherapies. Int J Mol Sci. 24 (9), 8129(2023).
  15. Jiang, R., et al. The sodium new houttuyfonate suppresses NSCLC via activating pyroptosis through tcons-14036/mir-1228-5p/prkcdbp pathway. Cell Prolif. 56 (7), e13402(2023).
  16. Chen, P., Liu, Y., Wen, Y., Zhou, C. Non-small cell lung cancer in China. Cancer Commun (Lond). 42 (10), 937-970 (2022).
  17. Amorim, R., et al. Mitochondriotropic antioxidant based on caffeic acid antioxcin(4) activates Nrf2-dependent antioxidant defenses and quality control mechanisms to antagonize oxidative stress-induced cell damage. Free Radic Biol Med. 179, 119-132 (2022).
  18. Long, K., et al. Small-molecule inhibition of ape1 induces apoptosis, pyroptosis, and necroptosis in non-small cell lung cancer. Cell Death Dis. 12 (6), 503(2021).
  19. Lin, Z., Cheng, X., Zheng, H. Umbelliferon: A review of its pharmacology, toxicity and pharmacokinetics. Inflammopharmacology. 31 (4), 1731-1750 (2023).
  20. Cruz, L. F., et al. Umbelliferone (7-hydroxycoumarin): A non-toxic antidiarrheal and antiulcerogenic coumarin. Biomed Pharmacother. 129, 110432(2020).
  21. Zheng, S., et al. Systematic review of lonicerae japonicae flos: A significant food and traditional Chinese medicine. Front Pharmacol. 13, 1013992(2022).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Tagi

apoptoza indukowana przez RCDUmbelliferonEpi-Vogelosideżywotność komórekstres oksydacyjnymitochondrialna ścieżka apoptotycznaWestern blot
Skontaktuj się z nami
Poleć bibliotece

Prywatność

Warunki korzystania z usługi

Zasady

Prawa autorskie © 2026 MyJoVE Corporation. Wszelkie prawa zastrzeżone.